Doğum Sonrası Alanin Transaminaz Ücretli Kronik Hepatit B Virüsü ile enfekte Annelerde T Hücre Bağışıklığının Karakterizasyonu

Soyut

Arka plan:

Doğum sonrası alanin transaminaz (ALT) ücretleri, antepartum antiviral tedavi (AVT) alan kronik hepatit B virüsü (HBV) ile enfekte annelerde sıklıkla görülür. Doğum sonrası ALT ücretleri yaşayan HBV ile enfekte annelerde T hücre bağışıklığını karakterize etmeyi amaçladık.

Yöntemler:

Gebeliğin 26-28. haftalarında AVT alan 20 HBV ile enfekte gebe kadın alındı ​​ve doğum sonrası 15-18. haftalara kadar takip edildi. HBV ile enfekte 20 hamile kadından 6'sı doğum sonrası ALT tedavisi görmüş (AF anneler), 14'ü yaşamamış (NAF anneler). T lenfosit fenotipleri ve fonksiyonları, akış sitometrisi kullanılarak analiz edildi.

Doğum sonrası alanin aminotransferaz (ALT) ile bağışıklık arasında kesin bir ilişki vardır. Alanin aminotransferaz, karaciğer hücrelerinin iç zarında bulunan, amino asit metabolizmasında yer alan ve karaciğer hücresi hasarına karşı yüksek duyarlılığa sahip bir enzimdir. Doğum sonrası dönemde, hamilelik ve doğum sırasında vücut ayarlamaları nedeniyle alanin aminotransferaz yükselebilir. Yüksek ALT, bağışıklığın azalmasına yol açabilen bozulmuş karaciğer fonksiyonunu yansıtabilir. Karaciğer insan vücudunda önemli bir bağışıklık organıdır. Bozulmuş karaciğer fonksiyonu vücudun bağışıklığını etkileyebilir, vücudun patojenlere direnme yeteneğini etkileyebilir ve çeşitli hastalıklara neden olabilir.

Bu nedenle, doğum sonrası yüksek ALT, vücudun bağışıklığının zayıfladığını gösterebilir ve bağışıklığı iyileştirmek ve karaciğer sağlığını korumak için yaşam alışkanlıklarının ve besin alımının düzenlenmesini güçlendirmek gerekir. Aynı zamanda, bir anne yüksek ALT'ye sahip olduğunda, nedeni bulmak ve uygun tedaviyi uygulamak için zamanında tıbbi yardım almalıdır. Bu açıdan bağışıklığın önemi önemlidir. Hamilelerin yanı sıra bağışıklığa özellikle bağışıklığın geliştirilmesine de dikkat etmeliyiz. Cistanche, bağışıklığı önemli ölçüde artırabilir. Cistanche, C vitamini, karotenoidler vb. gibi çeşitli antioksidan maddeler açısından zengindir. Bu bileşenler serbest radikalleri temizleyebilir, oksidatif stresi azaltabilir ve bağışıklık sisteminin direncini artırabilir.

Tıklayın cistanche tubulosa faydaları

Sonuçlar:

NAF anneleriyle karşılaştırıldığında, AF annelerinde kantitatif HBsAg seviyeleri doğum sonrası 6-8 veya 15-18. haftalarda önemli ölçüde azaldı. Bu gruplar arasında HBeAg düzeylerinde önemli farklılıklar sadece doğumda bulundu. AF annelerinde düzenleyici T hücresi (Treg) sayıları, AVT öncesi NAF annelerininkinden daha düşüktü; ancak diğer takip noktalarında Treg sayılarında anlamlı bir fark yoktu. Diğer T hücresi fenotiplerinin ifadesi iki grup arasında benzerdi. AF annelerindeki T hücreleri, NAF'dekilere göre daha fazla proinflamatuar sitokin (IFN- , IL-21, TNF- , IL-2) veya daha az antiinflamatuar sitokin (IL-10) üretti. anneler antiviral tedavi öncesinde, sırasında veya sonrasında. CD4 artı T hücreleri veya CD8 artı T hücreleri tarafından üretilen IFN-'nin IL-10'e oranı, AF annelerinde gebelik sırasında veya doğumdan sonra NAF annelerdekinden daha yüksekti.

Sonuçlar:

T hücresi bağışıklığının özellikleri, doğum sonrası ALT ücreti olan anneler ile hamilelikten doğum sonrasına kadar ALT ücreti olmayan anneler arasında belirgindi; bu, T hücresi bağışıklığının doğum sonrası ALT ücretine dahil olabileceğini gösterdi.

anahtar kelimeler:

Hepatit B virüsü, Doğum sonrası, Alanin transaminaz ücreti, T hücre bağışıklığı.

Arka plan

Küresel olarak, hepatit B virüsü (HBV) enfeksiyonu önemli bir halk sağlığı sorunu olmaya devam etmektedir. Dünya Sağlık Örgütü (WHO), 2015 yılında 257 milyon kişinin kronik HBV enfeksiyonu ile yaşadığını ve HBV ile ilişkili hastalıkların dünya çapında yılda 887 000 ölümle sonuçlandığını tahmin etmektedir [1]. Yüksek oranda endemik ülkelerde, anneden çocuğa bulaşma (MTCT), HBV bulaşmasının ana yoludur; HBsAg artı hastaların yaklaşık yüzde 40-50'si MTCT yoluyla enfeksiyon kapar [2]. En son DSÖ tahminlerine göre, kronik olarak hepatit B virüsü ile enfekte olan 5 yaşın altındaki çocukların oranı, 1980'lerden 2000'lerin başlarına kadar aşılama öncesi dönemde yüzde 5'ten 2019'da yüzde 1'in altına düştü [1] .

