Golgi Alpha1,2-Mannosidase IA, NKCC2'nin Verimli Endoplazmik Retikulumla İlişkili Bozulmasını Teşvik Eder

Soyut

Apikal yerleşimli böbrek Na-K-2Cl yardımcı taşıyıcı NKCC2'deki mutasyonlar, yaşamı tehdit eden bir böbrek hastalığı olan tip I Bartter sendromuna neden olur. Daha önce ER'den taşınmanın, NKCC2'nin hücre yüzeyine yolculuğundaki sınırlayıcı aşamayı temsil ettiğini göstermiştik. Yine de, NKCC2'ye ve onun hastalığa neden olan mutantlarına özgü ER kalite kontrol bileşenleri hakkında çok az şey bilinmektedir. Burada, Golgi alfa1, 2-mannosidaz IA'nın (ManIA) olgunlaşmamış NKCC2 formunun yeni bir bağlanma ortağı olarak tanımlandığını rapor ediyoruz. NKCC2 ile ManIA etkileşimi esas olarak cis-Golgi ağında gerçekleşir. ManIA birlikte ekspresyonu, toplam NKCC2 protein bolluğunu azaltırken, ManIA yıkımı ters etki yarattı. Daha da önemlisi, ManIA ortak ifadesinin NKCC2 katlama mutantları üzerinde daha derin bir etkisi oldu. Sikloheksimid kovalamaca testi, ManIA'yı aşırı eksprese eden hücrelerde, NKCC2 stabilitesinin ve olgunlaşmasının büyük ölçüde engellendiğini gösterdi. ManIA'nın sitoplazmik bölgesinin silinmesi, NKCC2 ile etkileşimini zayıflattı ve yardımcı taşıyıcının olgunlaşması üzerindeki etkisini inhibe etti. NKCC2 ekspresyonunda ManIA kaynaklı azalmalar, proteazom inhibitörü MG132 ile dengelendi. Benzer şekilde, kifunesin tedavisi, ManIA etkisini büyük ölçüde azalttı; bu, mannoz budamasının, yardımcı taşıyıcının gelişmiş ERAD'sine dahil olduğunu kuvvetle düşündürür. Ayrıca, ManIA'yı katalitik alanından mahrum bırakmak, NKCC2 üzerindeki etkisini tamamen ortadan kaldırdı. Özetle, verilerimiz böbrek hücrelerinde yanlış katlanmış NKCC2 proteinlerinin tutulmasını ve bozulmasını destekleyen bir ManIA aracılı ERAD yolunun varlığını göstermektedir. Golgi ManIA'nın başlangıçta ER içinde protein kalite kontrol gözetiminden kaçan yanlış katlanmış proteinlerin tutulmasını, geri dönüştürülmesini ve ERAD'sini teşvik ederek NKCC2'nin ERAD'sine katkıda bulunduğu bir model önermektedir.

anahtar kelimeler

böbrek; NKCC2; protein kalite kontrolü; ERAD; golgi; alfa1,2-mannosidaz IA; zar; insan ticareti; takas sendromu; hipertansiyon

Cistanche'nin faydalarını öğrenmek için buraya tıklayın

giriiş

Sodyum dengesi ve böbrek tarafından düzenlenmesi, hücre dışı hacmi düzenleyerek, renal tuzun işlenmesini etkileyen ve BP'yi önemli ölçüde değiştiren nadir monogenik sendromlarda gösterildiği gibi, uzun vadeli kan basıncı (BP) kontrolünün önemli bir belirleyicisidir [1, 2]. Gerçekten de, kan basıncı yüksekliğinin patogenezine ve sürdürülmesine birkaç faktör katkıda bulunsa da, başlangıçta Guyton tarafından öne sürüldüğü gibi, böbrek mekanizmalarının birincil bir rol oynadığına inanılmaktadır [1]. Böbreğin Henle döngüsünün (TAL) kalın çıkan kolu, filtrelenmiş NaCl yükünün yüzde 20-30'unun yeniden emilmesinden sorumludur [3-5]. Moleküler seviyede, TAL Na-Cl yeniden emilimine lüminal Na-K-2Cl yardımcı taşıyıcı NKCC2 [5] aracılık eder. Sonuç olarak, NKCC2 taşıma fonksiyonunun nihai idrar tuzu atılımı üzerinde önemli bir etkisi vardır ve daha sonra uzun vadeli kan sodyum dengesini etkiler [3,5]. Buna göre, yardımcı taşıyıcının ve/veya düzenleyicilerinin kalıtsal varyasyonları insanlarda kan basıncını etkiler [3,6-8]. Aslında, NKCC2'nin inaktivasyonu, elektrolit anormalliklerinin yanı sıra düşük BP'ye sahip hayatı tehdit eden bir böbrek hastalığı olan tip I Bartter sendromuna (BS1) neden olur [9], kotransporterin artan aktivitesi ise yüksek BP ile ilişkilendirilmiştir [2,10– 13]. Ayrıca, tuza duyarlı hipertansiyonun çeşitli hayvan modellerinde [14,15], NKCC2 protein ekspresyonu artar ve hipertansiyon gelişimine katkıda bulunur. BP homeostazındaki rolüne ek olarak, NKCC2 aktivitesi su dengesinin düzenlenmesi için de gereklidir [5,16]. Bu görüşü destekler şekilde, BS1 ve BS5 hastalarında NKCC2 inaktivasyonu şiddetli poliüri gelişimine neden olur [7,8,17]. Ayrıca, yaşlanan böbreklerin bozulmuş üriner konsantrasyon yeteneği, en azından kısmen, azalmış NKCC2 proteini seviyesine atfedilir [18,19]. Hipertansiyon ve yaşlanmaya ilişkin tüm hayvan modellerinde, NKCC2'nin esas olarak post-translasyonel mekanizmalar tarafından düzenlendiğini [5,16,19] vurgulamaya değer, bu nedenle NKCC2'nin biyogenezini ve kaçakçılığını düzenleyen faktörleri inceleme ihtiyacının altını çiziyor. Buna rağmen, memeli hücrelerinde vahşi tip ve mutasyona uğramış NKCC2 proteinlerinin hücre içi ticaretinin altında yatan moleküler mekanizmalar, özellikle protein-protein etkileşimi ile düzenlenmesi hakkındaki bilgimiz çok zayıf kaldı. Ayrıca, önceki raporların büyük çoğunluğu esas olarak yardımcı taşıyıcının Golgi sonrası düzenlemesine, özellikle fosforilasyona odaklanmıştır [20-22] ve bu nedenle bugün taşıyıcıların acil serviste ve Golgi öncesi düzenlenmesi hakkında çok az şey bilinmektedir. seviye.

