Ribes Meyeri Antosiyaninlerinin Sinir Kök Hücreleri ve Yaşlanan Fareler Üzerinde Yaşlanma Karşıtı Etkileri Bölüm 1

Lütfen iletişime geçinoscar.xiao@wecistanche.comdaha fazla bilgi için

Soyut:Yaşlanma, nörolojik bozukluk ve bilişsel gerileme ile ilişkilidir. Flavonoidler, fare modellerinde yaşlanma karşıtı araştırmalarda çok umut vericidir. Ribes Meyer antosiyaninleri bol flavonoidler açısından zengindir, ancak yaşlanma karşıtı biyolojik aktiviteleri bilinmemektedir. Bu çalışmada, bir R. Meyer antosiyanin özütü hazırladık ve nöral kök hücre (NSC) yaşlanması üzerindeki etkilerini in vivo ve in vitro olarak analiz ettik. Fare NSC'lerini izole ettik ve R. Meyer antosiyaninlerinin yaşlanma karşıtı etkilerini analiz etmek için hücre sayma kiti-8(CCK-8), hücre döngüsü, reaktif oksijen türleri (ROS) ve immünofloresan yöntemlerini kullandık. Metabolik analizde R. Meyer antosiyaninlerinde önemli bir flavonoid olarak ortaya çıkan naringenin (Nar) olarak bulunmuştur. Nar'a özgü yaşlanma karşıtı mekanizmaları araştırmak için RNA dizilimi (RNA dizilimi) ve enzim bağlantılı immünosorbent tahlili (ELISA) yöntemleri de kullanıldı. R. Meyer antosiyanin tedavisinden sonra, NSC proliferasyonu hızlandı ve NSC'ler yaşlanma belirteçlerini azalttı ve P16ink4 ekspresyonunu azalttı. R. Meyer antosiyanin tedavisi ayrıca in vivo ve in vitro yaşa bağlı nöronal kaybı tersine çevirdi. Nar, mNSC'nin in vitro yaşlanmasını bloke etti ve plazma TNF-proteininin aşağı regülasyonu yoluyla yaşlanan farelerde uzamsal hafıza ve bilişsel yetenekleri geliştirdi.narenciye biyoflavonoidleriBu bulgular, R. Meyer antosiyaninlerinin NSC proliferasyonunu arttırdığını ve in vivo TNF-protein seviyelerinde Nar'ın neden olduğu azalmalar yoluyla yaşlanma ile nörojenezi iyileştirdiğini göstermektedir.

GİRİİŞ

Ribes Meyer(R. Meyer Maxim olarak da bilinir)Saxifragaceae familyasına aittir [1, 2]. R. Meyer'in kökleri ve yaprakları, anti-inflamatuar ve anti-kanser etkileri [7-9] dahil olmak üzere birçok işlevi olan bir bitki sekonder metabolit flavonoidleri [1-6] sınıfı açısından zengindir. Zhou et al. ilk izole edilen naringenin(Nar), R. Meyer antosiyaninlerinden [1]. Nar, R. sativum'un ana bileşenidir; ancak Nar ve R. Meyer antosiyaninlerinin yaşlanma karşıtı biyolojik aktivitesi bilinmemektedir. Kök hücre tükenmesi, yaşlanmanın önemli bir özelliğidir [10]. Nöral kök hücrelerin (NSC'ler) yaşa bağlı kaybı, bilişsel gerileme ile ilişkilidir ve NSC'ler, hafıza kaybıyla ilişkili hastalıklarda rol oynar [11, 12]. Yaşlanan murin beyninde NSC ve nöronal sayılarda belirgin bir düşüş vardır [13].sinomorium faydalarıKök hücrelerde yaşlanmanın nedenleri arasında kısalmış telomerler, artan reaktif oksijen türleri (ROS), yaşlanma belirteci P16ink4a'nın aktivasyonu ve hücre döngüsü durması [14-16] yer alır. Bu faktörler nihayetinde sinir sistemi hasarına, metabolik bozukluklara ve bilişsel işlev bozukluğuna yol açar [17].

Daha fazla bilgi için lütfen buraya tıklayın

Bu değişikliklerin yaşlanma ile ilgili olduğu düşünüldüğünde, R. Meyer antosiyaninlerinin işlevleri yeterince çalışılmamıştır. Buna göre, yaşlanan farelerde R. Meyer antosiyaninlerinin NSC'ler üzerindeki etkilerini araştırdık. Sonuçlarımız, R. Meyer antosiyaninlerinin, NPC'lerin in vitro yaşlanmasını tersine çevirerek ve ayrıca yaşlanan farelerde bilişsel seviyeleri geliştirerek ve NSC proliferasyonunu ve nöronal sayıları artırarak yaşlı fenotipi iyileştirdiğini göstermektedir. Ayrıca R. Meyer antosiyaninleri arasında zenginleştirilmiş flavonoid Nar'ın, tümör nekroz faktörü (TNF) sinyal yolunu inhibe ederek NSC'lerde yaşlanmayı tersine çevirdiğini ve yaşlanan farelerde bilişsel seviyeleri iyileştirdiğini ortaya koyduk.

