Ön Bazolateral Amigdala Nöronları Uzaktan Korku Hafıza Engramı Bölüm 1'den Oluşur

Giriiş:

Tehdit edici çevresel ipuçları sıklıkla kalıcı korku anıları yaratır, ancak bunların nasıl oluştuğu ve depolandığı aktif olarak araştırılmaya devam etmektedir.

Korku hafızası beynimizdeki bir hafıza şeklidir. Bu, çoğu zaman bizi korkutan, endişelendiren ve gergin hissettiren çok özel bir hafıza şeklidir. Ancak bu korku anısı ile hafızamız arasındaki ilişki çok karmaşıktır.

Birincisi, korku anılarının kısa süreli hafızamızla hiçbir ilgisi yoktur. Korku anılarının çoğu uzun vadeli hafıza bankalarımızda saklanır. Bu yüzden bazen uzun zaman öncesine ait anılar aklımızda uçuşur.

İkincisi, korku anıları mutlaka hafızamızı etkilemez. Dikkatimizde ve ruh halimizde değişikliklere neden olsa da hafıza kaybına neden olduğuna dair bir kanıt yok. Pek çok insan, bazı korkunç şeyleri yaşadıktan sonra hâlâ çok güçlü anılar sergileyebilir.

Son olarak, korku dolu anıların hayatımızın teması haline gelmesine izin vermemeliyiz. Bu anıları işlemek ve daha olumlu yönde ilerlemek için olumlu adımlar atmalıyız. Buna terapi almak, sosyal olarak aktif olmak, vücudunuzu ve beyninizi egzersiz yapmak ve olumlu bir zihniyet ve zihinsel sağlığı sürdürmek dahildir.

Bu nedenle, korku dolu anılar bizde çok fazla strese ve rahatsızlığa neden olsa da yeteneklerimize ve çabalarımıza güvenmeliyiz. Bu korku dolu anılarla yüzleşebilir, hafızamızı güçlendirebilir, büyüyebilir, daha iyi, daha özgüvenli insanlar olabiliriz. Hafızamızı geliştirmemiz gerektiği görülebilir. Cistanche Deserticola hafızayı önemli ölçüde geliştirebilir çünkü Cistanche Deserticola birçok benzersiz etkiye sahip geleneksel bir Çin tıbbi malzemesidir ve bunlardan biri hafızayı geliştirmektir. Kıymanın etkinliği içerdiği asit, polisakkaritler, flavonoidler vb. gibi çeşitli aktif bileşenlerden gelir. Bu bileşenler beyin sağlığını çeşitli şekillerde geliştirebilir.

Kısa Süreli Belleği Nasıl Geliştireceğinizi Bilin'e tıklayın

Yakın zamandaki bir korku anısının hatırlanmasının, hafıza oluşumu sırasında etkinleşen birden fazla beyin bölgesindeki nöronların yeniden aktivasyonunu yansıttığı düşünülüyor; bu da anatomik olarak dağılmış ve birbirine bağlı nöron topluluklarının korku belleği engramları içerdiğini gösteriyor.

Bununla birlikte, uzun süreli korku hafızası hatırlama sırasında anatomik olarak spesifik aktivasyon yeniden aktivasyon engramlarının ne ölçüde devam ettiği büyük ölçüde araştırılmamıştır. Negatif değerliği kodlayan ön bazolateral amigdaladaki (BLA) ana nöronların, korku davranışını yönlendirmek için uzaktan korku hafızası hatırlaması sırasında akut olarak yeniden etkinleştiğini varsaydık.

Yöntemler:

TRAP2 ve Ai14 farelerinin yetişkin yavruları kullanılarak, bağlamsal korku koşullandırması (elektrik şokları) veya yalnızca bağlam koşullandırması (şok yok) sırasında Fos aktivasyonuna tabi tutulan aBLA nöronlarını "TRAP" etmek için kalıcı tdTomatoekspresyonu kullanıldı (n=5/grup) . Üç hafta sonra fareler, uzaktan hafıza hatırlama için aynı bağlam ipuçlarına yeniden maruz bırakıldı ve ardından Fosimmünohistokimya için kurban edildi.

