Uygun Egzersiz Düzeyi, Farelerde Ameliyat Sonrası Nöroplastisiteyi ve Bilişsel İşlevi İyileştirmek İçin Bağırsak Disbiyozunu ve Valerik Asit Artışını Azaltır Bölüm 3

MALZEMELER VE YÖNTEMLER

Deney protokolleri ve prosedürleri, Virginia Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (Charlottesville, VA, ABD; protokol numarası: 3114) tarafından onaylandı.

Bellek günlük yaşamımızda sıklıkla kullanmamız gereken yeteneklerden biridir. İnsanları daha akıllı, daha duyarlı ve kariyer ve kişilerarası ilişkiler konusunda daha elverişli hale getirebilir. Bu nedenle birçok insan hafızasını geliştirmek ister. Deneysel protokoller ile hafıza arasında bir ilişki vardır. Bu konuyu daha sonra inceleyelim.

Birincisi, deneysel protokoller insanların hafızalarını geliştirmelerine yardımcı olabilir. Deneyde insanların deneysel işlemi tamamlayabilmesi için belirli adımları izlemesi gerekmektedir. Bu adım adım aktivite, insan beynini yüksek dikkat ve konsantrasyon durumuna getirebilir, böylece beyin fonksiyonlarının performansını artırabilir. Aynı zamanda beynin hafıza fonksiyonunu da çalıştıracak olan deney sırasında bazı deneysel verileri ve deney adımlarını hatırlamanız gerekir. Bu şekilde tekrar tekrar pratik yaparak hafızanız yavaş yavaş gelişecektir.

İkincisi, hafıza sürecindeki duyusal deneyim, deney planının tasarımıyla da yakından ilgilidir. Deneylerde tasarımcılar genellikle deney sırasında belirli belirli görevler belirlerler, böylece katılımcıların sayıların hafızaya alınması ve yazılması, renk bloklarının hafızası ve tanınması gibi aynı işlemi birden çok kez tekrarlamaları gerekir. Bu tekrarlayan deneyim insanların hafızasını güçlendirebilir. dikkat ve hafıza yetenekleri sayesinde insanların bu bilgiyi uzun süreli belleğe işlemesini kolaylaştırır.

Ayrıca deneylerde temsili uyarıcı materyallerin (görüntü, ses, koku vb.) kullanılması da iyi sonuçlar doğurabilir. Çünkü bu uyaranlar beyindeki heyecan ve hafıza süreçlerini tetikleyerek kişinin hafıza yeteneğini geliştirebilmektedir. Aynı zamanda, bu uyaranlar çevre ve yaşamdaki durumlarla da birleştirilebilir, böylece ayrışmanın ortaya çıkması azaltılabilir ve bilginin hatırlanması daha kolay ve daha tutarlı hale getirilebilir.

Özetlemek gerekirse, deney planı insan hafızasının geliştirilmesinde çok önemli bir rol oynamaktadır. İnsanlar deneyler yaparak bilişsel yeteneklerini geliştirebilir, hafıza seviyelerini geliştirebilir ve aynı zamanda beyin fonksiyonlarını geliştirebilirler. Bu nedenle hafıza seviyemizi geliştirmek, kariyerimize, ilişkilerimize ve sağlığımıza daha fazla katkı sağlamak için yeni deneysel yöntemler öğrenmeye ve daha fazla deneye katılmaya devam etmeliyiz. Belleği geliştirmemiz gerektiği görülebilir ve Cistanche Deserticola hafızayı önemli ölçüde geliştirebilir, çünkü Cistanche Deserticola'nın antioksidan, antiinflamatuar ve yaşlanma karşıtı etkileri vardır, bu da beyindeki oksidasyonu ve inflamatuar reaksiyonları azaltmaya yardımcı olabilir, böylece beyni korur. sinir sisteminin sağlığı. Ek olarak, Cistanche Deserticola sinir hücrelerinin büyümesini ve onarımını da teşvik edebilir, böylece sinir ağlarının bağlantısını ve işlevini geliştirebilir. Bu etkiler hafızayı, öğrenme yeteneğini ve düşünme hızını geliştirmeye yardımcı olabilir ve ayrıca bilişsel işlev bozukluklarının ve nörodejeneratif hastalıkların gelişimini de önleyebilir.

