Cistanche Tubulosa'da Pineal Glikozit ve Ergosterol Glikozit İçeriğinin Belirlenmesi Yöntemi Üzerine Çalışma

Cistanche tubulosa, Ledaceae familyasının Cistanche cinsine ait pullu yaprakları olan kuru, etli bir gövdedir. Doğası gereği sıcak, tadı tatlı ve tuzlu olup böbrek ve kalın bağırsak meridyenlerine aittir. Böbrek yangınını tonlamak, özü ve kanı beslemek, bağırsakları nemlendirmek ve bağırsak hareketlerini teşvik etmek, yaşlanmayı geciktirmek gibi geleneksel etkileri vardır. "Çöl Ginsengi" olarak bilinir. Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi'nin 2010 baskısından başlayarak, Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wight, Cistanche'nin yasal bazal bitkilerinden biri olarak eklenmiştir ve C. Deserticola ile birlikte listelenmiştir.

Cistanche tubulosa esas olarak Sincan Uygur Özerk Bölgesi'ndeki Tarım Havzası'nın güney kenarı boyunca üretilmekte ve Ilgın bitkilerinin köklerinde parazit olarak büyümektedir. Şu anda Çin pazarındaki Cistanche tubulosa tıbbi malzemelerinin ana kaynağıdır ve yıllık üretimi %60'tan fazladır. Yabani kaynakların giderek azalması nedeniyle Ulusal Anahtar Korumalı Yabani Bitki Listesi'nde (2021 baskısı) ikinci sınıf korunan bitki olarak listelenmiştir.

Modern farmakolojik araştırmalar, Cistanche tubulosa'nın temel farmakolojik maddesinin feniletanoid glikozitlere (PhG'ler) dayandığını göstermiştir; bunların arasında Echinacoside (C35H46O20) ve Acteoside/verbascoside (C29H36O15) en yüksek içeriğe ve en güçlü aktiviteye sahiptir ve Çin Farmakopesi tarafından Cistanche tubulosa tıbbi materyallerinin kalite kontrolü için karakteristik bileşenler olarak açıkça belirtilmiştir. Çin Farmakopesi'nin 2020 baskısına göre, Cistanche tubulosa'nın kurutulmuş ürünündeki toplam ekinakrosit ve verbaskosit miktarı %1,5'ten az olmamalıdır; bu, çöl Cistanche tubulosa için %0,30 standardından çok daha yüksektir. Bu nedenle doğru, verimli ve tekrarlanabilir içerik belirleme yöntemlerinin oluşturulması, Cistanche tubulosa tıbbi materyallerinin kalite kontrolü, menşe değerlendirmesi, ekim optimizasyonu ve ürün geliştirme açısından büyük önem taşımaktadır.

Cistanche tubulosa'nın ana kimyasal bileşeni olan ekinosid

Cistanche tubulosa'nın ana kimyasal bileşeni olan Acteoside

Çam Kozalağı Krizantem Glikozidi ve Ergotamin Glikozidinin Kimyasal Özellikleri

kimyasal yapı

Çam kozalağı glikozidi ve ergosterol glikozitlerinin her ikisi de, temel iskeleti şeker gruplarına (genellikle glikoz ve ramnoz) glikosidik bağlarla bağlanan bir feniletanoid çekirdeğinden oluşan feniletanoid glikozitlerdir ve fenolik hidroksil pozisyonuna kafeoil grupları gibi ikame edilmiş gruplar eklenir. Ekinakozidin moleküler formülü C35H46O20 olup bağıl molekül ağırlığı 786.72'dir. Yapısında bir kafeoil grubu, bir glikoz grubu ve bir ramnoz grubu bulunur. Ergosterol glikozitin (verbascoside) moleküler formülü C29H36O15'tir ve bağıl molekül ağırlığı 624,59'dur. Yapısı pinealosidinkine benzer ancak ramnoz ve bazı kafeoil ikameleri yoktur. Her ikisi de metanol, etanol ve su gibi polar çözücülerde kolayca çözünür ve HPLC-UV tespiti için teorik bir temel sağlayan ultraviyole bölgede karakteristik absorpsiyona sahiptir (maksimum absorpsiyon dalga boyu 330 nm civarında).

