Apocynin, Bozulmuş Kan-Testis Bariyeri ve Oksidatif Stres Parametreleri ile Monosodyum Glutamatın Neden Olduğu Testis Hasarını İyileştirirⅠ

Soyut:

Amaç: Bu çalışma, monosodyum glutamatın (MSG) neden olduğu testis dejenerasyonunda aposinin (APO)'nun hormon seviyeleri, kan-testis bariyeri ve oksidatif biyobelirteçler üzerindeki etkilerini araştırmayı amaçladı. Yöntemler: Sprague Dawley erkek sıçanları (150–200 g; n=32) rastgele dört gruba dağıtıldı: kontrol, APO, MSG ve MSG artı APO. MSG ve MSG artı APO gruplarına 28 gün MSG (120 mg/kg) verildi.

Testosteron için şifalı bitkiler için tıklayın

Ayrıca, APO ve MSG artı APO grupları, deneyin son beş günü boyunca APO (25 mg/kg) aldı. Tüm uygulamalar oral sonda ile yapıldı. Son olarak testosteron, folikül uyarıcı hormon (FSH), lüteinizan hormon (LH), malondialdehit (MDA), glutatyon (GSH) ve süperoksit dismutaz (SOD), ışık ve transmisyon tayinine dayalı biyokimyasal analizler yapıldı. elektron mikroskobik incelemeler, sperm parametrelerinin değerlendirilmesi, ZO-1, oklüdin, NOX-2 ve TÜNEL immünohistokimyası değerlendirildi.

Bulgular: MSG hem oksidatif stres düzeyini hem de apoptozu artırmış, hücre proliferasyonunu azaltmış ve kan-testis bariyeri dahil olmak üzere testis morfolojisinde dejenerasyona neden olmuştur. Apocynin uygulaması, MSG artı APO grubunda bozulan tüm morfolojik ve biyokimyasal parametreleri tersine çevirdi. Sonuç: aposinin, dengeli hormon ve oksidan/antioksidan seviyeleri ile kan-testis bariyerinin bütünlüğünü koruyarak testis dejenerasyonunu önlediği düşünülmektedir.

Anahtar Kelimeler: monosodyum glutamat; aposinin; NOX-2; kan testis bariyeri; altyapı

1. Giriş

Katkı maddesi olarak yaygın olarak kullanılan L-glutamik asit, çeşitli gıdalarda doğal olarak bulunur ve lezzet arttırıcı monosodyum glutamatın (MSG) kaynağıdır [1]. Pek çok işlenmiş gıda, katkı maddesi olarak MSG içerir ve Avrupa'nın sanayileşmiş ülkelerinde ortalama günlük alım miktarı 0,3 ila 1.0 g. [2]. MSG tüketimi, gıda güvenliği kuruluşları tarafından güvenli kabul edilse de, birçok preklinik ve klinik çalışmada, özellikle uzun süreli maruziyeti hala sorgulanmaktadır. Glutamatın fizyolojik fonksiyonları arasında, glutatyon [1] gibi metabolitlerin bir öncüsü olarak merkezi sinir sistemindeki nörotransmitter özelliği vardır.

Uzun süreli MSG tüketiminin erkek üreme sistemi üzerinde olumsuz etkileri olduğu gösterilmiştir. Çalışmalar, uzun süreli MSG tüketiminin erkeklerde sperm sayısını azalttığını ve sperm ve testislerin morfolojik yapısını etkilediğini göstermiştir [3]. Daha önce atıfta bulunulan araştırmaların çoğu, MSG'nin sıçanlarda 2000-8000 mg/kg vücut ağırlığı dozlarındaki toksisitesine odaklanmıştır ve bu, bu seviyede insanlar için son derece olası değildir [4].