Kısa Süreli Belleği Nasıl Geliştireceğinizi Bilin'e tıklayın

Tüm hayvan deneyleri, 2011 yılında revize edilen Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi (NIH yayın sayısı 80-23) tarafından gerçekleştirildi. Anahtar materyallerin kaynakları, Ek Malzemeler'deki Anahtar Kaynaklar Tablosunda listelenmiştir.

Hayvanlar ve Deneysel Tasarım

19-22 g ağırlığındaki sekiz haftalık erkek C57BL/6 J fareleri, sabit çevresel koşullar altında (sıcaklık 22-24 derece, 12 saatlik aydınlık/karanlık döngüsü ve %50 ± %10 nem) gıdaya serbestçe erişilebilen bir odaya yerleştirildi. ve su.

Deneylerden önce hepsinin bir hafta boyunca alışmasına izin verildi. İlk deneyde rastgele olarak şu gruplara atandılar: (1) kontrol grubu (anestezi ve cerrahiye maruz kalmayan), (2) egzersiz grubu (%35-40 maksimum kapasitede egzersiz yapan, ancak anestezi ve cerrahiye maruz kalmayan) , (3) ameliyat grubu (2 saat boyunca izofluran anestezisi altında 15 dakika boyunca sol karotid artere maruz kalma) ve(4) ila (6) Exe-l+Sur, Exe-m+Sur ve Exe-h+Sur grupları: 35 saatte egzersiz yapıldı -%40, %55-60 ve %75-80 maksimum kapasite sırasıyla anestezi ve ameliyata tabi tutuldu.

Hayvanlar ameliyattan 4 gün sonra (n=20) başlayarak öğrenme ve hafıza testleri için kullanıldı veya beyinleri ameliyattan 6 saat, 24 saat, 48 saat, 72 saat, 96 saat ve 7 gün sonra biyokimyasal analizler için toplandı (n=9 veya 14), ameliyattan 48 saat ve 19 gün sonra immünofloresan boyama için (n=6) ve ameliyattan 19 gün sonra Golgi boyama için (n=8).

İlk 4 gruptaki farelerden kan ve dışkılar, ameliyattan 7 gün sonra (n=7) SCFA'ları ölçmek için ve ameliyattan 3 ve 7 gün sonra (n=8) veya 16 S analizleri için toplandı. 4-hafta egzersiz protokolünün sonunda (n=8) ​​veya ilk 2 grupta karşılık gelen zamanda (n=16). Doku toplamaya yönelik fareler, öğrenme ve hafıza testleri için kullanılan farklı fare gruplarıydı. İkinci deneyde, fareler rastgele (1) Transcontrol+Sur grubuna ve (2) Trans-exe+Sur grubuna atandı.

Birinci gruptaki farelere, alıcılardaki doğal bağırsak mikrobiyotasını ortadan kaldırmak için antibiyotik tedavisinden sonra arka arkaya 7 gün boyunca günde bir kez gastrik gavaj yoluyla 500 ul ve lavman yoluyla günde bir kez 600 ul dışkı solüsyonu verildi. İkinci gruptaki farelere, antibiyotik tedavisinden sonra art arda 7 gün boyunca günde bir kez gastrik gavaj yoluyla egzersiz farelerinden 500 ul dışkı solüsyonu ve lavman yoluyla 600 ul dışkı solüsyonu verildi. Alıcıların dışkıları, 16 S analizi için dışkı naklinden 14 gün sonra toplandı. Daha sonra fareler ameliyata alındı.