Farmakolojik aktivite

Çam kozalağı krizantem glikozidi ve ergosterol glikozidi çok çeşitli farmakolojik aktivitelere sahiptir: (1) antioksidan etki - süperoksit anyonlarını (O2 · -), hidroksil radikallerini (·OH) ve hidrojen peroksiti (H2O2) temizleyerek, Nrf2/ARE sinyal yolunu aktive ederek ve SOD ve GSH Px gibi antioksidan enzimlerin aktivitesini artırarak; (2) Nöroprotektif etki - Alzheimer hastalığı ve Parkinson hastalığı modelleri üzerinde iyileştirici bir etkiye sahip olan GDNF gibi nörotrofik faktörlerin ekspresyonunu teşvik etmek; (3) Hormon benzeri etkiler - testosteron senteziyle ilgili enzimlerin ekspresyonunu teşvik eder ve üreme fonksiyonunu iyileştirir; (4) Hepatoprotektif etki - alkolik karaciğer hasarını ve oksidatif stresi azaltır; (5) Antitümör etkisi - mitokondriyal bağımlı yollar yoluyla özofagus kanseri hücrelerinin apoptozunu indükler. Yukarıdaki faaliyetler, onları Cistanche tubulosa'nın kalite değerlendirmesi için yeri doldurulamaz gösterge bileşenleri haline getirmektedir.

Cistanche-antitümörün etkileri

İçerik Belirleme Yöntemlerine Genel Bakış

Şu anda, Cistanche tubulosa'da pineal glikozit ve ergosterol glikozit içeriğini belirlemeye yönelik yöntemler temel olarak yüksek performanslı sıvı kromatografisini (HPLC), ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisini (UPLC), ince tabaka kromatografisi görüntü sayısallaştırmasını (TLC ImageJ) ve sıvı kromatografisi tandem kütle spektrometrisini (LC-MS/MS) içerir. Bunlar arasında HPLC yöntemi, yüksek ekipman popülaritesi, basit işletimi ve iyi tekrarlanabilirliği nedeniyle Çin Farmakopesi tarafından yasal belirleme yöntemi olarak benimsenmiştir ve şu anda literatürde en çok rapor edilen yöntemdir. Aşağıda HPLC yönteminin sistem kurulumu ve optimizasyon sürecine odaklanılmaktadır.

Farklı kökenlerin ve ana bilgisayarların içerik üzerindeki etkisi

Köken Farklılıkları

Birçok çalışma, farklı bölgelerden Cistanche tubulosa'daki ekinakrosit ve ergosterol içeriğinde önemli farklılıklar olduğunu tutarlı bir şekilde göstermiştir. Sincan örneğini ele alırsak, Hetian Moyu İlçesi, Kaşgar Jiashi İlçesi ve Alar Şehri gibi yerlerden alınan örneklerde iki bileşenin içerik farkı 2-5 kata ulaşabiliyor. Genel olarak konuşursak, Hotan bölgesinde (özellikle Moyu İlçesi, Minfeng İlçesi ve Yutian İlçesi) üretilen Cistanche tubulosa'daki feniletanoid glikozitlerin toplam miktarı nispeten yüksektir ve bazı yüksek kaliteli örneklerdeki feniletanoid glikozitlerin içeriği %2,5 ila %5,0'a ulaşabilir, bu da %1,5'lik farmakope standardını çok aşar.

Farklı konakçı etkileri

Cistanche tubulosa, Tamarix cinsindeki farklı bitkilerin köklerinde parazite olur ve konakçı türlerin tıbbi malzemelerin kalitesi üzerinde önemli bir etkisi vardır. Chen ve diğerleri. (2005), T. talama kanensis üzerinde parazitlenen örneklerdeki feniletanolik asit içeriğinin genellikle T. ramosissima üzerinde parazitlenen numunelerden daha yüksek olduğunu bildirmiştir. Ayrıca yabani ve kültür ürünleri arasında da farklılıklar bulunmaktadır. Genellikle yabani ürünlerdeki iki bileşenin içeriği, kültür ürünlerine göre daha yüksektir, ancak yüksek kaliteli kültür ürünleri, ekim koşullarının optimize edilmesiyle daha yüksek seviyelere de ulaşabilir.

Teknik özellikler ve parçalardaki farklılıklar

Cistanche tubulosa'nın özellikleri (çap, uzunluk) ve tıbbi kısımları da içeriği üzerinde etkilidir. Araştırmalar, daha ince etli gövdelerdeki ekinekosid ve ergosterol içeriğinin genellikle daha kalın gövdelerdekinden daha yüksek olduğunu göstermiştir; Sapın üst kısmındaki (çiçeklenme ucuna yakın) içerik genellikle tabandakinden daha yüksektir. Bu kural, şifalı bitkilerin toplanması ve işlenmesi sırasında parçaların seçimi için bir referans sağlar.

