Soyut

Bu çalışma, Cistanche'deki dört ana feniletanoid glikozidin (PhG'ler) hızlı, basit ve düşük maliyetli tespiti için görüntü dijitalleştirmesine dayalı bir ince tabaka kromatografisi (TLC) yöntemi oluşturdu. Dört PhG, %50 metanol kullanılarak ekstre edildi ve metanol‑kloroform‑buzlu asetik asit‑sudan (3,5:1,5:1:7, V/V/V/V) oluşan mobil bir faza sahip bir poliamid plaka üzerinde ayrıldı. Spot görüntüler 365 nm UV ışığı altında yakalandı ve hızlı niceliksel analiz için entegre gri değerler üreten ImageJ yazılımı kullanılarak dijital olarak analiz edildi. Yöntem mükemmel doğrusallık gösterdiekinakozit, tubulozit A, akteozit ve izoakteozit, korelasyon katsayıları (r) sırasıyla 0,9974, 0,9931, 0,9923 ve 0,9890'dır. Geri kazanımlar sırasıyla %87,1 ila %96,5, %88,4 ila %109,7, %94,1 ila %105,1 ve %97,0 ila %115,1 arasında değişti. Bu yöntemle elde edilen niceliksel sonuçlar, yüksek performanslı sıvı kromatografisinden (HPLC) elde edilenlerle tutarlıydı. Bu çalışma, Cistanche'deki dört temel PhG'nin niceliksel analizi için hızlı ve doğru bir yöntem sunmaktadır.

Anahtar Kelimeler:Cistanche tubulosa; feniletanoid glikozitler; ince tabaka kromatografisi; ResimJ; hızlı cistanche kalite analizi

 

Yüksek ekinakozit içeriğine sahip Cistanche Ekstraktı

 

 

 

 

1. Giriş

Cistanche, esas olarak Çin'in Sincan, İç Moğolistan ve Ningxia bölgelerinde bulunan Orobanchaceae familyasının çok yıllık parazitik bir bitkisidir. Hem tıbbi hem de yenilebilir değeri olan bir bitki kaynağı olarak, kurutulmuş etli sapları birçok endüstride önemli bir ekonomik potansiyel göstermiştir. Çeşitli Cistanche türleri arasında,Cistanche DeserticolaVeCistanche tubulosaresmi olarak listelenmiştirÇin Farmakopesi, her iki tür de birlikteCistanche salsa, Japon Farmakopesinde ham ilaç "Nikujuyou" olarak tanınmaktadır. Üstelik Cistanche, ev sahibi bitkilerle birlikte ekiminin çöl ve yarı çöl alanlarına önemli ekolojik ve ekonomik faydalar sağlaması nedeniyle kurak bölgelerin ekolojik ortamının iyileştirilmesinde önemli bir rol oynuyor.

 

Belirli bir flavonoid içeriğine sahip Cistanche Ekstraktı

Geleneksel Çin tıbbında (TCM), Cistanche mükemmel bir tonik olarak kabul edilir. 2020 yılında Çin'de yeni bir gıda bileşeni olarak onaylandı ve pazarını ve ürün gelişimini önemli ölçüde genişletti. Cistanche yalnızca böbrek-yang eksikliği, kan ve öz tükenmesi, iktidarsızlık ve kısırlık ile kabızlığı tedavi etmek için kullanılmaz, aynı zamanda karaciğer fibrozisinin tedavisinde de umut verici bir potansiyel gösterir. Kimyasal bileşim çalışmaları feniletanoid glikozitleri (PhG'ler) Cistanche'deki ana aktif bileşenlerden biri olarak tanımlamıştır. Ekinekozit, akteozit, tübülosid A ve izoakteozid dahil olmak üzere bu bileşikler, yaşlanma karşıtı, antioksidan, yorgunluk önleyici ve müshil özellikleri de dahil olmak üzere çok çeşitli farmakolojik etkiler sergiler. Echinacoside ve acteoside, Cistanche'nin farmakope standartlarında kalite kontrolüne yönelik resmi belirteç bileşenleridir. Tubulosid A, önemli anti-inflamatuar ve antioksidan aktiviteler gösterirken, izoakteosid bilişsel iyileşme ve sitoprotektif etkilerle ilişkilendirilmiştir.