Öğrenme ve hafıza ameliyattan sonraki 4 günden itibaren değerlendirildi (n=15). Beyin, biyokimyasal çalışmalar için ilk deneyde olduğu gibi toplandı (n=10). Üçüncü deneyde fareler rastgele (1) Transkontrol grubuna ve (2) Trans-kontrol+Sur grubuna atandı. Her iki gruptaki farelere kontrol farelerinden dışkı nakli yapıldı. İkinci grup ise dışkı naklinden 14 gün sonra ameliyata alındı. Hipokampus, GDNF'yi (n=10) ölçmek için ameliyattan 2 gün sonra toplandı. Dördüncü deneyde, fareler rastgele olarak (1) kontrol grubuna (bu çalışmada açıklanan herhangi bir deneysel koşula maruz kalmayan saf fareler), (2) 7 gün boyunca antibiyotik alan antibiyotik grubu ve (3) kontrol farelerinden dışkı transplantasyonu alan Trans-kontrol grubu.

Öğrenme ve hafıza, dışkı naklinin tamamlanmasından 19 gün sonra (antibiyotik grubunda antibiyotik tedavisinin tamamlanmasından 26 gün sonra) değerlendirildi (n=12). Beşinci deneyde fareler rastgele (1) kontrol grubuna, (2) kontrol farelerinden dışkı nakli alan Trans-kontrol grubu ve (3) ameliyathane farelerinden dışkı nakli alan Trans-cerrahi grubu. 

Dışkı nakli ikinci deneyde anlatıldığı gibi yapıldı. Alıcıların dışkıları, 16 S analizi (n=10) için dışkı naklinden 14 gün sonra toplandı. Öğrenme ve hafıza, dışkı numunesi toplandıktan 4 gün sonra değerlendirildi (n=17). Altıncı deneyde fareler, rastgele olarak (1) ameliyat artı bir kez intraperitoneal enjeksiyonla 200 ul normal salin (NS) alan normal salin grubuna atandılar. 4 hafta boyunca haftada bir ve ardından ameliyat, (2)egzersiz artı normal salin artı 4-hafta boyunca haftada bir kez intraperitoneal enjeksiyonla 200 µl NS alan ameliyat grubu, %35–40 maksimum kapasitede egzersiz ve ardından ameliyat, (3 ) egzersiz artı valerik asit artı ameliyat grubu, 4-hafta boyunca haftada bir kez intraperitoneal enjeksiyonla valerik asit (200 µl içinde 200 mg/kg) aldı, %35–40 maksimum kapasitede egzersiz ve ardından ameliyat.

Enjeksiyon haftanın ilk egzersiz gününün sabahında yapıldı. Ameliyat günü ek bir enjeksiyon daha yapıldı. Davranışsal(n=13) ve biyokimyasal (n=10) sonuçlar, ikinci deneydeki gibi değerlendirildi. Yedinci deneyde, 13-haftalık (23–27 g ağırlığında) erkek C57BL/ 6 J faresi rastgele olarak (1) kontrol grubuna, (2) art arda 4 gün boyunca günde bir kez intraserebroventriküler enjeksiyonlarla 4 µl NS alan NS grubuna ve (3) 4 µl intraserebroventriküler enjeksiyonla 4 mg/kg valerik asit alan gruba atandı. Art arda 4 gün boyunca günde bir kez enjeksiyon. Sol ve sağ serebroventriküller dönüşümlü bir programa göre enjekte edildi. Öğrenme ve hafıza, enjeksiyondan 4 gün sonra değerlendirildi (n=15).