Doğru çalışması için, NKCC2'nin apikal hücre yüzeyine uygun şekilde hedeflenmesi ve TAL hücrelerinin fizyolojik veya patolojik zorluklara uygun şekilde uyum sağlamasına izin verecek şekilde yeterince ifade edilmesi gerekir [3,23]. Tüm transmembran proteinler gibi, NKCC2'nin hücre zarına uygun kaçakçılığı için hazırlık, kotransporter proteinin endoplazmik retikulumda (ER) sentezlenmesiyle başlar ve protein Golgi ağından geçerken devam eder [24,25]. Benzer şekilde, plazma zarına yönlendirilen hemen hemen tüm proteinlere benzer şekilde, endoplazmik retikuluma (ER) yer değiştiren NKCC2 proteinleri, sadece katlanmış proteinlerin salgı yolu boyunca hareket ettirileceği şekilde kalite kontrolünden geçer [26,27]. ER'de protein katlanmasının kontrolü genellikle, spesifik bir oligosakaritin (Glc3Man9GlcNAc2) yeni oluşan bir proteine ​​kovalent bağlanmasıyla başlatılan posttranslasyonel bir modifikasyon olan N-glikosilasyon ile ilişkilidir [28,29]. Bu oligosakarit transfer edildikten sonra, salgı yolu boyunca birkaç ardışık protein olgunlaşması adımı takip eder [28,30]. Üç glukoz kalıntısının uzaklaştırılmasından ve ER'de mannoz kırpılmasının başlamasından sonra, kalite kontrol sürecinin bir parçası olarak, doğru şekilde katlanmış proteinler olgunlaşma için Golgi aparatına aktarılır [26,28]. Yüksek mannoz N-glikanları daha sonra cis-Golgi'deki [31,32] Golgi 1, 2-mannosidazlar gibi spesifik mannosidazlar tarafından kesilir. GlcNAc, galaktoz, sialik asit ve fukoz şekerlerinin eklenmesi medial ve trans-Golgi bölmelerinde hibrit ve kompleks N-glikanları üretir [33,34]. Daha sonra, olgun N-glikosile edilmiş proteinler, nihai varış yerlerine hedeflenir. Katlama işlemi başarısız olduğunda, çekirdek glikan yapısındaki terminal mannoz kalıntıları aşamalı olarak kırpılır ve kusurlu proteinler, ERAD (endoplazmik retikulumla ilişkili bozunma [26,35]) olarak bilinen mekanizmalar aracılığıyla sitozolik proteazom bozunması için zar boyunca yer değiştirir. Agrega oluşturabilen veya ERAD şaperonları tarafından tespit edilemeyen geri kalan anormal proteinler, toplu olarak ER-sayfası [36,37] olarak anılan yollar yoluyla temizlenmek üzere lizozomlara iletilir. Bununla birlikte, bazı yanlış katlanmış proteinler yine de ER'den kaçabilir ve bir Golgi kalite kontrolüne (GQC) tabi tutuldukları ve parçalanma için lizozom veya proteazomu hedefledikleri Golgi'ye ilerleyebilirler [38]. Transmembran proteinlerin hem vahşi tip hem de mutant varyantları, ER kalite kontrolüne ve bozulmasına eğilimlidir. İlk integral membran memeli ERAD substratı olarak karakterize edilen klorür kanalı proteini CFTR (kistik fibroz transmembran iletkenlik düzenleyici) en iyi örnektir [39,40]. Normal koşullar altında, vahşi tip CFTR'nin yüzde 70'e kadarı ERAD tarafından bozulur [39,40]. Daha da etkileyici bir şekilde, kistik fibrozdan sorumlu CFTR'nin mutasyonu olan fenilalanin 508'in (∆F508) silinmesi katlanma etkinliğini azaltır ve mutant CFTR'nin yaklaşık yüzde 99'unun plazma zarına ulaşamadan bozunmasına neden olur [39,40]. CFTR'ye ve HERG [41], ROMK [42] ve NCC [43] gibi diğer birkaç transmembran proteinine benzer şekilde, daha önce yeni sentezlenen NKCC2 proteinlerinin çoğunun ER'de tutulduğunu ve bir süreç olan bozunmaya yöneldiğini göstermiştik. esas olarak proteazom yolunu içerir [44-46]. ERAD, yanlış katlanmış bir proteinin moleküler şaperonlar tarafından saptanmasıyla başlar [47]. Bu süreçte yer alan şaperonların tipi, temel olarak, ER lümeninde, ER zarında veya sitoplazmada oluşabilen substratın katlanan lezyonunun konumuna bağlıdır [27,47]. Sonuç olarak, üç farklı ERAD yolu önerilmiştir: ERAD-L (ER lümeni içinde yanlış katlanmış lezyonlara sahip substratların ERAD'si), ERAD-M (membran) ve ERAD-C (sitoplazma) [27,47,48]. Örneğin, gelişmekte olan CFTR'nin ERAD'si hem sitoplazmik hem de ER luminal şaperonları içerir [49]. Benzer şekilde, başka bir transmembran proteini olan NCC, ERAD'si için birkaç sitoplazmik şaperonu birleştirir [43,50]. İlgili böbreğe özgü elektronötral NCC'ye benzer şekilde, NKCC2 12 transmembran bölgeye, iki büyük sitoplazmik alana ve ER'ye maruz kalan büyük bir ekzofasiyal halkaya sahiptir [5]. NKCC2, ER ve sitoplazmada alanlar içerdiğinden, yardımcı taşıyıcının ER zarının her iki tarafında veya her iki tarafında ER moleküler şaperonları ile bir etkileşimi düşünülebilir. Ayrıca, NKCC2'nin C-terminal alanının baskın sitoplazmik bölge [5] olduğu göz önüne alındığında, protein-protein etkileşiminin ana bölgesi olması muhtemeldir ve bu nedenle yardımcı taşıyıcının biyogenezinde ve kaçakçılığında çok önemli bir rol oynaması muhtemeldir. Bu kavramla uyumlu olarak, daha önce NKCC2 C-terminalinin [46,51-53] birkaç bağlayıcı ortağı tanımladık. Bunların arasında, aldolaz B ve SCAMP2'nin Golgi sonrası seviyede NKCC2 C-terminaline bağlandığını ve yardımcı taşıyıcının hücre altı yeniden dağıtımını düzenlediğini gösterdik [51,52]. Daha yakın zamanlarda, STCH, Hsp70 ve protein-lektin OS9'un, ER ile ilişkili bozulmasını düzenlemek için esas olarak ER'de NKCC2'nin olgunlaşmamış formu ile etkileşime girdiğine dair kanıtlar sağladık [46,53]. Bu raporda, NKCC2'nin C-terminal kuyruğu ile her yerde bulunan bir protein olan Golgi 1,2-mannosidaz IA (Golgi ManIA, Man9-mannosidaz olarak da bilinir) arasındaki yeni bir protein-protein etkileşimini açıklıyoruz. ER -mannosidaz I (MAN1B1) ve diğer iki Golgi 1,2-mannosidaz, Golgi -mannosidaz IB [MAN1A2] ve Golgi -mannosidaz içeren sınıf I -1,2 mannosidaz ailesine aittir IC [MAN1C1] [31,54–56]. İlginç bir şekilde, artan sayıda kanıt, -1,2-mannosidazların yalnızca protein katlanması ve olgunlaşmasında yer almadığını, aynı zamanda yanlış katlanmış protein bozulmasında da önemli bir rol oynadığını gösterdi [57-60]. Burada, ManIA'nın NKCC2'nin olgunlaşmamış formu ile esas olarak cis-Golgi ağında etkileşime girdiğini ve proteazom yolu ile bozulmasını desteklediğini ve bu nedenle yanlış katlanmış NKCC2 proteinlerinin gözetiminde ve çıkarılmasında ek bir kontrol noktası ortaya koyduğunu gösteriyoruz. Sonuç olarak, bu bulgular, anormal NKCC2 kaçakçılığı ve ekspresyonu ile ilgili böbrek bozukluklarını önlemek ve/veya tedavi etmek için yeni stratejilerin geliştirilmesine yardımcı olmak için NKCC2 proteinlerinin ER ve Golgi kalite kontrolünün incelenmesinde yeni yollar açabilir.

Cistanche takviyesi

Malzemeler ve yöntemler

1. Maya İki Hibrit Testi

Maya iki hibrit (Y2H) taraması, daha önce ayrıntılı olarak açıklandığı gibi [51], yem olarak NKCC2 C terminalinin proksimal bölgesi (kalıntılar 661–1095) kullanılarak yapıldı. Kısaca, yemi eksprese eden AH109, ​​bir insan böbrek cDNA kütüphanesi ile dönüştürülmüş Y187 maya suşu ile çiftleştirildi. Varsayılan etkileşen proteinleri kodlayan pozitif klonların seçimi için, çiftleşmiş maya hücreleri önce düşük kesinlikteki seçme plakalarında (-Leu, -Trp, -His) ve ardından yüksek kesinlikte seçme plakalarında (-Leu, -Trp, -His, -) büyütüldü. Ada). Seçilen koloniler aynı zamanda -galaktosidaz aktivitesi açısından da test edildi ve pozitif klonlardan gelen DNA, RPM maya plazmid izolasyon kiti (BIO 101 Systems) kullanılarak maya hücrelerinden izole edildi. Av plazmitleri DH5 bakterisine (Invitrogen) dönüştürülerek ve bir Qiagen kiti kullanılarak izole edilerek kurtarıldıktan sonra, cDNA plazmitleri BLAST programı kullanılarak dizildi ve değerlendirildi.

2. Plazmid İnşaat ve Sahaya Yönelik Mutagenez

WT Myc-NKCC2, glikosile edilmemiş Myc-NKCC2 ((N442Q/N452Q) ve WT EGFP-NKCC2'nin üretimi daha önce tarif edilmiştir [45,46,51]. Fare ManIA kodlama sekansı, memeli ekspresyon pcDNA3.1/V5 vektörüne alt klonlanmıştır (Invitrogen, Paris, Fransa) WT ManIA-V5 yapısını oluşturmak için C-terminal kuyruğu (ManIA-∆Cter) olmayan ManIA içeren plazmit, ileri primer 50 CCGGAGCGATGAAGTTCGTGCTGCTGC 30 ve ters primer kullanılarak WT MANIAV5 ekspresyon yapısından amplifikasyon yoluyla üretildi 50 TTTCTCTTTGCCATCAATTTC 30. N-terminal bölgesinden (ManIA-∆Nter) yoksun ManIA içeren yapı, ileri primer 50 GAGGGCAAAGATCAAAGAGTAGATGACCCATGCTGGAAT kullanılarak QuikChange bölgeye yönelik mutajenez yöntemiyle (Stratagene, Les Ulis, Fransa) WT MANIA-V5 plazmitinden de üretildi. 3 0 ve ters primer 50 ATTCCAAGCATGGGTCATCTACTCTTTGATCTTTGCCTCTC 30. Tüm mutasyonlar ve kesmeler dizileme ile doğrulandı.

3. Hücre Kültürü

Opossum böbrek hücreleri (OKP hücreleri), yüzde 10 fetal sığır serumu (Eurobio, Les Ulis, Fransa), penisilin (100 U/mL) ve streptomisin (100 U/mL) ile 37°C'de takviye edilmiş DMEM'de (Gibco 42430) muhafaza edildi. C yüzde 5 CO2 içeren nemli bir atmosferde. İnsan embriyonik böbrek (HEK) 293 hücreleri, yüzde 10 fetal sığır serumu ve yüzde 1 penisilin/streptomisin ile tamamlanan DMEM ortamında büyütüldü. Plazmit DNA transfeksiyonu için hücreler, üreticinin talimatlarına göre (Invitrogen, Paris, Fransa) Lipofectamine plus kiti kullanılarak 5 saat süreyle geçici olarak transfekte edilmeden önce yüzde 60-70 birleşme noktasına büyütüldü. Protein bozunma deneyleri için hücreler, daha önce tarif edildiği gibi hücre parçalanmasından 6 saat önce MG132 (2 uM) veya klorokin (100 uM) ile muamele edildi [53,61]. Kifunesin (Sigma k1140, Saint-Quentin-Fallavier, Fransa), hücre parçalanmasından 6 saat önce 25 uM'de kullanıldı.