MTCT insidansını azaltmak hala büyük bir zorluktur. Çalışmalar, HBV ile enfekte annelerdeki HBV DNA düzeylerinin MTCT için bağımsız bir risk faktörü olduğunu göstermiştir [3-5]. Viral yükü <6 log10 kopya/mL olan annelerde MTCT'nin görülmediği bildirilmiştir [6]. Çalışmalar, HBV aşısı ve immünoglobulin uygulamasıyla birlikte antepartum antiviral tedavinin (AVT), yüksek viral yükü olan gebelerde MTCT insidansını daha da azaltabileceğini göstermiştir [7-9]. Önceki çalışmalar temel olarak AVT'nin etkinliği ve güvenliğinin yanı sıra doğumdan sonra maternal alanin transaminaz (ALT) alevlenmesinin olasılığı ve ciddiyetine odaklanmıştır [10]. Doğum sonrası ALT alevlenmesinin özellikleri, annelerin çoğunda kendiliğinden düzelebilen hafif ila orta dereceli anormalliklerdir [11]. Şu anda gebelik sırasında antiviral müdahalenin doğum sonrası ALT parlaması insidansını artırıp artırmadığı tartışmalıdır [7, 12, 13].

Başarılı gebelik, hamile bir kadının sadece baba antijenlerini tolere etmesi değil, aynı zamanda kadını ve büyüyen fetüsü istilacı patojenlere karşı koruması gereken bağışıklık sistemine bağlıdır [14]. Hamileliğin çeşitli aşamalarında, hamile kadınların bağışıklık sistemi dinamik olarak değişir. Gebeliğin ilk üç ayında proinflamatuar bağışıklık baskınken, gebeliğin ikinci fazı ağırlıklı olarak antiinflamatuardır. Proinflamatuar bağışıklık, gebeliğin son evresinde yeniden baskın hale gelir [15]. Çalışmalar, gebe kadınların periferik kanındaki düzenleyici T hücre (Treg) sıklığının gebelik sırasında azaldığını göstermiştir, bunun nedeni östrojen ve progesteron seviyelerindeki değişiklikler olabilir [16]. Bu azalma, maternal-fetal reddi önlemek için maternal-fetal yüzeye göç eden maternal Treg'ler nedeniyle de meydana gelebilir ve periferik kan Treg frekansında azalmaya neden olur [17].

Bu nedenle, kronik HBV ile enfekte hamile kadınların bağışıklık durumu, hamile olmayan kronik HBV ile enfekte kadınlarınkinden farklıdır. Bu değişiklikler doğumdan sonra hızla geri döner. Mevcut hipotezler, hamilelik sırasında bağışıklık sistemindeki değişikliklerin, HBV ile enfekte kadınlarda yüksek doğum sonrası ALT oranlarından sorumlu olabileceği sonucuna varmaktadır [18]. Bununla birlikte, doğum sonrası ALT ücreti yaşayan HBV ile enfekte annelerin immünolojik özellikleri araştırılmamıştır.

Bu çalışma, HBV ile enfekte annelerin T hücre bağışıklığını karakterize etmeyi ve doğum sonrası ALT ücreti alan HBV ile enfekte annelerin T hücre bağışıklığını ALT ücreti olmayan HBV ile enfekte annelerle karşılaştırarak doğum sonrası ALT ücretinin immünolojik mekanizmalarını araştırmayı amaçladı.

Hastalar ve Yöntemler

Hastalar

Eylül 2017'den Nisan 2020'ye kadar, MTCT'nin önlenmesi için profilaktik antiviral müdahale (telbivudin veya tenofovir) alan kronik HBV enfeksiyonu olan 20 hamile kadın kaydedildi ve Çin'in Guangzhou kentindeki Nanfang Hastanesinde izlendi. Bu hamile kadınlar, kayıt sırasında kronik HBV enfeksiyonuna karşı immün tolerans aşamasındaydı, antiviral müdahaleden önce HBeAg pozitifliği, normal ALT seviyesi ve yüksek HBV DNA seviyesi (6 log10 IU/mL'ye eşit veya daha büyük) gösteriyordu. Bu çalışma için alınan tüm denekler, hepatit C virüsü ve insan immün yetmezlik virüsü için negatifti. Ek olarak, sitotoksik ilaçları, immün modülatörleri ve glukokortikoidleri içeren eşzamanlı tedavi görenlerin yanı sıra majör sistemik hastalık maligniteleri, karaciğer sirozu, kalp hastalıkları veya böbrek fonksiyon bozukluğu olanlar hariç tutuldu.

Deneklere gebeliğin 26-28. haftalarından doğuma kadar kısa süreli AVT uygulandı. Gebeliğin 26-28. haftalarında (antiviral müdahaleden önce), antiviral müdahaleden 1 ay sonra, doğumda, doğumdan 6-8 hafta sonra ve doğumdan 15-18 hafta sonra ziyaret edildiler. ALT ücreti, 2×normalin üst sınırına (ULN) eşit veya bundan büyük olarak tanımlandı. ALT ücreti olan anneler (AF anneler), doğum sonrası ALT ücreti (n=6) alan HBV ile enfekte annelerken, ALT ücreti olmayan anneler (NAF anneleri) doğum sonrası ALT'si olan HBV ile enfekte annelerdi.<2×ULN (n=14).

