Farklı Syringa Vulgaris L. Ekstraktlarının Kimyasal Profili, Sitotoksik Aktivitesi ve Oksidatif Stres Azalması Bölüm 2

Lütfen iletişime geçinoscar.xiao@wecistanche.comdaha fazla bilgi için

2.5. Antioksidan Aktivite Deneyleri

S.wulgaris ekstraktlarının in vitro antioksidan kapasitesi üç farklı yöntemle değerlendirildi:2,2-difenil-pikrilhidrazil(DPPH●)süpürme deneyi, ferrik indirgeyici antioksidan güç (FRAP) ve bakır iyonu azaltıcı antioksidan kapasite( CUPRAC)(Tablo 9). Kullanılan üç yöntem, test edilen örneklerin antioksidan kapasitesini üç farklı mekanizma [31-33] ile kanıtlayan argümanları getirmek için seçilmiştir.

S.vulgaris'in çiçekleri ve meyveleri için antioksidan aktivite Toth ve ark. DPPH ağartma tahlilini kullanarak ve sırasıyla IC50 =65.25 ug/mL ve IC50 =67.39 ug/mL ile bu metanolik ekstraktların etkili bir antioksidan aktivitesini ortaya çıkardı [10]. Aynı tahlil Varga ve ark. ve üstün gösterdiantioksidanyaprak ve ağaç kabuğu ekstrelerinin aktivitesi sırasıyla （IC'ler0=25.25ug/mL, ICs0 =40.61 ug/mL）【11】. Çalışmamız, çiçek özütünün önemli olduğunu ortaya koydu (p<0.001)higher antioxidant="" activity="" （ic50="36.83" μg/ml）="" compared="" to="" the="" other="" analyzed="" extracts="" in="" the="" following="" order:="" flowers="">leaves >kabuk > meyve (Tablo 9). Çiçek özü için benzer sonuçlar CUPRAC ve FRAP deneyleriyle elde edildi (p<0.001). moreover,="" the="" present="" study="" brings="" originality="" by="" offering,="" for="" the="" first="" time,="" proof="" of="" the="" antioxidant="" capacity="" of="" the="" tested="" samples="" by="" different="" other="" mechanisms="" that="" are="" highlighted="" using="" the="" two="" other="" assays,="" frap,="" and="" cuprac.="" at="" the="" same="" time,="" the="" study="" offers="" for="" the="" first="" time="" a="" comparative="" view="" on="" flowers,="" fruit,="" leaves,="" and="" bark,="" bringing="" evidence="" on="" the="" fact="" that="" flowers="" represent="" the="" most="" important="" antioxidant="">

Daha fazla bilgi için lütfen buraya tıklayın

Ayrıca, yapılan analizlerin getirdiği özgünlük, test edilen örneklerin antioksidan kapasitesinin incelenmesi, sitotoksik aktivitenin temelini oluşturduğu için daha da önemli hale gelmektedir. Antioksidan kapasite, fenilpropanoidlerin, flavonoidlerin ve ayrıca fenilpropanoidlerin, flavonoidlerin ve ayrıca büyük ölçüde bilindiği ve kabul edildiği için, test edilen numunelerin [10,11] fenolik bileşimi ile yüksek oranda ilişkilidir.sekoiridoidlerantioksidan ve antiproliferatif kapasite [34-36] sergilerler, ancak dahası, antioksidan kapasite aynı zamanda bu örneklerin sitotoksik aktivitesi ile yüksek oranda ilişkili olabilir, çünkü antioksidan aktivite şu anda en önemli mekanizmalardan birini temsil edebilir. sitotoksisitenin temeli [37].

2.6. Sitotoksisite Testleri

Dört S.vulgaris etanolik özütünün iki insan kanser hücre hattı, HeLa ve B16F10 üzerindeki in vitro antiproliferatif potansiyelini araştırmak için MTT tahlili yapıldı. Sonuçlar Şekil 3 ve 4'te sunulmuştur.