4. Protein Hazırlama, İmmunoblotlama ve İmmunopresipitasyon

Transfeksiyondan sonra hücreler, 120 mM Tris/Hepes, pH 7,4; 150 mM NaCI, 5 mM EDTA, 3 mM KCI; Yüzde 1 (v/v) Triton X-100 ve proteaz inhibitörleri (Complete Roche 1697498, Meylan, France). Numuneler daha sonra toplandı ve 16,{{10}} rpm'de 15 dakika 4°C'de santrifüjlendi. İmmüno-çökeltme için hücreler, 0.4 M NaCI içeren lizis tamponu ile çözündürüldü; 1.5 mM MgCI2; 10 mM Hepes, pH 7.9; yüzde 5 (v/v) gliserol; Yüzde 0,5 (v/v) Nonidet P-40) ve proteaz inhibitörleri (Complete, Roche Diagnostics). İmmünopresipitasyon, anti-V5 (Invitrogen) veya anti-ManIA (Sigma) antikoru kullanılarak ve afinite saflaştırması, protein G-agaroz boncukları (Dynabeads, Invitrogen, Paris, Fransa) kullanılarak gerçekleştirildi. Oda sıcaklığında 1 saat protein G-agaroz boncukları ile inkübasyondan sonra, immünokompleks PBS (Invitrogen) içinde yıkandı. Protein numuneleri daha sonra yükleme tamponunda kaynatıldı, yüzde 7.5 veya yüzde 10'luk bir gradyan veya yüzde 15'lik SDS-poliakrilamid jelleri üzerinde çalıştırıldı ve ilgili birincil antikorlar ve yaban turpu peroksidaz-konjuge ikincil antikor ile incelendi. Proteinler, üreticinin talimatlarına göre gelişmiş kemilüminesans tespiti (Thermo Fisher Scientific, Les Ulis, Fransa) ile görselleştirildi.

5. İmmunositokimya

Transfeksiyondan yirmi dört ila kırk sekiz saat sonra, konfluent hücreler PBS plus plus (pH 8, 1 mM MgCl2 ve 0.1 mM CaCl2) ile yıkandı. Hücreler daha sonra 50 mM NH4Cl ile inkübe edilmeden önce oda sıcaklığında 2 dakika boyunca PBS içinde yüzde 2 paraformaldehit ile sabitlendi ve 1 dakika boyunca yüzde 0,1 Triton X{15} ile geçirgenleştirildi. Spesifik bir antikor bağlanmasını bloke etmek için hücreler, 30 dakika boyunca DAKO (arka plan azaltıcı bileşenlere sahip antikor seyreltici) ile inkübe edildi. Sabit hücreler, ilgili birincil antikor ile oda sıcaklığında 1 saat süreyle inkübe edildi. Bu çalışmada kullanılan birincil antikorlar şunlardır: fare anti-V5 (Invitrogen, Paris, Fransa), fare anti-Myc (Takara, Clontech, Saint-Germain-en-Laye, Fransa), sıçan anti-V5 (Abcam, Paris, Fransa), tavşan anti-Calnexin (Abcam), tavşan anti-Giantin (Abcam), tavşan anti-GM130 (Abcam), tavşan anti-ManIA (Abcam), Kullanılan ikincil antikorlar şunlardır: keçi anti-tavşan Alexa Fluor 555 (Invitrogen), keçi anti-tavşan Alexa Fluor 488 (Invitrogen), keçi anti-tavşan FITC (DakoCytomation, Trappes, Fransa), keçi antifare Texas red (Invitrogen), keçi anti-sıçan Alexa Fluor 555 (Invitrogen), keçi anti-fare Alexa Fluor 488 (Invitrogen), Alexa Texas Red konjuge anti-fare (Jackson ImmunoResearch, Ely, UK), tavuk anti-fare Alexa Fluor 647 (Invitrogen). İlgili birincil ve ikincil antikorlarla inkübasyonlardan sonra hücreler daha sonra PBS ile yıkandı ve Vectashield ile monte edildi.

Herba Cistanche

6. Sikloheksimid-Chase Testleri

NKCC2'nin stabilitesini ve olgunlaşmasını izlemek için, NKCC2 plazmidleri ile transfeksiyondan 14−16 saat sonra OKP veya HEK hücrelerine 100 uM konsantrasyonda sikloheksimit eklendi. Kovalama dönemi için hücre lizatları, sikloheksimid işleminden 0, 1, 2 ve 4 saat sonra toplandı ve immünoblotlama ile analiz edildi.

7. siRNA Yıkımı

ManIA siRNA'lar, Dharmacon'dan ON-TARGET artı SMART havuzları (L-012174-00-0005) olarak satın alınmıştır. HEK hücreleri, daha önce gerçekleştirilen [46,53] üreticinin spesifikasyonları kullanılarak ilk olarak Lipofectamine RNAiMAX (Invitrogen) ile kontrol veya spesifik ManIA siRNA'larla transfekte edildi. siRNA transfeksiyonundan bir gün sonra hücreler, NKCC2 plazmitleri ile transfekte edildi. 24-48 saat sonra, belirtilen antikorlar kullanılarak her protein için hücre lizatları analiz edildi.

8. İstatistiksel Analizler

Veriler ortalama ± SE olarak ifade edilir. Ortalamalar arasındaki farklar, uygun şekilde eşleştirilmiş veya eşleştirilmemiş t-testleri veya ANOVA kullanılarak değerlendirildi. p < 0.05, istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

Tartışma

Bu çalışma, NKCC2 biyogenezi sırasında ER ile ilişkili bozunmanın düzenlenmesinin altında yatan moleküler mekanizmalar hakkında fikir edinmek için gerçekleştirildi. Maya iki hibrit analizi ve ortak immünopresipitasyon deneyleri kullanarak GolgiMannosidase IA'yı yeni bir NKCC2 bağlama ortağı olarak belirledik. İlişki, yardımcı taşıyıcının yalnızca olgunlaşmamış ve yüksek mannozlu glikosile edilmiş formunu içerir ve esas olarak cis-Golgi ağında gerçekleşir. ManIA yıkımının NKCC2 protein bolluğunu arttırdığını, oysa aşırı ekspresyonunun ters etkiye sahip olduğunu bulduk. ManIA ortak ifadesi, tutulmasını, ER'ye geri dönüştürülmesini ve proteazom yolu yoluyla bozulmasını teşvik ederek NKCC2 olgunlaşmasını bozdu. Önemli olarak, NKCC2 katlama mutantları, ManIA aracılı ERAD yoluna daha yatkındır. Bu bulgular, NKCC2 protein kaçakçılığındaki anormalliklerin, BS1'in patofizyolojisini aydınlatmak ve mevcut tedavileri iyileştirmek için gerekli olan Bartter sendromuna nasıl yol açtığını daha iyi anlamaya yardımcı olabilir.

Sınıf I 1,2-mannosidazlar tarafından mannoz budama işleminin, glikoproteinlerin ERAD'sinin tanınma aşamasına dahil olduğu, çünkü bu işlem onların inhibitörleri 1-deoksimannojirimisin ve kifunensin [67, 70–73]. Başlangıçta, esas olarak maya üzerinde yürütülen çalışmalara dayanarak, bu bileşiklerin, bir glikan sinyali olan Man8'i oluşturmak için Man9'un orta B dalından mannozu esas olarak ayıran ER 1,2-mannosidaz I'i inhibe ederek ERAD'yi engellediği düşünülüyordu. ERAD'ı başlatmayı önerdi [70,74]. Bununla birlikte, memeli hücrelerinde, hem kifunesin hem de 1-deoksimannojirimisinin Golgi 1,2-mannosidazları da inhibe ettiği göz önüne alındığında, bu hipotez mutlaka sağlam değildir. Ayrıca, memeli hücrelerinde, Man6GlcNAc2 (M6) veya Man5GlcNAc2 (M5) oluşturmak için üç ila dört 1,{16}}bağlı mannoz kalıntısının daha fazla kırpılmasının, yanlış katlanmış glikoproteinlerin bozunmasını tetiklemeye de katkıda bulunduğunu gösteren artan kanıtlar vardı [ 32,75–77]. Ancak, bu ek düzeltmeden hangi 1,2-mannosidazın sorumlu olduğu açık değildi. Adaylardan biri ER a 1,2-mannosidaz I'in kendisidir, çünkü aşırı ekspresyonu artan mannoz budamasına ve hızlandırılmış ERAD'ye yol açar [78–80]. Diğer olası adaylar, ER-bozunmasını arttırıcı -mannosidaz benzeri (EDEM) proteinler olabilir, çünkü hem EDEM1 hem de EDEM3'ün, hücrelerde aşırı eksprese edildiğinde mannoz kırpılmasını uyardığı ve glikoprotein ERAD'yi hızlandırdığı bildirilmiştir [81,82]. Başka bir olası aday, Man9'u Man6 ve Man5'e kırpan Golgi mannosidaz IA olabilir [31,54]. Bu enzim ve diğer iki Golgi 1,2 mannosidazın (IB ve IC), kültürlenmiş hücrelerde aşırı eksprese edildiğinde bir ERAD-L substratı olan NHK 1-antitripsin'in bozunmasını ve mannoz kırpılmasını arttırdığı gösterilmiştir [57]. Bu çalışmada, ManIA'nın bir böbrek transmembran proteini olan NKCC2 ile spesifik bir etkileşiminin kanıtını gösterdik. Daha da önemlisi, in vivo ManIA ilişkisinin yalnızca cotransporter'ın olgunlaşmamış biçimini devreye soktuğunu gösterdik. En önemlisi, ManIA bağlanmasının NKCC2'nin tutulması ve ER ile ilişkili bozulmasına dahil olduğuna dair kanıt sağladık.