PhG'ler için geleneksel analitik yöntemlerCistanche'deki teknolojiler arasında yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC) ve sıvı kromatografisi-kütle spektrometrisi (LC-MS) yer alır. Ancak bu yöntemler pahalı enstrümantasyona dayanır, zaman alıcı numune hazırlama gerektirir ve yüksek vasıflı operatörler gerektirir. Yakın kızılötesi (NIR) spektroskopisi hızlı ve tahribatsız bir alternatif sunmasına rağmen hâlâ büyük NIR cihazlarına bağımlıdır ve kolaylıkla taşınabilir değildir. Sonuç olarak, özellikle birincil test uygulamaları için, yerinde niteliksel ve niceliksel analize uygun, düşük maliyetli, kullanımı kolay ve taşınabilir bir yönteme acil bir ihtiyaç vardır.

Son yıllarda bilgisayarlı görme teknolojisindeki ilerlemeler, görüntü tanıma ve işlemenin geleneksel analitik teknikleri geliştirmesine olanak tanıdı ve TLC'yi etkili bir niceliksel yöntem haline getirdi. Bu yaklaşım, numune noktalarının gri değerini konsantrasyonlarıyla ilişkilendirir. Açık kaynaklı bir görüntü işleme yazılımı olan ImageJ, kullanıcı dostu olması ve çok yönlülüğüyle öne çıkıyor. Örneğin, Bai ve ark. pirinçteki ‑aminobütirik asidin (GABA) miktarını belirlemek için bir TLC‑ImageJ yöntemi geliştirdi ve bu yaklaşımın görüntü tabanlı niceliksel analiz için uygulanabilirliğini doğruladı.

Bu çalışmada, Cistanche'deki dört ana PhG'nin TLC spot görüntülerini yakaladık, PhG içeriği ile entegre gri değerler arasında doğrusal bir ilişki kurduk ve dört bileşiğin tamamının niceliksel analizini gerçekleştirdik. Bu yaklaşım, yerinde hızlı, düşük maliyetli tespit için yeni bir çözüm sunar ve geniş uygulama potansiyeline sahiptir.

Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd. Hakkında- 200.000 dönümlük Cistanche yetiştirme üssü, yılda 20.000 ton taze Cistanche işleme kapasitesine sahip bir GMP fabrikası ve gelişmiş membran ayırma teknolojisi de dahil olmak üzere Cistanche ekstraksiyon teknolojileriyle ilgili 14'ün üzerinde patenti ile dünyanın en büyük Cistanche işleme şirketi. Hotan, Sincan menşeli Cistanche özleri konusunda uzmanız ve ürünlerimiz Amerika Birleşik Devletleri ve Avrupa Birliği'nin uluslararası kalite standartlarını karşılamaktadır. Önemli olan şuna odaklanıyoruz:Cistanche tubulosaEkinekozit, akteozit, tübülozit A ve izoakteozit dahil olmak üzere doğal olarak daha yüksek feniletanoid glikozit içeriği içeren ekstrakt, onu nutrasötik ve fonksiyonel gıda uygulamaları için üstün bir seçim haline getiriyor.

 

Belirli bir akteozit içeriğine sahip Cistanche Ekstraktı

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1 Aletler ve Reaktifler

Teçhizat:1000T çok fonksiyonlu öğütücü (MinYe Sanayi ve Ticaret A.Ş., Yongkang, Çin); AB135‑S analitik terazisi (Mettler‑Toledo, İsviçre); GAMAG LINOMAT 5 yarı otomatik gözcü (CAMAG, İsviçre); UV lambası (CAMAG, İsviçre); 1200 serisi HPLC sistemi (Agilent, ABD); Gelişmiş‑III‑18W ultra saf su sistemi (Tang's Kangning Technology, Chengdu, Çin); poliamid TLC plakaları (10 cm x 10 cm, 10 cm x 20 cm; Sijia Biochemical Plastics, Taizhou, Çin); ikiz kanallı geliştirme odası (200 mm × 200 mm).

Reaktifler:Metanol (analitik dereceli, Beilian Fine Chemicals, Tianjin, Çin); metanol ve asetonitril (kromatografi sınıfı, Sigma‑Aldrich, Şanghay, Çin); buzlu asetik asit (analitik sınıf, Zhiyuan Chemical Reagents, Tianjin, Çin); formik asit ve kloroform (analitik sınıf, Damao Chemical Reagents, Tianjin, Çin); ultra saf su. Ekinakozit, tubulozit A, akteozit ve izoakteozit referans standartları (saflık %98'e eşit veya daha büyük, Yinglai Technology, Pekin, Çin).

Örnekler:Taze Cistanche numuneleri Çin'in Xinjiang kentinden temin edildi ve Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd. tarafından işlendi. Toplam 51 partiCistanche tubulosave 8 partiCistanche Deserticolatoplandı, dilimlendi, kurutuldu, toz haline getirildi ve depolama için kapatıldı.