Şekil 4. Beş farklı konsantrasyonda S. Vulgaris yaprak, meyve, ağaç kabuğu ve çiçek ekstraktlarının B16H10 hücre hattı üzerindeki inhibitör etkileri, her bir ekstrakt için belirlenen TPC(umol GAE/mL)'ye göre hesaplanan C1-C5: yapraklar （11.34-560,7 mmol GAE/mL）, meyve（6.66-33,2 μmol GAE/mL）, ağaç kabuğu（9.875-49,37 μmol GAE/mL） ve çiçekler （11.69-58.475 μmol GAE/mL）; Negatif kontrol—işlenmemiş hücreler, Dahili kontrol—Etanol, Pozitif kontrol—Cisplatin. Değerler, üç belirlemenin ortalama ± SD'sini temsil eder.*p<><><0.0001(differences between="" extract-treated="" cells="" and="" the="" negative="">

Çiçeklerin etanolik özütü, hem B16F10 hem de HeLa hücreleri üzerinde önemli sitotoksik aktivite sergiledi (Şekil 3 ve 4). Her ikisinin de canlılığımelanomvekarsinomhücreler önemli ölçüde azaldı (p<0.0001) compared="" to="" the="" untreated="" control="" for="" concentrations="" of="" 23.39-58.475="" μmol="" gae/ml="" and="" 11.69-58.475="" μmol="" gae/ml,="" respectively.="" no,="" statistically="" significant="" (p="">0.05) Bu konsantrasyonlar tarafından belirlenen canlılık değerleri arasındaki farklar fark edildi, bu da sitotoksik aktivitenin doza bağlı olmadığını gösteriyor. Çiçek özüne benzer şekilde, yaprak özütü her iki hücre hattı üzerinde önemli bir sitotoksik etki gösterdi (p<0.001). furthermore,="" when="" tested="" against="" the="" hela="" cell="" line,="" these="" two="" extracts'="" inhibitory="" activity="" was="" comparable="" to="" the="" positive="" control—cisplatin="" treated="" cells="" (figure="" 3).on="" the="" b16f10="" cells,="" similar="" efficacy="" was="" displayed="" only="" by="" the="" flower="" extract,="" while="" the="" leaf="" and="" bark="" extracts="" possessed="" a="" lower="" cytotoxic="" effect="" compared="" to="" cisplatin.="" the="" fruit="" extract="" proved="" the="" lowest="" cytotoxic="" effect="" (figure="">

Bu nedenle, sonuçlarımız in vitro olarak göstermektedir.sitotoksikS.vulgaris ekstraktlarının iki tümör hücre hattı üzerindeki özellikleri. HeLa hücre hattının B16F10 hücrelerinden daha duyarlı olduğu kanıtlanmıştır; farklı tümör hücre tipleri arasında değişen in vitro ve in vivo duyarlılık literatürde belgelenmiştir [38,39].

Doz-yanıt eğrisinin lineer olmayan bir regresyon analizi, sitotoksik aktivite için yarı maksimum inhibitör konsantrasyon (ICs0) değerlerini belirledi ve sonuçlar Tablo 10'da açıklanmıştır.

Bu sonuçlar, S.vulgaris durumunda en düşük ICso değerlerininetanoliksırasıyla meyve ve kabuk için ekstraktlar elde edilmiştir. Ancak bu değerler hesaplanır.