Diğer ölçüm yöntemlerine giriş

Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC)

Cistanche tubulosa deneyi

Cistanche Tubulosa Ekstraktı Doğal Takviye Tozu'nu görüntülemek için buraya tıklayın

【Daha fazlasını isteyin】 E-posta:cindy.xue@wecistanche.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / WeChat: 18599088692

UPLC yöntemi, daha küçük parçacık boyutuna (Waters HSS T3, 1,8 μ m, 100 × 2,1 mm gibi), 0,3 mL/dk akış hızına, yalnızca 1 μ L enjeksiyon hacmine sahip bir kromatografi sütunu kullanır ve analiz süresi, daha iyi ayırma ve hassasiyetle 10-15 dakikaya kısaltılabilir (geleneksel HPLC 30-50 dakika gerektirir). Liang Jiansong ve diğerleri. (2021), geniş bir doğrusal aralığa ve yüksek geri kazanım oranına sahip olan ve büyük miktarlarda numunelerin hızlı taranması için uygun olan, altı feniletanolik glikozidin eşzamanlı belirlenmesi için bir UPLC yöntemi oluşturdu.

LC-MS/MS yöntemi

Sıvı kromatografi tandem kütle spektrometresi yöntemi son derece yüksek hassasiyete sahiptir ve Cistanche tubulosa'da ekinekosid, ergosterol glikozit, izoergosterol glikozit ve guanozin A dahil düzinelerce bileşeni aynı anda belirleyebilir. Metabolomik araştırmaları ve kapsamlı kalite değerlendirmesi için uygundur. RPLC-HILIC birleşik teknolojisi, 5 büyüklük düzeyindeki içerik aralığını kapsayan 23 polar ve polar olmayan bileşeni aynı anda ölçebilir.

Çevrimiçi basınçlı solvent mikro ekstraksiyon girdap akımı kromatografisi HPLC yöntemi

Bu yöntem, numune ekstraksiyonu, saflaştırma ve kromatografik ayırma işlemlerini çevrimiçi olarak birleştirerek organik solvent tüketimini ve numune kullanımını önemli ölçüde azaltır. Üç feniletanolik glikozidin LOQ'ları sırasıyla 0,50 mg/L (ekinakozit), 0,25 mg/L (ergosterol glikozit) ve 0,38 mg/L (izoergosterol glikozit) olup değerli numunelerin hızlı analizi için uygundur.

TLC Görüntü Sayısallaştırma Yöntemi

cistanche özü tozu

ImageJ yazılımına dayanarak, ince tabaka kromatografi noktalarının gri değerleri üzerinde kantitatif analiz yapıldı. Pineal krizantem glikozit, guanozin A, ergosterol glikozit ve izoergosterol glikozitin korelasyon katsayıları r sırasıyla 0,9974, 0,9931, 0,9923 ve 0,9890 idi ve bunlar HPLC yöntemiyle tutarlıydı. Bu yöntem düşük maliyetlidir, kullanımı kolaydır ve taban birimlerinde ve sahada hızlı taramaya uygundur.

tartışma

Kromatografik koşulların optimize edilmesinde önemli konular

HPLC yöntemlerinin geliştirilmesinde mobil faz seçimi çok önemlidir. Literatür karşılaştırması şunu göstermektedir: (1) su asetonitril sistemi, feniletanolik glikozit zirvesinin kuyruklanmasına neden olmaya eğilimlidir ve %0,1 formik asit veya %1 asetik asit eklenmesi, zirve şeklini önemli ölçüde iyileştirebilir; (2) Metanol asetonitril asetik asit üçlü sisteminin ayırma verimliliği, saf metanol veya saf asetonitril ikili sisteminkinden üstündür; (3) 330-334 nm'lik tespit dalga boyu seçimi, 334 nm'de biraz daha yüksek bir yanıt ve 330 nm'de ergosterolden daha az müdahale ile her iki bileşenin absorpsiyon yoğunluğunu dengeleyebilir. Sütun sıcaklığının alıkonma süresi üzerinde etkisi vardır ancak 30-35 derecelik makul bir aralıkla ayrılma derecesini önemli ölçüde değiştirmez.