Görüntü edinimi:iPhone 15 Pro (12 MP çözünürlük, F2,2 diyafram açıklığı, 2× optik yakınlaştırma).Görüntü dijitalleştirme yazılımı:F Renk Seçici (Deweibo) ve ImageJ (versiyon 1.54p, Ulusal Sağlık Enstitüleri, ABD).

2.2 Deneysel Yöntemler

2.2.1 Referans Standart Çözümlerin Hazırlanması

Ekinakozit, tübülozit A, akteozit ve izoakteosid referans standartları doğru bir şekilde tartıldı, %50 (V/V) metanolde çözüldü ve sırasıyla 1,003, 1,007, 1,004 ve 1,005 mg/mL konsantrasyonlarda stok çözeltiler elde etmek için 10 mL şişelerde hacme kadar seyreltildi.

Her bir stok solüsyonunun alikotları (ekinekosit 2 mL, tubulosid A 0.5 mL, akteozit 1 mL, izoakteozit 0.5 mL) 10 mL'lik bir şişeye aktarıldı, %50 metanol ile hacme kadar seyreltildi ve 210.02, 52.40, 101.12 içeren karışık bir referans standart solüsyonu elde etmek için 0.22 um'lik bir membrandan süzüldü ve Sırasıyla 51,14 ug/mL.

2.2.2 Test Numune Çözümlerinin Hazırlanması

Cistanche numuneleri dilimlendi, kurutuldu ve 0,425 mm'lik bir elekten geçecek şekilde öğütüldü. C. tubulosa tozu (0,5 g) veya C. Deserticola tozu (1,0 g) doğru bir şekilde tartıldı, 30 mL %50 metanol ile karıştırıldı, 40 dakika sonikasyona tabi tutuldu ve herhangi bir ağırlık kaybını telafi etmek için yeniden tartıldı. Çözelti, test numunesi çözeltisini elde etmek için 0,22 μm'lik bir membrandan süzüldü.

2.2.3 TLC Çözücü Seçimini Geliştirme

Solvent polaritesi, elüsyon kuvveti ve ön deneysel sonuçlara dayanarak, gelişmekte olan üç solvent sistemi değerlendirildi:

Sistem 1: Metanol‑buzlu asetik asit‑su (2:1:7, V/V)

Sistem 2: Metanol‑kloroform‑buzlu asetik asit‑su (2:1,5:1:7, V/V)

Sistem 3: Metanol‑kloroform‑buzlu asetik asit‑su (3,5:1,5:1:7, V/V)

Karışık referans standart çözeltisi ve test örneği çözeltisinin alikuotları (her biri 5 uL) poliamid TLC plakaları üzerine bantlar halinde uygulandı. Geliştirme sonrasında plakalar kurutuldu ve geciktirme faktörleri (Rf değerleri) hesaplandı.

2.2.4 Görüntü Toplama ve İşleme

TLC plakaları sabitlendi ve 365 nm UV ışığı altında incelendi. Aynı açı ve yükseklikten görüntü yakalamak için bir standa monte edilen iPhone 15 Pro kullanıldı. TLC görüntülerini RGB değerlerine, tepe alanlarına ve entegre gri değerlere dönüştüren dijital kantitatif analiz için F Color Picker ve ImageJ yazılımı kullanıldı. Arka plan çıkarma ve görüntü ters çevirme, ImageJ kullanılarak gerçekleştirildi. Görüntüler daha sonra 8 bit gri tonlamaya dönüştürüldü, yeniden ters çevrildi ve görselleştirme için kontrast ayarlandı. Ölçüm için gri değerler kullanılarak entegrasyon analizi için hedef bantlar seçildi.

 

Cistanche Ekstrakt Özellikleri Listesi

Cistanche World Shop'u ziyaret edin

 

 

 

 

3. Sonuçlar ve Tartışma

3.1 Geliştirilen Çözücünün Seçimi

Dört PhG'nin Rf değerleri, test edilen üç gelişmekte olan solvent arasında sistematik olarak karşılaştırıldı. Solvent Sistemleri 1 ve 2 yetersiz polarite gösterdi, bu da noktaların plaka yüksekliğinin yarısını aşmamasına ve zayıf ayrılmaya neden oldu. Solvent Sistemi 3 (metanol‑kloroform‑buzlu asetik asit‑su, 3,5:1,5:1:7, V/V/V/V), 0,67 (ekinakozit), 0,38 (tubulosid A), 0,68 (akteozit) ve 0,24 (izoakteozit) Rf değerlerine sahip keskin ve açıkça ayrılmış noktalar verdi. Bu nedenle sonraki tüm TLC analizleri için Sistem 3 seçildi.

