Yaşlanma Lekesi Karşıtı Bir Serum Olarak -Mangostin'in Geliştirilmiş Cilde Taşınması İçin Umut Veren Ultra Küçük Tek Katmanlı Taşıyıcı Sistem Bölüm 1

Soyut: Etki bölgesine etkili bir şekilde iletilebilirse, -mangosteen, melanogenez bloke edici aktivitesi nedeniyle yeni kozmesötikler geliştirme potansiyeline sahiptir. Bu çalışma, -mangosten için ultra küçük tek lamelli bir taşıyıcı sistem geliştirmeyi ve bunun insanlar üzerinde yaşlanma karşıtı bir serum olarak etkinliğini in vivo olarak değerlendirmeyi amaçladı. Ultra küçük tek lamelli taşıyıcı bazlar, beş faktör (işlenmemiş hindistancevizi yağı, soya lesitini, Tween 80 ve karıştırma süresi ve hızı) ve iki seviye (düşük ve düşük) içeren bir 25-faktöriyel tasarım kullanılarak optimize edildi. yüksek); damlacık boyutunun tepkisi, Design Expert 12® kullanılarak analiz edildi. Leke önleyici inceleme, art arda iki hafta boyunca -mangosteen yüklü ultra küçük tek lamelli taşıyıcının gece topikal uygulamasından sonra insan derisinin dijital görüntülerinin alınmasıyla gerçekleştirildi. Bunun sonuçları, Motic Live Imaging 3.0 ve standart bir kırmızı, yeşil ve mavi puan kullanılarak analiz edildi. Optimize edilmiş serum formülü, 15 dakika boyunca dakikada 1500 devir karıştırma hızında yüzde 2,3 işlenmemiş hindistancevizi yağı, yüzde 1 lesitin ve yüzde 28,3 Tween 8{52}} (polisorbat 80) bileşimi ile doğrulandı. Optimize edilmiş temel formüle yüzde 3 -mangostin eklenmesi, -25.8 mV zeta potansiyeli ve 0.445 polidispersiyon indeksi ile 16.5 nm'lik ultra küçük tek lamelli taşıyıcı globül boyutu üretti. -mangosten yüklü ultra küçük tek lamelli taşıyıcının fiziksel karakterizasyonu, yüzde 90.94 geçirgenlik, 6.5 pH değeri, 38 cP viskozite, 1.042 g/mL özgül ağırlık ve yüzde 72.46 tutma verimliliğinden oluşuyordu. Bir transmisyon elektron mikroskobu, sistemdeki küresel nano boyutlu damlacıkları doğruladı. -mangosten yüklü ultra küçük tek lamelli taşıyıcının gece art arda 2 hafta boyunca topikal uygulaması, insan gönüllülerde lekelerin yoğunluğunda ve alanında önemli bir azalma ile gösterilen anti-yaş lekesi aktivitesi gösterdi (p < 0.05).