Sekizinci deneyde, fareler rastgele olarak (1) ameliyat gününden itibaren art arda 4 gün boyunca günde bir kez intraserebroventriküler enjeksiyon yoluyla DMSO alan cerrahi artı dimetil sülfoksit (DMSO) grubuna, (2) ameliyat artı C3ar antagonisti (SB290157) alan C3ar antagonist grubuna atandı. ) ameliyat gününden başlayarak 4 gün boyunca günde bir kez intraserebroventriküler enjeksiyonla, (3) egzersiz artıDMSO artı 35'teki 4-hafta egzersizinden sonraki ameliyat gününde başlayarak art arda 4 gün boyunca günde bir kez intraserebroventriküler enjeksiyon yoluyla DMSO alan ameliyat grubu –%40 maksimum kapasite ve(4) egzersiz artı C3ar agonisti artı %35–40 maksimum kapasitede 4-hafta egzersizinden sonraki ameliyat gününde başlayan ardışık 4 gün boyunca günde bir kez intraserebroventriküler enjeksiyonla C3aragonist alan ameliyat grubu . Davranış testleri yukarıda belirtildiği gibi ameliyattan 4 gün sonra başlatıldı (n=15).

Dokuzuncu deneyde, fareler rastgele olarak (1) kontrol grubuna, (2) ameliyat grubuna, (3) ameliyat artı ameliyat olduklarında intraserebroventriküler enjeksiyon yoluyla GDNF alan GDNF grubuna ve (4) ameliyat artı ısıyla inaktive edilmiş GDNF grubuna atandı. Ameliyat olduklarında intraserebroventriküler enjeksiyon yoluyla ısıyla inaktive edilmiş GDNF alan grup. Hipokampiler, ELISA çalışması için ameliyattan 48 saat sonra toplandı (n=12). Bir haftalık iklimlendirmeden sonra, 30-36 g ağırlığındaki yaşlı fareler (18-aylık erkek C57BL/6 J fareleri) kullanıldı. üç çalışma. İlk deneyde, yaşlı fareler rastgele olarak (1) kontrol grubuna, (2) farelerin 4-haftalık %35-40 maksimum kapasitede egzersiz yaptığı egzersiz grubuna, (3) ameliyat grubuna ve (4) Farelerin ameliyattan önce %35-40 maksimum kapasitede 4-hafta egzersiz yaptığı Exe+Sur grubu. Hayvanlar, ameliyattan 4 gün sonra başlayan öğrenme ve hafıza testleri için kullanıldı (n=12) veya beyinleri, 48 saatte immünofloresan boyama için ameliyattan 48 saat sonra (n=10 veya 12) biyokimyasal analizler için toplandı. ve ameliyattan 19 gün sonra (n=6) ve Golgistaining için ameliyattan 19 gün sonra (n=8).

4 grubun farelerinden kan ve dışkılar, SCFA ölçümü için ameliyattan 7 gün sonra (n=7) ve 16 S analizleri için ameliyattan 3 ve 7 gün sonra (n=8) veya ameliyattan sonra toplandı) 4-haftalık egzersiz protokolünde veya ilk 2 grupta (n=16) karşılık gelen zamanda. Doku toplamaya yönelik fareler, öğrenme ve hafıza testleri için kullanılan farklı gruplardı. İkinci deneyde, yaşlı fareler rastgele olarak (1) Trans-Eski Kontrol+Sur grubuna ve (2) Trans-Eski Exe+Sur grubuna atandı. Bu fareler, dışkı naklinden 14 gün sonra, tarif edildiği gibi ameliyata tabi tutuldu. genç yetişkin fareler üzerinde ikinci deney. Öğrenme ve hafıza ameliyattan 4 gün sonra değerlendirildi (n =10).

Üçüncü deneyde, yaşlı fareler rastgele olarak (1)cerrahi artı NS grubuna; (2) egzersiz artı NS artı ameliyat grubu; ve (3)egzersiz artı valerik asit artı ameliyat grubu. Bu farelere, genç yetişkin fareler üzerinde yapılan altıncı deneyde anlatıldığı gibi egzersiz kondisyonu ve valerik asit verildi. Davranışsal sonuçlar ameliyattan 4 gün sonra (n=11) başlayarak test edildi. Yukarıda açıklanan örnek boyutları (n), her gruba/duruma rastgele dağıtılan hayvan sayısını temsil ediyordu. Bu hayvan sayıları, her deneyin en az 3 tekrarının toplamıydı. Hayvanlar, her deneyde bilgisayar tarafından oluşturulan rastgeleleştirme tablolarına dayalı olarak rastgele gruplara dağıtıldı.

