Soyut
Amaç: Bu çalışma, karışık bir bitki özütünün (MHE) bir ilaç olarak uygulanabilirliğini doğrulamak için yapılmıştır.yaşlanma karşıtı kozmetikiçeriğini araştırarakcilt yaşlanma karşıtıin vitro ve in vivo aktiviteler. Yöntemler: Bu çalışmada Forsythiae fructus, Tribuli fructus, Solomon mührü, Sibirya ginsengi, Ponciri Fructus ve Ginseng içeren ultrasonik ekstraksiyon kullanarak MHE hazırladık. araştırdıkdermal fibroblastlarda cilt için MHE'nin yaşlanma karşıtı etkisi. buyaşlanma karşıtı aktivitetip I kollajen sentezi seviyeleri ile belirlendi. Matris metaloproteinaz-1 (MMP1) ve metalloproteinazlar 1'in doku inhibitörü (TIMP1) mRNA seviyeleri, qRT-PCR ile ölçüldü. MMP1 protein seviyeleri, lekeleme analizi ile değerlendirildi. Cilt nemi, elastikiyeti, dokusu ve kırışıklıkları ile ilgili klinik testler, yüzde 1 MHE içeren kozmetikler kullanılarak yapıldı. Sonuçlar: MHE, pro-kollajen tip I sentezinin ve TIMP1 mRNA ifadesinin yukarı regülasyonunu indükledi. MHE, MMP1 mRNA seviyelerinin ve protein seviyelerinin aşağı regülasyonuna yol açtı. Ayrıca, yüzde 1 MHE içeren kozmetiklerin cilde uygulanmasından sonra, tedaviden 4 hafta sonra cilt hidrasyonu, elastikiyeti, dokusu ve kaz ayakları iyileştirildi. Sonuç: MHE, in vitro olarak kollajen sentezini teşvik ederek ve MMP1 gen ekspresyonunu baskılayarak yaşlanmayı geciktirici bir etkiye sahiptir ve in vivo olarak cilt iyileştirme etkisine sahiptir. Bu nedenle, MHE'nin işlevsel bir kozmetik bileşen olarak değere sahip olduğu gösterildi.
anahtar kelimeler:Cilt bakımı, Yaşlanma karşıtı, Kırışıklığa karşı, Doğal kozmetikler, Bitkisel ilaçlar
YAŞLANMAYA KARŞI Bitkisel Takviyeler Cistanche
giriiş
Deri, dış çevre ile temas halinde olan ve hayatta kalmamız için hayati önem taşıyan bir organdır ve birincil bariyer görevi görür.dış saldırılara karşıbulaşıcı ajanlar ve fiziksel yaralanma gibi; ayrıca birkaç önemli fizyolojik rolü de yerine getirir (Slominski ve diğerleri, 2004; Vollmer ve diğerleri, 2018). Yaşlandıkça,cilt fonksiyonuultraviyole (UV) ışınları, kirlilik ve stres nedeniyle atrofik değişiklikler ve cilt hücrelerinin sayısı ve cilt kalınlığı azaldıkça ortaya çıkan cilt yaşlanması ile giderek kötüleşir (Farage ve ark., 2013).
Cilt yaşlanmasıiçsel yaşlanma ve dışsal yaşlanma olarak ikiye ayrılabilir. Endojen cilt yaşlanması, dış etkenlerden bağımsız olarak zamanla doğal olarak gerçekleşir. Dermal-Epidermalkavşak (DEJ) kohezyonu zayıflar ve farklılaşma ilekeratinositlerin lipid oluşumu azalır (Makrantonakiet al., 2007). Öte yandan, eksojen yaşlanma, dış etkenlerden kaynaklanır.UV ışınları, kızılötesi ışınlar (IR), sigara, incetoz ve yaşam tarzı. Bunlar arasında fotoyaşlanma UV kaynaklıdır.cilde nüfuz eden ve kollajen ve elastine zarar veren ışınlardermiste. Bu süreçte elastik lifler ve kollajencildin lifleri deforme olur, bu da elastikiyetin azalmasına neden olurve sarkma. Kollajen, hücre dışının önemli bir bileşenidir.matris ve doku fonksiyonunun belirlenmesinde önemli bir role sahiptir.