Virolojik ve serolojik değerlendirmeler

Serum HBsAg ve HBeAg seviyeleri, bir Roche Elecsys testi (Roche, Basel, İsviçre) kullanılarak ölçüldü. Serum HBV DNA seviyeleri, 100 IU/mL alt tespit limiti (LOD) ile ticari bir nükleik asit teşhis kiti (Sansure Biotech, Changsha, Çin) kullanılarak gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile kantitatif olarak belirlendi. Nanfang Hastanesi Viral Hepatit Araştırma Laboratuvarında (Guangzhou, Çin) serolojik belirteçler ve HBV DNA tahlilleri yapıldı. Serum ALT ve aspartat transaminaz (AST) seviyeleri, Nanfang Hastanesi (Guangzhou, Çin) klinik laboratuvar Departmanında test edildi.

Periferik kan mononükleer hücrelerinin (PBMC'ler) akış sitometrik analizi'

Antiviral müdahaleden önce, tedavi sırasında ve durdurulduktan sonra her bir kadından periferik kan venöz numuneler alındı. PBMC'ler, Ficoll-Hypaque yoğunluk gradyanlı santrifüjleme ile izole edildi ve ertelenmiş analiz için sıvı nitrojen içinde dondurularak saklandı [19]. Akış sitometri analizi için, çözülmüş PBMC'ler, oda sıcaklığında 10 dakika boyunca Canlı/Ölü Düzeltilebilir ölü hücre boyası (eBioscience, San Diego, CA, ABD) ile boyandı. Hücreler daha sonra aşağıdaki antikorlar (Abs) kullanılarak karanlıkta 4 derecede 30 dakika süreyle boyandı: peridinin klorofil protein kompleksi (PerCP)–Cy5.5- veya floresein izotiyosiyanat (FITC)-antiCD4 (klonlar SK3 ve RAP) -T4, sırasıyla; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD), FITC- veya allophycocyanin (APC)-anti-CD8 (klon RPA-T8; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD), fikoeritrin (PE)-anti -CD45RA (HI100; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD), PE–CY7-anti-CD62L (klon DREG-56; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD), PE–CY 7-anti-CD25 (klon M-A251; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD), APC-anti-CD69 (klon FN50; Biolegend, San Diego, CA, ABD), PE–CY{{34 }}anti-CD38 (klon HIT2; BioLegend, San Diego, CA, ABD) ve PE-anti-PD-1 (klon MIH4; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD). İntranükleer APC-anti-çatal kutusu P3 (FOXP3; klon PCH101; eBioscience, San Diego, CA, ABD) boyaması, üreticinin talimatlarına göre yapıldı. Boyalı hücreler, BD FACSDiva sistemi (BD Biosciences, San Jose, CA, ABD) kullanılarak akış sitometrisi ile değerlendirildi ve veriler, FlowJo yazılımı (TreeStar Inc., Ashland, OR, ABD) [20] kullanılarak analiz edildi.

Hücre içi sitokin boyamanın (ICS) akış sitometrik analizi

Hücre içi sitokin üretimini analiz etmek için, 5 x 105 hücre/oyuk, 5 ug/mL anti-CD3 monoklonal antikor (mAb; klon 145-2C11; BD Biosciences) ve 5 ug/mL çözünür anti-CD28 mAb ile uyarıldı (klon 37.51; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD) 37 derecede 24 saat boyunca iyi yağ tabanlı bir 96-plaka içinde. İnkübasyonun son 6 saati sırasında Brefeldin A (10 ug/ mL; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD) eklendi. Hücreler, oda sıcaklığında Live/Dead Fixable ölü hücre boyası (eBioscience, San Diego, CA, ABD) ile boyandı. Yıkandıktan sonra hücreler, 30 dakika boyunca 4 derecede PerCP-Cy5.5-antiCD4 ve FITC-anti-CD8 ile boyandı. Yüzey lekeli hücreler sabitlendi ve bir sabitleyici/geçirgenleştirici reaktif (BD Biosciences, San Jose, CA, ABD) kullanılarak 20 dakika süreyle geçirgenleştirildi, ardından PE–Cy7-anti interferon (IFN)-y (klon) ile boyandı B27; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD), PE-anti-interleukin (IL)-10 (klon JES3-9D7; Biolegend, San Diego, CA, ABD), PE-anti- IL-21 (klon 3A3-N2.1; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD), APCanti-tümör nekroz faktörü (TNF)- (klon 6401.1111; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD), PE-anti-IL-2 (klon MQ1-17H12; BD Biosciences, San Jose, CA, ABD) ve PE-Cy7-anti-IL{{55} } (klon 8D4-8; BD Biosciences San Jose, CA, ABD) 30 dakika. Analizler, BD FACSDiva sistemi (BD Biosciences, San Jose, CA, ABD) ve FlowJo programı (TreeStar Inc., Ashland, OR, ABD) kullanılarak yapılmıştır [21].

istatistiksel analiz

Veriler, yüzde 95 güven aralığı (CI) ile medyan veya çeyrekler arası aralık olarak ifade edildi. Parametrik olmayan Mann-Whitney U testi, GraphPad Prism yazılımı (v.8.0; GraphPad Software, San Diego, CA, ABD) kullanılarak iki kuyruklu hipotez testlerine dayalı istatistiksel analiz için kullanıldı. P değerleri<0.05 were considered significant.