her bir ekstrakt için belirlenen TPC'ye (umol GAE/mL) göre. Böylece, dört özütün tamamı için oluşturulan karmaşık kimyasal bileşim dikkate alınarak, in vitro antiproliferatif aktivite ile tanımlanan gruplar ve/bileşikler arasındaki korelasyonlar belirlendi. TPC（r²{{0}}.4） ile hücre canlılığı arasında bir ilişki bulunamadı. Hücre canlılığı üzerindeki inhibitör etki ile Tablo 1'de açıklanan belirli tanımlanmış ve nicelenmiş bileşikler arasında güçlü bir korelasyon fark edildi. Aşağıdaki bileşik 1, 2, 5, 7, 9, 11, 13 ve 14'ün en yüksek miktarı atfedildi. Çiçeklerin kimyasal bileşimini ekstrakte ederken, bileşiklerin geri kalanı kabuk ekstraktında en bol bulunanlardı (Tablo 1). Bu bileşikler arasında, asetonid ve ekinakozit miktarlarının, sırasıyla hem flower（r²= 0.84-0.97 hem de 0.87-0.99 tarafından gösterilen sitotoksisite ile güçlü bir şekilde ilişkili olduğu görülmüştür. ) ve ağaç kabuğu (r2=0.87-0.94 ve 0.85-0.99, sırasıyla) B16H10 hücre hattına doğru çıkar. HeLa hücre hattı durumunda, korelasyon şu şekilde gözlemlendi:ligstrosit（r-=0.89-0.99）, siringalakton A （r²=0.90-0.99） ve oleuropein-aglikon （r²=0.{{ 8}}.98）. Kabuk özü durumunda tüm bu üç sekoiridoid bileşiğin en yüksek miktarda bulunmasına rağmen, kabuk özütlerindeki içerikleri ile antiproliferatif aktivite arasındaki korelasyon katsayıları nispeten düşük（r²=-0.80-0.49 ）.

Cistanche bağışıklığı artırabilir

Bu bulgular, sırasıyla B16H10 ve HeLa hücre hattına karşı S. Vulgaris etanolik çiçek özütünün antiproliferatif etkinliğinden sorumlu bileşikler arasında fenilpropanoidlerin (akteosit ve ekinakozit) ve sek-iridoidlerin (ligstrosit, siringalakton A, oleuropein-aglikon) altını çizmektedir. Bu sonuçlar, sekoiridoidlerin in vitro antiproliferatif etkinliğini gösteren önceki raporlarla uyumludur [4].

Önceki çalışmalar, birkaç Syringa türünün durumunda antioksidan ve antitümör potansiyeline işaret etti ve bu özelliklerin, iridoidler ve lignanlar gibi belirli ana tanımlanmış bileşiklerle ilişkili olabileceğini düşündürdü. 4,5]. S. pubescens'in çiçeklerinden ve yapraklarından elde edilen sulu ekstreler, L2215 hücre hattına karşı test edildiğinde in vitro sitotoksik iken, S. patula çiçek tomurcukları ekstresi ve iki izole bileşik, syringaresinol ve oleoside 11-metil ester, HepG2'yi inhibe edebildi. hücre proliferasyonu [4,5]. Benzer şekilde oleuropein ve 3,4-dihidroksifenil etil alkol 8-O- -D-glukopiranozit, S.pubescens subsp. patula, P-388, L-1210, SNU-5 ve HL-60 hücrelerine karşı sitotoksisiteyi ifade etti [5].

S.vulgaris yapraklarından izole edilen birkaç bileşiğin anti-tümör potansiyeli sergilediği bildirilmiştir [4,40]. Sırasıyla LOX-IMVI melanom hücre hattına ve NCI-H522 akciğer kanseri hücre hattına karşı test edildiğinde, izooleoacteoside ve siringopikrosit B durumunda nispeten zayıf sitotoksisite vurgulanmıştır [4,18]. Ek olarak, oleuropeinin hidroliz ürünü, akciğer kanseri hücre hatları DMS273 ve DMS114'e karşı orta düzeyde sitotoksik aktivite sergilemiştir [4,40].