Shin ve diğerleri tarafından allometrik dönüştürme. [5] bu dozun sıçanlarda 120 mg/kg vücut ağırlığına eşdeğer olduğunu göstermiştir. Üreme organlarında ve spermde önemli sayıda glutamat reseptörü vardır, bu da onları vücuttaki aşırı glutamatın neden olduğu eksitasyon hasarına duyarlı hale getirir. Bu, üreme sistemini glutamatın neden olduğu hasar için sık sık bir hedef haline getirir. Ek olarak, glutamat toksisitesinin hipotalamik-hipofiz-gonadal eksene doğrudan zarar vererek üremede homeostatik bir dengesizliğe yol açtığı bilinmektedir [6].

MSG, oksidatif hasara (artmış lipid peroksidasyonu ve azalmış antioksidan enzim aktiviteleri) ve düşük sperm sayısı ve morfolojik anormallikler ile kendini gösteren spermatogenik değişikliklere neden olmuştur [3]. Bu nedenle, MSG'nin oral tüketiminin, doğrudan insanlarda günlük alımdan tahmin edilen ılımlı bir doz aldıklarında sıçanlar üzerindeki etkilerini inceledik. Sıçan testis morfolojisi üzerindeki bu MSG dozu etkisi, deneysel çalışmalarda da gözlenmiştir [3,7].

Reaktif oksijen türlerinin (ROS) aşırı üretimi, oksidatif stresi ve apoptozu tetikler. Serbest radikaller reaktif yapıları nedeniyle lipidler, nükleik asitler ve proteinler ile etkileşebilir ve vücut üzerinde zararlı etkileri olabilir [8]. ROS tarafından indüklenen oksidatif stresin erkek kısırlığında önemli bir rol oynadığı bilinmektedir [9]. Çalışmalar, NADPH oksidazın (NOX) ROS'un ana kaynaklarından biri olduğunu göstermiştir [10]. Erkek üreme sistemindeki aşırı ROS ve oksidatif stres, sperm konsantrasyonu, hareketliliği ve morfolojisinde olumsuz değişikliklere neden olur. Dejenere sperm ve bozulmuş semen parametreleri infertiliteye yol açar [11]. ROS, spermdeki DNA hasarı nedeniyle erkek kısırlığına neden olur [12]. Oksidatif stres, spermin plazma zarının bütünlüğünü tehlikeye atar ve erken kapasitasyona neden olur.

Bunun sonucunda spermin dölleme yeteneği azalır ve kısırlık meydana gelir [13]. Apocynum cannabinum bitkisinin köklerinden ekstrakte edilen Apocynin'in (APO) bir NOX inhibitörü olarak etkili olduğu bilinmektedir [14]. APO'nun antiinflamatuar etkisi birçok deneysel çalışmada gösterilmiştir [15]. NOX aktivasyonu, sitozolik bileşenlerin hücre zarına göçü yoluyla gerçekleşir [16,17]. APO, aktif insan nötrofillerinde NOX aktivitesi üzerinde hareket ederek ROS üretiminin seçici bir inhibitörü olarak görev yapar.

Ancak APO, fagositozu veya diğer hücre içi ölüm mekanizmalarını etkilemez [18,19]. NOX izoformları, çeşitli hücrelerde ifade edilir ve farklı fizyolojik işlevlere sahiptir. NOX-2, eozinofiller, makrofajlar ve nötrofillerde bulunan bir NOX izoformudur [20]. Spermatogenik hücreler ve Sertoli hücreleri birbirine bağlıdır. Bu dinamik ilişki, sıkı bağlantılar ve boşluk bağlantıları tarafından düzenlenir [21]. Sertoli hücreleri arasındaki sıkı bağlantılar, kan-testis bariyerinin (BTB) oluşumu ve işlevi için önemlidir.

BTB'nin yapısı, sıkı bağlantıları, dezmozomları, bazal ektoplazmik özelleşmeleri ve boşluk bağlantılarını içerir. Epitel kökenli sıkı bağlantılar, zonula occludens-1 (ZO-1) ve oklüdin [21] gibi çok sayıda integral zar proteini içeren multimoleküler zar özelleşmeleridir. Okludinler, sıkı bağlantıların oluşumuna katkıda bulunan moleküllerden biridir. Zonula occludens-1 (ZO-1), ZO-2 ve ZO-3 gibi zonula occludens proteinleri bu yapıda yer alan önemli proteinlerdir. Okludin, ZO-1 ve ZO-3, aktin hücre iskeleti ile etkileşime girer. ZO-3 proteini, ZO-1 ve oklüdin [22]'nin sitoplazmik alanları ile ilişkilidir.