Sonuçlar:

TRAPed (tdTomato +), Fos + ve yeniden etkinleştirilen (çift etiketli) nöron toplulukları, bağlam koşullu farelerden korku açısından daha büyüktü; aBLA'nın orta alt bölgesi ve orta/kaudal dorsomedial kadranları, üç topluluk popülasyonunun en büyük yoğunluklarını sergiliyordu.

Domates + toplulukları bağlamda ve korku gruplarında baskın olarak glutamaterjik iken, uzaktan hafıza hatırlama sırasındaki donma davranışı her iki grupta da topluluk boyutları ile ilişkili değildi.

Tartışma:

aBLA içeren bir korku hafızası engramının uzak bir zaman noktasında oluşmasına ve devam etmesine rağmen, engram nöronlarının popülasyon büyüklüğünü değil elektrofizyolojik tepkilerini etkileyen plastisitenin, korku hafızasını kodladığı ve uzun vadeli korku hafızası hatırlamasının davranışsal tezahürlerini yönlendirdiği sonucuna vardık.

giriiş

Korku uyandıran uyaranlar sıklıkla çevresel ipuçlarını tehdit edici yaşam olaylarına bağlayan güçlü ve kalıcı çağrışımsal anılar oluşturur.

Benzer şekilde algılanan tehditlerle daha sonraki karşılaşmalar, korku hafızasının hatırlanmasını yansıtan daha güçlü koruyucu davranışlarla sonuçlanır. Korku çağrışımı işlemedeki hatalar, kaygı ve travma sonrası stres bozukluğu (PTSD) dahil olmak üzere olumsuz değerli psikiyatrik sonuçlara yol açabilir (Tovote ve diğerleri, 2015).

Korku hafızasının altında yatan mekanizmaların tüm karmaşıklığını anlamak, korkuyla ilişkili psikiyatrik hastalıkları teşvik eden işlevsel devre anormalliklerini tanımlamak ve normal korku işlemeyi yeniden sağlamak için yeni terapötik hedefler önermek için gereklidir.

Geçtiğimiz birkaç on yıl boyunca korku hafızası araştırmaları büyük ölçüde kısa süreli hafıza oluşumu, depolanması ve geri çağrılmasına odaklandı (Kimand Jung, 2006; Kim ve Cho, 2020; Lee ve diğerleri, 2021).

Çalışmalar, korku hafızası oluşumu ve depolanmasından geniş çapta dağılmış, birbirine bağlı CNS nöronal topluluklarının sorumlu olduğunu göstermiştir (Ramirez ve diğerleri, 2013; Liu ve diğerleri, 2014; Roy ve diğerleri, 2022). Bu toplulukların algılanan tehditlerle etkinleştirilmesi, hafıza engramı olarak bilinen kalıcı bir fiziksel damgayı temsil eden güçlendirilmiş sinaptik iletimle sonuçlanır (Yuan ve diğerleri, 2011; Miyawaki ve Mizuseki, 2022).

Kısa süreli hafıza hatırlamanın, orijinal olarak hafıza oluşumu sırasında aktive edilen aynı nöron topluluklarının yeniden aktivasyonunu yansıttığı düşünülmektedir; tek bir nöron topluluğunun kısmi aktivasyonunun bile korkuyla ilgili davranışları uyandırabildiğini gösteren kanıtlar, bu da hafıza hatırlamanın göstergesidir (Roy ve diğerleri, 2022). ). Atomik olarak kararlı güçlendirilmiş devre engramları kısa vadeli korku hafızasını açıklayabilirken, uzun vadeli korku hafızasına ne ölçüde katıldıkları belirsizliğini koruyor.