Bütün bunlar göz önünde bulundurulduğunda ve fitokimyasal analizlerde, sitotoksisite deneylerinde ve antioksidan tahlillerinde elde edilen sonuçların doğrulanmasıyla, tüm bunlar arasındaki bağlantı açık hale gelir ve test edilen numunelerin antiproliferatif aktivitesinin önemli olduğu sonucuna varılabilir. bir antioksidan mekanizmaya bağlı olabilir. Bildiğimiz kadarıyla bu, S. Vulgaris'in çiçeklerinden, yapraklarından, kabuğundan ve meyvesinden elde edilen etanolik ekstraktların kimyasal profilini, antioksidatif ve antiproliferatif özelliklerini değerlendirmeyi ve karşılaştırmayı amaçlayan ilk çalışmadır.

3. Gereçler ve Yöntemler 3.1. Kimyasallar ve tepkimeler

HPLC-DAD-MS analizi için asetonitril, Merck (Darmstadt, Almanya) tarafından satın alınırken, su, Millipore (Darmstadt, Almanya) tarafından bir Direct-QUV sistemi ile saflaştırıldı. Klorojenik asit, rutin ve oleuropein (analitik saflık) Sigma Aldrich'ten (Darmstadt, Almanya) satın alındı. Kullanılan diğer tüm kimyasallar Alfa-Aesar, Karlsruhe, Almanya'dan satın alındı. Sitotoksisite, iki tümör hücre hattı üzerinde test edildi: murin melanom hücreleri (B16F10 hücreleri) ve insan kanser hücre hatları (HeLa). Seçilen hücre çizgileri American Type Cell Collection'dan (ATCC) (Manassas, VA, ABD) elde edildi. B16F10 hücreleri, RPMI 1640 ortamında (Sigma Aldrich, Darmstadt, Almanya) muhafaza edildi.

yüzde 10 fetal sığır serumu (EuroClone, MI, Pero, İtalya) ve yüzde 1 Antibiyotik-Antimvcotik 100 × (Sigma Aldrich, Darmstadt, Almanya) ile desteklenmiştir. Hela hücreleri, yüzde 10 cenin sığır serumu (EuroClone, MI, Pero, İtalya) ve yüzde 1 Antibiyotik-Antimikotik 100x (Sigma Aldrich) ile desteklenmiş DMEM/F-12 ortamında (Gibco Life Technologies, Paisley, UK) muhafaza edildi. , Darmstadt, Almanya). İki hücre çizgisi, nemli bir atmosferde 37 derecede yüzde 5 CO, inkübatörde (Advantage-Lab, Shilde, Belçika) kültürlendi. Sisplatin (Ebewe Pharma Ges. mb H.Nfg. KG, Unterach am Attersee, Avusturya), sitotoksisite testi için standart bir pozitif kontrol olarak dahil edildi.

3.2.Bitki Materyali ve Ekstraktların Hazırlanması

Bitkisel materyal, Romanya'nın Kuzey-Batı bölgesindeki Cluj ilçesinden hasat edildi. Çiçek ve yapraklar türün çiçeklenme döneminde Nisan-Mayıs 2020'de, meyve ve kabuk ise Eylül 2020'de hasat edilmiştir. Eczacılık Fakültesi Cluj-Napoca (83 no'lu kupon).

Hasat edilen numuneler havada kurutuldu. Ekstraktların elde edilmesi için, her numunenin öğütülmüş bitkisel materyali, 1:10 oranında yüzde 70 o/v etanol ile soğuk yumuşatılmıştır. Çözelti daha sonra süzülmeye tabi tutuldu, süzüldü ve antioksidan kapasite ve sitotoksik aktivitenin fitokimyasal analizi ve biyolojik aktivite testi için kullanıldı [41].