Çeşitli kolajen türleri arasında, tip 1 kolajen, toplam kolajenin yaklaşık yüzde 75-80 kadarını oluşturur (Landau, 2007; Lovell ve diğerleri, 1987; Mays ve diğerleri, 1988). Cilt maruz kaldığındaUV ışınları uzun süre serbest radikaller üretir. Bunlar ücretsizradikaller, matris metaloproteinazın ifadesini uyarır-1(MMP1), kollajen yıkımını destekleyen ve kollajeni inhibe edencilt elastikiyetini azaltan ve kırışıklıklara neden olan sentez.Bu nedenle, neden olduğu cilt kırışıklıklarını önlemek ve iyileştirmek içinyaşlanmayı teşvik eden bir bileşen geliştirmek gereklidir.kollajen üretimini ve ekspresyonunu ve aktivitesini inhibe ederMMP1 (Wlascheket al., 2001).
Cilt yaşlanmasıyaşam kalitesi ile yakından ilişkilidir. Deri en görünür organ olduğu için yaşlanma sürecinden haberdar olmamızı sağlar (Binic ve ark., 2013). Tıp, eczacılık ve kozmetik alanlarında çeşitli çalışmalar devam etmektedir.cilt yaşlanmasını önlemek ve iyileştirmek. buyaşlanma karşıtı bileşenlerin geliştirilmesien önemli yaşlanma karşıtı stratejilerden biridir.
Forsythiae fructus, Tribuli fructus, Solomon mührü, Siberian ginseng, Ponciri fructus ve Ginseng içeren yeni yaşlanma karşıtı bileşenler geliştirmek için ultrasonik ekstraksiyon kullanarak bitkisel özler hazırladık.
Çeşitli tıbbi ve cilt etkilerine sahip bitkilerden altı bitkisel ilaç seçildi. Forsythiae fructus, Lian Qiao olarak bilinen Forsythia suspense'in (Oleaceae familyası) kurutulmuş meyvesiÇin'de ilk olarak bir Shennong Bencao Jing'de kaydedildi.geleneksel Çin tıbbı (TCM) üzerine prestijli monografi(Donget al., 2017). Isı temizleme olarak kullanılmıştır vegibi bulaşıcı hastalıkların tedavisi için TCM'yi detoksifiye etmekakut nefrit, erizipel ve ülserler (Wanget al., 2018). Bukliniklerde tek bir ilaç veya bileşik reçete olarak yaygın olarak kullanılmaktadır.Modern farmakoloji, çeşitli özelliklere sahip olduğunu göstermiştir.anti-enflamatuar, antibakteriyel, anti-dahil olmak üzere biyoaktivitelerviral, antioksidan, antitümör, anti-diyabetik, antihiperlipidemik,antiandrojenik alopesi, anti-kusma, anti-aging ve anti-obezite aktiviteleri ve nöroprotektif, hepato-koruyucu vedamar gevşetici etkiler (Donget al., 2017). Ayrıca, olmuşturbildirdihor çiçeği fructuscilt beyazlatma, anti-atopik dermatit ve yaşlanma karşıtı etkiler. Tayvan'a göreülke çapında reçete veritabanı,Hor çiçeği Fructusolduatopiyi tedavi etmek için en sık kullanılan