Her ne kadar uzun vadeli korku hafızası pekiştirmesinin, kısa vadeli hafızanın ilerleyici veya ara sıra güçlendirilmesine bağlı olduğu düşünülse de, yakın zamanda yapılan birkaç çalışma, kısa vadeli korku hafızası nöron topluluklarının zamana bağlı yeniden organizasyona uğradığını ve bunun da depolanan hafızanın ya kendi içinde farklı bir nöronal topluluğa göç etmesiyle sonuçlandığını ileri sürüyor. aynı beyin bölgesi (DeNardo ve diğerleri, 2019) veya tamamen farklı beyin bölgeleri (Frankland ve Bontempi, 2005; Do Monte ve diğerleri, 2016).

Bazolateral amigdala (BLA), korku hafızasının ayrılmaz bir parçası olan bir beyin bölgesidir ve hem yakın zamandaki hem de uzak korku hafızasının hatırlanmasında rol oynar (Maren ve diğerleri, 1996; Gale ve diğerleri, 2004; Kitamura ve diğerleri, 2017; Liu ve diğerleri). ., 2022).

Özellikle, raporlar BLA'da (1) hafıza oluşumu sırasında aktif hale gelen, (2) hafızanın geri çağrılması sırasında yeniden aktif hale gelen ve (3) korku olmayan bağlamlarda korku benzeri davranışları yönlendirebilen spesifik bir kısa süreli korku hafızası engramını tanımlamıştır. Royet diğerleri, 2022; Zaki ve diğerleri, 2022). Bununla birlikte, hafıza oluşumu sırasında aktif hale gelen aBLA nöron topluluğunun, uzaktan hafıza geri çağırma sırasında ne ölçüde yeniden aktif hale geldiği belirsizliğini koruyor.

Bu çalışmada, bir BLAfear hafıza topluluğunun yeniden aktivasyonunun, korku koşullanmasından 3 hafta sonra uzak bir zaman noktasında gözlemlendiği hipotezini test ettik. Özellikle ön BLA'da (aBLA) lokalize olan korku uyaranlarına yanıt veren negatif değerlikli nöronlarla birlikte, BLA'nın hem caydırıcı hem de ödül arama davranışına katkıda bulunan devreleri barındırması özel bir öneme sahiptir (Hu, 2016) (Goosensand Maren, 2001; Kim ve diğerleri, 2016, 2017; Zhang ve diğerleri, 2020).

aBLA'ya odaklanarak, Cre-rekombinaz aktivitesinin geliştirilmiş bir Cre yoluyla c-fos acil erken gen promotörü arttırıcı elemanlarına bağlandığı, Aktifleştirilmiş Popülasyonlarda (TRAP2) transgenik farelerde (DeNardo ve diğerleri, 2019) ikinci nesil Hedefli Rekombinasyon kullandık. -östrojen reseptörü (ER) kompleksi. Bu kompleksi eksprese eden nöronlar kalıcı Cre rekombinasyonuna maruz kalabilir, yani ER agonisttamoksifen veya bunun daha kısa etkili analoğu 4-hidroksitamoksifen (4-OHT) uygulanarak "TRAP edilebilir" ve Cre'nin kalıcı ifadesine izin verilir bağımlı efektör veya raportör moleküller.

Burada, TRAP2 farelerini ve Cre'ye bağımlı tdTomato muhabir hattı Ai14'ü (Madisen ve diğerleri, 2010) geçtik ve bağlamsal korku şartlandırması sırasında aBLA nöronlarının TRAPed'in (tdTomatopozitif) ne ölçüde yeniden etkinleştirildiğini (Fos immünoreaktif proteinini eksprese eder) uzaktan hafıza geri çağırma sırasında ölçtük 3 hafta sonra.

Kısa süreli korku hafızasında olduğu gibi, bulgularımız aBLA'da uzun vadeli glutamaterjik korku hafızası nöronal topluluklarının varlığını desteklemektedir.