Serbest radikallere karşı yeterli antioksidan olmadığında oksidatif stres oluşur. Süperoksit dismutaz (SOD) ve glutatyon (GSH) seviyeleri gibi antioksidan enzimlerin aktivitesinde azalma oksidatif hasarın artmasına neden olur [23]. Hücre zarı hasarının bir parametresi olan malondialdehit (MDA), reaktif hücrelerdeki oksijen radikal saldırısının yoğunluğunu ve in vivo olarak serbest radikal metabolizmasını gösterir. Azalan SOD ve artan MDA oksidatif stresi tetikler ve hücre hasarına neden olarak hücre ölümüyle sonuçlanır [24]. Araştırmalar, NOX-2'i ROS'un kaynağı olarak gösterdi [20,25]. Güçlü bir NOX-2 inhibitörü [26] olan APO, oksidatif stres nedeniyle doku hasarını önlemek için NOX-2'nin inhibisyonunda etkili olabilir.

APO uygulamasının oksidatif stres parametreleri ve histopatolojik hasar üzerinde iyileştirici bir etkisi olabilir. Bu çalışma, MSG'nin testiküler doku hasarı, hücre proliferasyonu, apoptoz ve NOX-2 ekspresyonu ile gösterilen oksidatif stres ve kan-testis bariyeri üzerindeki etkilerini değerlendirmeyi amaçladı. Ayrıca çalışma, aposinin tüm bu parametreler üzerindeki etkileri iyileştirip iyileştiremeyeceğini araştırmayı amaçladı.

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1. Deneysel tasarım

Bu deneysel çalışma, Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi Deney Hayvanları Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır (ACU-HADYEK, Onay numarası: HDK2020/39). Bu çalışmada, 8-haftalık Sprague Dawley erkek albino fareleri (n=32), 22 ± 2 ◦C sıcaklıkta ve standart bir aydınlık/karanlık (12:12 saat) olan kafeslerde tutuldu. döngü. Sıçanlar, deney süresinin 28 günü boyunca standart hayvan yemi ile ad libitum olarak beslendi. Bu araştırma, ARRIVE'ın (Hayvan Araştırması: In Vivo Deneylerinin Raporlanması) yönergeleri ve düzenlemelerine göre yürütülmüştür. Bu çalışmada, Sprague Dawley erkek sıçanları (her grupta n=8 adet) rastgele 4 gruba ayrıldı: kontrol, APO, MSG ve MSG artı APO. Kontrol grubu ratlara 28 gün distile su (1 mL) oral sonda ile verildi. MSG ve MSG artı APO gruplarına 28 gün ardışık olarak oral sonda ile 120 mg/kg MSG uygulandı [4]. APO ve MSG artı APO gruplarına, deneyin son 5 gününde oral sonda ile 25 mg/kg APO uygulandı [27]. Deney gruplarındaki sıçanların ağırlıkları haftalık olarak analiz edildi. İzofluran anestezisi sonrası ratlar sakrifiye edildi. Biyokimyasal ve mikroskobik değerlendirmeler için kan örnekleri ile testis ve epididim doku örnekleri kullanıldı.

2.2. Serum Testosteron, FSH ve LH Konsantrasyonlarının Ölçümü

Serum testosteron, folikül uyarıcı hormon (FSH) ve lüteinize edici hormon (LH) konsantrasyonları enzim bağlantılı immünosorbent assay (ELISA) kitleri kullanılarak ölçüldü. Sıçan testosteron (Katalog no: EA0023Ra, ELISA kit Bioassay Technology Laboratory), Rat FSH (Katalog no: EA0015Ra, Bioassay Technology Laboratory, Shanghai, China) ve Rat LH ELISA (Katalog no: EA0013Ra, Bioassay Technology Laboratory) kitleri kullanıldı. kit prosedürüne göre hormon seviyeleri analizi. Testosteron sonuçları nmol/L, FSH ve LH mIU/L olarak verildi.