Ekstraksiyon Yöntemlerinin Optimizasyonu

Çözücü konsantrasyonu, katı-sıvı oranı, ultrason sıcaklığı ve zamanın tümü ekstraksiyon verimliliğini etkiler. Araştırmalar şunu göstermiştir: (1) %50~%80 metanol veya etanol, %60~%80 etanol gibi biraz daha yüksek bir ekstraksiyon oranıyla her iki glikozit bileşenini etkili bir şekilde ekstrakte edebilir; (2) Tam ekstraksiyon için 1:30~1:50 (g/mL) katı-sıvı oranı yeterlidir; (3) Optimum kombinasyon, 50-60 derecelik ultrason sıcaklığı ve 40 dakikalık süredir; (4) Ultrasonik ekstraksiyon, reflü ekstraksiyonundan daha üstündür çünkü ikincisi, ısıya duyarlı feniletanolik glikozitlerin bozulmasına kolayca yol açabilir.

Farmakope Standartlarının Rasyonelliği Üzerine Tartışma

Mevcut farmakope, Cistanche tubulosa'daki paeoniflorin ve ergosterol glikozitlerin toplam miktarının %1,5'e eşit veya daha fazla olması gerektiğini şart koşmaktadır. Bu standart nispeten gevşektir; Sincan'dan gelen yüksek kaliteli numuneler genellikle %3 ila %5'e ulaşırken, yalnızca birkaç düşük kaliteli numune alt sınıra yaklaşmaktadır. Bazı araştırmacılar, tıbbi malzemelerin kalitesinin daha iyi olmasını sağlamak için standardın %2,0 ila %2,5'e yükseltilmesini önermektedir. Ek olarak, farmakopede gösterge olarak yalnızca iki bileşen kullanılırken, Cistanche tubulosa ayrıca guanozin A, izoergosterol glikozitler ve hesperidin gibi çeşitli aktif feniletanolik glikozitler içerir. Çok göstergeli kapsamlı değerlendirme gelecekteki gelişme yönüdür.

Yöntem Seçimi İçin Öneriler

Genel tıbbi malzemelerin kalite denetimi ve günlük üretim kalite kontrolü için farmakope HPLC yönteminin kullanılması tavsiye edilir. Yöntem olgunlaşmış, ekipman gereksinimleri düşük ve sonuçlar oldukça karşılaştırılabilir. Büyük ölçekli numune taraması veya değerli numune analizi için UPLC veya çevrimiçi PLME-TFC-HPLC yöntemleri daha etkilidir. LC-MS/MS sınıflandırma yöntemi, derinlemesine kalite değerlendirmesi ve çeşit tanımlama için tercih edilen yöntemdir. TLC görüntü yöntemi, taban düzeyinde hızlı ilk tarama için uygundur. Araştırmacılar gerçek ihtiyaçlara göre makul seçimler yapmalıdır.

cistanche özü tozu

Çözüm

Bu makale, Cistanche tubulosa'da ekinekosid ve ergosterol içeriğini belirlemek için HPLC yöntemini sistematik olarak ele almaktadır. Bu yöntem çok boyutlu metodoloji ile doğrulanmıştır ve geniş bir doğrusal aralık (r 0,999'dan büyük veya ona eşit), iyi hassasiyet (RSD) özelliklerine sahiptir.<3%), high accuracy (recovery rate 95.7%~100.7%), and easy operation, fully meeting the quality control requirements of the Chinese Pharmacopoeia for Cistanche tubulosa.

Kapsamlı analiz şunları göstermektedir: (1) Cistanche tubulosa'daki pineal glikozit içeriği genellikle ergosterol glikozitin 3-8 katıdır ve bu ikisinin toplam miktarı, menşe yerine, konakçıya, boyuta ve konuma bağlı olarak değişir; (2) Hotan, Sincan'dan alınan yüksek kaliteli numunelerdeki toplam feniletanolik asit miktarı, farmakope standardının 2-3 katı veya daha fazlasına ulaşabilir; (3) UPLC ve LC-MS/MS gibi yeni teknolojiler, çok bileşenli eşzamanlı belirleme ve derin kalite değerlendirmesi için güçlü araçlar sağlar.