Cistanche kapsülleri

Daha önce ERAD ve ER'den ihracatın, NKCC2 olgunlaşması ve hücre yüzeyi ekspresyonunun [8,44-46] önemli düzenleyicisini oluşturduğuna dair kanıtlar sunmuştuk. Aslında, yeni sentezlenen NKCC2 proteinlerinin çoğunun, proteazom ve lizozom yollarını içeren ER ile ilişkili bozunmayı hedeflediğini gösterdik [8,44-46,53]. Ayrıca, STCH ve protein lektin OS9'un, esas olarak ER'de olgunlaşmamış NKCC2 formu ile etkileşime girerek bu işlemlere dahil olduğunu gösterdik [46,53]. OS9 ve STCH'ye benzer şekilde, ManIA'nın yardımcı taşıyıcının ERAD'sine dahil edilmesi ilk olarak bu çalışmada, proteinlerin birliğinin yalnızca NKCC2'nin olgunlaşmamış formunu içerdiğini ortaya koyan ortak immünopresipitasyon deneyleri ile önerildi. Dikkat çekici bir şekilde, ManIA'nın sitoplazmik kuyruğunun silinmesi, NKCC2 ile etkileşimini azaltmış ancak tam olarak engellememiş, bu nedenle yardımcı taşıyıcının ManIA proteininin diğer bölgeleri ile etkileşim olasılığını açmıştır. Ayrıca, ManIA'nın yalnızca çekirdek glikosile edilmiş ve olgunlaşmamış NKCC2 formuyla etkileşime girmesine rağmen, immünositokimya çalışmalarımız, ManIA'nın ER'de NKCC2 ile kollokalize olmadığını ortaya koydu. Bu bağlamda, ManİA'nın ya Golgi'de ya da ER'de rapor edildiğini belirtmekte fayda vardır [31,83-85]. Başka bir bağımsız çalışma, mannosidaz IA'nın kalite kontrol veziküllerinde de bulunabileceğini bildirmiştir [58]. Sonuç olarak, ManIA'nın hücresel dağılımı hücre tipine bağlı olabileceğinden, çalışmamızı iki farklı böbrek hücre hattında, OKP ve HEK hücrelerinde gerçekleştirdik. Bu hücrelerde gerçekleştirilen lokalizasyon çalışmaları, ManIA'nın Golgi-aparatında her iki hücre hattında ifade edildiğini açıkça gösterdi ve kotransporter ile etkileşim bölgesinin cis-Golgi ağı olduğunu ortaya çıkardı. Golgi aparatının girişindeki glikoproteinlerin N-glikanının hala yüksek mannoz tipinde olduğu göz önüne alındığında, ManIA ile NKCC2 etkileşiminin gerçekten de cis-Golgi ağında meydana gelebileceği düşünülebilir. siRNA ve aşırı ekspresyon yaklaşımlarını kullanarak, ManIA'nın ER ile ilişkili bozulmasını desteklemek için olgunlaşmamış NKCC2 ile etkileşime girdiğini gösterdik. Daha da önemlisi, ManIA'nın sitoplazmik kuyruğu silindiğinde, NKCC2'nin olgun formu üzerindeki ManIA etkisi önlendi. Daha da etkileyici olanı, NKCC2'nin hem olgunlaşmamış hem de olgun formları üzerindeki ManIA etkisi, enzim katalitik alanından mahrum bırakıldığında tamamen ortadan kalktı. Ayrıca, ManIA tarafından NKCC2 düzenlemesi, proteazom inhibitörü MG132'nin varlığında da önlendi, ancak bir lizozomal fonksiyon inhibitörü olan klorokin ile önlenmedi; ManIA'nın NKCC2'nin ERAD'sindeki rolünü daha fazla desteklemek için mannoz kesme inhibitörü kifunensinin etkisini de test ettik. İlginç bir şekilde, kifunesin tedavisi, NKCC2 üzerindeki ManIA etkisini inhibe etti; bu, mannoz düzeltmenin, NKCC2'nin ManIA aracılı ER ile ilişkili bozunmasında önemli bir süreç olduğunu gösterir. Bununla birlikte, ManIA etkisi, kifunesin tarafından tam olarak engellenemedi; bu, en azından kısmen, yardımcı taşıyıcı üzerindeki ManIA etkisinin tamamen N-glikan bağımlı olmadığı anlamına gelir. Bu düşünceyi desteklemek için, NKCC2 glikosilasyon bölgelerinin mutasyonları, yardımcı taşıyıcı üzerindeki ManIA etkisini tam olarak engellemedi ve bu nedenle, en azından bizim deneysel koşullarımız altında, ManIA etkisinin bir kısmının N-Glikandan bağımsız olabileceğini doğruladı. Bu düşünceyi desteklemek için Ron ve ark. ER stres koşulları altında, başka bir alfa-mannosidaz proteini olan EDEM1'in gelişmiş ifadesinin mannoz kırpma olayını atladığına ve glikoproteini doğrudan geç ERAD aşamalarına [86] ilettiğine dair kanıt sağladı. Gerçekten de, EDEM1'in aşırı ekspresyonu üzerine glikoprotein H2a'nın bozunmasının kifunesin [86] tarafından bloke edilmediğini açıkça gösterdiler. Bu özellikle ilgi çekicidir, çünkü deneysel ortamımız, yani salgı ve zar proteinlerinin (NKCC2) heterolog aşırı ekspresyonu, ER stresine [87-89] neden olur; bu, mannoz kırpılmasından bağımsız olarak ManIA'nın bir etkisinin sürekliliğini en azından kısmen açıklayabilir. , bu koşullar altında cotransporter üzerinde. Glikosile edilmemiş NKCC2 proteini üzerindeki kalan ManIA etkisinin, MG132 tarafından tamamen bloke edildiğini belirtmekte fayda var, bu nedenle ManIA'nın proteazoma bağlı bir yolda NKCC2'nin ERAD'sini desteklediği fikrini daha da destekler.

Yanlış katlanmış ve agregasyon eğilimli polipeptitlerin birikmesi, hücresel sağlığa zararlıdır [90-92]. Daha fazla sayıda (70'den fazla) insan hastalığı, salgı ve zar proteinlerinin katlanmasındaki kusurlardan kaynaklanmaktadır [91,92]. Ökaryot hücreler, proteinin yanlış katlanmasını önlemek ve salgı yolunda protein homeostazını sürdürmek için çoklu kalite kontrol (QC) mekanizmalarına sahiptir [26]. Endoplazmik retikulumla ilişkili bozunma (ERAD) yolu [36,48] yoluyla ER kalite kontrolü (ERQC) ve ER sayfası [93] Golgi kalite kontrolü (QCG) [38] ve plazma membranı (PM) kalite kontrolü [94] içerir ]. Bu nedenle, yanlış katlanmış proteinler, özellikle NKCC2 gibi karmaşık topolojilere sahip transmembran proteinler, son varış yerlerine ulaşmadan önce ardışık kalite kontrol kontrol noktalarında sıkı bir şekilde denetlenir [26,94]. Ayrıca, QC yolları, tek bir proteinin yanlış katlanmasını verimli bir şekilde önlemek için işbirliği yapabilir. Örneğin, yanlış katlanmış transmembran proteinlerinin çoğu ERAD tarafından parçalansa da, bazı anormal proteinler, özellikle ER stres koşulları altında, Golgi'ye anterograd trafik için COPII veziküllerine paketlenmek üzere ER gözetiminden kaçabilir [95-97]. Birkaç çalışmadan elde edilen kanıtlar, Golgi aparatının bir KK kontrol noktası olarak hizmet ettiği fikrini desteklemektedir [26,38]. Aslında, ERAD ve ER sayfasından kaçan, ER'den çıkan ve vakuole/ yıkım için lizozom [26,38]. Bu bağlamda, lizozom inhibitörü klorokin'in kotransporter üzerindeki ManIA etkisini engellemediği göz önüne alındığında, lizozom/vakuol hedefli GQC yolunun, NKCC2'nin ManIA kaynaklı aşağı regülasyonunun altında yatan mekanizma olması pek olası değildir. Başka bir olasılık, Golgi'ye giren bazı yanlış katlanmış proteinlerin, ER'ye geri gönderildikten sonra proteazomal bozunma için hedeflenebilmesidir. Daha kesin olarak, GQC büyük olasılıkla cis-Golgi'de kaçan substratları yakalar ve proteazom tarafından ERAD için onları ER'ye geri döndürür. Bu büyük ilgi görüyor çünkü ManIA'nın NKCC2 ile esas olarak cis-Golgi ağında aynı yerde bulunduğunu gösterdik. Ayrıca, klorokinin aksine, proteazom inhibitörü MG132, NKCC2 üzerindeki ManIA etkisini ortadan kaldırdı; bu nedenle, proteazom hedefli GQC'nin, ManIA tarafından NKCC2 düzenlemesini yöneten ana yol olma olasılığının çok yüksek olduğunu kuvvetle önerir. Unutulmamalıdır ki, mayayla ilgili çok yakın tarihli bir araştırma, Golgi'ye giren bazı yanlış katlanmış proteinlerin, EGAD [98] adı verilen bir mekanizma olan ER'ye geri döndürülmeden doğrudan proteazomal bozunma için hedeflenebileceğini öne sürmüştür. Bununla birlikte, bu ek mekanizma dışlanamasa da, ManIA ortak ifadesi üzerine NKCC2'nin büyük ölçüde ER'de tutulduğunu açıkça gösterdik. Bu nedenle, verilerimiz, ManIA'nın başlangıçta ER kalite kontrolünden kaçan yanlış katlanmış NKCC2 proteinlerinin tutulmasını, geri dönüştürülmesini ve proteazoma bağımlı ERAD'yi desteklediğini kuvvetle önerir.