2.3. Testiküler MDA, GSH ve SOD Düzeylerinin Ölçümü

MDA seviyeleri ticari bir kit (E-BC-K025-M, Elabscience, Houston, TX, ABD) kullanılarak belirlendi. Lipit peroksidasyonunun bozunma ürünlerinden biri olan MDA, Tiyobarbitürik asit (TBA) ile reaksiyona girerek maksimum 532 nm absorpsiyon ile pembe bir kompleks oluşturur. Dokudaki MDA seviyeleri nmol/g olarak hesaplandı. Testis dokusunda GSH analizi Beutler yöntemine göre yapıldı [28]. Yöntemin prensibi, analiz tüpündeki GSH'nin 5,50 -ditiyobis-2-nitrobenzoik asit (DTNB) ile reaksiyona girerek sarımsı bir renk vermesine dayanır. Bu rengin ışık şiddeti spektrofotometrede 410 nm dalga boyunda okunmuştur. Doku homojenatları santrifüjlendi ve elde edilen süpernatana yüzde 10'luk bir TCA çözeltisi eklendi, karıştırıldı ve proteinleri çökeltmek için tekrar santrifüjlendi. Parlak renkli süpernatanlar, GSH analizi için kullanıldı. Oda sıcaklığında 5 dakika bekletilen örneklerde oluşan rengin şiddeti spektrofotometrede 410 nm'de okundu ve glutatyon standart eğrisi kullanılarak dokudaki µmol/g cinsinden GSH seviyeleri belirlendi. SOD aktivitesi, Sigma SOD Tespit Kiti (E-BC-K019-M, Elabscience, Houston, TX, ABD) kullanılarak belirlendi. Absorbans değerleri, SOD aktivitesi bir enzim çalışma solüsyonu ile inkübe edildikten sonra 450 nm'de okundu. Dokudaki SOD seviyeleri IU/g olarak hesaplandı.

2.4. Sperm Sayısı, Motilite ve Morfoloji

Sıçanlardan alınan epididimal doku örnekleri, bir Hepes tampon çözeltisi ile bir Earle's Balanced Salts çözeltisine yerleştirildi ve önceki bir çalışmaya dayalı olarak sperm sayısı, hareketliliği ve morfolojisi analizi için işlendi [27]. Kısaca, sıçanların epididim doku örnekleri, diseksiyondan sonra bunlara Hepes tampon çözeltisi eklenmiş bir Earle's Balanced Salts çözeltisine aktarıldı. Spermatozoayı değerlendirmek için rutin bir yoğunluk gradyan yöntemi kullanıldı. Süpernatan çıkarıldı ve pelet, bir spermatozoa yıkama ortamı (SAGE, Newcastle upon Tyne, UK) ile seyreltildi ve santrifüjlendi. Daha sonra pelet, bir sperm hazırlama ortamı (SAGE, UK) ile seyreltildi. 10 um pelet, saymak için bir fotomikroskop ile bir Macler sayım odasında (Sefi cut out Medical Instruments, Haifa, İsrail) spermatozoayı saymak için kullanıldı. Morfolojik değerlendirme için smearler hazırlandı ve ardından Diff-Quick kiti (Medion Diagnostics, Grafelfing, Münih, Almanya) kullanılarak boyandı. Sperm morfolojisini değerlendirmek için her slaytta 100 sperm bir fotomikroskop (Zeiss A1 Axio Scope, Oberkochen, Almanya) ile 100x büyütmede incelendi.

