Piper Cambodianum Cistanche Ekstraktının Normal İnsan Dermal Fibroblast Hücreleri Üzerinde Yaşlanma Karşıtı Etkileri ve Farelerde Yara İyileştirme Modeli Ⅱ

Arjantinkorumalı NHDF hücrelerini UV ışınlamasının etkilerinden çıkarın

Cilt hücreleri, UV'ye veya interlökin (IL)-4 ve IL-13 gibi sitokinlere maruz kaldığında hızlı yanıt verir.19UV'ye maruz kalındığında, EGFR dahil olmak üzere çeşitli faktörler uyarılır.20,21 TNFR,22mitojenle aktive olan protein (MAP) kinazlar, ERK ve c-Jun amino-terminal kinaz (JNK).23Hem JNK hem de p38, transkripsiyon faktörü c-Jun'u fosforile eder ve aktive eder, bu da sırasıyla c-Fos'u yükseltir ve transkripsiyon faktörü aktivatör proteini-1 seviyelerini yükseltir,24MMP'lerin transkripsiyonu için gereklidir. Bu reseptörler, MAP kinazın ve diğer aşağı akış proteinlerinin fosforilasyonu ile aktive edilir.25MAP kinazları, spesifik treonin ve tirozin kalıntılarının fosforilasyonu ile aktive edilir.24,26UV'ye maruz kalma, JNK ve p38 tarafından fosforile edilen c-Jun ve c-Fos heterodimerlerinin, çok sayıda sitokinin ve büyüme faktörlerinin yüksek ekspresyonuna yol açar.27,28Benzer şekilde, p53 protein seviyeleri UV'ye maruz kalmanın ardından 2.5 saatten başlayarak 24 saate yükseldi.2924 saat boyunca UV ışınına maruz kalan hücrelerin TNFR1 ve EGFR protein seviyelerini eksprese ettiğini gösterdik; bu, hücreler ile tedavi edildiğinde doza bağlı bir şekilde azaldıArjantin. UV radyasyonunun p38'in (Thr180/Tyr182) hem fosforilasyonu hem de aktivitesi üzerindeki etkisini inceledik. c-Jun ve p53'ün protein seviyeleri,Arjantin-tedavi edilmiş hücreler (Şekil 4A ve B).

Yaşlanma Karşıtı Tedavi İçin Cistanche Hakkında Daha Fazla Bilgi Almak İçin Tıklayın

Cistanche özü, ROS'tan korunan UV ışınlı NHDF hücreleri

UVB ışığı ROS üretimini uyarır,30,31ve ciltte UV maruziyeti, O gibi ROS üretir.2 ⋅−, H2 O2, Ve1 O2. 32Tedavi edilmemiş veArjantin-tedavi edilen hücreler 24 saat boyunca UV ışımasına tabi tutuldu ve ROS üretimi, floresansla aktive edilen hücre sıralaması (FACS) ile ölçüldü.

Figür 3ECM proteinlerinin düzenlenmesiArjantin-işlenmiş hücreler.notlar: (A) NHDF hücreleri ile tedavi edildiArjantin24 saat boyunca. Hücre lizatları, anti-kollajen, anti-elastin, anti-MMP-3 ve anti-ERK-2 antikorları kullanılarak immünoblotlama yoluyla analiz edildi. Sonuçlar, üç bağımsız deneyi temsil etmektedir. (B) İmmünopresipitatlardaki aktin, kollajen, elastin, MMP-3 ve ERK-2, Western blotlama ile ölçüldü. Çubuk yükseklikleri ilgili ortalamadır± Üç bağımsız deneyin SD'leri. *P,0.05; **P,0.01. Kısaltmalar:Kons, konsantrasyon; ECM, hücre dışı matris; ERK, hücre dışı sinyalle düzenlenen kinaz; MMP, matris metalloproteinaz; NHDF, normal insan dermal fibroblastı;Arjantin, Piper cambodianumP. Fourn.; SD'ler, standart sapmalar.