Cistanche glikozidi ayrıca kalp ve karaciğer dokularında SOD aktivitesini artırabilir ve her dokudaki lipofuscin ve MDA içeriğini önemli ölçüde azaltabilir, çeşitli reaktif oksijen radikallerini (OH-, H₂O₂, vb.) etkili bir şekilde temizleyerek ve neden olduğu DNA hasarına karşı koruma sağlayabilir. OH radikalleri tarafından. Cistanche feniletanoid glikozitler, serbest radikalleri güçlü bir şekilde süpürme yeteneğine, C vitamininden daha yüksek bir indirgeme kabiliyetine sahiptir, sperm süspansiyonunda SOD aktivitesini geliştirir, MDA içeriğini azaltır ve sperm zarı işlevi üzerinde belirli bir koruyucu etkiye sahiptir. Cistanche polisakkaritleri, D-galaktozun neden olduğu deneysel olarak yaşlanmış farelerin eritrositlerinde ve akciğer dokularında SOD ve GSH-Px aktivitesini artırabilir, ayrıca akciğer ve plazmadaki MDA ve kollajen içeriğini azaltabilir ve elastin içeriğini artırabilir. DPPH üzerinde iyi bir temizleme etkisi, yaşlanmış farelerde hipoksi süresini uzatır, serumdaki SOD aktivitesini geliştirir ve deneysel olarak yaşlanmış farelerde akciğerin fizyolojik dejenerasyonunu geciktirir. Hücresel morfolojik dejenerasyonla, deneyler Cistanche'nin iyi antioksidan yeteneğe sahip olduğunu göstermiştir ve cilt yaşlanması hastalıklarını önleyen ve tedavi eden bir ilaç olma potansiyeline sahiptir. Aynı zamanda, Cistanche'deki ekinacoside, DPPH serbest radikallerini temizleme konusunda önemli bir yeteneğe sahiptir ve reaktif oksijen türlerini temizleyebilir ve serbest radikal kaynaklı kollajen bozulmasını önleyebilir ve ayrıca timin serbest radikal anyon hasarı üzerinde iyi bir onarım etkisine sahiptir.

Cistanche Tubulosa Eki'ne tıklayın

【Daha fazla bilgi için:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

anahtar kelimeler: -mangosten; nanotaşıyıcı; ultra küçük tek lamelli taşıyıcı; kozmetik serum; nanoemülsiyon

1. Giriş

Yaşlılık lekeleri (karaciğer lekeleri), cilt hiperpigmentasyonunun en yaygın şeklidir [1]. Ellerin sırtı, ayakların üst kısmı, yüz, omuzlar ve sırtın üst kısmı gibi uzun yıllar boyunca güneşe maruz kalan ciltte en yaygın olanıdır ve genellikle istenmeyen bir yaşlanma belirtisidir. Sonuç olarak, çeşitli etkinlik ve yan etkilere sahip çok çeşitli cilt beyazlatma ürünleri mevcuttur. Devam eden bir odak noktası, geleneksel ürünlere göre daha kısa sürede oldukça konsantre bir cilt aydınlatma etkisi sağlayan optimize edilmiş kozmesötik ürünler geliştirmektir [2]. Diğer bir odak noktası, halk tarafından genellikle daha olumlu algılandıkları ve bu nedenle pazarlama avantajları sağladıkları için doğal bazlı kozmesötiklerin geliştirilmesidir. Fito bileşik bazlı bir formül geliştirmedeki zorluk, aktif içeriği stratum corneum bariyer tabakası yoluyla hedef bölgelerine etkili bir şekilde iletmektir [3]. Nanokozmesötikler, nispeten basit uygulama prosedürleri ve hedeflenen dağıtım potansiyeli ile gelişmiş cilt nüfuzu potansiyeli sunar. Fito bileşik bazlı nano kozmesötiklerin örnekleri [4–7], E vitamini ve D-panthenol Nanotopes™ [8,9] için olanları içerir.

-mangostin (1,3,6,trihidroksi-7-metoksi-2,8-bis(3-metilbut-2-en-1-il){{ 10}}H-xanthan- 9-melanin oluşumu sürecini (koyu noktalar) engelleme potansiyeline sahiptir [10]. Bileşik, tirozinaz aktivitesinin baskılanması yoluyla B16F1 melanom hücrelerine karşı güçlü anti-melanojenik aktivite göstermiştir. enzim, melanin sentezinde önemli bir enzim ve normal insan epidermal melanositleri (NHEM'ler) üzerinde bir de-pigmentasyon etkisinin uygulanması [11]. Bu nedenle, -mangostin, lekelerin, kloazmanın tedavisi için kozmetik veya ilaçların bir bileşeni olarak kullanılabilir veya melanoz.