ilk 10 bitki arasında yer alırdermatit (yüzde 15,9), kurdeşen (yüzde 11.49-13,4) ve akne (yüzde 22,3)(Donget al., 2017). hor çiçeği fructussaponinler içerir,flavonoidler,ve yararlı olan alkaloidler ve oleanolik asitfarmakolojik eylem. Ek olarak, arctigenin içerir vematairesinol. Fizyolojik olarak aktif cilt bileşenleri olarak, bunlarmelanin metabolizması üzerinde etkili olan tirozinaz inhibitörleridir.tarafından indüklenen yol -melanosit uyarıcı hormon ( -MSH)ve kozmetik beyazlatma malzemeleri olarak ilgi görmektedir.(Yang ve Choe, 2011).Tribuli fructus, kurutulmuş meyvesi olantribulus terrestrisL, farmakolojik olduğu bildirilmiştircinsel işlevi iyileştirme, önleme ve tedavi etme faaliyetleriKardiyovasküler hastalık ve nöroproteksiyonun iyileştirilmesi vehafıza. Aynı zamanda anti-diyabetik, antiinflamatuar veantioksidan etkiler (Chhatreet al., 2014). Tribuli fructusekstrakt büyük miktarlarda diosgenin, tigogein, çeşitlisaponinler, vb. Bu saponinler en önemli biyoaktif maddelerdir.gibi çeşitli biyolojik etkilerden sorumlu bileşenlerafrodizyak etki, antihipertansif etki ve koruyucuiskemi-reperfüzyon hasarına ve antikanser etkisine karşı,antibakteriyel ve antifungal aktiviteler (Chhatreet al., 2014).
Diğer bileşenler arasında furostanol ve spirostanol saponinler, polisakkaritler, flavonoid glikozitler, alkaloidler ve amidler bulunur. Ayrıca sıçanlarda atopik dermatite karşı etkilidir ve antiinflamatuar etkilere sahiptir (Chhatre ve ark., 2014). Tribuli fructus ekstraktının yaşlanma karşıtı etkisinin HS68 hücrelerinde Tip I pro-kollajen ve Elastin üretimini arttırdığı, adipositlerin lipid birikimini teşvik ettiği ve sonuçta cilt kırışıklıklarını ve elastikiyetini iyileştirdiği bildirilmiştir (Kim ve ark., 2016). ). Sibirya ginsengi (Acanthopanax senticosus), ginseng ve yabani ginseng ile birlikte Oga familyasına ait yaprak döken bir çalıdır. Sibirya ginsenginin ginseng ile birçok benzerliği vardır ve inme, yüksek tansiyon ve diyabet için bitkisel bir ilaç olarak kullanılır. Sibirya ginseng özü, doğu tıbbında uzun süredir kullanılmakta olup, yakın zamana kadar çeşitli çalışmalarda farmakolojik ve fizyolojik sonuçlar bildirilmiştir. Şimdiye kadar tanımlanan Sibirya ginsengi bileşenleri arasında eleuthero tarafları A, B, C, D, E, I, K, L ve M ve sesamin, kiisanosid, kafeik asit, klorojenik asit, kampesterol, vitaminler ve mineraller (Park ve diğerleri, 2010).