3.2 Yöntem Doğrulaması

3.2.1 Kalibrasyon Eğrisi ve Görüntü İşleme Yöntemi Seçimi

Beş konsantrasyon seviyesinde karışık referans standart çözeltileri hazırlandı ve her birinden 5 μL TLC ile analiz edildi. Görüntüler ImageJ kullanılarak işlendi ve kalibrasyon eğrileri, konsantrasyonun (x, ug/mL) entegre gri değere (y) karşı grafiğinin çizilmesiyle oluşturuldu. Doğrusal aralıklar ekinekosid için 21-210 ug/mL, tubulosid A için 5,2-52 ug/mL, akteozid için 10,1-101 ug/mL ve izoakteozid için 5,2-52 ug/mL idi.

Üç görüntü dijitalleştirme yöntemi karşılaştırıldı:

Entegre gri değer– ortalama nokta gri değeri × piksel alanını ölçmek için ImageJ'yi kullanma (Ctrl + M).

Zirve alanı– çubuk aracını kullanarak kontur grafikleri oluşturmak ve nokta tepe alanını ölçmek.

RGB değerleri– optimize edilmiş kombinasyonlarla (ekinakozit için 2G+B, tübülosid A için R, akteozit ve izoakteosid için 2R+G) spot merkezde R, G, B kanal yoğunluklarını elde etmek için F Renk Seçicinin kullanılması.

Bu yöntemler arasında, entegre gri değer yaklaşımı en yüksek korelasyon katsayılarını (r 0,9890'dan büyük veya eşit) verdi ve bu da TLC görüntü dijitalleştirmesi için üstün doğruluğu gösterir.

3.2.2 Tespit ve Kantitasyon Sınırları

LOD ve LOQ, LOD=3.3σ/S ve LOQ=10σ/S (burada kesişimin σ=standart sapması ve kalibrasyon eğrisinin S=eğimi) olarak hesaplandı. LOD değerleri 0,041 ug/bant (ekinakosid), 0,005 ug/bant (tubulosid A), 0,008 ug/bant (akteosid) ve 0,011 ug/bant (izoakteosid) idi. Karşılık gelen LOQ değerleri sırasıyla 0,138, 0,017, 0,026 ve 0,037 ug/banttır.

3.2.3 Kesinlik, Kararlılık ve Tekrarlanabilirlik

Dört PhG için entegre gri değerlerin bağıl standart sapması (RSD), hassasiyet için %0,56 ila %2,4, stabilite için %0,76 ila %2,2 ve tekrarlanabilirlik için %0,61 ila %1,9 arasında değişmiştir; bunların tümü iyi yöntem performansına işaret etmektedir.

3.2.4 Kurtarma

Ortalama geri kazanımlar %87,1 ila %96,5 (ekinakosid), %88,4 ila %109,7 (tubulosid A), %94,1 ila %105,1 (akteosid) ve %96,9 ila %115,1 (izoakteozid) aralığında olup tatmin edici bir doğruluk göstermektedir.

3.3 Gerçek Örnek Analizi: TLC‑ImageJ ve HPLC karşılaştırması

51 gruptaki dört PhG'yi ölçmek için TLC‑ImageJ yöntemi uygulandı.Cistanche tubulosave 8 partiCistanche Deserticola. Kantitatif sonuçlar, C. tubulosa'daki dört PhG'nin tamamı için ve C. Deserticola'daki ekinakozit ve akteozid için iki yöntem arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark göstermeyen eşleştirilmiş t‑testleri kullanılarak HPLC analizine göre doğrulandı (P > 0,05).

Sonuçlar, TLC‑ImageJ'in yalnızca farmakope işaretleyici bileşenlerini (ekinakosid ve akteozid) değil aynı zamanda rutin kalite kontrolüne genellikle dahil edilmeyen tübülosid A ve izoakteozidi de doğru bir şekilde ölçebildiğini doğruladı. TLC‑ImageJ ve HPLC arasındaki iyi anlaşma, Cistanche kalite analizi için bu hızlı analitik yaklaşımın uygulanabilirliğini doğrulamaktadır.

3.4 Cistanche Kalite Analizi için TLC‑ImageJ Yönteminin Avantajları

TLC‑ImageJ yöntemi birkaç önemli avantaj sunar:

Ek boyama adımı yok– noktalar 365 nm UV ışığı altında mavi floresan olarak doğrudan görülebilir.