Polifenolik bir bileşik olarak -mangosten, cilde uygulandığında etkinliği sınırlayabilen oksidasyona karşı hassastır. Bu nedenle etkili bir formülasyon yaklaşımının, aktif bileşiğin hem deri geçirgenliğini hem de stabilitesini artırması gerekir. Çeşitli yaklaşımlar, lipozomlar [13], niozomlar [14] ve proteazomlar [15] dahil olmak üzere -mangosteen [12]'nin stabilitesinin ve deriye verilmesinin arttığını göstermiştir.

Çalışmamız ultra küçük tek lamelli taşıyıcı (USUC) matrisine odaklanmıştır: NanotopeTM olarak da adlandırılan bir nanotaşıyıcı sistem. Bu sistem, diğer tek lamelli veya çok lamelli lipozomlara (100–300 nm) kıyasla çok daha küçük damlacık boyutuyla (40 nm'den küçük veya eşit) karakterize edilir [8]. Daha küçük damlacıklar, sabit bir yağlı faz, bir yüzey aktif madde, bir yardımcı yüzey aktif madde ve bir sulu faz oranıyla üretilir; oranlar bir optimizasyon prosedüründen elde edilir. USUC'de, dağılmış bir faz, dağıtıcı ortamda bir yardımcı yüzey aktif madde ile stabilize edilmiş tek bir fosfatidilkolin (yüzey aktif madde) tabakası ile çevrilidir [16]. Daha küçük damlacık boyutu, stratum corneum'a derin penetrasyon için faydalıdır [8].

Burada mangosten için bir USUC nanotaşıyıcı sisteminin geliştirilmesini, fiziksel karakterizasyonu ve insan gönüllülerde in vivo testi açıklıyoruz. Formül optimizasyonu, bir 25-faktöriyel tasarım [6,17] kullanılarak gerçekleştirildi ve optimum damlacık boyutu ve stabiliteye sahip kaliteli bir USUC sağlamak için gerekliydi.

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1. Malzemeler

-mangostin (saflık %90'a eşit veya daha büyük) Institut Teknologi Bandung'dan (Mark Herb, Bandung, Endonezya) satın alındı. Diğer bileşenler arasında soya lesitini (gıda sınıfı; Shankar Soya Products, Indore, Hindistan), işlenmemiş hindistancevizi yağı (VCO; Wahana, Padang, Endonezya) ve Tween 80 (Bratachem, Jakarta, Endonezya) bulunmaktadır. Diğer tüm kimyasallar pro-analiz sınıfındaydı.

2.2. Deneysel tasarım

Optimizasyon, üç bileşim değişkeninden (Tween 80 (X1), soya lesitini (X2) ve VCO (X3) konsantrasyonları) ve iki işlem değişkeninden oluşan bir {{0}faktör tasarımı kullanılarak gerçekleştirildi: karıştırma süresi ( X4) ve hız (X5) (iki seviyeli — yüksek ve düşük) [18]. Tablo l'de açıklanan faktörler ve seviyeler kullanılarak otuz iki USUC temel formülü hazırlandı. Bağımlı değişken, USUC'nin damlacık boyutuydu. Boyutun 0–40 nm aralığında olması gerekiyordu [19]. Her değişkenin etkileri ve etkileşimleri, aşağıdaki formda bir faktöriyel denklem kullanılarak belirlendi:

2.3. USUC Temel Formül Optimizasyonu

USUC baz formülleri, kendiliğinden sulu faz titrasyonu ile hazırlandı. Soya lesitini ve Tween 80 manyetik bir karıştırıcı (IKA® C-MAG HS 7, Staufen, Germany) ile 75°C sıcaklıkta karıştırıldı ve karıştırma sırasında VCO eklendi. Su, şeffaf bir çözelti oluşana kadar karışıma yavaşça titre edildi [8]. 32 baz, bir parçacık boyutu analiz cihazı (Shimadzu SALD 2300, Tokyo, Japonya) kullanılarak parçacık (damlacık) boyutları açısından karakterize edildi.