Triterpenoid saponinler, lignanlar, kumarinler veflavonoidler, aralarında fenolik bileşiklerin en aktif bileşenler olduğu kabul edilir (Huang ve diğerleri, 2011). Sibirya ginseng ekstresinin cilt üzerindeki etkinliği hakkında birçok rapor bulunmaktadır.Kırışık önleyici etki,antioksidan etki,kolajen sentezive fotoyaşlanmaya karşı kollajenaz inhibitör aktivitesi bildirilmiştir (Park ve ark., 2010). Sibirya ginseng ekstraktının, epidermal kök hücrelerin proliferatif kapasitesini etkileyerek ve epidermisi kalınlaştırarak Tip IV kollajen sentezini düzenlediği bildirilmiştir (Choi ve ark., 2016). Süleyman'ın mührü, tonik etkisi olan ve doğu tıbbında kalp yetmezliğini ve diyabeti tedavi etmek için kullanılan Polygonatum odoratum'un (eş anlamlısı: P.officinale) bir köksapıdır. Süleyman'ın mührü döngü önleyici ve öksürük önleyicidir; kalp gerginliğini hafifletir ve idrar söktürücü, enerji verici, hipoglisemik, yatıştırıcı ve toniktir; tüberküloz ve mide-bağırsak bozuklukları dahil olmak üzere akciğer hastalıklarını tedavi etmek için kullanılır (Haroon ve ark., 2012). Ayrıca kan hastalıklarının tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır; böbrek kanalları üzerinde faydalı etkileri vardır ve beyaz saç, görme sorunları, baş dönmesi ve saçkıranları önler. Bir sinir toniğidir ve diyabet tedavisinde kullanılmaktadır (Haroon ve ark. 2012). Süleyman'ın mührü, yüksek fenol içeriğine ve antioksidan aktiviteye sahiptir. Solomon'un mühründen gelen homoizoflavanonlar, gelişmiş glikosilasyon son ürünlerinin oluşumunu engeller. Solomon mührü, güçlü bir bağırsak bağışıklık sistemi düzenleyici aktivitesi ve osteoklast farklılaşmasını ve lektin kaynaklı apoptozu indükleme yeteneğini göstermiştir. Örnek olarak P. odoratum yaprak ekstraktı örneğinde yara iyileştirme işlevi bildirilmiştir (Fathi ve ark., 2014). Ponciri fructus immatures, Rutaceae familyasına ait Poncirus trifoliata Rafinesque'in olgunlaşmamış meyvesidir (Jung ve ark., 2016). Son zamanlarda, anti-enflamatuar ve anti-hipersensitivite etkileri rapor edilmiştir ve yağlı silt ekstraktının etkisinin kanser hücrelerinin apoptozunu indüklediği bildirilmiştir (Lee ve diğerleri, 2008). Ponciri fructus'un atopik dermatit tedavisinde etkili olduğu bilinmektedir. Ponciri fructus ekstraktının deri uygulaması yoluyla epidermal hiperkeratoz, dermal ödem ve sitokinler gibi atopik dermatitlere karşı etkileri bildirilmiştir. Özellikle kaşıntı, mast hücre sayısı, IgE üretimi ve sinir büyüme faktörü ekspresyonunda önemli azalmalar bildirilmiştir. Ponciri fructus özleri, bağışıklık mekanizmalarını düzenleyerek atopik dermatite karşı etkili bir anti-inflamatuar etki ve antipruritik etkinlik göstermiştir. Ek olarak, Ponciri fructus ekstraktının oral uygulamasının alerjik hastalıkların tedavisi ve önlenmesinde yardımcı olduğu bilinmektedir (Hwang ve diğerleri, 1997). Ginseng, çok işlevli aktivitelere sahip, yaygın olarak kullanılan geleneksel bir bitkisel ilaçtır. Ginseng, antiinflamatuar, antioksidan, antitümör ve yaşlanma karşıtı aktiviteleri için kullanılmıştır (Choi, 2008; Kim & Ko, 2020). Ginseng'in cilt üzerindeki etkinliği ile ilgili birçok çalışma yapılmıştır (He ve ark., 2018). Bunlar arasında, ginseng'in temsili bileşenleri olan saponinler ve ginsenosidler hakkında birçok rapor bulunmaktadır. Saponinler, çoğu bitkide yaygın olarak bulunan ve çeşitli formlarda bulunan bileşiklerdir. Saponinler hemoliz gibi çeşitli biyolojik aktiviteleri ve antibakteriyel, antiviral ve antioksidan fonksiyonları hızlandırabilirler. Ayrıca saponinler, şişliği ve cilt iltihabını azaltabilen anti-enflamatuar özelliklere sahiptir. Ginsenosidler, anjiyogenezi teşvik ettiği ve vasküler endotelyal büyüme faktörü ve birikimini indüklediği bilinen enflamatuvar sitokinlerden biri olan interleukini (IL)-1 arttırır.farelerde cilt yanık bölgelerinde. Deri yaralarından makrofajları uzaklaştırma ve yara iyileşmesini destekleme etkileri de rapor edilmiştir (Kim ve diğerleri, 2011).