3.3. HPLC-DAD-ESI plus Polifenolik Bileşiklerin Analizi

Polifenolik bileşiklerin değerlendirilmesi, dörtlü bir pompa, otomatik numune alma cihazı, DAD dedektörü ve MS-6110 tekli dört kutuplu API-elektrosprey dedektörü (Agilent-Technologies) ile donatılmış HP{{0}} sıvı kromatografisinde gerçekleştirilmiştir. , Santa Clara, CA, ABD). Fenolik bileşiklerin tespiti pozitif iyonizasyon modunda gerçekleştirilmiştir. 50-100 V aralığında farklı parça uygulandı. Bileşiklerin ayrılması, mobil faz olarak 0suda yüzde 0.1 asetik asit (A) kullanılarak bir Eclipse XDB-C18~5 um;4.5x150 mm id）column（Agilent） üzerinde gerçekleştirildi. ) ve 0 asetonitril (B) içinde yüzde 0.1 asetik asit. Elüsyon için aşağıdaki bileşim ile çok aşamalı bir doğrusal gradyan kullanıldı: 2 dakika boyunca yüzde 5 B; 20 dakikada yüzde 5'ten yüzde 90'a kadar B, 4 dakika yüzde 90 B'de tutun, ardından 6 dakikada yüzde 5 B'ye ulaşın. Akış hızı 0,5 mL/dak ve sıcaklık 25±0.5 derecede tutuldu. Ekstrakttaki fenolik bileşikler, ayrılan her bir bileşiğin alıkonma süreleri, UV görünür ve kütle spektrumları aşağıdaki gibi üç referans standartla karşılaştırılarak analiz edildi: flavonoidler için bileşikler, rutinin beş farklı konsantrasyon kullanılarak elde edilen kalibrasyon eğrisi kullanılarak nicelendirildi, 10 ila 80ug/mL arasında değişen ve fenilpropanoidler için rutin (mg rutin/g bitki materyali (R2=0.9973)) eşdeğerleri olarak ifade edilen bileşikler, beş farklı kullanılarak elde edilen klorojenik asit kalibrasyon eğrisi kullanılarak nicelendirildi. 10 ila 50 ug/mL arasında değişen ve klorojenik asit/bitki materyali (R2=0.9937) eşdeğerleri olarak ifade edilen konsantrasyonlar, iridoidler için bileşikler, beş farklı konsantrasyon kullanılarak elde edilen oleuropein kalibrasyon eğrisi kullanılarak nicelendirildi, 10 ila 100 ug/mL arasında değişen ve klorojenik asit/g bitki materyalinin eşdeğerleri olarak ifade edilen (R-=0.9966). Pozitif yüklü iyonlar, Tarama modu kullanılarak kütle spektrometrisi ile tespit edildi. Kütle spektrometrisi için aşağıdaki koşullar kullanıldı: gaz sıcaklığı 3500 C, nitrojen akışı 7 L/dak, nebulizatör basıncı 35 psi, kılcal voltaj 3000 V, parça 100 V ve m/z 120-1200. Kromatogramlar λ=280 ve 340 nm'de kaydedildi. Veri toplama, Agilent ChemStation yazılımı [42,43] kullanılarak yapıldı.

3.4. FT-IR Spektroskopisi

Fourier Kızılötesi dönüşüm spektroskopisi, Cluj-Napoca'dan "Romanya Kralı I. Michael" Yaşam Bilimleri Enstitüsü'nün Spektroskopi laboratuvarında yapıldı. FT-IR analizinden önce, S. Vulgaris yaprağı, çiçeği, kabuğu ve meyve özleri, oda sıcaklığında 12 saat boyunca temiz bir mikroskop lamı üzerinde kurutuldu. Kurutulmuş özler daha sonra mikroskop lamından çıkarıldı ve KBr tozu ile 1:100 oranında karıştırıldı ve bir spektral pelet pres odası çelik kitine yerleştirildi. Yarı saydam KBr peletini oluşturmak için 10tfor2dakikalık basınç uyguladık. FT-IR spektrumları, bir Jasco FT-IR4100 spektrometresi (Jasco, Almanya) ile 4000-400 cm' spektral aralıkta, 4 cm çözünürlükte 256 tarama/örnek kullanılarak toplanmıştır. Ayrıca, elde edilen Ft-IR spektrumları, kullanılan aynı yazılımın Spectra Manager programı kullanılarak CO ve H2O için düzeltildi. Son olarak, FT-IR veri analizi OriginPro Sürüm 8.5.1 yazılımı (OriginLab Corporation, Northampton, MA, ABD) kullanılarak gerçekleştirilmiştir.