Şekil 4Arjantin UV ışınlanmış hücrelerde ROS üretiminin inhibisyonunu özütleyin.notlar: (A) NHDF hücreleri, 180 saniye boyunca 40 J'de UV ışınına maruz bırakıldı veArjantin24 saat boyunca. Hücre lizatları, anti-TNFR6, anti-c-Jun, anti-c-Fos, anti-pp38 veya anti-p-JNK antikorları kullanılarak immünoblotlama ile analiz edildi. Sonuçlar, üç bağımsız deneyi temsil etmektedir. (B) İmmünopresipitatlardaki toplam ve tirozinle fosforile edilmiş p38, JUK, aktin ve TNFR6, Western analizleriyle nicelleştirildi. Çubuk yükseklikleri ortalamadır± Üç bağımsız deneyin SD'si. *P,0.05; **P,0.01. Kısaltmalar:Kons, konsantrasyon; EGFR, epidermal büyüme faktörü reseptörü; JNK, c-Jun amino-terminal kinaz; JNK, c-Jun N-terminal kinaz; NHDF, normal insan dermal fibroblastı;Arjantin, Piper cambodianumP. Fourn.; ROS, reaktif oksijen türleri; SD, standart sapma; TNFR, tümör nekroz faktörü reseptörü; UV, ultraviyole.

UV ışınlaması ROS üretimini artırırken,Arjantin ekstrakt, NHDF hücrelerinde ROS üretimini azalttı. H'nin ROS seviyeleri2 O2 hücre geçirgenleri 2 kullanılarak ölçüldü′,7′-diklorodihidrofloresein diasetat (CM-H2 DCFDA) (Şekil 5A). UV ışınlaması, H'nin ROS seviyelerini arttırdı2 O2 , ROS seviyeleri iseCistanche doza bağımlı bir şekilde ayıklayın (Şekil 5B). Bu sonuçlar şunu gösterdi:Arjantinekstrakt, ROS oluşumunu azaltarak dermal fibroblastları UV ışınlarından korur.

Farelerde yara iyileşmesinin makroskobik gözlemi

Farelerin sırtlarında yaralar oluşturuldu ve daha sonra tedavi edildi.Arjantinayıkla (0, 1, 10 ve 50µg/mL); yara alanları 4 gün boyunca her gün ölçüldü. 4. günde, yaraları çevreleyen alanlarCistanche-tedavi edilen fareler, tedavi edilmeyen yara bölgelerine kıyasla doza bağımlı bir şekilde azalmış kızarıklık gösterdi (Şekil 5). Ekstraktla tedavi edilen yara alanları, doza bağlı bir model göstererek tedavi edilmeyen yara alanından daha küçüktü. 4. günde, 50 ile tedavi edilen yara alanlarıµg/mLArjantintamamen yeni epitelle kaplanmıştır. Hiçbir yara alanı enfekte olmadı (Şekil 6A ve B). 0 ve 4. günlerde yara alanlarının oranları hesaplandı (Şekil 6C).