Bu çalışmanın amacı, karışık bir bitkisel özütün (MHE) cilt yaşlanma karşıtı etkisini in vitro ve in vivo olarak aydınlatmaktı.
Yöntemler
1. In vitro etkililik değerlendirmesi
1) MHE'nin hazırlanması
Forsythia süspansiyonunun kurutulmuş meyvesi, Tribulus Terrestris L.'nin kuru meyvesi, Sibirya ginsengi (Acanthopanax senticosus (Eleuthero) Kökü), Süleyman'ın mührü (Rhizome ve Polygonatum Officinale'nin kökü), Poncirus Trifoliata Rafinesque'in meyvesi ve ginseng (Panax) yerel bir pazardan satın alındı. Geleneksel Çin Tıbbının (TCM) "Yin-Yang" ve "Beş Element" teorisine dayanarak, "Yang"a karşılık gelen Forsythia suspensa, Tribulus terrestris L. ve Poncirus trifoliata Rafinesque ve Sibirya ginsengi, ginseng ve Süleyman'ın mührü karşılık gelen "Yang" "Yin" seçildi. Altı şifalı bitki yine beş elemente (odun, ateş, su, Metal veya Altın ve Toprak veya toprak) karşılık gelen özelliklere ayrıldı. Bu şifalı otlar, her bir elementin dengesi için aynı oranda karıştırılmış ve Poncirus trifoliata ile Dünya'ya karşılık gelen ginseng, orantıları eşleştirmek için diğer elementlerle birleştirilmiştir (Tablo 1). Altı şifalı bitki, ultra sonikasyonla (20 kHz, 2 saat) yüzde 30 etanol içinde özümlendi. Döner buharlaştırıcı ile konsantre edildikten sonra yüzde 30 (h/h) bütilen glikol ilave edildi ve çözelti, yüzde 1 katı içerikli bir özüt hazırlamak için seyreltildi.
Tablo 1. Karışık bitkilerin bileşimi
2) Hücre kültürleri ve reaktifler
İnsan birincil fibroblast hücreleri (HDFn), PromoCell'den (Normal insan dermal fibroblastlar genç sünnet derisi, C-12300; PromoCell, Almanya) elde edildi. Dulbecco's ile hücre kültürleriYüzde 10 (v/v) fetal sığır serumu (FBS, SH30084.03, Hyclone) ve yüzde 1 antibiyotik içeren değiştirilmiş Eagle's orta yüksek glikoz (DMEM yüksek glikoz, SH30243.01, Hyclone, Cytiva)antimikotik ajanlar (Anti-anti, 15240-062, Gibco, ABD), yüzde 5 CO2 inkübatöründe 37 derecede kültürlendi.
3) Hücre canlılığı testi (MTT testi)
MTT tahlili, hücre yaşayabilirliğini ölçtü ve MHE'nin sitotoksisitesini belirledi. Hücreler, kuyucuklu bir plaka üzerinde 5x103 hücre/göz oranında tohumlandı ve hücre kültürü altında 24 saat kültürlendikoşullar. Daha sonra ortamı attık, hücreleri fosfat tamponlu salin solüsyonuyla (PBS, 21-040-CV; Corning, ABD) yıkadık, hücreleri yeni serumsuz ortama yerleştirdik vehücrelere {{0}}.01, 0.025, {{10}}.05 konsantrasyonları uyguladı. Örneklerin yüzde 0.10, 0.25, 0.50, 0.75 ve 1.{15}} ve hücreleri 24 ve 48 saat kuluçkaya yatırdı. Ardından 100 μL MTT solüsyonu ekledik.(0,5 yüzde , 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5 difenil-2H tetrazolyum bromür) her birine iyi ve hücreleri 2 saat daha inkübe etti. Kültür ortamını çıkardıktan sonra, 100 μL yüzde 100 dimetil sülfoksit (DMSO) ekledik, hücreleri 10 dakika çalkaladık ve bir mikroplaka okuyucu (Epoch 2 mikroplaka okuyucu, BioTek, ABD) ile 590 nm'de absorbansı ölçtük.