Veriler, ek etkileşimlerle faktöriyel denklemi uydurmak ve yanıtı incelenen değişkenlerle ilişkilendirmek için Design Expert® sürüm 12 bilgisayar yazılımı (StatEase®, Minneapolis, MN, ABD) kullanılarak analiz edildi [17]. Bağımsız değişkenler arasındaki etki ve etkileşimler, 3B yüzey ve kontur çizimleri [19] ile açıklanmıştır.

-Mangostin USUC'un Hazırlanması

-mangostin (ağırlık/hacim olarak yüzde 3), yukarıda tarif edildiği gibi USUC hazırlığından önce VCO içinde çözüldü. VCO, soya lesitini ve Tween 80'in bileşimi ve karıştırma işleminin koşulları, optimize edilmiş USUC bazı için olanlarla aynıydı [8,20,23].

2.4. -Mangostin Yüklü USUC'nin Karakterizasyonu

2.4.1. Fiziko kimyasal özellikleri

Bir USUC'nin karakterizasyonu organoleptik inceleme, pH değeri, geçirgenlik yüzdesi, donma-çözülme döngüleri yoluyla fiziksel stabilite, viskozite, özgül ağırlık, damlacık boyutu, polidispersite indeksi (PDI) ve zeta potansiyeli [21,24,25] içerir. USUC formüllerinin pH'ı, önceden kalibre edilmiş bir pH metre (Hanna Instrument, Woonsocket, RI, ABD) kullanılarak ölçülmüştür. Bu ölçüm, oda sıcaklığında 8-haftalık depolama sırasında haftada bir kez yapıldı [26]. Geçirgenlik, 650 nm dalga boyunda UV-görünür bir spektrofotometre (SHIMADZU UV-1601, Tokyo, Japonya) ile ölçülmüştür. Yüzde 100'e yakın geçirgenlik, sıvı numunelerin şeffaflığını gösterir [27,28].

USUC bazlarının fiziksel stabilitesi bir donma-çözülme döngüsü testi kullanılarak değerlendirildi: USUC'ler 24 saat boyunca -5 °C'de ve ardından 24 saat daha 25 °C'de depoda tutuldu. Bu test üç döngü için tekrarlandı. USUC'nin pH, viskozite, özgül ağırlık ve geçirgenlik gibi fizikokimyasal özellikleri üç döngüden sonra değerlendirildi [29].

USUC bazlarının viskozitesi, üç kopya halinde 100 rpm hızında 3 numaralı mil kullanılarak bir cup-and-bob viskozimetre (Brookfield DV2T, Middleboro, MA, ABD) ile ölçüldü. USUC bazlarının özgül ağırlığı, 25 °C'de [20,30] bir piknometre kullanılarak belirlendi.

-mangostin USUC'lerinin damlacık boyutu, polidispersite indeksi (PDI) ve zeta potansiyeli, 25°C'de bir partikül boyutu analiz cihazı (HORIBA Scientific SZ-100, Kyoto, Japonya) kullanılarak belirlendi [31].

2.4.2. Kapsülleme Verimliliğinin (EE) Tayini

USUC formülünde tutulan -mangostin miktarı, -mangosten yüklü bir USUC'nin etil asetat (1:2) ile ekstraksiyonu ve ardından bunun 10 dakika sonikasyonu (Elmasonic S 80 (H), Singen, Almanya) yoluyla salındı. . Etil asetat solüsyonundaki -mangostin konsantrasyonu, 314 nm'lik bir λ maks'da onaylanmış bir spektrofotometrik analitik yöntem kullanılarak ölçülmüştür [24].

Tuzaklanma verimliliği (EE), aşağıdaki denklem kullanılarak hesaplandı:

2.4.3. Transmisyon Elektron Mikroskobu (TEM) ile Mikroskobik Analiz

-mangosten yüklü USUC'nin morfolojisi, 80.0 KV ve 30,000x büyütmede bir TEM (JEOL JEM 1010, Tokyo, Japonya) kullanılarak gözlemlendi. 10 uL'lik bir numune ızgara üzerine damlatıldı, uranil asetat ile boyandı ve kurutuldu. Gözlem, oda sıcaklığında gerçekleştirildi [8,24,32].

