Cistanches Salsa'nın Benign Prostat Hiperplazisinin İlerlemesi Üzerindeki Anti-proliferasyon Etkileri Ⅰ
Oct 18, 2022
Soyut:Cistanche Tubulosatedavisinde geleneksel tıpta kullanılmıştır.böbrek yetmezliği, nevrasteni, cinsel işlev bozukluğu hastalıkları, veiyi huylu prostat hiperplazisi(BPH). Bu çalışmanın amacı, C. tubulosa özütünün (CSE) ortaya çıkardığı mekanizmayı araştırmaktı.prostat dokusu üzerinde antiproliferatif etkiBPH ile indüklenen sıçanların CSE'nin BPH üzerindeki etkileri, prostat ağırlığı, seruln dihidrotestosteron (DHT) üretimi ve BPH ile indüklenen sıçanların prostat dokusunda 5o-redüktaz tip 1 ve tip 2'nin mRNA ekspresyonu açısından değerlendirildi. Ayrıca prostat bezi morfolojisinin histolojik incelemesi için hematoksilen ve eozin (H&E) boyaması yapıldı ve western blot analizi ile prostat dokusundaki protein ekspresyon seviyeleri araştırıldı. CSE tedavisi, BPH ile indüklenen sıçanların prostat dokusunda prostat ağırlığını, serum DHT konsantrasyonunu ve 5o-redüktaz tip 1 ve tip 2'nin mRNA ekspresyonunu azaltmıştır. Ek olarak, CSE tedavisi, iltihaplanma ile ilgili proteinlerin (uyarılabilir nitrik oksit sentaz ve siklooksijenaz 2) ve apoptozla ilişkili proteinlerin (kaspaz-3 ve Bcl-2 ailesi proteinleri) ekspresyon seviyelerini düzenleyerek hücre çoğalmasını bastırdı. CSE, inflamatuar ve apoptozla ilişkili proteinlerin ekspresyonunu düzenleme yeteneği nedeniyle BPH için potansiyel bir terapötik aday olabilir.
Anahtar Kelimeler:iyi huylu prostat hiperplazisi, Cistanche Tubulosa, dihidrotestosteron, inflamasyon, apoptoz, Bcl-2.
giriiş
Cistanche TubulosaÇin'in kuzeybatısına özgü parazit bir bitkidir. Kökü, hastalıkların tedavisinde kullanılan önemli bir geleneksel doğu tıbbıdır.böbrek yetmezliğivenevrasteni(Deng ve ark.2004).C.tubulosa'nın da tedavisinde etkili olduğu bildirilmiştir.cinsel işlev bozukluğu hastalıkları, gibiiktidarsızlıkveiyi huylu prostat hiperplazisi(BPH) DonguiBogam adlı Kore tıp kitabında. Feniletanoid glikozitler (PhG'ler) bu bitkinin ana aktif bileşenleridir (Jimenez ve Riguera 1994). Pek çok PhG'nin antioksidan ve antitümör etkileri dahil olmak üzere çok çeşitli biyolojik özelliklere sahip olduğu gösterilmiştir. C. tubulosa kaynaklı bir PhG olan Acteoside, serebellar granül nöronlarında 1-metil-4-fenilpiridinyum iyonu (MMP*) tarafından indüklenen apoptozu inhibe eder (Pu ve ark. 2003). C. tubulosa'nın fizyolojik fonksiyonları üzerine çalışmalar yapılmış olmasına rağmen, C. tubulosa'nın BPH üzerindeki etkilerinin altında yatan moleküler mekanizma(lar) araştırılmamıştır.
BPH, bez içindeki kanserli olmayan büyüme nedeniyle prostatın büyümesi ile karakterizedir (Andriole ve ark. 2004). BPH prevalansında ve insidansında artışlar, yaşlanan bir nüfus bağlamında meydana gelmektedir. 2030 yılına kadar ABD nüfusunun yüzde 20'si 65 yaş veya üzerinde olacak ve bu rakam 20 milyondan fazla erkeği içerecektir (Parsons 2010). BPH yaşlı erkeklerde sık görülen bir hastalık olmasına rağmen, BPH tam olarak tanımlanmamıştır ve şu anda BPH için mükemmel bir tedavi yoktur (Djavan ve ark.2010).
BPH için tedavi seçenekleri arasında farmakolojik ve cerrahi stratejiler yer alır.