Bununla birlikte, özellikle, ister koşullandırma ister uzaktan hafıza hatırlama veya her ikisi sırasında aktive edilmiş olsun, BLA nöron topluluklarının boyutu korku davranışıyla ilişkili değildi; bu, korku öğrenmeyle ilişkili esnekliğin doğasının ve bunun, topluluk nöronlarının elektrofizyolojik tepkileriyle ilişkili uzaktan korku hafızası hatırlaması üzerindeki nihai etkisinin ortaya çıktığını gösteriyor. Topluluk popülasyonunun büyüklüğü değil, esas olarak uzaktan korku hafızası davranışını yönlendirir.

Malzemeler ve yöntemler

Etik onay

Deneysel prosedürler, Texas Health SanAntonio Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı ve Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımına ilişkin Ulusal Araştırma Konseyi Kılavuzuna uygun hale getirildi.

Hayvanlar

Homozigot Fos2A−iCreER/2A−iCreER knockin (TRAP2, #030323) ve R26Ai14/+ (Ai14, #007914) farelerin (Jackson Laboratories) üreyen çiftleri, erkek hemizigotTRAP2:Ai14 yavruları (Şekil 1A) üretmek için çaprazlandı. Sütten kesildikten sonra fareler gruplandı ve kemirgen yatakları (Sani-chips; Harlan Teklad, Madison, WI, ABD) içeren plastik kafeslere (29 x 18 x 13 cm) yerleştirildi. Vivaryumun sıcaklığı 14°C ile kontrol edildi (24◦C). :10 saat aydınlık-karanlık döngüsü (ışıklar saat 06:00'da açılır). Yiyecek ve su istenildiği kadar mevcuttu. Fareler 3 aylık olduklarında deneyler başlatıldı.

Davranışsal alışkanlık

Daha önce yayınlanmış çalışmalarda olduğu gibi (DeNardo ve diğerleri, 2019), fareler, araştırılmayan deneysel koşullara (örneğin, kullanım, yeni bağlam keşfi vb.) yanıt olarak cfos indüksiyonunu en aza indirmek için bağlamsal korku koşullandırmasından hemen önce art arda beş gün alışkanlık eğitimi almıştır.( Şekil 1B).

Her günlük alışma oturumu 3 dakika sürdü ve koşullandırma odasına (HabitestModular System, Coulbourn Instruments) maruz bırakılmadan oluşuyordu. Oda duyusal ipuçları (1) %70 etanol (koku alma işareti), (2) metal ızgara zemin (dokunsal işaret), (3) desenli arka plan (görsel işaret) ve (4) görünür ışıktan (görsel işaret) oluşuyordu.

Ek olarak, tüm fareler, şartlandırma odasına yerleştirilmeden önce bir dakika süreyle elde tutuldu ve odadan çıktıktan sonra 10 saniye boyunca nazikçe "süründü". Alışkanlık seansları, intraperitoneal (IP) enjeksiyon yapılmaması dışında, farelerin koşullandırma gününde deneyimleyeceği muameleyi taklit edecek şekilde tasarlandı.

Bağlamsal korku koşullaması

Fareler daha sonra rastgele olarak korku koşullu (şok) ve bağlam koşullu (şoksuz/yalnızca bağlam) gruplara atandı. Koşullandırma 0. Günde başladı ve koşullandırma odasına yerleştirilen ve 2 gün boyunca keşfetmelerine izin verilen farelerden oluşuyordu. dk. Sonraki 4 dakika boyunca, korkuya şartlanmış fareler, 1 saniye süreli ve 0.75 m yoğunlukta bir dizi 1,5 metrelik şok aldı.

Şoklar, fareler için öngörülemeyen aralıklarla verildi, ancak fareler arasında tutarlıydı. Bağlam şartlandırılmış farelere ayak şokları hariç aynı protokol uygulandı(Şekil 1C). Görev sona erdikten sonra, her fareye, daha önce açıklandığı gibi hazırlanan 4:1 ayçiçeği ve hint yağı kokteyli içinde eritilmiş bir 4-hidroksitamoksifen (4-OHT, 100 mg/kg, IP) enjeksiyonu verildi (DeNardo ve ark., 2019).