4) Pro-kollajen tip I üretiminin ölçümü
Hücre kültürü ortamındaki pro-kollajen tip I konsantrasyonu, ticari olarak temin edilebilen bir ELISA kiti (Prokollajen tip I C-peptit EIA Kiti, MK101, TaKaRa) kullanılarak ölçüldü.Bio, Japonya) üreticinin talimatlarına göre. Her numune üç kopya halinde analiz edildi.
5) Kantitatif kullanarak mRNA ifade seviyelerinin ölçümü
Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu (qRT PCR) Hücreler, kuyu plakaları üzerinde 1×105 hücre/oyuk olacak şekilde tohumlanmıştır. HDFn hücreleri 24 saat kültürlendi; daha sonra hücreler, 24 saat boyunca FBS'siz DMEM yüksek glikoz ile senkronize edildi. Ortam, serumsuz ortamla değiştirildi ve numunelerin yüzde 0.05, 0.10, 0.25, 0.5 ve 0.75 konsantrasyonları ile işlendi 24 ve 48 saat boyunca. RNA ekstraksiyonu, bir RNA ekstraksiyon kiti (TaKaRa MiniBEST Universal RNA ekstraksiyon kiti, 9767A, Takara Bio, ABD) kullanılarak HDFn hücreleriyle gerçekleştirildi ve numuneler, üreticinin protokolleri izlenerek saflaştırıldı. İzole edilmiş RNA (1 ug), bir TR reaktif kiti (gDNA Eraser içeren PrimeScriptTM RT reaktif Kiti, RR047A, Takara Bio, ABD) kullanılarak cDNA'ya sentezlendi. SYRB Green Realtime PCR Master Mix (Power SYBRTM Green PCR Master Mix, 4367659, Applied BiosystemsTM, ABD) ve QuantStudioTM 3 (QuanStudioTM 3 Real-Time PCR cihazı, A28132, Thermo Fisher Scientific, ABD) gerçek zamanlı PCR makinesi kullanılarak, gen ekspresyon seviyeleri, temizlik geni gliseraldehit 3-fosfat dehidrojenaz (GAPDH) için standardize edildi. Bu çalışmada kullanılan primerler Tablo 2'de sunulmaktadır. Deneyler, üç bağımsız tekrar için iki kopya halinde gerçekleştirildi. Erime eğrisi analiziHer primer seti için yapıldı.
6) Western blot analizi
Fibroblast hücrelerinden alınan protein lizatları, bir lizis tamponu (EzRIPA Lysis Kit, WSE-7420; ATTO Corporation, Japonya) ile ekstre edildi. Bradford yöntemi, proteinleri ölçmek için kullanıldı.Eşit miktarlarda protein, 5X numune tamponu (TLP-102-01, TransLab, Kore) ile karıştırıldı ve 99 derecede 10 dakika denatüre edildi. Proteinler, 150 dakika boyunca 150 V'de yüzde 10 SDS-PAGE ile ayrıldı ve PVDF zarlarına (Clear Blot Membrane, 3322546, ATTO Corporation, Japonya) aktarıldı. Membranlar, yüzde 0,5 sığır serum albümini (BSA, A4503-10G; Sigma) ile 1 saat süreyle bloke edildi ve Tween-20 (10X TBS with Tween 30, TR{) içeren Tris tamponlu salinle yıkandı. {17}}; Biosesang, Kore) üç kez; membranlar daha sonra MMP-1 (Rekombinant Anti-MMP1 antikoru [EP1249Y], ab134184, Abcam, ABD), -Actin (Anti{24}}Actin (N-tern) ve PA0207'ye (Abfrontier) karşı birincil antikorlarla inkübe edildi , Kore) gece boyunca 4 derecede Durulamadan sonra, zarlar ikincil antikor olarak anti-tavşan IgG-yaban turpu peroksidaz (HRP) (Anti-tavşan IgG, HRP-bağlı Antikor, #7074; Hücre Sinyal Teknolojisi, ABD) ile işlendi. 1 saat boyunca kemilüminesans tespiti, ECL Prime western blot tespit reaktifi (GE Healthcare, ABD) ve ATTO WSE-6100 LuminoGraph (ATTO Corporation, Japonya) kullanılarak yapıldı. Kantitatif analiz için, yakalanan görüntüler Image ile analiz edildi yazılımı (CS analyzer 4, ATTO şirketi, Japonya).