Son yıllarda BPH hastalarına yapılan cerrahi müdahalelerin sayısı farmakolojik tedaviler lehine azalmıştır (Emberton ve ark. 2011). BPH'nin doğası gereği farmakolojik tedavi, uzun ve sürekli ilaç kullanımını gerektirir. Bu nedenle ilacın uzun süreli ve sürekli tolere edilebilirliği çok önemli bir konudur. BPH tedavisinde 5a-redüktaz inhibitörleri (finasterid ve du-tasterid) ve a-adrenoseptör antagonistleri (alfuzosin, terazosin, doksazosin, tamsulosin) gibi çeşitli farmakolojik ajanlar kullanılmaktadır (Lepor 2011;
Untergasser ve ark.2005).BPH tedavisi için ana farmakolojik ajanlar, 5o-dihidrotestosteron düzeylerini düzenlediği bilinen 5a-redüktaz inhibitörleri ve o-adrenerjik blokerlerdir (Tiwari ve ark. 2005). Bu farmakolojik ajanların BPH'nin ilerlemesini önemli ölçüde engellediği düşünülse de, çok sayıda çalışma bunların istenmeyen yan etkilerini bildirmiştir (Patel ve Chapple 2006). Örneğin finasterid'in baş dönmesi, bozulmuş kas büyümesi ve Steroid hormonlarına yapısal benzerliği nedeniyle şiddetli miyopati (McConnell ve ark.2003; Uygur ve ark.1998). Bu farmakolojik ajanlar istenmeyen yan etkiler gösterdiğinden, BPH'yi etkili bir şekilde tedavi eden bitkisel ilaçlar bulmak önemli tıbbi değere sahiptir.
C. tubulosa'nın BPH üzerindeki etkisini değerlendirmek için, C. tubulosa özütünün (CSE), testosteron ile indüklenen BPH sıçan modellerinde prostatik hücre büyümesi ve apoptoz arasındaki dengesizliği modüle edebileceğini gösterdik.
Malzemeler ve yöntemler Malzemeler ve reaktifler
C.tubulosa, Omniherb Co.Ltd.'den satın alındı. (Daegu, Kore Cumhuriyeti) ve finasterid, Merck and Co.Inc.'den temin edilmiştir. (New Jersey, ABD). Testosteron, fenilmetilsülfonilflorür (PMSF), Triton X-100, propidium iyodür (PI), Nonidet P-40(NP-40) ve protein inhibitör kokteyli (PIC) Sigma-Aldrich'ten satın alındı Chemical Co. (St. Louis, Missouri, ABD). GAPDH oligonükleotid primerleri ve 5o-redüktaz tip 1 ve tip 2, Bioneer'den (Deajeon, Kore) satın alındı ve SYBR Primix Ex Taq, Takara'dan (Shuzo, Shiga, Japonya) satın alındı. Anti-iNOS(M{{9}) antikorları }), COX-2(C-20),poli(ADP-riboz)polimeraz-1(PARP-1,(D-1),kaspaz{{ 16}} (H-277),Bcl-2(C-2),Bcl-xL(H-5),Bax(B-9)ve anti- -aktin(ACTBD11B7), Santa Cruz Biotechnology'den (Santa Cruz, California, ABD) satın alındı.Anti-PCNA için antikor, BD Biosciences,Pharmingen'den (San Diego,California,USA) satın alındı. . tubulosa özütü (CSE)
C. tubulosa otları Omniherb Co.Ltd.'den satın alındı. (Yeongcheon, Kyungpook, Kore Cumhuriyeti). bir nem içeriğine sahiptiler.<13% by="" weight="" and="" were="" air-dried.="" afterward,="" herbs="" underwent="" extraction="" with="" 50%(v/v)="" ethanol-water="" at="" 60="" ℃for="" 8="" h.="" the="" extract="" obtained="" was="" filtered="" through="" 20="" μm="" cartridge="" paper,="" and="" ethanol="" was="" removed="" by="" vacuum="" rotary="" evaporation="" (eyela,="" japan).