Fareler daha sonra ev kafeslerine geri gönderildi ve burada normal barınmalarına devam etmeden önce en az 72 saat boyunca davranış odasının bitişiğindeki odada rahatsız edilmeden bırakıldılar.

Korku koşullandırmasından üç hafta sonra (21. Gün), farelere, koşullandırma sırasında mevcut olanlarla aynı duyusal ipuçlarıyla test odasına yeniden maruz kalmayı içeren uzaktan hafıza hatırlama testine (Şekil 1D) tabi tutuldu. Farelerin, FreezeFrame 4 video izleme yazılımı (ActiMetrics, Wilmette IL, ABD) kullanılarak korku davranışının (postüral donma) puanlandığı 5 dakika boyunca odayı keşfetmesine izin verildi.

Beyin fiksasyonu ve histoloji

Hafıza hatırlama testinden doksan dakika sonra, farelere izofluran (%5 oksijen) ile derin anestezi uygulandı ve daha sonra 30 mL heparinize (100 U/mL)izotonik salin ve ardından 100 mL %4 paraformaldehit (PFA) ile transkardiyak perfüzyon uygulandı. )0,1 M fosfat tamponunda.

Beyinler çıkarıldı, oda sıcaklığında (~22◦C) 6 saat boyunca %4 PFA içerisinde sonradan sabitlendi ve en az 2 gün boyunca %30 sakkaroz-0.01 M fosfat tamponlu salin (PBS) ile kriyokorumalı hale getirildi.

Beyinler daha sonra dondurucu mikrotom (Leica Microsystems, Wetzlar, Almanya) üzerinde 30 µm kalınlığında koronal bölümler halinde dilimlendi ve aBLA içeren bölümler (Paxinos ve Franklin, 2019), -20◦C'de polivinilpirolidon (PVP) kriyoprotektan içinde saklandı.

İmmünohistokimya

İmmün boyama daha önce tarif edildiği gibi gerçekleştirildi (Mitchell ve diğerleri, 2018; Maruyama ve diğerleri, 2019).

Kısaca, PVP kriyoprotektanı çıkarmak için kesitler PBS içinde yıkandı ve fiksasyon sırasında üretilen oto-floresan aldehitleri çıkarmak için sodyum borohidrit (%0.5) içeren PBS içinde 30 dakika boyunca inkübe edildi. Ek PBS yıkamalarının ardından kesitler, bloklama tamponunda (%3 keçi serumu, PBS içinde %0.05 Triton-X-100) ​​2 saat boyunca -22°C'de inkübe edildi, ardından poliklonal tavşan c'si içeren bloklama tamponunda 4°C'de inkübasyon yapıldı. -72 saat süreyle Fos birincil antikoru (Ab) (1:1,500, sinaptik sistemler #226 003) veya 24 saat süreyle monoklonal fare CaMKII birincil Ab'si (1:500, Enzo Life Sciences, #ADI-KAM-CA002).

Daha fazla yıkamanın ardından Fos ve CaMKII bölümleri, biyotinlenmiş keçi anti-tavşan IgG ikincil Ab'de (1:250 EMD Millipore #AP132B) -22◦C'de 2 saat ayrı ayrı inkübe edildi, ardından 0'da seri yıkama yapıldı. 05 M tris tamponlu salin (TBS) ve 0,1 Msodyum asetat daha sonra TBS bazlı bloke etme solüsyonunda 1 saat boyunca streptavidin-Alexa Fluor 488'e (1:250, Invitrogen #S11223) maruz bırakıldı.

Son olarak kesitler Tris tamponunda yıkandı ve Fluoromount-G (Invitrogen, #00-4958-02) ile slaytlara yerleştirildi.