7) İstatistiksel analiz
İstatistiksel analiz, Windows için GraphPad Prism sürüm 3.03 (GraphPad Software, ABD) kullanılarak yapıldı. Sonuçlar, 3 deneyin ortalama ± SD'si olarak sunulur. eşleştirilmemişStudent t-testi kullanıldı ve p değerleri<0.05 were considered statistically significant.
2. İn vivo etkililik değerlendirmesi
1) Reaktifler ve kozmetik ürünler
Test ürünleri cilt losyonu, esans kremi ve göz kremiydi; bu kremler, Tablo 3'te gösterilen aktif bileşen olarak MHE'nin yüzde 1'ini içeriyordu.
2) İnsan katılımcılar
Tüm gönüllüler testin amacını ve içeriğini kabul etti ve teste başlamadan önce yazılı bilgilendirilmiş onam formları imzaladı. Başka bir cilt bakım ürünü kullanmalarına izin verilmedi ve test ürünleri cilt-göz kremi (sadece kaz ayağına)-esanslı krem-losyon krem sırasıyla yüze uygulandı. Çalışma, Helsinki Bildirgesi yönergelerine göre yürütüldü ve Kore Ulusal Biyoetik Politikası Enstitüsü Kurumsal İnceleme Kurulu (#P01-202108-13-001) tarafından onaylandı.
3) Etkinlik testi
Bu çalışmaya, yaşları 45 ile 55 (ortalama ±SD 50.81±2.86) arasında değişen, normal cilde sahip 21 kadın denek katıldı. Test ürünleri 4 hafta boyunca günde iki kez (sabah ve akşam) uygulandı. Katılımcılar araştırma merkezini 2 haftada bir ziyaret ederek, ortam sıcaklığının 22±2 derece ve bağıl nemin yüzde 50±5 olduğu laboratuvarda test bölgeleri ölçülmüştür. Katılımcılar yüzlerini yıkadıktan sonra laboratuvarda 20 dakika ortama alıştırıldı ve cilt hidrasyonu, elastikiyeti, dokusu ve kazayağı açısından değerlendirildi. Cilt hidrasyonu, bir Corneometer® CM825 (C plus K elektronik GmbH, Köln, Almanya) kullanılarak ölçüldü; esneklik bir Cutometer® MPA 580 (C plus K elektronik GmbH, Köln, Almanya) kullanılarak ölçüldü ve doku ve kaz ayağı bir DermaTOP 3D-HE (EOTECH SAS, Fransız) kullanılarak ölçüldü.
4) Derinin advers reaksiyonlarının değerlendirilmesi
Advers reaksiyonlar her ziyarette anket ve gözlem yoluyla kontrol edildi. Değerlendirmede sübjektif parametreler kaşıntı, karıncalanma, gıdıklanma, yanma, batma,sertlik ve gerginlik, objektif parametreler ise eritem, ödem, skuam ve papül olarak sınıflandırıldı.
5) İstatistiksel analiz
Veriler SPSS® yazılımı kullanılarak analiz edildi. Zaman noktaları arasındaki farkların istatistiksel önemi, tekrarlanan ölçüm analizi kullanılarak belirlendi; p değeri<0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. Başlangıç değerinden değişim oranı (yüzde) aşağıdaki gibi hesaplanmıştır:
Değişim oranı=((tedavi-başlangıçtan sonra)/temel)×yüzde 100