SONUÇLAR

R. Meyer antosiyaninlerinin ÇUŞ'lerde yaşa bağlı değişiklikler üzerindeki etkileri

R.Meyer antosiyaninlerinin hücre yaşlanması üzerindeki etkilerini belirlemek için 23-aylık farelerden (23M-mNSC'ler) alınan NSC'leri kullandık. R. Meyer antosiyaninlerinin konsantrasyonlarına bağlı olarak hücreler üzerinde sitotoksik veya koruyucu etkiler gösterebileceğini göz önünde bulundurarak, öncelikle 23M-mNSC'leri tedavi etmek için güvenli bir R. Meyer antosiyanin konsantrasyonu belirlememiz gerekiyordu. R. Meyer antosiyaninleri ile tedavi edilen hücrelerin canlılığı, bir hücre sayma kiti-8 (CCK-8) testi kullanılarak tespit edildi. 100 pg/mL'ye kadar olan konsantrasyonlarda,R. 48 veya 72 saat boyunca Meyer antosiyanin tedavisi, 23M-NSC hücre canlılığını arttırdı (Ek Şekil 1A). Yaşlanma sırasında ROS birikimi mitokondriyal hasarda önemli bir rol oynar [16,18]. R. Meyer antosiyaninlerinin oksidatif hasarı baskılayıp baskılayamayacağını belirlemek için ROS testleri gerçekleştirdik. R. Meyer antosiyaninleri, 100 pg/mL'lik bir konsantrasyonda oksidatif hasarı inhibe etti (Ek Şekil 1B). Kontrollerle karşılaştırıldığında, R. Meyer antosiyanin ile tedavi edilen hücrelerde proliferasyon ve ROS seviyelerinde belirgin değişiklikler gözlemledik, bu da 100 pg/mL R. Meyer antosiyaninlerinin 23M-NSC proliferasyonunu uyardığını ve oksidatif hasarı inhibe ettiğini gösterdi. R. Meyer antosiyaninlerinin nörosfer oluşumu üzerindeki etkilerini belirlemek için, 3-haftalık(3W-mNSC'ler) ve 23-aylık (23M-mNSC'ler) farelerin beyinlerinden NSC'leri izole ettik. NSC'ler alt kültürlendi ve 100 pg/mL R. Meyer antosiyaninleri ile işlendi(Şekil 1A). 23M-mNSC'lerle karşılaştırıldığında, 3W-NYC grubundaki nörosferlerin sayısı artırıldı ve nörosferlerin şekilleri 20-50 μm'lik artan bir çapla daha düzgün ve yuvarlaktı (Şekil 1B{{38}). }D). Ek olarak, 5 gün sonra 23M-mNSC'lerden türetilen nörosferlerin boyutu (20 um) daha küçüktü ve bu bulgu önceki çalışmaların sonuçlarıyla tutarlıydı [19,20]. R. Meyer antosiyaninleri ile tedavi edildiğinde, hem 3W-mNSC'lerde hem de 23M-mNSC'lerde nörosfer oluşumu önemli ölçüde arttı (Şekil 1E). Yaşlanma, hücre döngüsü durması, kısaltılmış telomerler ve yaşlanma geni pl6mk4a'nın artan ifadesi ile yakından ilişkilidir. R. Meyer antosiyaninle muamele edilmiş 23M-NSC'ler, p16mk4a gen ekspresyonunu önemli ölçüde azalttı, S fazında daha fazla sayıda hücreye ve işlenmemiş hücrelere kıyasla telomerleri uzattı (Şekil 1F-1H). Ayrıca, yaşlanmanın NSC'lerin çoğalmasını azalttığını ve nöronal üretim için farklılaşma yeteneklerini azalttığını biliyoruz [13,21]. 23M-mNSC'lerin farklılaşması üzerine, R. Meyer antosiyanin tedavisinden sonra TuJ1-pozitif nöron sayısında önemli bir artış oldu (Şekil lI-1J), bu da R. Meyer antosiyanin tedavisinin NSC'lerin nöronlara farklılaşması. Bu sonuçlar, R. Meyer antosiyaninlerinin in Vitro yaşlı NSC'ler üzerinde olumlu bir etkisi olduğunu göstermektedir.