Görüntüleme ve analiz

Uygun lazer hatlarıyla donatılmış, Zeiss LSM710 lazer taramalı eş odaklı mikroskobu ile arayüzlenen bir A{{0}}bit fotomultiplier tüp, 20x objektif (NA 0,8) ve tarama kafası iğne deliği boyutu kullanılarak aBLA görüntüleri yakalamak için kullanıldı. 47,5 mikron. Her görüntü için, tdTomato (yani, TRAPed, kırmızı) ve Alexa-488(Fos, yeşil) floresansının ayrı piksel haritalarını oluşturmak için ImageJ yazılımı (NIH, Bethesda, MD) kullanıldı.

Çift etiketleme için piksel eşik yoğunluğu ve dalga boyu örtüşme tespiti, daha önce açıklandığı gibi Fo'nun birincil Ab'si ile ve olmadan işlenen doku bölümlerinin karşılaştırılması yoluyla belirlendi (Mitchell ve diğerleri, 2018; Maruyama ve diğerleri, 2019). Hücre sayımı ve ortak lokalizasyon verileri, kullanılarak elde edildi. yarı özerk ImageJ eklentisi EzColocalization (Stauffer ve diğerleri,2018).

aBLA'nın görüntüleri neredeyse eşit büyüklükte üç rostro-kaudal alt bölgeye bölünmüştür; her alt bölge, bregmaya göre rostral-kaudal stereotaksik koordinatların spesifik olmayan aralığı ile tanımlanmıştır: rostral, -0,8 ila -1,1 mm; orta, −1,2 ila −1,5 mm; ve kaudal, −1,6 ila −1,9 mm (Paxinos ve Franklin, 2019). ImageJ'deki İlgi Alanı (ROI) yöneticisi daha sonra aBLA'yı çevresine göre dorsal-ventral ve medial-lateral çeyrekleri boyunca bölmek için kullanıldı. Bu şablon daha sonra belirtilen her rostral-kaudal alt bölge içindeki tüm görüntülere uygulandı.

aBLAçevre sınırı, her görüntüdeki tüm nöron sayımlarının 2-D uzamsal grafiğini oluşturmak için ImageJ EzColocalization eklentisiyle birlikte kullanıldı. Daha sonra rostral, orta ve kaudal alt bölgelerdeki uzamsal grafikler ayrı ayrı üst üste bindirildi. Bu, rostral alt bölge için 10 korku ve 10 bağlam grafiği, orta alt bölge için 10 korku ve 13 bağlam grafiği ve kaudal alt bölge için 12 korku ve 13 bağlam grafiği ile sonuçlandı.

Bağlam grubunda daha fazla sayıda alt bölge görüntü grafiğini düzeltmek için 1.0(10/10), 0,77 (10/13) ve 0,92 düzeltme faktörleri (12/13) bağlam grubunun sırasıyla rostral, orta ve kaudal alt bölge grafiklerine uygulandı. Bağlam verilerindeki sayımların topografik dağılımının sapmasını önlemek için, her aBLA alt bölgesinden hangi belirli sayımların hariç tutulacağını belirlemek için MS Excel'deki bir rastgele sayı üreteci kullanıldı.

Daha sonra aBLA alt bölgelerini 1-4 olarak adlandırılan çeyreklere ayırdık (bkz. Şekil 2D). Bunu yapmak için, kesişim koordinatı (0,0), MS-Excel'de 2-D düzleminde her çeyreğin alanının yaklaşık olarak dörtte birine eşit olduğu nokta olarak belirlendi. her rostral-kaudal alt bölgenin toplam alanının. Her sayımın çeyrek eksenleri ve xy koordinatları belirlendi ve saat yönünde 30° döndürüldü, böylece aBLA'nın anatomik eksenine hizalandılar.

Alt bölgelerin ve çeyrek dairelerinin boyutlarındaki küçük değişiklikleri hesaba katmak için sayım verileri yüzey alanına (sayım/mm2) göre normalleştirildi, böylece rapor edilen değerler alt bölge veya çeyrek daire başına sayım yoğunluğunu temsil ediyor.