="" the="" concentrate="" was="" subsequently="" freeze-dried,="" and="" the="" yield="" was="" found="" to="" be="" 12%="" w/w.="" the="" experiment="" was="" performed="" by="" dissolving="" the="" dry="" extract="" in="" distilled="" water,="" and="" the="" rest="" of="" extract="" was="" stored="" at="" -20="" ℃.="" the="" identities="" of="" the="" active="" components="" of="" the="" extract,as="" determined="" by="" hplc,="" were="" reported="" previously(jiang="" and="" tu="">
Hayvanlar
On haftalık erkek Sprague-Dawley sıçanları (200±20 g), Daehan Biolink'ten (Daejeon, Kore Cumhuriyeti) satın alındı. Hayvanlar, Sangji Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım Komitesi (Kayıt No.2014-09) tarafından kabul edilen ve ilan edilen laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımına ilişkin kılavuzlara uygun koşullar altında barındırıldı. Deneye başlamadan önce sıçanlar 2 hafta süreyle laboratuvar koşullarına alıştırıldı. Deney boyunca 22±2 derece sabit sıcaklıkta ve yüzde 55±9 bağıl nemde 12 saat aydınlık/12 saat karanlık döngüsünde 4 hafta boyunca yiyecek ve suya ücretsiz erişimleri sağlandı. Sıçanlar rastgele 4 gruptan birine (n=6) atandı: kontrol grubu (Con, araç solüsyonlu normal prostat: fosfat tamponlu salin (PBS)200μL, po）; BPH ile indüklenen grup （BPH）, Finasterid (5 mg/kg/gün, po,(Fina)) ile tedavi edilen BPH ile indüklenen grup CSE ile tedavi edilen BPH ile indüklenen grup(200 mg/kg/gün; po) Kontrol grubundaki sıçanlar kesilerek açıldı ve daha sonra zoletil@ 50 (20 mg/kg, ip) ile anestezi uygulandıktan sonra testisler çıkarılmadan dikildi; diğer gruplardaki sıçanlar hadım edildi. 3 günlük iyileşmeden sonra, BPH ile indüklenen gruplara testosteron propiyonat (10 mg/kg) enjekte edildi. /day,ip, mısır yağı içinde çözülmüş) tek başına veya 4 hafta boyunca günlük olarak CSE veya finasterid ile birlikte Son uygulamadan yirmi dört saat sonra, tüm sıçanlar zoletil@ 50 (20 mg/kg,ip) ile anesteziden sonra öldürüldü. Kaudal vena kavadan kan örnekleri alındı ve serum santrifüj ile ayrıldı ve -80 derecede saklandı.Tüm prostat bezi çıkarıldı ve tartıldı (Guo et al.2004).
Prostat ağırlığının vücut ağırlığına oranı
Prostat dokuları eksize edildi, yıkandı ve hemen tartıldı. Prostat ağırlığının vücut ağırlığına oranı (PW/BW oranı) aşağıda açıklandığı gibi hesaplandı.
Güç/BW oranı
= (deney grubundaki her bir hayvanın prostat ağırlığı/deney grubundaki her bir hayvanın vücut ağırlığı) x 100 Prostat ağırlığının büyüme inhibisyonu
Çalışma tamamlandığında prostatlar çıkarıldı ve tartıldı. Büyüme inhibisyonunun yüzdesi şu şekilde hesaplandı:100-[(tedavi edilen grup-kontrol grubu)(BPH grubu-kontrol grubu)×100]. Dihidrotestosteron (DHT) analizinin serum konsantrasyonları
DHT'nin serum konsantrasyonları ticari ELISA (ALPCO Diagnostics, Salem, New Hampshire, ABD) ile belirlendi. Testler üreticinin talimatlarına göre yapıldı.