Cistanche yaşlanmayı geciktirebilir

R. Meyer antosiyanin tedavisi, yaşlanan farelerin öğrenme ve hafıza yeteneklerini geliştirir

Yaşlanma, bilişsel gerileme ile ilişkilidir [22,23]. Bu nedenle, R. Meyer antosiyaninlerinin farelerin öğrenme ve hafıza yetenekleri üzerindeki etkilerini değerlendirdik. Morris su labirenti (MWM) testi, yetişkin C57BL/6 farelerine (12 aylık) 2 ay boyunca 100 mg/kg R. Meyer antosiyanin verildiğinde, kontrollere kıyasla platforma ortalama ulaşma süresinin azaldığını ortaya koydu(Şekil). 2A). Ayrıca platforma ilk ulaşmak için geçen süreyi de inceledik (Şekil 2B). R. Meyer antosiyaninle tedavi edilen grup, kontrol grubundan önemli ölçüde daha az zaman aldı, ancak ortalama hız iki grup arasında önemli ölçüde farklı değildi (Şekil 2C), bu da R. Meyer antosiyaninlerinin farelerin motor yeteneği üzerinde çok az etkisi olduğunu gösteriyor. Ayrıca, tedavi edilen grupta, fareler, tedavi edilmeyen gruba kıyasla platform alanına ulaşmadan önce önemli ölçüde daha kısa bir mesafe yüzdü (Şekil 2D). Bu sonuçlar, R. Meyer antosiyaninlerinin, yaşlanan farelerin bilişsel ve uzamsal hafıza yeteneklerini geliştirebileceğini göstermektedir.çöl sümbülYaşlanmayla ilişkili bilişsel düşüş, NSC sayılarının azalmasıyla ilişkilendirilmiştir [11, 24]. Buna göre, 100 mg/kg R. Meyer antosiyaninlerinin intragastrik subventriküler z ZOne uygulamasından sonra fare beyninden e (SVZ) NSC'leri izole ettik ve kültürledik (Şekil 2E). Ortaya çıkan nörosfer sayıları ölçüldü ve kontrol grubuyla karşılaştırıldığında R. Meyer antosiyaninle tedavi edilen grupta önemli ölçüde daha fazla nörosfer vardı(Şekil 2F). Daha sonra, nörosfer boyut dağılımını analiz ettik.R. Meyer antosiyanin ile muamele edilmiş fare nörosferleri, esas olarak üst boyut aralığındaydı (50-100 um çap),

Şekil 1. Ribes Meyer antosiyaninleri, fare nöral kök hücrelerinin (MNC'ler) yaşlanma fenotipini kurtarır. (A) Nörosferler, 23-aylık (23M-NSC) ve 3-haftalık (3W-NSC) fare beyinlerinden klonal olarak türetilmiştir ve her antosiyanin olmak üzere 100 pg/mL R ile tedavi edilmiştir. (B) 23M-NSC ve 3W-NSC arasındaki nörosfer sayılarındaki farklılıklar. . (D. E) R. her antosiyanin ile tedavi, kontrollere kıyasla hem 3W-NSC hem de 23M-NSC türevli nörosferlerin sayısını arttırdı. (FH) 100 pg/mL R ile tedavi edilen 23M-NSC'lerde 48 saat boyunca Meyer antosiyaninleri, p16ink4a mRNA ifadesi, hücre döngüsü ve bağıl telomer uzunlukları ölçülmüştür. (F) qRT-PCR ile tespit edilen hücre yaşlanması işaretleyici p16ink4a mRNA ifadesi. (G) Hücre döngüleri, akış sitometrisi kullanılarak belirlendi. (H) bağıl telomer uzunluğunun qRT-PCR tespiti. (I) R ile tedavi edilen 23M-NSC'lerde TuJ1 ve GFAP'nin immünofloresan boyaması.flavonoid ekstraksiyon yöntemi pdfMeyer antosiyaninler ve kontrol. (J) (I)'nin miktar tayini. Veriler, üç bağımsız deneyin ortalama ± SD'si olarak sunulur. *P<0.05,><0.01, and="">< 0.0001="" compared="" with="" untreated="" cells.="" whereas="" control="" neurospheres="" were="" more="" common="" in="" the="" lower="" range="" （20-50="" μm="" diameter）（figure="">

R. Meyer antosiyanin tedavisinin NSC'ler ve nöronlar üzerindeki etkisini in vivo olarak daha fazla doğrulamak için, hipokampusun immünofloresan boyaması yapıldı ve immünopozitif hücrelerin yüzdeleri analiz edildi. İyi bilinen NSC belirteçleri nestin ve Ki67 [25, 26] kullanarak, R. Meyer antosiyaninle tedavi edilen hipokampal bölgede (Ek Şekil 2A, 2B) nestin ve Ki67-pozitif hücrelerde bir artış olduğunu ortaya koyduk. fareler. Ek olarak, bu farelerde TuJ1-pozitif hücrelerin (olgun nöronların bir belirteci) sayısı da arttı (Ek Şekil 2C, 2D).flavonoidlerBirlikte, bu sonuçlar 100 mg/kg R. Meyer antosiyaninlerinin, NSC proliferasyonunu teşvik ederek ve nöronal sayıları artırarak yaşlanan farelerde uzamsal hafızayı ve bilişsel yetenekleri geliştirebileceğini göstermektedir.

Bu makale www.aging-us.com YAŞLANMA 2020, Cilt. 12, Sayı 17

www.aging-us.comYAŞLANMA 2020, Cilt. 12, Sayı 17www.aging-us.comYAŞLANMA 2020, Cilt. 12, Sayı 17