TRAP2 sistemimiz tarafından yakalanan nöronların uyarıcı fenotipini değerlendirmek için, koşullandırma-TRAPed tdTomato ekspresyonunun, glutamaterjik nöronların yerleşik bir belirteci olan kalsiyum-kalmodulin bağımlı protein kinaz II (CaMKII) ile birlikte lokalizasyonu (McDonald ve diğerleri, 2002), şu şekilde ölçüldü: ImageJ hücre sayacı eklentisini kullanarak fare başına en az üç aBLA bölümünün görüntüleri.

İstatistik

İstatistiksel testler Prism 9.5.1 yazılımıyla (GraphPad, San Diego, CA, ABD) yapıldı ve Shapiro-Wilk testi kullanılarak tüm veri setlerinin normal dağılımına yönelik testi içeriyordu. Sürekli veriler için grup karşılaştırmaları, iki kuyruklu eşleştirilmemiş öğrenci verileriyle yapıldı. Önemli ANOVA etkileşimlerini takip eden ikili karşılaştırmalar için t testleri veya iki veya üç yönlü ANOVA ve ardından sırasıyla Sidak ve Tukey'in çoklu karşılaştırma testi.

Pearson r-katsayısını ve buna karşılık gelen P-değerini belirlemek için grup içi korelasyon analizi yapıldı. Korelasyonlar Fisher'sZ dönüşümü kullanılarak gruplar arasında karşılaştırıldı (Ek Tablo 1). Grup verileri ortalama ± SEM olarak ifade edilir. İstatistiksel anlamlılık P < 0.05 olarak belirlendi.

Sonuçlar

Korku şartlandırması uzaktan korku hafızası engramını tetikler

Korku hafızası oluşumu sırasında aktif hale gelen aBLA nöronlarının uzaktan hafıza hatırlama sırasında ne ölçüde yeniden aktif hale getirildiğini belirlemek için, farelere korku (n=5) veya bağlam (n=5) koşullandırması ve ardından 4-OHT enjeksiyonu uygulandı. (Şekil 1A-C).

Korku hafızası oluşumunun (yani korkunun öğrenilmesinin) incelenmesinde, donma davranışı üzerinde tedavi (şok ve şok yok) ve zaman aralığı (her şoktan sonra 30 saniyelik aralık) arasında anlamlı bir etkileşim gözlendi [iki yönlü ANOVA, F(5, 40)=6.733, P=0.0001]. Korku koşullu fareler, şoktan sonra taban çizgisine göre donma süresinin arttığını gösterdi 3(BL'nin %275 ± 68'i, P=0.0203), 4 (BL'nin %486 ± 76'sı, P < 0,0001) ve 5 (402 ± 26) BL yüzdesi, P < 0,0001) ve şoktan sonra bağlam şartlandırılmış farelere göre 4 (bağlamın %251 ± 38'i, p < 0,0001) ve 5 (bağlamın %375 ± 25'i, p < 0,0001).

Beklendiği gibi, koşullandırma sonrası 21. günde uzaktan hafıza geri çağırma için koşullandırma odasına yeniden maruz bırakıldığında, korku koşullu farelerin bağlam kontrollerine kıyasla önemli ölçüde daha fazla donma süresi sergiledikleri ortaya çıktı[346 ± %18, eşleştirilmemiş t-testi, t(8) {{7} }.16, P < 0.0001] (Şekil 1D).
Toplu olarak, Şekil 1'deki veriler, korku koşullandırma protokolümüzün güçlü korku hafızası oluşumuna ve uzaktan korku hafızası hatırlamasına neden olduğunu göstermektedir.