Cistanche tubulosa

ERAD mekanizmasının altında yatan mekanizmaların kapsamlı bir şekilde araştırılması, ERAD'ın hem normal hem de hastalıklı durumlarda insan sağlığına nasıl katkıda bulunduğuna dair birkaç yeni görüş sağlamıştır [48,92]. Genel olarak ER kalite kontrolünün ve özel olarak ERAD fenomeninin önemi, konformasyonel hastalıklar olarak adlandırılan çok sayıda insan patolojisinde belirtilmiştir [48,92]. NKCC2 ile ilgili olarak, daha önce Bartter sendromu tip 1'in ERAD yolu ile bağlantılı hastalıklar arasında olduğunu belgeledik [61]. Gerçekten de, farklı hücresel yolaklar BS1 hastalığında NKCC2 fonksiyon kaybından sorumlu olabilse de, verilerimiz ER-ilişkili protein degradasyonunun BS1'i destekleyen en yaygın mekanizma olduğunu ortaya koydu [61]. Buna göre, spesifik olarak WT NKCC2'nin olgunlaşmamış formlarına ve bunun katlanan mutantlarına bağlanan proteinlerin tanımlanması, ERAD'lerinin düzenlenmesinin altında yatan moleküler mekanizmaların deşifre edilmesi için önemlidir. Bu çalışmada, WT NKCC2'ye ek olarak, ManIA'nın olgunlaşmamış NKCC2 mutantları A508T ve Y998X ile etkileşime girdiğine dair kanıtlar sağladık. Ayrıca, ManIA ortak ifadesinin, WT NKCC2 ile karşılaştırıldığında NKCC2 katlama mutantı A508T üzerinde daha derin bir etkiye sahip olduğunu gösterdik; bu, ManIA'nın BS1 sırasında NKCC2 mutantlarının ERAD'sinde önemli bir rolü olabileceğini kuvvetle öne sürüyor. Bu özellikle ilgi çekicidir çünkü daha önce A508T ve Y998X'in acil serviste tutulduğunu bildirmiştik [45,61]. İmmünolokalizasyon deneylerimizin, ifade sisteminden bağımsız olarak, ManIA'nın cis-Golgi ağında ifade edildiğini ortaya koyduğu göz önüne alındığında, enzimin bu iki NKCC2 mutantı ile etkileşimi, çoğu A508T ve Y998X'in büyük ölçüde ER'de hapsolmuş olmasına rağmen, kuvvetle önerir. bu iki mutantın ER'den cis-Golgi'ye önemli bir transferi vardır ve burada ManIA tarafından yakalanıp ER'ye geri gönderilebilirler. Bu bağlamda, Hosokawa ve ark. ayrıca, transfekte edilmiş NHK proteinlerinin çoğunun ER'de tutulmasına rağmen, bazılarının ER kalite kontrolünden kaçtığını ve ERAD için hedeflenmek üzere Golgi a 1,{34}}mannosidazlar tarafından kırpıldıkları cis-Golgi'ye ulaştığını gösterdi [ 57]. Ayrıca, son zamanlarda yapılan birkaç araştırma, başlangıçta ER'de işlev gördüğü tahmin edilen ERManI'nin, yakalanan ERAD substratlarının geri alınmasını kolaylaştıran Golgi tabanlı bir kalite kontrol kontrol noktasına katkıda bulunduğu memeli hücrelerinde Golgi kompleksinde de lokalize olduğunu göstermiştir. acil servise [59,60,99]. NKCC2 gibi, ManIA'nın bir transmembran protein olduğu göz önüne alındığında, aynı zamanda ER'de kotransporter ile geçici olarak etkileşime girebilir ve bu nedenle enzimin, ya ER'den geçerken ERAD için yanlış katlanmış NKCC2 proteinlerini hedefleyen sinyali üretmeye katılmasına izin verir. veya Golgi'ye giderken.

Özet olarak, Golgi ManIA'nın cis-Golgi'de NKCC2'nin olgunlaşmamış formu ile ER tutulmasını teşvik etmek ve proteazom yolu ile ERAD'sini hızlandırmak için etkileşime girdiğini bulduk. Bildiğimiz kadarıyla bu, Golgi kalite kontrol mekanizmasının NKCC2 biyogenezindeki önemli rolünü açıklayan ilk çalışmadır. Ayrıca bu, lümen proteinlerinin yanı sıra ManIA'nın transmembran proteinlerin ERAD'ına da dahil olabileceğine dair kanıt sağlayan ilk rapordur. Verilerimiz, ManIA'nın acil serviste ERAD sürveyansına yedek bir sistem olarak hizmet etmek için cis-Golgi-lokalize edilmiş bir kalite kontrol kontrol noktası içinde manevralar yaptığını ve bu nedenle istenmeyen yanlış katlanmış NKCC2 proteinlerinin yeterli şekilde çıkarılması için güçlü bir ek ağ sağladığını kuvvetle önerir. özellikle Bartter sendromu hastalığı sırasında protein agregatlarının oluşumundan kaynaklanan proteotoksisiteden hücreler. İnkar edilemez bir şekilde, ManIA, yardımcı taşıyıcının ERAD'ına aracılık etmek için tek başına çalışamaz. Uygun şekilde, ManIA'nın diğer NKCC2 bağlayıcı proteinler ve OS9 [46] ve STCH [53] gibi yardımcı taşıyıcının ER kalite kontrolüne aracılık etmek için ERAD bileşenleri ile sıralı veya eşzamanlı olarak uyum içinde çalıştığı makul bir şekilde varsayılabilir. Bu bağlamda, ER stres koşulları altında: (1) OS9'un, yanlış katlanmış NKCC2 proteinlerinin ER'de ve ERAD'sinin proteazom tarafından tutulmasına dahil olduğu bir model öneriyoruz. (2) STCH, proteazom ve lizozom yollarıyla NKCC2'nin ERAD'sinde çok önemli bir rol oynar. (3) Golgi ManIA, ER kalite kontrolünden kaçan yanlış katlanmış NKCC2 proteinlerini yakalayarak ve bunları ER'ye geri göndererek NKCC2'nin ERAD'sine katkıda bulunur. Bu modelin arkasındaki kesin mekanizmayı ortaya çıkarmak için daha fazla deney yapılması gerekiyor. NKCC2 ve hastalığa neden olan mutantların ER ve Golgi kalite kontrollerinin spesifik moleküler bileşiminin kapsamlı karakterizasyonu ve tanımlanması, ER ve Golgi ağlarından hücre yüzeyine kotransporter taşınmasını hedefleyen yeni terapötik stratejilerin tanımlanması için bir temel sunabilir.

Referanslar

1. Guyton, AC Tansiyon kontrolünde böbreklerin ve vücut sıvılarının özel rolü. Bilim 1991, 252, 1813–1816. [CrossRef] [PubMed]

2. Lifton, RP; Gharavi, AG; Geller, DS İnsan hipertansiyonunun moleküler mekanizmaları. Hücre 2001, 104, 545–556. [ÇaprazRef]

3. Castrop, H.; Schiessl, Renal Na-K-2Cl ortak taşıyıcısının (NKCC2) IM Fizyolojisi ve patofizyolojisi. Am. J. Physiol. Ren. Fizyol. 2014, 307, F991–F1002. [ÇaprazRef]

4. Greger, R.; Velazquez, H. Üriner konsantrasyon mekanizmasında kortikal kalın çıkan uzuv ve erken distal kıvrık tübül. böbrek uluslararası 1987, 31, 590–596. [CrossRef] [PubMed]

5. Gamba, G. Elektronötral katyon-klorür yardımcı taşıyıcılarının moleküler fizyolojisi ve patofizyolojisi. Fizyol. Rev. 2005, 85, 423–493. [CrossRef] [PubMed]

6. Ares, GR; Caceres, PS; Ortiz, PA Kalın çıkan kolda NKCC2'nin moleküler düzenlenmesi. Am. J. Physiol. Ren. Fizyol. 2011, 301, F1143–F1159. [CrossRef] [PubMed]

7. Komhoff, M.; Laghmani, K. Antenatal Bartter sendromunun patofizyolojisi. Curr. görüş. Nefrol. Hipertans. 2017, 26, 419–425. [CrossRef] [PubMed]

8. Laghmani, K.; Beck, BB; Yang, SS; Seaayfan, E.; Wenzel, A.; Reusch, B.; Vitzthum, H.; Prime, D.; Demaretz, S.; Bergmann, K.; et al. Polihidramnios, Geçici Antenatal Takas Sendromu ve MAGED2 Mutasyonları. İngilizce J.Med. 2016, 374, 1853–1863. [ÇaprazRef]

9. Simon, DB; Lifton, RP Kalıtsal hipokalemik alkalozun moleküler temeli: Bartter ve Gitelman sendromları. Am. J. Physiol. 1996, 271, F961–F966. [ÇaprazRef]

10. Aviv, A.; Hollenberg, Birleşik Krallık; Weder, A. Siyahlarda idrar potasyum atılımı ve sodyum duyarlılığı. Hipertansiyon 2004, 43, 707–713. [ÇaprazRef]

11. Hoorn, EJ; Walsh, SB; McCormick, JA; Fürstenberg, A.; Yang, CL; Roeschel, T.; Palige, A.; Howie, AJ; Conley, J.; Bachmann, S.; et al. Kalsinörin inhibitörü takrolimus, renal sodyum klorür kotransporterini aktive ederek hipertansiyona neden olur. Nat. Med. 2011, 17, 1304–1309. [CrossRef] [PubMed]

12. Borschewski, A.; Himmerkus, N.; Boldt, C.; Blankenstein, KI; McCormick, JA; Lazelle, R.; Willnow, TE; Jankowski, V.; Düz, A.; Bleich, M.; et al. Kalsinörin ve A-Tipi Tekrarlarla Sıralamayla İlgili Reseptör Renal Na( artı )-K( artı )-2Cl(-) Kotransporterını Düzenlemek için Etkileşir. J. Am. Sos. Nefrol. 2016, 27, 107–119. [ÇaprazRef]