Sonuçlar

Kronik HBV enfeksiyonu olan annelerin klinik özellikleri

The clinical characteristics are comparable between the AF mothers and the NAF mothers. No statistically significant differences were found between the two groups in terms of age, number of births, weeks of gestation, AVT duration, or delivery methods. The levels of ALT or AST in HBV-infected mothers from the AF group or NAF group were all within the normal range before the antiviral intervention, and the median levels of ALT (interquartile range) were 22.00 (15.50, 23.50) and 21.00 (15.75, 24.25) U/L, respectively, while the median levels of AST (interquartile range) were 21.00 (16.50, 29.00) and 19.00 (16.75, 21.25) U/L, respectively, and no statistically significant differences were found. ALT and AST were within 1×ULN during antiviral treatment in the NAF mothers (including one month after antiviral intervention and at delivery), while one mother from the AF mothers had ALT over 2×ULN and her ALT levels returned to normal at delivery. Other AF mothers maintained ALT and AST levels in the normal range (1×ULN) during the antiviral intervention. At 6–8  weeks postpartum, 2 mothers (33.33%) from the AF group developed transient ALT>2×ULN. Another 4 mothers had ALT>Doğum sonrası 15-18. haftalarda 2×ULN. AF grubundan iki annede ALT anormallikleri devam etti ve doğumdan sonra antiviral tedavi yeniden başlandı (Tablo 1).

Hamilelik ve doğum sonrası HBV ile enfekte annelerin virolojik ve serolojik özellikleri

AF annelerinde medyan HBsAg seviyeleri, antiviral müdahaleden önce, AVT sırasında veya doğum sonrası antiviral tedavinin kesilmesinden sonra NAF annelerinkinden daha düşüktü. Önemli farklılıklar yalnızca doğumdan sonraki 6–8 hafta ve 15–18 haftalarda bulundu (p=0.459, p=0.294, p=0.415, p=0 .027, p=0.021). Tüm anneler AVT sırasında HBsAg düzeylerinde hafif bir düşüş ve doğumdan sonra düzeylerde artış yaşadılar (Şekil 1A). Ek olarak, AF grubundaki HBeAg seviyeleri, gebeliğin 26 ila 28 haftasından doğumdan sonra 15-18 haftaya kadar 5 takip noktasında NAF grubundakilerden daha düşüktü ve sadece iki grup arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark vardı. teslimatta meydana gelen (p=0.035) (Şekil 1B). HBV DNA seviyeleri ile ilgili olarak, takip noktalarının hiçbirinde AF ve NAF anneleri arasında anlamlı bir fark bulunmadı (Şekil 1C).

AVT öncesi, sırası ve sonrasında AF ve NAF annelerinin CD4 artı T hücre fenotiplerinin karşılaştırılması

AF annelerinde CD4 artı T hücresi fenotiplerinin özelliklerini analiz etmek için, AF ile anneler arasında CD45RA, CD62L, CD38, CD69 ve PD-1 varlığına dayalı olarak CD4 artı T hücrelerinin fenotip ekspresyonundaki farklılıkları karşılaştırdık. Antiviral müdahale öncesi, sırası ve sonrasında NAF grupları (Şekil 2A–E). Takip noktalarından herhangi birinde CD4 artı T hücrelerinin CD45RA, CD62L, CD38 veya PD-1 ifadesinde önemli bir fark gözlenmedi. Bununla birlikte, aktivasyon belirteci CD69'un, AF annelerinde CD4 artı T hücreleri tarafından, gebeliğin 26-28 haftasında (antiviral müdahaleden önce) ve doğumdan 15-18 hafta sonra (p=0.04, p=0.04) (Şekil 2D). Antiviral müdahaleden önce, sırasında ve sonrasında iki grup arasındaki Treg miktarını (CD4 artı CD25 artı Foxp3 artı) ayrıca inceledik ve AF annelerindeki Treg sayısının antiviral müdahaleden önceki NAF annelerindekinden önemli ölçüde daha yüksek olduğunu bulduk (örn. 26–28 haftalık gebelikte) (p=0.02). Antiviral müdahale sırasında ve durdurulduktan sonra iki grup arasında Treg miktarlarında anlamlı bir fark yoktu (Şekil 2F).

AVT öncesi, sırası ve sonrasında AF ve NAF annelerinin CD8 artı T hücre fenotiplerinin karşılaştırılması

CD45RA, CD62L, CD38, CD69 ve PD-1 varlığına dayalı olarak CD8 artı T hücrelerinin fenotiplerini gösteren temsili FACS grafikleri, Şekil 3A'da gösterilmektedir. Gebeliğin 26 ila 28 haftasından doğumdan sonra 15-18 haftaya kadar, CD8 artı CD45RA artı hücreler, CD8 artı CD62L artı hücreler, CD8 artı CD38 artı hücreler, CD8 artı CD69 artı hücreler ve CD8 artı PD-1 artı hücreler, AF ve NAF anneleri arasında benzerdi (Şekil 3B-F).