histolojik analiz
Her gruptaki prostat dokusu yüzde 4 formalin solüsyonunda sabitlendi, parafine gömüldü ve sonra 4 pm'lik bölümlere kesildi. Kesitler histolojik inceleme için hematoksilen ve eozin (H&E) ile boyandı. Görüntüler bir SZX10 mikroskobu (Olympus, Tokyo, Japonya) kullanılarak elde edilmiştir. Histolojik analiz ve prostattan (TETP) epitel dokusunun kalınlığı, Seul Tıp Bilimleri Enstitüsü'nden (Seul, Kore) profesyonel bir histolog tarafından ölçülmüştür. Histolojik analizde objektif değerlendirme için Leica Application Suite (LAS, sürüm 3.3.0) yazılımı. Kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) analizi
Her hayvandan alınan prostat dokusu homojenleştirildi ve toplam RNA, üreticinin talimatlarına göre Easy-Blue@ Reagent (Intron Biotech-nology Inc., Gyeongi-do, Kore Cumhuriyeti) kullanılarak izole edildi. Toplam RNA, bir Epoch@mikro-hacim spektrofotometre sistemi (BioTek Instruments, Inc. Winooski, Vermont, ABD) kullanılarak nicelendirildi. Karaciğer ve iç organ yağ dokularından alınan toplam RNA, yüksek kapasiteli bir cDNA ters transkripsiyon kiti (Applied Biosystems, Foster City, California, ABD) kullanılarak cDNA'ya dönüştürüldü. ). Sıçandan tasarlanan 5o-redüktaz tip 1 için oligonükleotit primerleri, GGAAGG TTT CAT GGCCTT CG(ileri) ve TCG AGG GCA GCT GTA TG(ters), sıçandan tasarlanan 5o-redüktaz tip 2 primerleri ATG idi. GGG ACC CTG ATC CTG TG (ileri) ve CGA CAC CACAAA GGA AGG CA (ters) ve ev tutma geni olarak kullanılan ve sıçandan tasarlanan GAPDH primerleri TGA TTC TAC CCA CGG CAA GT (ileri) ve AGC idi. ATC ACC CCA TTT GAT GT (ters). Ters transkripsiyon, bir termocy-cler (Gene Amp⑧ PCR sistemi 9700, Applied Biosystems) kullanılarak gerçekleştirildi ve sonuçlar, optimal yoğunluğun GAPDH'ye oranı olarak ifade edildi. Western blot analizi
prostat dokusuHer bir hayvandan elde edilen ürün, ticari lizis tamponu PRO-PREP® (Intron Biotechnology Inc.) içinde homojenleştirildi ve hücre lizizini indüklemek için 25 dakika boyunca buz üzerinde inkübe edildi. Doku ekstraktları 20 dakika 16 000g(4 derece)'de santrifüjlendi ve süpernatan temiz bir tüpe aktarıldı. Protein konsantrasyonu, kalınlaşmış glandüler epitel, glandüler lümene doğru bakan vakuollü bir sitoplazma ve azalmış glandüler luminal alan dahil olmak üzere tipik histolojik değişiklikler gösterdi (Şekil 3A). 4 hafta boyunca CSE uygulaması, normal prostat dokusundan prostat hiperplazisine histolojik bir değişikliği temsil eden bu tipik hiperplastik paternleri bastırdı. Kısaca, finasterid ve CSE ile tedavi edilen grupların histolojik incelemesi, prostat hiperplazisini iyileştirmek için açık bir eğilim gösterdi. Ek olarak, Şekil 3B'de gösterildiği gibi, TETP analizi, diğer çalışma gruplarına kıyasla BPH ile indüklenen sıçanlarda en kalın epitel dokusunun gözlemlendiğini ve finasterid ve CSE ile tedavi edilen grupların prostat kalınlığında önemli bir azalma gösterdiğini gösterdi. .
Prostat epitel hücrelerinin proliferasyonunu değerlendirmek için, BPH ile indüklenen sıçanların prostat dokusunda PCNA'nın protein ekspresyonunu inceledik. Şekil 3C'de gösterildiği gibi, western blot analizi, kontrol grubundaki PCNA seviyelerine kıyasla BPH ile indüklenen grupta PCNA protein ekspresyonunda bir artış gösterdi. Bununla birlikte, BPH ile indüklenen grupla karşılaştırıldığında, finasterid ve CSE ile tedavi edilen gruplar, PCNA protein ekspresyonunda azalma sergiledi, bu da BPH'de çoğalma önleyici etkilerine işaret etti.
Şekil 2. Benign prostat hiperplazisi (BPH) ile indüklenen sıçan modellerinin prostat dokularında Cistanche Tubulosa özütü (CSE) uygulamasının serum dilhidrotestosteron (DHT) üretimi ve 5a-redüktaz tip 1 ve tip 2 mRNA seviyeleri üzerindeki etkisi. (A) DHT'nin serum konsantrasyonları, ELISA tahlili kullanılarak belirlendi. (B) Prostat dokusunda 5a-Redüktaz tip 1 ve tip 2 mRNA ekspresyonu, kantitatif gerçek zamanlı PCR ile analiz edildi. Gösterilen veriler, grup başına 6 sıçanın ortalama±SEM'sini temsil eder."p<><0.001 vs.con=""><0.001 vs.bph="">