Maksimum egzersiz kapasitesinin belirlenmesi ve egzersiz eğitimi

Ameliyattan önce, {{{0}}haftalık ve 18-aylık fareler, bireysel farelerin maksimum egzersiz kapasitesi belirlendikten sonra 4-haftalık koşu bandı aerobik egzersizine maruz bırakıldı. Bu belirleme daha önce açıklananlara benzer bir şekilde gerçekleştirildi [47, 48]. Kısaca, fareler ilk gün şok ızgarasının başlangıç ​​ayarları 25 V, 0,3 mA ve 2 Hz olacak şekilde ve hız ve eğim sıfırda 10 dakika süreyle koşu bandına alıştırıldı. Koşu bandının hızı daha sonra 10 dakika boyunca eğim 50'ye ayarlanarak 10 cm/s'ye çıkarıldı. Daha sonra koşu bandı hızı ve eğimi 5 dakika süreyle 15 cm/kum 100'e çıkarıldı.

The speed was then increased by 5 cm/s every 5 min to an average maximal speed of 70 cm/s in young mice and 60 cm/s in old mice (around 65–75 cm/s and 55–65 cm/s, respectively), as they reached the criteria for exercise-induced exhaustion. These criteria were: (1) 10 consecutive seconds on the electric grid; (2) spending >Şebekede geçirilen sürenin %50'si; ve/veya (3) elle dürtükleme konusunda motivasyon eksikliği. Bu kriterlerin bir veya daha fazlası karşılandığında fare ilgili şeritten hemen çıkarıldı. Ertesi gün, fareler aynı koşu bandı üzerinde ortalama maksimum hızın yarısı kadar (genç farelerde 35 cm/s veya yaşlı farelerde 30 cm/s) ve 100° eğimde tekrar tükenme kriterlerinden birine ulaşıncaya kadar koştular ve bu koşu süresi sürekli egzersiz her farenin maksimum egzersiz kapasitesi olarak kaydedildi. Bu iki protokolden sonra fareler, egzersiz sonrasında gözle görülür agresif davranışlardan kaçınmak için 30 dakika boyunca ayrı ayrı barındırıldı.

After resting for 2 days, mice assigned to exercise training groups were subjected to a 4-week protocol of forced treadmill running at 35–40%, 55–60%, or 75–80% of the maximal capacity, respectively, for 5 days a week. Mice that were shocked for >5% of the total daily exercise time in 2 consecutive days or >Art arda 3 gün içindeki toplam sürenin %3'ü hariç tutulacaktır.

Egzersiz gruplarıyla aynı deney grubundaki egzersiz yapmayan gruplar, yaklaşık 30-40 dakika boyunca her gün hareket etmeyen bir koşu bandına yerleştirildi. Toplamda 5 saniye boyunca 10 şok aldılar; bu, bir egzersiz grubundaki farelerin hareketsiz bir koşu bandında kaldıkları süre boyunca her gün aldıkları şokların ortalama miktarıydı. Eğer bir deney setinde bir egzersiz grubu yoksa, deney setindeki hiçbir fare şoka maruz kalmadı.