2.4.4. İnsan Gönüllülerde -Mangostin Yüklü USUC'nin Görsel Değerlendirmesi

10 gönüllünün iç önkol derisi üzerinde yama testi yapıldı ve ciltte kırmızı, kaşıntılı döküntüler gibi potansiyel tahriş reaksiyonlarını kontrol etmek için 24 saat bırakıldı. -mangostin USUC'nin leke önleyici etkisine yönelik bir deney, sırasıyla 57 ve 40 yaşındaki 2 kadın gönüllü üzerinde gerçekleştirilmiştir. Deney, Andalas Üniversitesi Tıp Fakültesi tarafından yayınlanan etik izin belgesi (belge No. 181/UN.16.2/KEP-FK/2020, 23 Aralık 2020) ile gerçekleştirilmiştir. -mangosten yüklü USUC, art arda 2 hafta boyunca geceleri ince bir şekilde noktalar üzerine ve yüzün her yerine uygulandı. Her iki gönüllü de bu çalışmaya katılmak için bilgilendirilmiş onam formu doldurdu ve test sırasında herhangi bir yüz aydınlatıcı krem ​​kullanmamayı kabul etti. Fotoğraf çekilmeden önce, gönüllüler ticari olarak satılan yağsız makyaj temizleyici ile yüzlerini temizlediler. Gönüllülerin yüzleri, tedaviden önce ve sonra tek lensli bir refleks dijital kamera (Nikon D 810, Melville, NY, ABD) kullanılarak fotoğraflandı. Her yüz görüntüsü, 36 megapiksel ve 7360 × 4912 boyutlarında bir kamera kullanılarak 30-40 cm mesafeden alınmıştır. Koyu noktaların yoğunluğu, kırmızı, yeşil ve mavi (RGB renk modeli) değerleri ölçülerek doğrulanmıştır. ) Windows ve OS X için Adobe® Photoshop ile (Microsoft Corp, Redmond, WA, ABD). Koyu noktaların boyutu, Motic Live Imaging 3.0 ile donatılmış bir mikroskop (Olympus, Ningbo, Çin) kullanılarak belirlendi. [33–35].

2.5. İstatistiksel analiz

Veriler ortalama ± standart sapma olarak gösterilmiştir. Tahmin edilen cevaba karşı optimize edilmiş formülü doğrulamak için basit bir t-testi kullanıldı; cilt koşullarının parametrelerindeki önemli gelişmeleri belirlemek için eşleştirilmiş bir t-testi yapıldı. Ortalamalar arasında önemli bir fark oluşturmak için iki yönlü bir ANOVA (=0.05) kullanıldı, ardından yüzde 5 anlamlılık düzeyinde bir Duncan çoklu aralık testi yapıldı [18].

3. Sonuçlar

3.1. Temel Formül Optimizasyonu

Otuz iki USUC baz formülü, Tablo 2'de açıklandığı gibi çeşitli faktörlerle hazırlandı. Tepki değişkeninin ölçümü, 11,3 nm–184,5 um'lik geniş bir damlacık boyutu aralığı gösterdi. Yalnızca altı formül (F1, F3, F9, F12, F25 ve F28), damlacık boyutu 40 nm'den küçük veya eşit [8] olan bir USUC sisteminin kriterlerini karşıladı. Tablo 2'deki veriler, optimize edilmiş formülün belirlenmesinin ardından bir regresyon modeli elde etmek için Design Expert® yazılımı ile daha fazla analiz edildi.