3.5.Toplam Polifenoller, Flavonoidler ve Fenolik Asit İçeriğinin Kantifikasyonu

Toplam fenolik içerik (TPC), Avrupa Farmakopesi'ne göre polifenollerin Folin-Ciocalteu reaktifi ile renk reaksiyonuna dayalı bir spektrofotometrik yöntemle, gallik asit kalibrasyon eğrisi kullanılarak değerlendirildi (R2= 0.9928). ). Sonuçlar mg gallik asit eşdeğerleri (GAE)/g kurutulmuş bitkisel materyal olarak ifade edildi. Toplam flavonoidlerin (TFC) tayini, rutin (R-=0.9981) kalibrasyon eğrisine dayanan ve sonuçları mg rutoside eşdeğerleri (RE)/g olarak ifade eden alüminyum klorür yöntemi kullanılarak spektrofotometrik olarak da yapıldı. kurutulmuş bitkisel malzeme. Toplam fenolik asitler (TPA), Romanya Farmakopesi'nin (Cynarae folium mono-grafı) 10. Baskısında bulunana benzer Arnow reaktifi kullanılarak spektrofotometrik bir yöntemle değerlendirildi. TPA belirleme sonuçları mg kafeik asit eşdeğerleri (CAE)/g kurutulmuş bitkisel materyal olarak ifade edildi ve bir kafeik asit kalibrasyon eğrisi grafiği (R2= 0.9956) kullanılarak hesaplandı. Tüm bu deneyler üç kopya halinde gerçekleştirilmiştir [31,33,44].

3.6. GC-MS Analizi

GC-MS analizi, bir Dani Master GC-MS Sisteminde gerçekleştirilmiştir. Bileşiklerin ayrılması için 30 m ×0.25 mm × 0.25 um olan bir SH-Rxi-5 ms sütunu kullanıldı. Taşıyıcı gaz olarak azot, 10 mL/dk akış hızıyla kullanıldı. Sistemin sıcaklığı Tablo 11'de bulunan gradyanı takip etti.

Mutlak etanol ile 1 ila 10 arasında seyreltilmiş her numuneden beş μL enjekte edildi. EIS-MS dedektörü, moleküler ağırlıkları 50 ila 600 dalton arasında olan bileşikleri tanımladı. İyon kaynağı 200 derecede çalıştırıldı. Bileşikler, NIST MS 2.2 spektrum veri tabanı kullanılarak eşleştirme faktörüne dayalı olarak geçici olarak tanımlandı. Bileşiklerin tanımlanması için yüzde 80'den yüksek bir eşleşme puanı kabul edilebilir olarak kabul edildi. Alan normalleştirme yöntemi ile kantitatif analiz yapıldı ve sonuçlar alan yüzdesi (yüzde ) olarak ifade edildi [31,45]. 3.7.Antioksidan Aktivite Deneyleri