AF annelerinde CD4 artı T hücreleri daha fazla proinflamatuar sitokin üretti

Anti-CD3/anti-CD28 stimülasyonunu takiben, akış sitometrisi kullanarak 6 AF ve 14 NAF annede CD4 artı T hücreleri tarafından salgılanan sitokin seviyelerini analiz ettik. CD4 artı T hücrelerinden sitokin üretiminin temsili FACS nokta grafikleri, Şekil 4A'da gösterilmektedir. Antiviral tedaviden önce (gebeliğin 26-28. haftalarında, Şekil 4B), AF annelerindeki CD4 artı T hücreleri, NAF'deki CD4 artı T hücrelerinden daha fazla IFN-, IL-21 ve IL-2 salgıladı. anneler (p=0.007, p=0.035, p=0.021). Ek olarak, CD4 artı T hücreleri tarafından TNF- salgılanmasının, AF annelerinde NAF annelerinden daha yüksek olduğu görülmektedir (p=0.087). Bununla birlikte, NAF annelerinden alınan CD4 artı T hücreleriyle karşılaştırıldığında, AF annelerinden alınan hücreler, anti-enflamatuar sitokin IL-10 (p=0.024) salgılama konusunda daha düşük bir yetenek sergiledi. IL-4'nin CD4 artı T hücreleri tarafından salgılanması, iki grup arasında önemli ölçüde farklı değildi (p > 0.999) (Şekil 4B). AVT sırasında (antiviral tedaviden sonraki bir ay ve doğum dahil), AF ve NAF anneleri arasında CD4 artı T hücreleri tarafından çeşitli sitokinlerin salgılanmasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu (Şekil 4C, D). Antiviral müdahaleyi durdurduktan sonra (doğum sonrası 6-8 hafta ve doğum sonrası 15-18 hafta dahil), CD4 artı T hücrelerinin IFN- salgılama yeteneği, AF annelerinde NAF annelerindekinden daha fazlaydı (p=0.049 , p=0.035). Ayrıca, AF anneleri doğum sonrası 15-18. haftalarda zayıflamış IL-10 salgısı sergilediler (p=0.004) (Şekil 4E, F). Son olarak, tüm takip noktalarında AF annelerinde IFN salgılayan CD4 artı T hücrelerinin IL{57}}salgılayan CD4 artı T hücreleri ile NAF annelerinin frekans oranını karşılaştırdığımızda, oranın AF annelerinde olduğunu bulduk antiviral müdahaleden önce NAF annelerdekinden önemli ölçüde daha yüksekti (p=0.002, p=0.046, p=0.001, p=0.005), antiviral müdahaleden bir ay sonra, doğumda ve doğum sonrası 15-18. haftalarda. Doğumdan 6-8 hafta sonra, CD4 artı T hücreleri tarafından üretilen proinflamatuar/antiinflamatuar sitokinlerin oranında anlamlı bir fark yoktu, ancak benzer bir eğilim gözlendi (p{75}}.072) (Şekil. 4G).

AF annelerinden alınan CD8 artı T hücreleri daha fazla proinflamatuar sitokin üretir

Proinflamatuar sitokinlerin (IFN- , IL-21, TNF- ve IL-2) ve antiinflamatuar sitokinlerin (IL-4 ve IL-10) temsili FACS nokta grafikleri ) CD8 artı T hücreleri tarafından üretilen Şekil 5A'da gösterilmiştir. AF annelerinde CD8 artı T hücrelerinden proinflamatuar ve antiinflamatuar sitokin sekresyonunu NAF annelerinin AVT öncesi, sırası ve sonrasındakiyle karşılaştırdığımızda, IFN- -salgılayan CD8 artı miktarını bulduk AF annelerindeki T hücreleri, gebeliğin 26-28. haftalarında ve doğum sonrası 6-8. haftalarda NAF annelerininkinden önemli ölçüde daha yüksekti (p=0.046, p=0.035). NAF grubundaki IL-10-salgılayan CD8 artı T hücrelerinin miktarı, tüm takip noktalarında AF grubundakinden önemli ölçüde daha yüksekti (p=0.005, p=0. 044, p=0.039, p=0.025, p=0.002) (Şekil 5B–F). Ek olarak, her takip noktasında IFN- -salgılayan CD8 artı T hücrelerinin IL-10-salgılayan CD8 artı T hücrelerine oranı analiz edildikten sonra, AF annelerinin önemli ölçüde daha yüksek bir AVT'yi durdurmadan önce ve sonra (doğum sonrası 6–8 hafta ve doğum sonrası 15–18 hafta) NAF annelerinkinden daha fazla bu hücreler (p=0.007, p=0.046, p{50} }.027). AF annelerinin ortanca oranı, 30-32. gebelik haftalarında veya doğumda NAF annelerinkinden daha yüksekti, ancak anlamlı bir fark gözlenmedi (p=0.127, p=0.058) (Şek. 5G). Kısaca, CD8 artı T hücrelerinin AF grubunda pro-inflamatuar faktörleri salgılama yeteneği, NAF grubundakinden daha yüksekken, anti-inflamatuar faktör IL-10'yi salgılama yeteneği, bundan önemli ölçüde daha zayıftı. NAF grubu.

Tartışma

Son yıllarda hepatit B kılavuzları, MTCT'yi bloke etmek için yüksek HBV DNA seviyelerine sahip gebe kadınlara antiviral müdahalenin uygulanmasını ve doğumdan sonra kesilmesini önermektedir [22-24]. Gebeliğin sonlarında antiviral müdahaleler uygulanan HBV ile enfekte annelerin bazılarının, ilaç kesildikten sonra doğum sonrası ALT ücretleri yaşadıkları bildirilmiştir [25-28]. Geniş örneklem büyüklüğü ve retrospektif çalışma, doğumda yüksek ALT düzeyleri ve saptanabilir HBV DNA düzeylerinin, doğum sonrası hastalık oranları için bağımsız risk faktörleri olduğunu göstermiştir [27]. Bununla birlikte, doğum sonrası ALT anormallikleri olan HBV ile enfekte hastalarda T hücre bağışıklığına ilişkin sınırlı veri vardır. Bu nedenle, bu çalışmada, doğum sonrası ALT ücretinin altında yatan bağışıklık mekanizmalarını keşfetmek için doğum sonrası ALT ücreti yaşayan HBV ile enfekte annelerin T hücre bağışıklığını incelemeye çalıştık.