Yüksek verim– Tek bir TLC plakasında aynı anda 8-10 numune analiz edilebilir.

Hızlı analiz– kantitatif analizi 30 dakika içinde tamamlayın.

Taşınabilir ve düşük maliyetli– yalnızca temel TLC ekipmanı ve bir akıllı telefon gerektirir; sabit laboratuvar tesislerine bağımlılığı ortadan kaldırır.

Çok yönlü– Farmakope belirteçlerinin ötesinde birden fazla PhG'ye uygulanabilir, kapsamlı kalite analizine olanak sağlar.

İçinCistanche tubulosaChengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd. gibi ekstrakt tedarikçilerine göre bu yöntem, hızlı süreç içi ve nihai ürün kalite analizi için pratik bir araç sağlayarak, ABD ve Avrupa pazarlarındaki nutrasötik, fonksiyonel gıda ve ilaç endüstrilerinin beklediği yüksek standartları karşılamak üzere partiler arasında tutarlı PhG içeriği sağlar.

 

 

4. Sonuç

Bu çalışma, Cistanche'deki dört ana feniletanoid glikozidin hızlı kantitatif analizi için bir TLC görüntü dijitalleştirme yöntemi oluşturdu: ekinakosid, tübülosid A, akteozit ve izoakteosid. Yöntem, hedef bileşiklerin fizikokimyasal özellikleriyle uyumludur, ek boyama gerektirmez ve tek bir TLC plakasında 8-10 örneğin 30 dakika içinde eşzamanlı analizine olanak tanır. Bu yöntemle elde edilen niceliksel sonuçlar, doğruluğunu ve güvenilirliğini doğrulayan HPLC'den elde edilen sonuçlarla tutarlıdır.

Yöntem, taşınabilir, düşük maliyetli ekipmanlara dayandığından ve laboratuvar altyapısına bağımlılığı azalttığından özellikle birincil test uygulamaları ve saha bazlı kalite analizi için çok uygundur. Çin'in Sincan kentindeki Cistanche yetiştirme, işleme ve araştırma tesislerinde halihazırda uygulanmış olup, pratik faydasını göstermektedir.

 

Cistanche yetiştirmek ve işlemek için Wecistanche Fabrikası

 

Wecistanche Destek Hizmeti-İşbirliği hakkında daha fazla bilgi için
E-posta:wallence.suen@wecistanche.com

 

Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd.Dünyanın en büyük Cistanche işleme şirketi, bu gelişmiş ancak erişilebilir kalite analiz metodolojisini uygulamaktan ve tanıtmaktan gurur duymaktadır. 200.000 dönümlük Cistanche tabanımız, GMP sertifikalı üretim tesislerimiz ve son teknoloji ürünü membran ayırma teknolojilerimiz ile birinci sınıf ürünler sunuyoruzCistanche tubulosaendüstri lideri spesifikasyonlara kadar doğal olarak daha yüksek seviyelerde feniletanoid glikozitler içeren ekstraktlar. Ürünlerimiz ABD ve AB uluslararası kalite standartlarını karşılar ve TCM kaynatma maddeleri, fonksiyonel gıdalar, sağlık ürünleri, diyet takviyeleri, farmasötik ürünler ve kozmetikler dahil olmak üzere çok çeşitli uygulamalar için uygundur.

Cistanche takviyelerine olan küresel talep büyümeye devam ederken (tüketicilerin doğal yaşlanma önleyici, bilişsel sağlık ve canlılık ürünlerine olan ilgisinin artmasıyla birlikte pazarın 2033 yılına kadar 1,13 milyar dolara ulaşması öngörülüyor) güvenilir, hızlı kalite analiz yöntemlerinin önemi büyük hale geliyor. Burada sunulan TLC‑ImageJ yöntemi, üreticilere, tedarikçilere ve düzenleyici kurumlara tutarlı ürün kalitesi sağlamak için pratik bir çözüm sunarak Cistanche endüstrisinin Amerika Birleşik Devletleri, Avrupa ve ötesinde sürekli genişlemesini destekler.

 

 

Referanslar

[Orijinal referanslar korunmuş ve İngilizce çeviriye uygun şekilde uyarlanmıştır.]

Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd.

Web sitesi: www.xjcistanche.com

Yüksek feniletanoid glikosit konusunda uzmanlaşmakCistanche tubulosaözler

SC, HACCP, SOCA, NOP (ABD Organik Programı) ve Uluslararası Organik Mahsul İyileştirme Birliği (OCIA) sertifikalarıyla sertifikalı

ABD ve AB pazarına uyumlu