13. Trudu, M.; Janas, S.; Lanzani, C.; Debaix, H.; Schaeffer, C.; İkehata, M.; Citterio, L.; Demaretz, S.; Trevisani, F.; Ristagno, G.; et al. Yaygın kodlamayan UMOD gen varyantları, üromodulin ekspresyonunu artırarak tuza duyarlı hipertansiyonu ve böbrek hasarını indükler. Nat. Med. 2013, 19, 1655–1660. [ÇaprazRef]

14. Alvarez-Guerra, M.; Garay, Dahl tuzuna duyarlı farelerde RP Renal Na-K-Cl yardımcı taşıyıcı NKCC2. J. Hipertens. 2002, 20, 721–727. [ÇaprazRef]

15. Capasso, G.; Rizzo, M.; Evangelista, C.; Ferrari, P.; Geelen, G.; Lang, F.; Bianchi, G. Genetik hipertansiyonun erken evresinde renal apikal plazma zarı Na artı taşıyıcıların değiştirilmiş ifadesi. Am. J. Physiol. Ren. Fizyol. 2005, 288, F1173–F1182. [ÇaprazRef]

16. Fenton, RA; Knepper, MA Fare modelleri ve yeni milenyumda üriner konsantrasyon mekanizması. Fizyol. Rev. 2007, 87, 1083–1112. [CrossRef] [PubMed]

17. Komhoff, M.; Laghmani, K. MAGED2: Antenatal Bartter sendromunun yeni bir formu. Curr. görüş. Nefrol. Hipertans. 2018, 27, 323–328. [ÇaprazRef]

18. Sands, JM Yaşlanan böbrekte üriner konsantrasyon ve dilüsyon. Semin. Nefrol. 2009, 29, 579–586. [ÇaprazRef]

19. Tian, ​​Y.; Riazi, S.; Han, Ö.; Klein, JD; Sugimura, Y.; Verbalis, JG; Ecelbarger, CA Renal ENaC alt birimi, Na-K-2Cl ve yaşlı, suyla kısıtlı F344 x Kahverengi Norveç farelerinde Na-Cl yardımcı taşıyıcı bollukları. böbrek uluslararası 2006, 69, 304–312. [CrossRef] [PubMed]

20. Schiessl, IM; Castrop, H. NKCC2 ekleme ve fosforilasyonun düzenlenmesi. Curr. görüş. Nefrol. Hipertans. 2015, 24, 457–462. [CrossRef] [PubMed]

21. Davies, M.; Fraser SA; Galiç, S.; Choy, Güneybatı; Katerelos, M.; Gleich, K.; Kemp, BE; Dağı, PF; Güç, DA Obezitede yeni Na artı tutma mekanizmaları: NKCC2'nin fosforilasyonu ve SPAK/OSR1'in AMPK tarafından düzenlenmesi. Am. J. Physiol. Ren. Fizyol. 2014, 307, F96–F106. [ÇaprazRef]

22. Gamba, G. NKCC2 aktivitesinin SPAK kesik izoformları tarafından düzenlenmesi. Am. J. Physiol. Ren. Fizyol. 2014, 306, F49–F50. [CrossRef] [PubMed]

23. Edwards, A.; Castrop, H.; Laghmani, K.; Vallon, V.; Layton, AT NKCC2 izoform düzenlemesinin kalın çıkan kol ve makula densadaki NaCl taşınması üzerindeki etkileri: Bir modelleme çalışması. Am. J. Physiol. Ren. Fizyol. 2014, 307, F137–F146. [ÇaprazRef]

24. Vitale, A.; Denecke, J. Salgı yolunun endoplazmik retikulum geçidi. Bitki. Hücre 1999, 11, 615–628. [PubMed]

25. Caplan, MJ Epitel hücrelerinde membran polaritesi: Protein sıralaması ve polarize bölgelerin kurulması. Am. J. Physiol. 1997, 272, F425–F429. [ÇaprazRef]

26. Güneş, Z.; Brodsky, JL Salgı yolunda protein kalite kontrolü. J. Cell Biol 2019, 218, 3171–3187. [CrossRef] [PubMed]

27. Ruggiano, A.; Foresti, O.; Carvalho, P. Kalite kontrol: ER ile ilişkili bozulma: Protein kalite kontrolü ve ötesi. J. Hücre Biol. 2014, 204, 869–879. [CrossRef] [PubMed]

28. Ruddock, LW; Molinari, ER kalite kontrolünde M. N-glikan işleme. J. Hücre Bilimi 2006, 119, 4373–4380. [ÇaprazRef]

29. Molinari, M. N-glikan yapısı, protein katlanmasının uzamasını veya atılma başlangıcını belirler. Nat. kimya Biol. 2007, 3, 313–320. [ÇaprazRef]

30. Hebert, DN; Garman, SC; Molinari, M. Endoplazmik retikulumun glikan kodu: Protein olgunlaşması ve kalite kontrol etiketleri olarak asparagine bağlı karbonhidratlar. Trendler Hücre Biol. 2005, 15, 364–370. [ÇaprazRef]

31. Igdoura, SA; Herscovics, A.; Lal, A.; Moremen, KW; Morales, CR; Hermo, L. N-glikan işlemede yer alan alfa-mannosidazlar, testis ve epididimdeki hücrelerin Golgi aparatı içinde hücre özgüllüğü ve belirgin alt bölümlendirme gösterir. Avro. J. Hücre Biol. 1999, 78, 441–452. [ÇaprazRef]

32. Lederkremer, GZ; Glickman, MH Bir fırsat penceresi: Şekerlerin ve ubikuitinlerin kırpılmasıyla protein yıkımının zamanlaması. Trendler Biyokimya. bilim 2005, 30, 297–303. [CrossRef] [PubMed]

33. Stanley, P.; Taniguchi, N.; Aebi, M. N-Glikanlar. Essentials of Glycobiology'de, 3.; Varki, A., Cummings, RD, Esko, JD, Stanley, P., Hart, GW, Aebi, M., Darvill, AG, ve diğ., Eds.; Cold Spring Harbor: New York, NY, ABD, 2015; s. 99–111.

34. Barlowe, CK; Miller, EA Salgı proteini biyogenezisi ve erken salgı yolundaki trafik. Genetik 2013, 193, 383–410. [ÇaprazRef]

35. Wu, X.; Rapoport, TA ER ile ilişkili protein bozulmasına ilişkin mekanistik görüşler. Curr. görüş. Hücre Biol. 2018, 53, 22–28. [ÇaprazRef]

36. Güneş, Z.; Brodsky, JL Yanlış katlanmış bir protein modelinin bozunma yolu, toplanma eğilimi ile belirlenir. Mol. Biyo Hücre. 2018, 29, 1422–1434. [ÇaprazRef]

37. Fresno, I.; Molinari, M. Arızalı salgı proteinlerinin proteasomal ve lizozomal klirensi: ER ile ilişkili bozunma (ERAD) ve ER ile lizozomla ilişkili bozunma (ERLAD) yolları. kritik Rev. Biochem. Mol. Biol. 2019, 54, 153–163. [CrossRef] [PubMed]

38. Briant, K.; Johnson, N.; Swanton, E. Transmembran alan kalite kontrol sistemleri, endoplazmik retikulum ve Golgi aparatında çalışır. PLoS BİR 2017, 12, e0173924. [CrossRef] [PubMed]

39. Jensen, TJ; Loo, MA; Pind, S.; Williams, DB; Goldberg, AL; Riordan, JR Proteazom dahil çoklu proteolitik sistemler CFTR işlemeye katkıda bulunur. Hücre 1995, 83, 129–135. [ÇaprazRef]

40. Ward, CL; Ömür, S.; Kopito, RR Ubikuitin-proteazom yoluyla CFTR'nin bozulması. Hücre 1995, 83, 121–127. [ÇaprazRef]

41. Gong, Q.; Keeney, Doktor; Molinari, M.; Zhou, Z. Ubikuitin-proteazom yolu ile kaçakçılığı kusurlu uzun QT sendromu tip II mutant kanallarının bozulması. J. Biol. kimya 2005, 280, 19419–19425. [ÇaprazRef]

42. O'Donnell, BM; Mackie, TD; Sübramanya, AR; Brodsky, JL Renal potasyum kanalının endoplazmik retikulumla ilişkili bozulması, ROMK, tip II Bartter sendromuna yol açar. J. Biol. kimya 2017, 292, 12813–12827. [CrossRef] [PubMed]

43. Needham, PG; Mikoluk, K.; Dhakarwal, P.; Khadem, S.; Snyder, AC; Sübramanya, AR; Brodsky, JL Tiazide duyarlı NaCl yardımcı taşıyıcı, şaperon bağımlı endoplazmik retikulumla ilişkili bozunma için hedeflenir. J. Biol. kimya 2011, 286, 43611–43621. [CrossRef] [PubMed]

44. Zaarour, N.; Demaretz, S.; Defontaine, N.; Zhu, Y.; Laghmani, K. Karboksil terminalindeki çoklu evrimsel olarak korunmuş Di-lösin benzeri motifler, NKCC2'nin anterograd kaçakçılığını kontrol eder. J. Biol. kimya 2012, 287, 42642–42653. [ÇaprazRef]