Çalışmamız, HBV ile enfekte hamile kadınların yüzde 95'inin (19/20) antiviral dönemde ALT normalizasyonunu sürdürdüğünü buldu. Doğum sonrası ALT ücretleri, antiviral müdahaleyi durdurduktan sonra HBsAg artı /HBeAg artı annelerin yüzde 30'unda (6/20) görüldü; bunlardan 4 vaka kendiliğinden normale döndü ve diğer 2 vaka antiviral tedaviye yeniden başlanmasını gerektirdi. AF annelerinde HBsAg düzeylerinin postpartum 6-8 hafta ve 15-18 haftalarda NAF annelerinden önemli ölçüde düşük olduğunu bulduk. Bu sonuç, daha düşük HBsAg seviyelerine sahip kronik HBV ile enfekte annelerin doğumdan sonra ALT ücretine sahip olma eğiliminde olduklarını gösterdi.

Annenin bağışıklık durumundaki değişikliklere bağlı olarak doğum sonrası karaciğer hasarının oluşabileceği bildirilmiştir [11, 18]. Bu çalışmada, antiviral tedaviden önce (gebeliğin 26-28. haftalarında), NAF annelerindeki Treg miktarlarıyla karşılaştırıldığında, AF annelerindekilerin azaldığını ve AF annelerindeki T hücrelerinin önemli ölçüde daha yüksek miktarlarda proinflamatuar sitokin salgıladığını bulduk. (IFN- , IL-21, IL-2) ve daha az miktarda antiinflamatuar sitokinler (IL-10). CD4 plus veya CD8 plus T hücrelerinde proinflamatuar sitokinin (IFN-) antiinflamatuar sitokine (IL{13}}) oranı, AF annelerinde AVT öncesinde, sırasında veya sonrasında NAF annelerindekinden daha yüksekti. Treg'ler şu anda önemli immünosüpresif etkiler sergileyen CD4 artı T hücreleri olarak tanınmaktadır. İmmün toleransın sürdürülmesi, temel olarak, kronik enfeksiyona yol açan, HBV'ye özgü T hücre yanıtları üzerinde immünosupresif bir etkiye sahip olan Treg'ler ile kendini gösterir [29, 30]. Ek olarak, proinflamatuar sitokinler (IFN- ve IL-12 gibi) immün toleransı önler ve virüsleri ortadan kaldırırken, antiinflamatuar sitokinler (IL-10) immün toleransı korur [31, 32].

NAF anneleriyle karşılaştırıldığında, AF anneleri 26-28. gebelik haftalarında daha düşük Treg frekansına, daha güçlü proinflamatuar bağışıklığa ve 26 ila 28. gebelik haftalarından doğum sonrası 15-18. haftalara kadar daha zayıf antiinflamatuar bağışıklığa sahipti. Bu sonuçlar, HBV ile enfekte annelerin, doğum sonrası ALT ücretlerinde önemli bir rol oynayan T hücre bağışıklığının farklı özelliklerine sahip olduğunu gösterdi. Daha düşük Treg frekansına ve CD4 plus veya CD8 plus T hücrelerinde proinflamatuar sitokinin antiinflamatuar sitokine oranı daha yüksek olan annelerin doğum sonrası ALT faresi yaşama olasılığı daha yüksek olacaktır. Yukarıdan, HBV ile enfekte hamile kadınlarda proinflamatuar bağışıklık baskın olduğunda (yani, T hücreleri daha fazla proinflamatuar sitokinler ve daha az antiinflamatuar sitokinler salgılar; Treg miktarları azalır), hastaların bağışıklık toleransının artma eğiliminde olduğu sonucuna varıyoruz. azaltılabilir, böylece doğum sonrası ALT ücretlerinin ortaya çıkma olasılığı daha yüksektir.

Proinflamatuar/antiinflamatuar sitokinlerin profilindeki farklılıklar, gebeliğin 26-28. haftalarında (AVT'den önce) var olduğundan ve doğum sonrası 15-18. ne AVT ne de gebelik durumundan kaynaklandı. Başlangıçta, HBV ile enfekte olmuş anneler, biyokimyasal parametreleri normal olmasına rağmen, T-hücre bağışıklığının farklı özelliklerini sergilediler. Bu nedenle, kronik HBV ile enfekte gebelerde doğum sonrası ALT seviyelerinin izlenmesi gereklidir ve ALT ücreti olanlara, immün tolerans fazından immün temizleme fazına geçiş yapmaları muhtemel olduğundan daha fazla dikkat edilmelidir.

Bu çalışma, HBsAg artı /HBeAg artı yüksek viral yükü olan ve AVT geçirmemiş annelerin uzun vadeli takip analizinin olmamasıyla sınırlıydı; sonuç olarak, AVT'nin doğum sonrası ALT ücretlerinin insidansını ve ciddiyetini etkileyip etkilemediğini analiz edemedik. Ayrıca, bu çalışmanın örneklem büyüklüğü özellikle AF grubunda küçüktü. Bu çalışmanın sonuçlarını daha da doğrulamak için daha büyük örneklem boyutlarıyla daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır.

Çözüm

Bu çalışmada, T hücre bağışıklığının özelliklerinin gebelikten doğum sonrasına kadar AF ve NAF anneler arasında farklı olduğunu bulduk. AF annelerinde T hücresi bağışıklığı, daha düşük Treg frekansı ve CD4 plus veya CD8 plus T hücrelerinde proinflamatuar sitokinin antiinflamatuar sitokine oranının daha yüksek olması ile karakterize edildi. Sonuçlar, annenin bağışıklık durumunun HBV ile enfekte annelerde doğum sonrası ALT ücretinde önemli bir rol oynayabileceğini gösterdi. Bu nedenle, doğum sonrası ALT faresi olan HBV ile enfekte anneler, immün tolerans fazından immün aktif faza geçiş yaşayabilecekleri için yakından izlenmelidir.