Korku öğrenimi, topluluk için sağlam bir alt bölgeye özgü aBLA'yı tetikler

TRAPed (tdTomato +) sayımlarının analizi, korku koşullu farelerde (110 ± 6,2), bağlam koşullu (77 ± 3,1) farelere göre önemli ölçüde daha büyük fos-aktive edilmiş aBLA popülasyonunu ortaya çıkardı[eşlenmemiş t-testi, t(8)=4 .782, P=0.0014] (Tablo 1). Beklendiği gibi, bağlamın ∼%70'i ve korku-TRAP edilmiş nöronların ∼%80'i (n=6 aBLAbölümleri/grup) CaMKII + idi (Ek Şekiller 1A, B), bu da onların esas olarak glutamaterjik projeksiyon nöronları olduklarını gösterir.

Önceki raporlara benzer şekilde (Kim ve diğerleri, 2016), theaBLA'yı üç rostrokaudal alt bölgeye ayırdık: rostral, orta ve kaudal (Şekil 2A–C) ve TRAPed sayım yoğunluklarını (sayım/mm2) alt bölgeler arasında ve içinde karşılaştırdık. tedavi grupları arasında (Şekil 2D). İki yönlü ANOVA, alt bölge ile tedavi arasında anlamlı bir etkileşim olduğunu ortaya çıkardı [F(2,24)=7.7099,P=0.0038].

Grup içi analizler, TRAPed sayısının orta aBLA alt bölgesinde korku (239 ± 9) ve bağlam (144 ± 12) gruplarında rostral (korku: 86 ± 6,P < {) gruplarına göre daha fazla olduğunu ortaya çıkardı. {8}}.0001; bağlam: 81 ± 9, P=0.0035) ve kaudal (korku:123 ± 15, P < 0,0001; bağlam: 90 ± 12, P {{20) }}.0132) alt bölgeler.

Gruplar arası analiz, korkuya koşullanmış farelerin orta alt bölgesinde TRAP'lı sayı yoğunluğunun önemli ölçüde daha yüksek olduğunu ortaya çıkardı (P < 0.0001).

TRAPed nöronların konumunu daha fazla tanımlamak için rostral, orta ve kaudal aBLA alt bölgelerini her biri dört çeyreğe ayırdık (Şekil 2E). Orta alt bölgede, sayım yoğunluğu üzerinde ana işlem etkisi gözlendi [üç yönlü ANOVA, F(1,32)=17.44, P=0.0002] ile 3. çeyrekte (218 ± 29'a karşı 107 ± 17, P=0.0031) ve 4'te (240 ± 16'ya karşı 101 ± 12, P < 0.0001) korkuda bağlam grubuna göre daha yüksek TRAPedcount yoğunluğu.

aBLA alt bölgelerinde grup içi ve çeyrek içi TRAPed sayım yoğunluklarını daha da değerlendirdik (Şekil 2E ve Ek Tablo 2). Özellikle, rostral alt bölge (59 ± 8) ile karşılaştırıldığında, korku grubunun 2. çeyreğinin hem orta (245 ± 21, P < 0.0001) hem de kaudal (172 ± 23, P=0.0040) alt bölgesi.

Daha sonra, aBLA'nın tamamında, orta alt bölgesinde ve topluluk sayı yoğunluklarının bağlam ve korku koşullu gruplar arasında farklılık gösterdiği orta ve kaudal alt bölgelerin çeyreklerinde donma davranışı ile TRAP'lı nöron topluluğunun boyutu arasındaki ilişkiyi değerlendirdik. Ne korku ne de bağlam grubunda (Şekil 2F) anlamlı bir korelasyon gözlemlenmedi, bu da korku davranışının aBLA alt bölgelerindeki korku öğrenme duyusu topluluğunun boyutunu yansıtmadığını gösteriyor.

Toplu olarak, Şekil 2'deki bulgular, korku koşullanmasının aBLA'da bağlam koşullamasına göre daha büyük bir fos topluluğuyla sonuçlandığını göstermektedir. Topluluk nöronları en yoğun şekilde orta aBLA alt bölgesinde lokalizeydi, ancak korku davranışı topluluk popülasyon boyutlarıyla ilişkili değildi.

For more information:1950477648nn@gmail.com