45. Zaarour, N.; Demaretz, S.; Defontaine, N.; Mordasini, D.; Laghmani, K. COOH terminalinde oldukça korunmuş bir motif, endoplazmik retikulum çıkışını ve NKCC2'nin hücre yüzeyi ifadesini belirler. J. Biol. kimya 2009, 284, 21752–21764. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Seaayfan, E.; Defontaine, N.; Demaretz, S.; Zaarour, N.; Laghmani, K. OS9 Proteini, Na-K-2Cl Yardımcı Taşıyıcısı (NKCC2) ile Etkileşir ve Endoplazmik Retikulumla İlişkili Bozunma Yolu için Olgunlaşmamış Formunu Hedefler. J. Biol. kimya 2016, 291, 4487–4502. [ÇaprazRef]

47. Brodsky, JL ERAD (endoplazmik retikulumla ilişkili degradasyon) sırasında moleküler şaperonların oynadığı koruyucu ve yıkıcı roller. biyokimya J.2007, 404, 353–363. [ÇaprazRef]

48. Guerriero, CJ; Brodsky, JL İnsan fizyolojisinde salgılanan protein katlanması ile endoplazmik retikulumla ilişkili bozunma arasındaki hassas denge. Fizyol. Rev. 2012, 92, 537–576. [ÇaprazRef]

49. Ahner, A.; Gong, X.; Frizzell, RA Kistik fibroz transmembran iletkenlik düzenleyici bozulması: Ubiquitylation ve SUMOylation yolları arasındaki karşılıklı konuşma. FEBS J. 2013, 280, 4430–4438. [ÇaprazRef]

50. Donnelly, BF; Needham, PG; Snyder, AC; Roy, A.; Khadem, S.; Brodsky, JL; Subramanya, AR Hsp70 ve Hsp90 multichaperone kompleksleri, tiazide duyarlı yardımcı taşıyıcı endoplazmik retikulum ile ilişkili bozulmayı ve biyogenezi sırayla düzenler. J. Biol. kimya 2013, 288, 13124–13135. [ÇaprazRef]

51. Benziane, B.; Demaretz, S.; Defontaine, N.; Zaarour, N.; Cheval, L.; Burjuva, S.; Klein, C.; Froissart, M.; Blanchard, A.; Paillard, M.; et al. Memeli hücrelerinde NKCC2 yüzey ifadesi: Aldolaz BJ Biol ile yeni etkileşim yoluyla aşağı regülasyon. kimya 2007, 282, 33817–33830. [ÇaprazRef]

52. Zaarour, N.; Defontaine, N.; Demaretz, S.; Azroyan, A.; Cheval, L.; Laghmani, K. Salgı taşıyıcı zar proteini 2, NKCC2'nin hücre zarına ekzositik sokulmasını düzenler. J. Biol. kimya 2011, 286, 9489–9502. [ÇaprazRef]

53. Bakhos-Douaihy, D.; Seaayfan, E.; Demaretz, S.; Komhoff, M.; Laghmani, K. STCH ve Stresle Uyarılabilen Hsp70'in NKCC2'nin Kararlılığı ve Olgunlaşması Üzerindeki Farklı Etkileri. Int. J. Mol. bilim 2021, 22, 2207. [CrossRef]

54. Herscovics, A.; Schneikert, J.; Athanassiadis, A.; Moremen, KW Mayadan memelilere korunan bir gen ailesinin bir üyesi olan bir fare Golgi mannosidaz cDNA'sının İzolasyonu. J. Biol. kimya 1994, 269, 9864–9871. [ÇaprazRef]

55. Tempel, W.; Karaveg, K.; Liu, ZJ; Rose, J.; Wang, M.Ö. Moremen, KW Fare Golgi alfa-mannosidaz IA'nın yapısı, sınıf 1 (47 glikosilhidrolaz ailesi) alfa1,2-mannosidazlar arasındaki substrat özgüllüğü için moleküler temeli ortaya koyuyor. J. Biol. kimya 2004, 279, 29774–29786. [ÇaprazRef]

56. Tulsiani, DR; Touster, O. Sıçan karaciğeri Golgi zarlarından mannosidaz IA'nın saflaştırılması ve karakterizasyonu. J. Biol. kimya 1988, 263, 5408–5417. [ÇaprazRef]

57. Hosokawa, N.; Sen, Z.; Tremblay, LO; Nagata, K.; Herscovics, A. Golgi alfa1,2-mannosidazlar tarafından yanlış katlanmış boş Hong Kong alfa1- antitripsin ERAD'sinin uyarılması. biyokimya biyografiler. Res. komün. 2007, 362, 626–632. [CrossRef] [PubMed]

58. Ogen-Stern, N.; Avezov, E.; Shenkman, M.; Benyair, R.; Lederkremer, GZ Mannosidase IA, Kalite Kontrol Veziküllerinde Bulunmakta ve ERAD'a Yönelik Glikoprotein Hedeflemesine Katılmaktadır. J. Mol. Biol. 2016, 428, 3194–3205. [ÇaprazRef]

59. Iannotti, MJ; Figard, L.; Sokaç, AM; Sifers, RN A Golgi-lokalize mannosidaz (MAN1B1), protein biyosentetik kalite kontrolünde enzimatik olmayan bir bekçi rolü oynar. J. Biol. kimya 2014, 289, 11844–11858. [CrossRef] [PubMed]

60. Pan, S.; Cheng, X.; Sifers, RN Golgi konumlu endoplazmik retikulum alfa-1, 2-mannosidaz, gamma-COP ile doğrudan etkileşim yoluyla ERAD substratlarının alınmasına katkıda bulunur. Mol. Biol. Hücre 2013, 24, 1111–1121. [CrossRef] [PubMed]

61. Şevket, İ.; Bakhos-Douaihy, D.; Zhu, Y.; Seaayfan, E.; Demaretz, S.; Frachon, N.; Weber, S.; Komhoff, M.; Vargas-Poussou, R.; Laghmani, K. Bartter Sendromu Tip 1'de endoplazmik retikulumla ilişkili bozulmanın rolüne dair yeni görüşler. Hum. Mutat. 2021, 42, 947–968. [ÇaprazRef]

62. Fujita, E.; Kuroku, Y.; İzoay, A.; Kumagai, H.; Misutani, A.; Matsuda, C.; Hayashi, YK; Momoi, T. Mutant disferlinin yeni varyantı için iki endoplazmik retikulumla ilişkili bozunma (ERAD) sistemi: Ubiquitin/proteasome ERAD(I) ve otofaji/lizozom ERAD(II). Hımm. Mol. Genet. 2007, 16, 618–629. [ÇaprazRef]

63. Bernasconi, R.; Molinari, M. ERAD ve ERAD ayarı: Memeli ER'den yükün ve ERAD düzenleyicilerinin atılması. Curr. görüş. Hücre. Biol. 2011, 23, 176–183. [ÇaprazRef]

64. Arvan, P.; Zhao, X.; Ramos-Castaneda, J.; Chang, A. Golgi, plazmalemma ve endozomal sistemlerde faaliyet gösteren salgı yolu kalite kontrolü. Trafik 2002, 3, 771–780. [ÇaprazRef]

65. Stolz, A.; Wolf, DH Endoplazmik retikulumla ilişkili protein bozulması: Cehenneme refakatçi destekli bir yolculuk. Biyokimya. biyografiler. Açta 2010, 1803, 694–705. [CrossRef] [PubMed]

66. Wang, F.; Şarkı, W.; Brancati, G.; Segatori, L. Endoplazmik retikulumla ilişkili bozunmanın inhibisyonu, fonksiyon proteini yanlış katlanma hastalıklarında doğal katlanmayı kurtarır. J. Biol. kimya 2011, 286, 43454–43464. [CrossRef] [PubMed]

67. Tokunağa, F.; Brostrom, C.; Köide, T.; Arvan, P. Yanlış katlanmış N-bağlı glikoproteinlerin endoplazmik retikulum (ER) ile ilişkili bozunması, ER mannosidaz IJ Biol'ün inhibisyonu üzerine baskılanır. kimya 2000, 275, 40757–40764. [CrossRef] [PubMed]

68. Groisman, B.; Shenkman, M.; Ron, E.; Lederkremer, GZ Mannose düzeltmesi, bir glikoproteinin EDEM1'den XTP3-B'ye iletilmesi ve geç endoplazmik retikulumla ilişkili bozunma adımları için gereklidir. J. Biol. kimya 2011, 286, 1292–1300. [CrossRef] [PubMed]

69. Vargas-Poussou, R.; Feldmann, D.; Vollmer, M.; Konrad, M.; Kelly, L.; van den Heuvel, LP; Teburbi, L.; Brandis, M.; Karolyi, L.; Hebert, SC; et al. Na-K-2Cl kotransporter geninin yeni moleküler varyantları, antenatal Bartter sendromundan sorumludur. Am. J. Hum. Genet. 1998, 62, 1332–1340. [CrossRef] [PubMed]

70. Helenius, A.; Aebi, M. Endoplazmik retikulumdaki N-bağlı glikanların rolleri. Annu. Rev. Biochem. 2004, 73, 1019–1049. [ÇaprazRef]

71. Spiro, RG Endoplazmik retikulumla ilişkili bozunma için glikoproteinleri hedeflemede N-bağlı polimannoz oligosakaritlerin rolü. Hücre Mol. Hayat Bilimi 2004, 61, 1025–1041. [ÇaprazRef]

72. Marcus, NY; Perlmutter, DH Glukosidaz ve mannosidaz inhibitörleri, mutant alfa1 antitripsin ZJ Biol'ün artan salgılanmasına aracılık eder. kimya 2000, 275, 1987–1992. [ÇaprazRef]