3.2. Yanıt (Y): Bağımsız Değişkenlerin Parçacık Boyutu Üzerindeki Etkisi

Tepki (Y) olarak damlacık boyutunun değerlendirilmesi yapıldı. Deneysel tasarım aşamasında beş faktör veya bağımsız değişken modellendi, ardından damlacık boyutu için bir yanıt yüzeyi oluşturuldu. Şekil 1, bağımsız değişkenlerin parçacık boyutu üzerindeki etkilerinin 3B yanıt yüzeyi çizimlerini göstermektedir. Elde edilen faktör denklemi Denklem (3)'te verilmiştir:

Damla boyutu tepkisi, Tween 80 ve soya lesitini bileşimi daha yüksek seviyelerde olduğunda arttı (Şekil 1a). VCO seviyesinin düşürülmesi ve Tween 80 seviyesinin arttırılması, 20-70 nm'lik damlacık boyutunda bir yanıtla sonuçlandı (Şekil 1b). Tween 80 ile karıştırma süresi arasındaki ilişkinin damla boyutu yanıtı üzerindeki etkisi, daha uzun karıştırma süresinin 20-100 nm'lik bir damla boyutu yanıtıyla sonuçlandığını göstermiştir (Şekil 1c). 1200-1350 rpm'lik bir karıştırma hızı ve yüzde 20'lik bir Tween 80 içeriği ile 20,000 nm'lik bir damlacık boyutu tepkisi elde edildi. Daha düşük bir karıştırma hızı ile Tween 80 seviyesindeki bir artış, maviden yeşile alanla gösterilen (Şekil 1d) damlacık boyutu yanıtını 80,{23}} nm'ye kadar artırdı. Artan soya lesitini ve VCO içeriği, maviden yeşile alanla işaretlendiği gibi (50,000–100,000 nm) (Şekil 1e) daha büyük damlacık boyutu değerlerine neden oldu. Artan lesitin içeriği ve daha uzun karıştırma süresinin kullanılması, maviden yeşile alanla (50,000–100,000 nm) gösterildiği gibi daha büyük damlacık boyutuyla sonuçlandı (Şekil 1f). Yüksek karıştırma hızıyla artan soya lesitini içeriği, yeşilden sarıya bölgeyle (50,000–150,000 nm) işaretlendiği gibi damlacık boyutunu artırdı (Şekil 1g). Damlacık boyutu tepkisi üzerinde VCO içeriğinin ve karıştırma süresinin değerlendirilmesi, karıştırma süresinin 15 dakika olduğunu ve VCO seviyesinin<1.5% resulted in a droplet size of 40 nm (Figure 1h). The droplet-size profiles were varied,  with different levels of combination for both VCO versus stirring speed and stirring speed versus stirring time (Figure 1i,j).

3.3. Yazılım Tasarım Uzmanı® Tarafından Optimal Formülün Belirlenmesi

Analiz, bindirilmiş kontur çizimleri oluşturmak için Design Expert® kullanılarak gerçekleştirildi. Şekil 2'de sarı alan, damlacık boyutu tepkisi ile optimum temel formülün tahmin alanını temsil eder. 1.00 arzu edilebilirlik değeriyle, yüzde 28,2 Tween yüzde 80 ve yüzde 1 soya lesitini konsantrasyonunda tahmini bir optimal temel formül bulundu. 1'e yakın bir arzu edilebilirlik değeri, modelin optimize edilmiş formülü üretme yeteneğini gösterir. USUC bazının üretimi için optimize edilmiş koşullar, 15 dakika süreyle 1500 rpm'lik bir karıştırma hızıydı. Bu kompozisyon ve bu koşullar, 34.04 nm'lik tahmin edilen yanıtı elde etti. Doğrulama için optimize edilmiş formülün hazırlanması (Tablo 3), tahmin edilen yanıttan önemli ölçüde farklı olmayan 36 nm'lik bir damlacık boyutuyla sonuçlandı (p Büyük veya 0.05'e eşittir).

【Daha fazla bilgi için:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】