Antibiyotik tedavisi

Nakledilen mikrobiyotanın kolonizasyonunu kolaylaştırmak için alıcı farelere, biz ve diğerleri tarafından tanımlandığı gibi orijinal bağırsak mikrobiyotalarını ortadan kaldırmak için art arda 7 gün boyunca günde bir kez antibiyotik tedavisi verildi [11, 36]. Kısaca, ilk gün mide sondası ile %10 magnezyum sülfat (200 ul/10 g, iki kez, 3 saat aralıklarla) ile purgasyondan sonra, C57BL/6 J farelerine amoksisilin/klavulanik asit (200 mg/kg), metronidazol (200 mg/kg) verildi. 200 mg/kg) ve sefazolin (2 g/kg) mide sondası ile ve lavman (mide sondası için 300 ul ve lavman için 400 ul NS) ardışık 7 gün boyunca günde bir kez sabah ve amoksisilin/klavulanik asit (20 mg/kg) ), metronidazol (20 mg/kg) ve sefazolin (300 mg/kg) günlük 200 ul NS içerisinde intraperitoneal enjeksiyonla aynı 7 gün boyunca (16:00 ila 17:00 arası) uygulandı. Bakteriyel çapraz bulaşmayı önlemek için farelerin bakımı ve günlük kafes ve su şişesi değişiklikleri, havalandırmalı bir başlıkta temiz bir önlük ve eldiven giyen teknisyenler tarafından gerçekleştirildi. Etkiyi belirlemek için 16 S analizi için son tedaviden 24 saat sonra yarı fareden alınan dışkılar toplandı.

Dışkı nakli

Kontrol farelerinden, 4-haftalık egzersizin tamamlanmasından hemen sonra farelerden, ameliyattan 2 ila 8 gün sonra farelerden bağırsak hareketinden sonraki 30 dakika içinde toplanan taze dışkı topakları, 100 mg/ml steril salinle seyreltildi. 7'lik tüm dışkı topakları – Her deney koşulundaki 10 donör karıştırıldı ve salin içinde yeniden süspanse edildi. Kısaca, dışkı maddesi 5 dakika boyunca vorteksle karıştırıldı ve daha sonra sindirilmemiş yiyecekleri ve partiküllü malzemeleri çıkarmak için 70 mikronluk bir naylon hücre süzgecinden geçirildi. Alıcı farelere, ardı ardına 7 gün boyunca antibiyotiklerin son dozundan 24 saat sonra sabah mide sondasıyla 500 ul ve öğleden sonra lavman yoluyla 600 ul karşılık gelen dışkı solüsyonu verildi. Nakledilen fareler, 16 S analizleri ve ameliyat için dışkı toplama işlemine tabi tutulmadan önce, dışkı naklinden sonra 2 hafta boyunca muhafaza edildi.

Anestezi ve cerrahi

Ameliyatta daha önce tarif ettiğimiz gibi sol şah şahdamarı açığa çıkarıldı [6]. Kısaca, farelere %2 izofluran ile anestezi uygulandı ve işlem sırasında %100 oksijen sağlanan bir yüz maskesi ile spontan solunumları sağlandı. Isıtıcı battaniye yardımıyla rektal sıcaklık izlendi ve 37 derecede tutuldu. Fare en az 20 dakika süreyle izofluran ile anesteziye tabi tutulduktan sonra, 2-cm'lik bir orta hat boyun insizyonu ve 1-cm uzunluğunda ortak arteri açığa çıkaran yumuşak doku diseksiyonu, vagus sinirine herhangi bir zarar vermeden gerçekleştirildi. Daha sonra yara sulandı ve 4-0 cerrahi sütür kullanılarak kapatıldı. Cerrahi prosedür steril koşullar altında gerçekleştirildi ve genç farelerde yaklaşık 15 dakika, yaşlı farelerde ise 12 dakika sürdü. Genel anestezinin toplam süresi 2 saatti. Ameliyattan sonra tüm hayvanlara 3 mg/kgbupivakain deri altı enjeksiyonu yapıldı. Anestezi sırasında parmak sıkışmasına yanıt gözlenmedi.