73. Liu, Y.; Choudhury, P.; Cabral, CM; Sifers, RN Eksik katlanmış insan alfa1-antitripsin'in hücre içi imhası, calnexin'den salınmayı ve asparagin bağlantılı oligosakaritlerin translasyon sonrası kırpılmasını içerir. J. Biol. kimya 1997, 272, 7946–7951. [CrossRef] [PubMed]

74. Cabral, CM; Liu, Y.; Sifers, RN Salgı yolunda diseksiyon glikoprotein kalite kontrolü. Trendler Biyokimya. bilim 2001, 26, 619–624. [ÇaprazRef]

75. Ermonval, M.; Kitzmüller, C.; Mir, AM; Çacan, R.; Ivessa, NE MadIA214 glikosilasyon kusurlu hücre hattında eksprese edilen riboforin I'in kısa ömürlü bir varyantının N-glikan yapısı, glikoprotein degradasyonu sürecinde ER mannosidaz I olmayan bir mannosidazın rolünü ortaya koymaktadır. Glikobiyoloji 2001, 11, 565–576. [CrossRef] [PubMed]

76. Foulquier, F.; Yorgan, S.; Klein, A.; Mir, AM; Çırat, F.; Cacan, R. MI8-5 CHO hücre hattında Man5GlcNAc2 ve Man9GlcNAc2 türlerini taşıyan glikoproteinlerin endoplazmik retikulumla ilişkili bozunması. Avro. J. Biochem. 2004, 271, 398–404. [ÇaprazRef]

77. Avezov, E.; Frenkel, Z.; Ehrlich, M.; Herscovics, A.; Lederkremer, GZ Endoplazmik retikulum (ER) mannosidaz I bölümlere ayrılmıştır ve glikoprotein ER ile ilişkili bozunmada Man5-6GlcNAc2'ye N-glikan düzeltmesi için gereklidir. Mol. Biol. Hücre 2008, 19, 216–225. [ÇaprazRef]

78. Hosokawa, N.; Tremblay, LO; Sen, Z.; Herscovics, A.; Vada, I.; Nagata, K. İnsan ER mannosidaz IJ Biol tarafından yanlış katlanmış Null Hong Kong alfa1-antitripsin endoplazmik retikulum (ER) bozulmasının iyileştirilmesi. kimya 2003, 278, 26287–26294. [ÇaprazRef]

79. Sifers, RN Hücre biyolojisi. Protein bozulmasının kilidi açıldı. Bilim 2003, 299, 1330–1331. [ÇaprazRef]

80. Wu, Y.; Swulius, MT; Moremen, KW; Sifers, RN Yanlış katlanmış alfa 1-antitripsin'in bozunma için tercihen seçildiği moleküler mantığın açıklanması. Proc. Natl. Acad. bilim ABD 2003, 100, 8229–8234. [CrossRef] [PubMed]

81. Hirao, K.; Natsuka, Y.; Tamura, T.; Vada, I.; Morito, D.; Natsuka, S.; Romero, P.; Sleno, B.; Tremblay, LO; Herscovics, A.; et al. Çözünür bir EDEM homologu olan EDEM3, glikoprotein endoplazmik retikulumla ilişkili bozulmayı ve mannoz kırpılmasını geliştirir. J. Biol. kimya 2006, 281, 9650–9658. [ÇaprazRef]

82. Olivari, S.; Çalı, T.; Salo, KE; Paganetti, P.; Ruddock, LW; Molinari, M. EDEM1, katlanma kusurlu polipeptitlerin demannosilasyonunu hızlandırarak ve bunların kovalent agregasyonunu inhibe ederek ER ile ilişkili bozulmayı düzenler. biyokimya biyografiler. Res. komün. 2006, 349, 1278–1284. [CrossRef] [PubMed]

83. Bieberich, E.; Bause, E. Man9-insan böbreğinden mannosidaz, COS hücrelerinde Golgi'de yerleşik bir tip II transmembran N-glikoprotein olarak ifade edilir. Avro. J. Biochem. 1995, 233, 644–649. [CrossRef] [PubMed]

84. Velasco, A.; Hendricks, L.; Moremen, KW; Tulsiani, DR; Touster, O.; Farquhar, MG Alfa-mannosidaz I ve II'nin hücre altı dağılımındaki hücre tipine bağlı varyasyonlar. J. Hücre Biol. 1993, 122, 39–51. [CrossRef] [PubMed]

85. Bieberich, E.; Treml, K.; Volker, C.; Rolfs, A.; Kalz-Fuller, B.; Bause, E. Man9-domuz karaciğerinden elde edilen mannosidaz, endoplazmik retikulumda bulunan bir tip II zar proteinidir. COS 1 hücrelerinde cDNA klonlaması ve enzimin ifadesi. Avro. J. Biochem. 1997, 246, 681–689. [ÇaprazRef]

86. Ron, E.; Shenkman, M.; Groisman, B.; İzzenştayn, Y.; Leitman, J.; Lederkremer, GZ Yukarı regüle edilmiş EDEM1 ile ERAD'ye glikan bağımlı glikoprotein iletiminin atlanması. Mol. Biol. Hücre 2011, 22, 3945–3954. [ÇaprazRef]

87. Casagrande, R.; Stern, P.; Diehn, M.; Shamu, C.; Osario, M.; Zuniga, M.; Kahverengi, PO; Ploegh, H. S. cerevisiae'nin ER'sinden proteinlerin bozulması, sağlam bir katlanmamış protein tepki yolu gerektirir. Mol. Hücre 2000, 5, 729–735. [ÇaprazRef]

88. Schröder, M.; Kaufman, RJ ER stresi ve katlanmamış protein tepkisi. Mutat. Res. 2005, 569, 29–63. [ÇaprazRef]

89. Liang, CJ; Chang, YC; Chang, HC; Wang, CK; Asılı, YÇ; Lin, Y; Chan, CC; Chen, CH; Chang, HY; Sang, TK Derlin-1, mutant VCP'ye bağlı patogenezi ve endoplazmik retikulum stres kaynaklı apoptozu düzenler. PLoS Genet. 2014, 10, e1004675. [CrossRef] [PubMed]

90. Houck, SA; Singh, S.; Cyr, DM Yanlış katlanmış proteinlere ve protein kümelerine hücresel tepkiler. Yöntemler Mol. Biol. 2012, 832, 455–461. [CrossRef] [PubMed]

91. Chaudhuri, TK; Paul, S. Protein yanlış katlanan hastalıklar ve refakatçi temelli terapötik yaklaşımlar. FEBS J. 2006, 273, 1331–1349. [ÇaprazRef]

92. Yadav, K.; Yadav, A.; Vashistha, P.; Pandey, Başkan Yardımcısı; Dwivedi, UN Protein Yanlış Katlanan Hastalıklar ve Terapötik Yaklaşımlar. Curr. Protein. pept. bilim 2019, 20, 1226–1245. [ÇaprazRef]

93. Fresno, I.; Molinari, M. Endoplazmik retikulum devri: ER sayfası ve seçici ve seçici olmayan ER temizliğinde diğer tatlar. F1000Res 2018, 7, 454. [CrossRef]

94. Okiyoneda, T.; Apaj, PM; Lukacs, GL Plazma zarında protein kalite kontrolü. Curr. görüş. Hücre Biol. 2011, 23, 483–491. [ÇaprazRef]

95. Caldwell, SR; Tepe, KJ; Cooper, AA Endoplazmik retikulum (ER) kalite kontrol substratlarının bozulması, ER ve Golgi arasında taşıma gerektirir. J. Biol. kimya 2001, 276, 23296–23303. [CrossRef] [PubMed]

96. Taksiler, C.; Vogel, F.; Wolf, DH ER-Golgi trafiği, verimli ER bozulması için bir ön koşuldur. Mol. Biol. Hücre 2002, 13, 1806–1818. [CrossRef] [PubMed]

97. Vaşist, S.; Ng, DT Yanlış katlanmış proteinler, ER kalite kontrolünün sıralı bir kontrol noktası mekanizmasına göre sıralanır. J. Hücre Biol. 2004, 165, 41–52. [CrossRef] [PubMed]

98. Schmidt, O.; Weyer, Y.; Baumann, V.; Wider, MA; Eising, S.; Angelova, M.; Schleiffer, A.; Kremser, L.; Lindner, H.; Peter, M.; et al. Membran proteinlerinin endozom ve Golgi ile ilişkili bozulması (EGAD), sfingolipid metabolizmasını düzenler. EMBO J.2019, 38, e101433. [ÇaprazRef]

99. Pan, S.; Wang, S.; Utama, B.; Huang, L.; Blok, N.; Estes, MK; Moremen, KW; Sifers, ERManI'nin RN Golgi lokalizasyonu, memeli glikoprotein kalite kontrol sisteminin uzamsal ayrımını tanımlar. Mol. Biol. Hücre 2011, 22, 2810–2822. [ÇaprazRef]

Sylvie Demaretz 1,2, Elie Seaayfan 1,2,† , Dalal Bakhos-Douaihy 1,2, Nadia Frachon 1,2, Martin Kömhoff 3 ve Kamel Laghmani 1,2,

1 Centre de Recherche des Cordeliers, Sorbonne Université, Inserm, Université de Paris, F-75006 Paris, Fransa; sylvie.demaretz@sorbonne-universite.fr (SD); elie.seaayfan@uni-marburg.de (ES); dalal.bakhos_aldouaihy@sorbonne-universite.fr (DB-D.); nadia.frachon@sorbonne-universite.fr (NF)

2 CNRS, ERL8228, F-75006 Paris, Fransa

3 Pediatrik Nefroloji ve Transplantasyon Bölümü, Üniversite Çocuk Hastanesi, Philipps-Üniversitesi, 35043 Marburg, Almanya; Martin.Koemhoff@uk-gm.de