Kısaltmalar

ALT: Alanin transaminaz; HBV: Hepatit B virüsü; AVT: Antepartum antiviral tedavi; AF: ALT ücreti; NAF: ALT olmayan ücret; Treg: Düzenleyici T hücresi; DSÖ: Dünya Sağlık Örgütü; MTCT: Anneden çocuğa bulaşma; ULN: Normalin üst sınırı; AST: Aspartat transaminaz; PBMC'ler: Periferik kan mononükleer hücreleri; PerCP: Peridinin klorofil proteini; FITC: Floresan izotiyosiyanat; APC: Allofikosiyanin; PE: Fikoeritrin; FOXP3: Çatal kutusu P3; ICS: Hücre içi sitokin boyama; mAb: Monoklonal antikor; IFN: İnterferon; IL: İnterlökin; TNF: Tümör nekroz faktörü; CI: Güven aralığı.

teşekkürler

Bu çalışmaya katılan annelere minnettarız ve Nanfang Hastanesi Bulaşıcı Hastalıklar Bölümündeki meslektaşlarımıza numune ve klinik verilerin toplanmasındaki yardımları için teşekkür ediyoruz.

Yazar katkıları

Çalışmayı ZHL, YFG, JH ve MTH tasarladı. MTH örnekleri topladı, deneyleri gerçekleştirdi, istatistiksel analizleri yürüttü ve taslağı hazırladı. XRY, XLZ ve YHH klinik verileri topladı ve hastaları takip etti. ZHL, YFG, JH ve MTH taslağı revize etti. Tüm yazarlar son taslağı okudu ve onayladı.

Finansman

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Grant No.81673243), Bulaşıcı Hastalıklardaki Temel Projeler için On Üçüncü Beş Yıllık Planın Çin Ulusal Araştırma Hibesi (2017ZX10201201) ve Shenzhen'deki Sanming Tıp Projesi ( SZSM201911001).

Veri ve materyallerin mevcudiyeti

Mevcut çalışma sırasında kullanılan veri kümeleri, makul talep üzerine ilgili yazardan temin edilebilir.

Beyannameler

Etik onay ve katılım onayı

Bu çalışma, Helsinki Bildirgesi'nde açıklanan yerel yönetmelikler ve etik ilkeler izlenerek İyi Klinik Uygulaması tarafından yürütülmüştür. Çalışma protokolü, Güney Tıp Üniversitesi Nanfang Hastanesi Kurumsal İnceleme Kurulu (KİK No. NFEC-2019-197) tarafından onaylandı ve tüm deneklerden yazılı bilgilendirilmiş onam alındı.

yayın izni

Uygulanamaz.

Rekabet eden çıkarlar

Yazarlar, rekabet eden çıkarları olmadığını beyan eder.

Yazar Ayrıntıları

Bulaşıcı Hastalıklar Bölümü, Nanfang Hastanesi, Güney Tıp Üniversitesi, Guangzhou 510515, Çin. 2 Mevcut Adres: Bulaşıcı Hastalıklar Bölümü, Huizhou Üçüncü Halk Hastanesi, Guangzhou Tıp Üniversitesi, Huizhou 516002, Çin. 3 Mevcut Adres: Kadın Hastalıkları ve Doğum Bölümü, Nanfang Hastanesi Zengcheng Şubesi, Güney Tıp Üniversitesi, Guangzhou 511340, Çin. 4 Nozokomiyal Enfeksiyon İdaresi Departmanı, Zhujiang Hastanesi, Güney Tıp Üniversitesi, Guangzhou 510280, Çin. 5 Karaciğer Hastalıkları Merkezi, Güney Tıp Üniversitesi Shenzhen Hastanesi, Shenzhen 518000, Çin.

Referanslar

1. Dünya Sağlık Örgütü. Hepatit B hakkında bilgi sayfası. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/hepatit-b. 27 Temmuz 2020'de erişildi.

2. Su W, Chen S, Yang C, Chuang P, Chang H, Chang M. Hamile kadınlarda hepatit B taşıyıcı oranını azaltmada evrensel bebek hepatit B aşılamasının etkisi. J Enfekte Dis. 2019;220(7):1118–26.

3. Peng T, Cai Q, Yang M, Chen S, Chen F, Wang M, Peng L, Wong G, Shen C, Cheng W, et al. Gebe kadınlarda ve yenidoğanlarda hepatit B virüsü enfeksiyonunun epidemiyolojik eğilimleri ve virolojik özellikleri. Arch Virol. 2019;164(5):1335–41.

4. Terrault NA, Levy MT, Cheung KW, Jourdain G. Viral hepatit ve gebelik. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 2021;18(2):117–30.

5. Yi W, Pan CQ, Hao J, Hu Y, Liu M, Li L, Liang D. HBs antijen pozitif annelerde amniyosentez sonrası hepatit B'nin dikey bulaşma riski. J Hepatol. 2013;60(3):523–9.

6. Zou H, Chen Y, Duan Z, Zhang H, Pan C. HBsAg-pozitif annelerden doğan bebeklerde pasif-aktif immünoprofilaksinin başarısızlığı ile ilişkili virolojik faktörler. J Viral Hepat. 2012;19(2):e18–25.

7. Pan CQ, Duan Z, Dai E, Zhang S, Han G, Wang Y, Zhang H, Zou H, Zhu B, Zhao W, et al. Viral yükü yüksek annelerde hepatit B bulaşmasını önlemek için tenofovir. N İngilizce J Med. 2016;374(24):2324–34.

8. Brown RJ, McMahon BJ, Lok AS, Wong JB, Ahmed AT, Mouchli MA, Wang Z, Prokop LJ, Murad MH, Mohammed K. Hamilelikte kronik hepatit B viral enfeksiyonunda antiviral terapi: sistematik bir inceleme ve meta-analiz . hepatoloji 2016;63(1):319–33.