2.5. Işık Mikroskobu için Doku İşleme

Rutin histolojik incelemeler için testis dokuları Bouin solüsyonu ile fikse edildi. İmmünohistokimyasal incelemeler için testis dokuları yüzde 4'lük paraformaldehit (PFA) solüsyonu ile fikse edildi. Fiksasyonun ardından, dokulara rutin bir parafine gömme prosedürü uygulandı [29]. Rutin histolojik değerlendirme için kesitlere hematoksilen ve eozin (H&E) boyası uygulandı. Seminifer tübüllerin bazal membranlarının yapısını ortaya çıkarmak için periyodik bir asit-Schiff (PAS) reaksiyonu uygulandı. H&E ile boyanmış testis kesitlerindeki seminifer tübüller, modifiye Johnsen'in histopatolojik skorlama parametrelerine dayalı olarak skorlanmıştır [30,31]. Ayrıca Image J (Image J yazılımı, National Institutes of Health) programı kullanılarak 100 seminifer tübülün epitel kalınlıkları tüm kesitlerde ölçüldü.

2.6. Terminal Deoksinükleotidil Transferaz dUTP Nick End Etiketleme (TUNEL) İmmünokimya

Testiküler doku kesitlerine terminal deoksinükleotidil transferaz dUTP nick end etiketleme (TUNEL) yöntemi, kitin üretici tarafından verilen kullanım kılavuzuna (ApopTag Plus, In Situ Apoptosis Detection Kit, S7101, Merck Millipore, Darmstadt, Almanya) göre uygulandı. Kısaca, deparafinizasyon ve rehidrasyondan sonra, kesitler PBS içinde yıkandı ve daha sonra bir sitrat tamponu içinde bir mikrodalga fırında ısıtıldı. Soğutulduktan sonra doku kesitlerine proteinaz K (20 ug/mL) damlatıldı. Kesitler damıtılmış suda yıkandı ve yüzde 3'lük hidrojen peroksitle hazırlanan solüsyona batırıldı. PBS'de yıkandıktan sonra, oda sıcaklığında 30 dakika boyunca kesitlerin üzerine 10 uL stabilize edici tampon yerleştirildi. Daha sonra 10 µL Tdt enzim damlatıldı ve kesitler 37 ◦C'de 1 saat inkübe edildi. Durdurma-yıkama tamponu, oda sıcaklığında 10 dakika damlatıldı. PBS ile yıkandıktan sonra kesitlere 13 µL anti-digoxigenin damlatıldı. Oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edildikten sonra kesitler 4 kez 2 dakika PBS ile yıkandı. Daha sonra 13 µL 3,3'-Diaminobenzidin (DAB) solüsyonu damlatıldı. Daha sonra kesitler distile su ile çalkalandı. Kontrast boyama için kesitler Mayer hematoksilin solüsyonunda (JT Baker, Center Valley, PA, ABD) ıslatıldı. Distile suda yıkandıktan sonra bölümler İtalyan ile monte edildi. Kesitler ışık mikroskobu (Zeiss A1 Axio Scope, Oberkochen, Almanya) ile görüntülendi. Apoptotik indeks, toplam testiküler tübül sayısının 3 veya daha fazla TUNEL-pozitif hücreli seminifer tübül sayısına bölünmesiyle tahmin edildi [32].