Gelecekteki araştırmalar şunlara odaklanmalıdır: (1) daha fazla feniletanoid glikoziti kapsayan çok indeksli bir kalite değerlendirme sisteminin kurulması; (2) ekim ortamının, konukçu hasat döneminin ve işleme yönteminin içerik üzerindeki kapsamlı etkisinin kapsamlı bir şekilde araştırılması; (3) şifalı bitkilerden sağlıklı gıda ve kozmetik hammaddelerine kadar Guanhua Cistanche'nin tüm endüstri zincirinin standardizasyonunu teşvik etmek.

Referanslar

[1] Guanhua Roucong Kui'de [J] ekinekosid ve ergotamin içeriğini belirlemek için çorba yosunu HPLC yöntemi. Çinli Eczacı, 2009, 12 (8): 1061-1063

[2] Chen M, Xiao SP, Cui GH, ve diğerleri. Cistanche tubulosa[J] bitkilerinde ekinakozit ve akteozidin belirlenmesi. Çin Çin Materia Medica Dergisi, 2005, 30(11): 839-841.

[3] Baoshan, Ju Aihua, Xiao Zhibin. Guanhua Roucong Kui'de [J] ekinekozit ve ergotamin içeriğinin belirlenmesi. Çin Tıbbı İncelemesi, 2017, 23 (19): 39-40, 44

[4] Liang Jiansong, Xue Cuili, Wu Menghua, vb. Roucong Kui ve Shacong Kui'de [J] altı feniletanoid glikozidin UPLC içeriğinin belirlenmesi ve kemometrik değerlendirmesi. Farmasötik Analiz Dergisi, 2021, 41 (2): 226-235

[5] Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi Komitesi Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi (2020 baskısı, Cilt 1) [S]. Pekin: Çin Tıp Bilimi ve Teknolojisi Basını, 2020: 148-149

[6] Zhang Leihong, Du Niansheng, Wang Qing, vb. Roucongkui Toplam Glikozit Kapsüllerindeki Ekinoklorin İçeriğinin HPLC [J] ile Belirlenmesi. Northwest Pharmaceutical Journal, 2002, 17 (1): 3-4

[7] Ju Aihua, Ao Geriletu, Zhou Kai İç Moğolistan'dan tuzlanmış et ve ayçiçeğinde ekinakozit ve ergotamin içeriğinin belirlenmesi [J]. Çin Geleneksel Çin Tıbbı Dergisi, 2011, 26 (1): 178-180

[8] Song Peng, Tu Pengfei. Geleneksel Çin tıbbı Roucongkui'nin [J] kalite kontrolü ve değerlendirilmesine ilişkin araştırma ilerlemesi. Kuzey Eczanesi, 2011, 8 (2): 45-47

[9] Guo Dingyu, Xiao Jinglei. Roucongkui'de [J] Fonksiyonel Bileşenlerin Kalite Kontrolü ve Biyolojik Aktivite Araştırmasında İlerleme. Jilin Geleneksel Çin Tıbbı, 2023, 43 (7): 856-860

[10] Lu Yinghui, Pi Wenmin, Zhang Yue, vb. Roucong Kui ve Guanhua Roucong Kui'nin Karşılaştırmalı Çalışması ve Piyasa Durumu Analizi [J]. Modern Çin Tıbbı, 2019, 21 (8): 1105-1110

[11] Roucongkui (Guanhua Roucongkui) [S] formül granülleri için Ulusal Farmakope Komitesi Standardı. Pekin: Çin Tıp Bilimi ve Teknolojisi Basını, 2021

[12] Fu C, Li J, Aipire A, ve diğerleri. Cistanche tubulosa feniletanoid glikozitler, mitokondriye bağımlı yol [J] yoluyla Eca-109 hücrelerinde apoptozu indükler. Onkoloji Mektupları, 2019, 17(2): 1883-1892.

[13] Xu Mingjun, Çin'in Farklı Bölgelerinden Gelen Çöl Eti Ayçiçeğinin Bekleme Kalitesi Analizi ve Kapsamlı Değerlendirilmesi [J]. Gıda Endüstrisi Bilimi ve Teknolojisi, 2022, 43 (15): 312-320

[14] Rahibe Hao, Chen Sumei, Yan Donghai, vb. Roucongkui'nin kozmetikte uygulanmasına ilişkin araştırma ilerlemesi [J]. Günlük Kimya Bilimi Dergisi, 2021, 44 (9): 28-33

[15] Hou Ji, Wang Bo, Li Guanghui, vb. Roucongkui'nin [J] araştırma ilerlemesi ve sanayileşme durumu. Shandong Tarım Bilimi, 2020, 52 (12): 147-154