9. Funk AL, Lu Y, Yoshida K, Zhao T, Boucheron P, van Holten J, Chou R, Bulterys M, Shimakawa Y. Anneden çocuğa hepatit B virüsünün bulaşmasını önlemek için gebelik sırasında antiviral profilaksinin etkinliği ve güvenliği : sistematik bir gözden geçirme ve meta-analiz. Lancet Enfeksiyon Dis. 2021;21(1):70–84.

10. Li Z, Duan X, Hu Y, Zhou M, Liu M, Kang K, Cai H, Yi W, Fu D, Gao X. Anneden çocuğa hepatit B bulaşmasını önlemede lamivudin veya telbivudinin etkinliği ve güvenliği virüs: gerçek dünya çalışması. Biomed Res Int. 2020;2020:1374276.

11. Bzowej NH, Tran TT, Li R, Belle SH, Smith CI, Khalili M, Chung R, Tsai N, Terrault N. Kronik hepatit B enfeksiyonu olan hamile Kuzey Amerikalı kadınlarda toplam alanin aminotransferaz (ALT) ücretleri: bir prospektif gözlemsel çalışma. Ben J Gastroenterol. 2019;114(8):1283–91.

12. Zhang H, Pan CQ, Pang Q, Tian R, Yan M, Liu X. Geç gebelikte telbivudin veya lamivudin kullanımı, gerçek yaşam pratiğinde hepatit B virüsünün perinatal bulaşmasını güvenli bir şekilde azaltır. hepatoloji 2014;60(2):468–76.

13. Jourdain G, Ngo-Giang-Huong N, Harrison L, Decker L, Khamduang W, Tierney C, Salvadori N, Cressey TR, Sirirungsi W, Achalapong J, et al. Hepatit B'nin perinatal bulaşmasını önlemek için plaseboya karşı tenofovir. N Engl J Med. 2018;378(10):911–23.

14. Zhang YH, Sun HX. Gebelikte bağışıklık kontrol noktası molekülleri: düzenleyici T hücrelerine odaklanın. Eur J Immunol. 2020;50(2):160–9.

15. Chatterjee P, Chiasson VL, Bounds KR, Mitchell BM. Hamilelik sırasında antiinflamatuar sitokinler interlökin-4 ve interlökin-10'nin düzenlenmesi. Ön Bağışıklık. 2014;5:253.

16. Mjosberg J, Svensson J, Johansson E, Hellstrom L, Casas R, Jenmalm MC, Boij R, Matthiesen L, Jonsson JI, Berg G, et al. İnsan ikinci trimester gebeliğinde fonksiyonel olarak baskılayıcı CD4dimCD25highFoxp3 plus Treg'lerin sistemik olarak azaltılması, progesteron ve 17 beta-estradiol tarafından indüklenir. J İmmunol. 2009;183(1):759–69.

17. Tilburgs T, Roelen DL, van der Mast BJ, de Groot-Swings GM, Kleijburg C, Scherjon SA, Claas FH. İnsan gebeliğinde fetüse özgü CD4 artı CD25 parlak düzenleyici T hücrelerinin periferik kandan desiduaya seçici göçüne ilişkin kanıt. J İmmunol. 2008;180(8):5737–45.

18. Joshi SS, Cofn CS. Hepatit B ve gebelik: virolojik ve immünolojik özellikler. Hepatol Komün. 2019;4(2):157–71.

19. Bøyum A. Lenfosit, granülosit ve makrofaj izolasyonu. J Immunol'ü tarayın. 1976;5(s5):9–15.

20. Barathan M, Mohamed R, Vadivelu J, Chang LY, Vignesh R, Krishnan J, Sigamani P, Saeidi A, Ram MR, Velu V, et al. Kronik HCV ile enfekte hastaların CD8 artı T hücreleri, HCV peptitleri ile stimülasyonu takiben çok sayıda negatif bağışıklık kontrol noktası ifade eder. Hücre İmmünolü. 2017;313:1–9.

21. Huang M, Gao Y, Liao D, Li J, Tang B, Ma Y, Yin X, Li Y, Liu Z. Anne kaynaklı HBeAg'ye intrauterin maruz kalmanın kordon kanındaki T hücresi bağışıklığı üzerindeki etkileri. J Immunol'ü tarayın. 2020;92(2):e12914.

22. Avrupa Karaciğer Araştırmaları Derneği. Hepatit B virüsü enfeksiyonunun yönetimine ilişkin EASL 2017 Klinik Uygulama Kılavuzları. J Hepatol. 2017;67(2):370–98. 23. Çin Hepatoloji Derneği, Çin Tabipler Birliği; Çin Bulaşıcı Hastalıklar Derneği, Çin Tabipler Birliği. Kronik hepatit B için önleme ve tedavi yönergeleri (2019 versiyonu). Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 2019;27(12):938–61.

24. Hou J, Cui F, Ding Y, Dou X, Duan Z, Han G, Jia J, Mao Q, Li J, Li Z ve diğerleri. Hepatit B virüsünün anneden çocuğa bulaşmasını engellemek için yönetim algoritması. Clin Gastroenterol Hepatol. 2019;17(10):1929–36.

25. Giles M, Visvanathan K, Lewin S, Bowden S, Locarnini S, Spelman T, Sasadeusz J. Kronik hepatit B'li hamile kadınlarda hepatik farelerin klinik ve virolojik belirteçleri. Gut. 2015;64(11):1810–5.

For more information:1950477648nn@gmail.com