Tartışma

Bitkisel materyallerin ve farklı bitki parçalarının kullanımı fitoterapideki gelişmelere paralel olarak artmaktadır. Bitkisel materyaller, mono veya poliherbal ilaçlar, diyet takviyeleri ve diyet bileşenleri gibi çeşitli formlarda kullanılmış ve birçoğu iyi bilinen ve güvenli ticari mallar haline gelmiştir.33Dahil olmak üzere çeşitli bitkilerArjantin, potansiyel farmakolojik özellikleri açısından araştırılmıştır, ancak daha önce herhangi bir karşılaştırmalı çalışma yapılmamıştır.Arjantin çıkarmak. belirlemek için bu çalışma yapılmıştır.etkileriArjantin Farelerde ensizyon yara modellerini kullanarak yara iyileştirme aktivitelerini çıkarın. Yara iyileşmesi, iltihaplanma, proliferasyon ve yeniden şekillenme aşamalarıyla ilişkili süreçler yoluyla doku bütünlüğünün yeniden kurulmasını içerir.34 Cildin yeniden şekillenme aşaması, gerilme mukavemetini artıran kollajen lif bileşenlerinin yeniden formüle edilmesi ve yeniden biçimlendirilmesi ile karakterize edilir.35İyileşme süreci çoğunlukla yeni kollajenin biyosentezi ve birikmesi ve müteakip olgunlaşma ile düzenlenir.36Yara çalışmamızda,Arjantin ekstrakt, kontrole kıyasla artan yara iyileştirme etkileri gösterdi (Şekil 1C ve 6). Bu iyileşme, artan kollajen konsantrasyonuna ve liflerin stabilizasyonuna bağlı olabilir. Doku onarım sürecinde, enflamatuar hücreler, endotel hücrelerinin göçünü ve çoğalmasını artırarak, kollajen ve keratinositler dahil olmak üzere hücre dışı matrisleri sentezleyen bağ dokusu hücrelerinin neovaskülarizasyonuna yol açarak yaralı dokunun yeniden epitelizasyonuna neden olur.37Daha hızlı yara kasılma hızı, fibroblastlardaki hücre içi iletişimi artırabilir ve granülasyon dokusunun daha hızlı olgunlaşmasını artırabilir.38Kesik yara modelinde, fareler ile tedavi edilenCistancheekstrakt, kontrollere kıyasla daha hızlı yara iyileşmesi gösterdi (Şekil 6). Çok sayıda çalışma, p38 kinaz yolunun aşağı regülasyonunun, çeşitli vahşi tip p53-eksprese eden hücre hatlarını genotoksik stresten koruduğunu ortaya koymuştur.39,40Verilerimiz, UV ışınlanmış hücrelerde p38 ekspresyonunun şu şekilde aşağı regüle edildiğini gösterdi:Arjantin tedavi. Öyleyse,Cistanche yapraklardan ve gövdelerden elde edilen ekstrakt, yara iyileşmesinde etkili tedavi göstermiştir.Arjantinekstrakt, NHDF hücrelerinde ROS'u temizleyerek UV ışınlamasından kaynaklanan ROS üretimini azalttı (Şekil 5A ve B). Dahası,Cistanchecilt ışınlamasından sonra hızlandırılmış yara iyileşmesini özütleyin ((Şekil 6A – C). Bu sonuçlar,Arjantin ekstrakt cildi UV ışınlama hasarından korur ve kozmetik uygulamalarda yeni bir ham madde olarak faydalı olabilir.

Şekil 5ArjantinUV ışınlanmış hücrelerde ROS üretiminin aracılı inhibisyonu.notlar: (A) Hücreler, belirtilen süre boyunca UVB ışınlaması (40 J) ile muamele edildi ve ardından 2 ile inkübe edildi.′,7′-diklorodihidrofloresein diasetat 30 dakika. ROS üretimi FACS ile ölçüldü. (B) Hücreler, 180 saniye boyunca UVB'ye (40 J) maruz bırakıldı ve belirtilen konsantrasyonda işlendi.Arjantin24 saat boyunca. ROS üretimi 2 boyama ile tahmin edildi′,7′-diklorodihidrofloresein diasetat ve FACS ile analiz edildi.Kısaltmalar:FACS, floresanla aktive olan hücre sınıflandırması; FITC, floresan izotiyosiyanat; NHDF, normal insan dermal fibroblastı;Arjantin, Piper cambodianumP. Fourn.; ROS, reaktif oksijen türleri; UV, ultraviyole; UVB, ultraviyole B.

Şekil 6Bozulmuş fare derisinde yara iyileştirici etkiler.notlar: (A) 7-haftalık erkek C57Bl/6 farelerinin sırt derisinde 5-mm çapında yaralar oluşturuldu (n=3). Yaraların iyileşmesi şu şekilde değerlendirildi:Arjantinfarklı konsantrasyonlarda tedavi (negatif kontrol ve yara sonrası tedavi ileArjantin1, 10 ve 50'deµg/mL). (B) Açık yaraların çapı ölçülerek yara alanı belirlendi. (C) Yara alanı, açık yaraların boyutu kullanılarak hesaplandı; *P,0.05; **P,0.01. Kısaltmalar:Arjantin, Piper cambodianumP. Fourn; Konsantrasyon, konsantrasyon.