2.7. Çoğalan Hücre Nükleer Antijeni (PCNA) İmmünohistokimya

Kesitler, proliferatif hücrelerin sayısını ve proliferasyon indeksini belirlemek için PCNA immünohistokimyasına tabi tutuldu. Deparafinizasyon ve rehidrasyondan sonra, kesitler önceki bir çalışmada [32] açıklandığı gibi PCNA immünohistokimyası için işlendi. Kısaca, kesitler 20 dakika boyunca yüzde 3 hidrojen peroksit solüsyonunda (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) saklandı. Kesitler etilendiamintetraasetik asit (EDTA) tamponu (Sigma-Aldrich, ABD) içinde 200 W'da bir mikrodalga fırında 20 dakika ısıtıldı. 3 kez PBS ile yıkandıktan sonra kesitler yüzde 5'lik keçi serumu bloke edici solüsyonda (Invitrogen, Waltham, MA, ABD) 10 dakika bekletildi. Ardından birincil tavşan anti-PCNA antikoru (Katalog no: SY12-07, Novus Biologicals, Littleton, CO, ABD) (1:50) uygulandı. Kesitler gece boyunca 4 ◦C'de nemlendirilmiş bölmede tutuldu ve her seferinde 5 dakika olmak üzere 3 kez PBS ile yıkandı. Kesitler üzerine biotin işaretli keçi anti-tavşan sekonder antikoru (Katalog no: A16100, Invitrogen, Waltham, MA, ABD) (1:500) damlatıldı ve 37 ◦C'de 30 dakika bekletildi. Kesitlere Streptavidin peroksidaz (Invitrogen, Waltham, MA, ABD) damlatıldı ve 10 dakika bekletildi. 3 kez PBS ile yıkandıktan sonra, kesitler 3,30 -diaminobenzidin (DAB) kromojen (1 mL DAB substratı artı 30 uL DAB kromojen) içinde 5 dakika bekletildi. Kesitler distile su ile yıkandıktan sonra kontrast boyama için Mayer hematoksilin solüsyonu ile boyandı. Kesitler daha sonra Kaiser'in gliserol jelatini (Katalog no: 1.09242, Sigma-Aldrich, Darmstadt, Almanya) ile monte edildi. Kesitler ışık mikroskobu (A1 Axio Scope, Oberkochen, Zeiss, Germany) altında incelendi. Proliferasyon indeksini belirlemek için, her bölümdeki 20 tübüldeki PCNA-pozitif hücre sayısı, toplam hücre sayısına bölündü [32].

2.8. ZO-1 ve Oklüdin İmmünohistokimyası

Yüzde 4 PFA ile sabitlenmiş doku kesitleri parafinize edildi ve alkol çözeltileri ile yeniden hidratlandı. Kesitler daha sonra endojen enzimleri bloke etmek için yüzde 3 hidrojen peroksit solüsyonunda (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) 20 dakika bekletildi. PBS ile yıkandıktan sonra kesitler, bir EDTA tamponu (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD) içinde 200 W'da bir mikrodalgada ısıtıldı. Kesitler, oda sıcaklığında 30 dakika soğutuldu ve her biri 5 dakika PBS içinde 3 kez, ardından yüzde 10 tamponlu keçi serumunda (Invitrogen, ABD) 10 dakika saklandı. Kesitler tavşan anti-ZO-1 (Katalog no: 61-7300, Invitrogen, Waltham, MA, ABD) ve tavşan anti-oklüdin (1:100) (Katalog no: {{18}) ile işlendi. }, Invitrogen, Waltham, MA, ABD) antikorları (gece boyunca, artı 4 ◦C'de). PBS'de 3 kez 5 dakika yıkandıktan sonra, biyotin etiketli bir antitavşan sekonder antikoru (Katalog no: 65-6140, Invitrogen, Waltham, MA, ABD) (1:1000) kesitlerin üzerine damlatıldı. Kesitlere 3 kez 5 dakika PBS'de bekletildikten sonra streptavidin-peroksidaz (Invitrogen, Waltham, MA, USA) uygulandı. PBS'de yıkandıktan sonra üzerine AEC Single/Plus Chromogen (Abcam, Cambridge, UK) damlatıldı ve distile su ile çalkalanarak Kaiser's gliserol jelatin (Katalog no: 1.09242, Sigma-Aldrich, Darmstadt, Almanya) ile monte edildi. Kesitler, bir ışık mikroskobu (A1 Axio Scope, Oberkochen, Zeiss, Almanya) kullanılarak görüntülendi. Hem ZO-1 hem de oklüdin immünoreaktivitesinin yoğunluğu, Image J programı (1.44 yazılımı, Ulusal Sağlık Enstitüleri) kullanılarak hesaplandı.