3.7.1.DPPH Radikal Süpürme Faaliyeti

S. Vulgaris ekstrelerinin antioksidan kapasitesini değerlendirmek için DPPH ağartma tahlili kullanıldı. Test edilen ekstraktlarda bulunan DPPH reaktifi ve antioksidanların reaksiyonuna dayanan spektrofotometrik bir yöntemdir, 2 mL0.1 g/L DPPH·metanol çözeltisine farklı konsantrasyonlarda her bir ekstraktın mL'si eklenmiş ve muhafaza edilmiştir. 40 derecede termostatlı banyoda yarım saat. Absorbans ve varyasyonları 517 nm'de ölçüldü. DPPH radikalinin inhibisyonu şu formül kullanılarak hesaplanmıştır: DPPH süpürme yeteneği yüzdesi =(A kontrol- A numune/A kontrol)× 100, burada A kontrolü DPPH· radikal çözeltisinden oluşan kontrolün absorbansıdır artı metanol(tentür hariç tüm reaktifleri içeren bir karışım) ve A numunesi, DPPH radikal artı numunelerin absorbansıdır. DPPHdüşüş yüzdesi Trolox eşdeğerleri olarak ifade edildi (TE, R2=0.987).

DPPHTentürün radikal süpürme aktivitesi IC50(ug/mL) olarak ifade edildi. Testler üç kopya halinde yapıldı [32,33,46].

3.7.2. Demiri Azaltan Antioksidan Güç Testi (FRAP)

FRAP yöntemi, bir 2,4,6-tri(2-piridil)-1,3,5-triazin (TPTZ) radikalinin renk değişimine dayanan bir spektrofotometrik yöntemdir. Fe3 plus ile kompleks. Bu renk değişimi, bu komplekste demir iyonunun (Fe3) demir iyonuna (Fe2 artı ) indirgenmesiyle değerlendirilir[47]. FRAP reaktifi, 40 mM HC1 içindeki 2.5 mL 10 mM TPTZ solüsyonunun, 2.5 mL20 mM ferrik klorür solüsyonunun ve pH=3.6'da 25 mL asetat tamponunun karışımından oluşur. Test edilen her numunenin 4 mL'si su ile 1.8 mL'ye seyreltildi ve bu reaktifin 6 mL'si ile karıştırıldı. Aynı şekilde bir boş çözelti hazırlandı, ancak ekstraktların su ile değiştirilmesi Antioksidan kapasitesi, referans olarak Trolox ve bir kalibrasyon eğrisi (R2=0) kullanılarak 450 nm'de absorbanslar ölçülerek renk değişimi ile korelasyon içinde değerlendirildi. 992). Sonuçlar uM Trolox eşdeğeri/g kuru ağırlık bitkisel ürün olarak ifade edildi ve deneyler üç kopya halinde yapıldı [48].

3.7.3. Cupric long Azaltıcı Antioksidan Kapasitesi (CUPRAC)

CUPRAC yöntemi, neopren (2,9-dimetil-1,10-fenantrolin) içindeki bakır iyonunun (II) bakır demire (I) indirgenmesine dayanan bir spektrofotometrik yöntemdir. karmaşık. Bu azalma, açık yeşilden kırmızı-turuncuya bir renk değişimini belirler. Renk değişimi, 450 nm'de absorbans ölçülerek antioksidan kapasite ile ilişkilendirildi. Kalibrasyon eğrisi, Trolox standardının konsantrasyonları kullanılarak çizildi ve sonuçlar, mM Trolox eşdeğeri/g kuru ağırlık bitkisel ürün [32,49,50] olarak ifade edildi. 3.8. Sitotoksisite Deneyleri Tümör hücre hatları üzerinde sitotoksisite çalışması, MTT tahlili (3-(45-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazolium bromür; Sigma kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Aldrich) [51,52]. Her iki hücre hattı için hücreler, normal yayılma ortamında (her oyukta 200 uL hücre süspansiyonu) 24 saat boyunca 96-kuyucuklu plakalarda (1 x 10 derece hücre/kuyu) kaplandı. Ekstraktlar tam ortama beş farklı hacimde （5 μL,10 μL, 15 μL,20 μL,25 μL） eklenmiş ve elde edilen konsantrasyonlar (C1, C2, C3, C4 ve C5) aşağıdaki şekilde hesaplanmıştır. TPC her bir ekstrakt için belirlendi ve umol GAE/mL olarak şu şekilde ifade edildi: çiçekler(C1—11.69 umol GAE/mL, C2—23.39 umol GAE/mL, C3—35.08 umol GAE/mL, C4—46.78 umol GAE/mL, C5—58.475 μmol GAE/mL）, yapraklar（C1-11.34 μmol GAE/mL, C2—22.68 umol GAE/mL, C3—34.02 μmol GAE/mL, C4—45.36 μmol GAE/mL, C5— 56,7 μmol GAE/mL）, ağaç kabuğu （C1—9,875 μmol GAE/mL, C2—19,75 umol GAE/mL, C3—29,625 umol GAE/mL, C4—39.5 umol GAE/mL, C5—49,37 μmol GAE/mL） ve meyve （C1—6.66 umol GAE/mL, C2—13.32 umol GAE/mL, C3—19.98 umol GAE/mL, C4—26.64 umol GAE/mL, C5—33.2 umol GAE/mL). Negatif kontrol, normal bir genişleme ortamında (işlenmemiş hücreler) kültürlenen hücre çizgileri ile temsil edilirken, yüzde 70 o/v etanol ve Cisplatin (0.2 uM) sırasıyla dahili kontrol ve pozitif kontrol olarak dahil edildi.