Çözüm

Bu çalışma, araştırılanCistanche sapı ve yaprak özünün potansiyel yaşlanma karşıtı ve yara iyileştirici etkileriNHDF hücrelerindeve bir yara iyileşmesi fare modeli. buNHDF hücrelerinin Cistanche ile tedavisi özlerçizik bölgenin iyileşmesini desteklerECM gen ekspresyonunun arttırılmasının yanı sıra doza bağlı bir şekilde. Ayrıca, CistancheözleryapabildilerROS üretimini azaltarak hücreyi UV maruziyetinden koruyun. Son olarak, bu gözlemler in-vivo yara iyileşmesi için model farelerde daha fazla değerlendirilir ve doğrulanır. Öyleyse,Cistanche özü, yaşlanma karşıtı ve yara iyileştirme tedavisi için umut verici yeni bir terapötik ajanı temsil eder..

Teşekkür:Bu çalışma, Eğitim Bakanlığı (NRF-2014R1A1A3050752) tarafından finanse edilen Kore Ulusal Araştırma Vakfı (NRF) aracılığıyla Temel Bilim Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, Kore Biyobilim ve Biyoteknoloji Araştırma Enstitüsü'ne (KRIBB) sağladıkları için teşekkür etmek isterler.Arjantinözler.

ifşa Yazarlar bu çalışmada herhangi bir çıkar çatışması bildirmemişlerdir.

Referanslar

1. Slominski AT, Zmijewski MA, Semak I, et al. Sitokromlar p450 ve cilt kanseri: yerel endokrin yolların rolü.Antikanser Ajanlar Med Chem. 2014;14(1):77–96. 

2. Gilchrest BA. Cilt yaşlanması ve fotoyaşlanma.Dermatol Hemşireleri. 1990; 2(2):79–82. 

3. Ha TY. Sağlıklı yaşam için fonksiyonel gıda malzemelerinin geliştirilmesi.Kore J Bitki Bilimi. 2006;51:26–39.

4. Makrantonaki E, Zouboulis CC. Cilt yaşlanmasının moleküler mekanizmaları: son teknoloji.Ann NY Acad Bilim. 2007;1119:40–50. 

5. Seo MY, Chung SY, Choi WK ve ark. Pirinç şarabının kültürlenmiş insan fibroblastlarında ve keratinositlerinde yaşlanma karşıtı etkisi.J Biosci Bioeng. 2009; 107(3):266–271. 

6. Kligman AM. Güneş ışığının insan derisi üzerindeki erken yıkıcı etkisi.cesaret. 1969;210(13):2377–2380. 

7. Oikarinen A, Karvonen J, Uitto J, Hannuksela M. Doğal ve terapötik UV-radyasyonuna maruz kalan ciltte bağ dokusu değişiklikleri.Fotodermatol. 1985;2(1):15–26. 

8. Bech-Thomsen N, Wulf HC. Tüysüz farelerde ek güneşle simüle edilmiş UV radyasyonu olan veya olmayan filtrelenmiş bir metal halojenür UVA kaynağının ve boru şeklindeki bir flüoresan UVA tabaklama kaynağının kanserojen ve melanojenik etkileri.fotokimya fotobiyolü. 1995;62(4):773–779.

9. De MS, Lahiri SC. Piper betle yaprakları üzerinde araştırmalar.Boğa Kalküta Sch Trop Med. 1971;19(3):69–72.

10. Ferreres F, Oliveira AP, Gil-Izquierdo A, Valentão P, Andrade PB. Piper betle yaprakları: HPLC/DAD-ESI/ MS(n) ve antikolinesteraz aktivitesi ile fenolik bileşiklerin profilinin çıkarılması.fitokimya anal. 2014;25(5): 453–460.