İntraserebroventriküler enjeksiyonlar

Yukarıda açıklandığı gibi, bazı fare gruplarına intraserebroventriküler enjeksiyon uygulandı. Kısaca, bu fareler yüzüstü pozisyonda stereotaktik bir kafa çerçevesine yerleştirildi. Enjeksiyon bölgesi şu şekilde konumlandırılmıştır: Bregma'dan 1.00 mm mediolateral, -0.3 mm ön-arka ve Bregma'dan −2.5 mm dorsoventral derinlik. Cerrahi artı GDNF grubundaki farelere 1{{ intraserebroventriküler enjeksiyon uygulandı. Önceki çalışmalarda [6, 26] açıklandığı gibi 3 ul fosfat tamponlu salin (PBS) içindeki 20}} ug/kg rekombinant fare GDNF'si ve ameliyattaki fareler artı ısıyla inaktive edilmiş GDNF grubuna ısıyla denatüre edilmiş (100°C'de 5 dakika) enjeksiyonu yapıldı ) GDNF çözümü. Ameliyattaki fareler artı C3ar antagonist grubu, ameliyattan 0 saat, 24 saat, 48 saat ve 72 saat sonra %5 DMSO içeren 3 ul PBS içinde 10 ug/kg SB290157 aldı. Egzersiz artı C3ar agonisti ve ameliyat grubundaki fareler, SB290157 ile aynı anda %5 DMSO içeren 3 ul PBS içinde 1 ug/kg C3ar agonisti aldı. Altıncı deneyin valerik asit grubundaki farelere ardı ardına 4 gün boyunca 4 ul içinde 4 mg/kg valerik asit verildi.

Davranış testi

Öğrenme ve hafıza, yeni nesne tanıma ve Barnes labirent testi ile değerlendirildi. Tüm davranış testleri saat 10:00 am−5:00pm'de ses yalıtımlı bir odada gerçekleştirildi. Öğrenme ve hafıza testlerinde kullanılan fareler, bu testlerin etkilerinden kaçınmak amacıyla herhangi bir biyokimya çalışmasında kullanılmadı.

Yeni nesne tanıma testi

Bizim ve diğerlerinin daha önce açıkladığı gibi [20, 49, 50], fareler ameliyattan 4 gün sonra alışma için 5 dakika süreyle açık bir alana konuldu. Test şu şekilde gerçekleştirildi. Öğrenme gününde aynı nesnelerden ikisi odanın bitişik açılarına yerleştirildi. Fareler sırtları nesnelere dönük olacak şekilde odaya yerleştirildi ve 5 dakika boyunca odayı serbestçe keşfetmelerine izin verildi. İki nesne üzerinde toplam araştırma süresi eşitse hayvan elendi.<5 s. One of the objects was replaced by a novel object 30 seconds or 24 hours later. The mouse was put into the chamber with their backs turned toward the objects and allowed to explore for 5 min. Animal behavior was recorded by ANY-maze behavioral tracking software (Stoelting Co., IL). Exploratory time of new (T2) and old (T1) objects within 5 min was recorded and the memorization ability of the mouse was quantified by discrimination index: DI = T2 / (T1 + T2). The DIs at 30 s and 24 hours after the training reflected the instant and long-term memory, respectively. The field was always provided with even light, and the objects and fields were cleaned with 70% ethanol after each test.

Barnes labirenti

Ameliyattan yedi gün sonra hayvanlar, daha önce tanımladığımız gibi uzamsal öğrenmelerini ve hafızalarını test etmek için Barnes labirentine tabi tutuldular [6, 49]. Barnes labirenti, eşit aralıklı 20 deliğe sahip dairesel bir platformdur (SDInstruments, San Diego, CA). Deliklerden biri hedef kutusu adı verilen karanlık bir odaya bağlıydı. Test, hayvanların Barnes labirentinin ortasına yerleştirilmesiyle başladı. Farelerin bu kutuyu bulmasını teşvik etmek için platform üzerinde rahatsız edici gürültü (85 dB) ve parlak ışık (200W) kullanıldı. 4 günlük eğitimin ardından referans hafızaları 5. gün ve 12. günde test edildi. Bu süre boyunca herhangi bir test yapılmadı. 5. günden 12. güne kadar. Her deneme sırasında hedef kutuya girme gecikmesi bir ANYMaze video izleme sistemi (SD Instruments) tarafından kaydedildi.

For more information:1950477648nn@gmail.com