Yüzde 5 CO ile nemlendirilmiş bir atmosferde 37 derecede 24 saatlik inkübasyonun ardından hücrelerin canlılığı, daha önce yayınlanmış bir protokole göre MTT testi kullanılarak değerlendirildi [51,52]. Her kuyucuğa 0.5 mg MTT eklenerek oluşturulan formazan partikülleri dimetil sülfoksit (DMSO) (Sigma Aldrich, St.Louis, MO, ABD) ile çözüldü ve 450 nm'de bir mikroplaka kullanılarak absorbans okundu. okuyucu (Bio-Rad, Hercules, CA, ABD). Hücre canlılık yüzdeleri (yüzde), ekstrelerle muamele edilmiş hücre kültürleri ile negatif kontroller (işlenmemiş hücreler) arasındaki absorbans oranı l00 ile çarpılarak hesaplandı. Her bir ekstrakt için, hücre çoğalmasının yüzde 50'sini inhibe etmek için gereken ekstrakt konsantrasyonunu temsil eden IC5so değerleri olarak ifade edilen sitotoksik aktivite, lineer olmayan regresyon kullanılarak elde edilen doz-tepki eğrisinden hesaplandı. Tüm deneyler üç kopya halinde yapıldı.

3.9. İstatistiksel analiz

Tüm istatistiksel analizler, ANOVA GraphPad Prism yazılımı, sürüm 6.0(GraphPad, San Diego, CA, ABD) kullanılarak yapıldı. Sonuçlar ortalama standart sapma (SD) olarak ifade edildi. İstatistiksel anlamlılığı belirlemek için tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanıldı, ardından Tukey'nin post hoc testi kullanıldı. Ekstraktların sitotoksik aktivitesi, toplam fenolik içeriği ve tanımlanan bileşikler arasındaki korelasyonu belirlemek için Pearson korelasyon analizi yapıldı. 0.05'ten düşük bir p değeri istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

4. Sonuçlar

Bildiğimiz kadarıyla bu, S. Vulgaris'in çiçeklerinden, yapraklarından, kabuğundan ve meyvelerinden elde edilen etanolik ekstraktların kimyasal profilini, antioksidatif ve antiproliferatif özelliklerini değerlendirmeyi ve karşılaştırmayı amaçlayan ilk çalışmadır. Uygulanan yöntemler, özellikle çiçeklerden ve yapraklardan elde edilen S.vulgaris ekstraktlarının, önemli antioksidan ve sitotoksik potansiyele sahip değerli bileşik kaynakları olduğunu vurguladı.

Bu makale Molecules 2021, 26, 3104'ten alınmıştır. https://doi.org/10.3390/molecules26113104 https://www.mdpi.com/journal/molecules