2.9. ZO-1, Oklüdin ve NOX-2 İmmünofloresan Analizi

Kesitler yüzde 3 hidrojen peroksit içinde tutuldu ve PBS ile yıkandı. Daha sonra kesitler tavşan anti-ZO-1(1:100) ZO-1(Katalog no: 61-7300, Invitrogen, Waltham, MA, ABD), tavşan anti oklüdini (1 :100) (Katalog no: 71-1500, Invitrogen, ABD) ve tavşan anti-NOX-2 birincil antikorları (1:100) (Katalog no: NBP2-41291, Novus, BioTechne, Minnesota, ABD). Slaytlar, PBS ile yıkandı ve ardından AF 488 (Katalog no: ab150077, Abcam, ABD) etiketli keçi antitavşan sekonder antikoru (1:1000) ile inkübe edildi. Kesitler son kez PBS ile yıkandıktan sonra 406-diamino-2-fenil idol (DAPI) solüsyonu (Katalog No: ab104139, Abcam, Boston, MA, ABD) ile monte edildi. Kesitler, bir floresan mikroskobu (floresan ekli Zeiss AxioCam MRc 5 kameralı Zeiss Axio Scope.A1 mikroskobu) ile görüntülendi. Fotoğraflanan bölümlerdeki floresan yoğunluğu, Image J (Image J yazılımı, Ulusal Sağlık Enstitüleri) programı kullanılarak hesaplandı.

2.10. Geçirgen Elektron Mikroskobu için Doku İşleme

Testis dokusu numuneleri, tamponlanmış yüzde 2,5 glutaraldehit solüsyonu (0,1 M PBS içinde, pH 7,2) ile sabitlendi ve daha önce yayınlanan protokole göre rutin transmisyon elektron mikroskobik preparasyonu için işlendi [32]. Kesitler, transmisyon elektron mikroskobu (TALOS L 120 C, Thermo Scientific Fisher, Eindhoven, Hollanda) altında analiz edildi.

2.11. İstatistiksel analiz

Veriler, p < 0.05 ile tek yönlü ANOVA ve Tukey çoklu karşılaştırma testleri ile analiz edildi. İstatistiksel analiz, Graph Pad Prism 8.0 (San Diego, CA, ABD) kullanılarak yapıldı.

Cistanche testosteronu nasıl artırır?

Cistanche, Çin tıbbında enerji, libido ve genel canlılığı artırmak için geleneksel olarak kullanılan bir bitkidir. Cistanche'nin, testosteronu östrojene dönüştüren aromataz adı verilen bir enzimin aktivitesini inhibe ederek testosteron düzeylerini artırabileceğine inanılmaktadır. Cistanche'nin vücutta luteinize edici hormon (LH) üretimini arttırdığı da bulunmuştur. LH, testislerde testosteron üretiminin düzenlenmesinde çok önemli bir rol oynar. Cistanche, LH düzeylerini artırarak dolaylı olarak testosteron üretimini artırabilir. Ayrıca Cistanche, antioksidan özelliklere sahip ekinakozit ve akteozit gibi çeşitli fitokimyasallar da içerir. Bu bileşikler, testisleri ve diğer üreme organlarını oksidatif hasardan korumaya yardımcı olabilir, böylece fonksiyonlarını iyileştirir ve testosteron üretimini arttırır. Genel olarak, Cistanche'nin testosteron seviyelerini arttırdığı kesin mekanizmalar tam olarak anlaşılamamıştır, ancak muhtemelen aromatazı inhibe etme, LH üretimini arttırma ve üreme sistemine antioksidan destek sağlama etkileşimidir.

Devam edecek...

Merve Açıkel-Elmas 1,*, Salva Asma Algilani 1 , Begüm Şahin 1 , Özlem Bingöl Özakpınar 2 , Mert Geçim 2 , Kutay Köroğlu 3 ve Serap Arbak 1

1 Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi Tıp Fakültesi Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı, İçerenköy Mah., Kayışdağı Cad. 32, Ataşehir, İstanbul 34752, Türkiye

2 Biyokimya Anabilim Dalı, Eczacılık Fakültesi, Marmara Üniversitesi, Başıbüyük Yolu, 4/A, Başıbüyük, İstanbul 34854, Türkiye

3 Marmara Üniversitesi Tıp Fakültesi, Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı, Başıbüyük Yolu No. 9 D:2, Maltepe, İstanbul 34854, Türkiye