Cistanche Deserticola Polisakkaritleri Nöroprotektif Etkiye Sahiptir

daha fazla bilgi için:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu ve diğerleri

Soyut:

İskemi inme yüksek morbidite ve mortaliteye sahip bir hastalıktır.cistancheçöl çiçeğipolisakkaritler(CDP), hepatoproteksiyon ve immün homeostaz dahil olmak üzere çok çeşitli faydalı etkilere sahiptir. Bildiğimiz kadarıyla CDP'nin koruyucu etkisi(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)oksijen-glikoz yoksunluğu/reperfüzyonu (OGD/RP) tarafından yaralanan nöronlar üzerinde araştırılmamıştır. Bu çalışmada, OGD/RP bir PC12 hücre modelini yaraladı. Kısaca, CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)({{0}}.05, 0.5 ve 5 ug/ml) reperfüzyondan önce uygulandı. CDP'nin koruyucu etkisi(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)daha sonra hücre canlılığı, laktat dehidrojenaz (LDH) sızıntısı, [Ca2 artı ] I, mitokondriyal membran potansiyeli (MMP) ve hücre apoptozisi temelinde değerlendirildi, reperfüzyon sonrası andredoks durumu reaktif oksijen türleri (ROS), katalaz ( CAT), glutatyon peroksidaz (GSH-Px) ve toplam antioksidan kapasite. Parkinson hastalığıyla ilişkili protein DJ-1'in endojen antioksidasyona katılması ve performans göstermesi gerçeğine dayanaraksinir koruyucuiskemiastrok sonrası etkileri, CDP arasındaki etkileşimi araştırdık.(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)ve DJ{{0}}. DJ-1 ifadesi ELISA ve Western blot analizi ile tespit edildi ve DJ-1'in translokasyonu immünofloresan ile değerlendirildi. Sonuçlar, CDP'nin (0.05, 0.5 ve 5 ug/ml) PC12 hücre ölümünü azalttığını, korunmuş MMP ve kalsiyum homeostazını; oksidatif stresi inhibe etti ve hücre apoptozunu azalttı. Ayrıca, CDP (5 ug/ml), DJ-1 sekresyonunu ve ekspresyonunu belirgin şekilde uyardı. Genel olarak, sonuçlar CDP'nin(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)birsinir koruyucuoksidatif stresi inhibe ederek ve DJ-1 yolunu düzenleyerek OGD/RP kaynaklı yaralanmaya karşı etki

Anahtar Kelimeler:Cistanche Deserticola, Polisakkaritler, Nöroprotektif, Oksijen glukoz yoksunluğu/reperfüzyon, Oksidatif stresDJ-1

Cistanche İngiltere ürünleri için tıklayın

1. Giriş

İskemik inme, dünya çapında ikinci önde gelen ölüm nedeni ve uzun süreli sakatlığın birincil nedenidir [1]. İnmeye bağlı ölümlerin 2030 yılında 7,8 milyona çıkması beklenmektedir [2]. Çin'de her 100 kişide 58 ila 142,000 kişi her yıl felçten ölüyor. Bu nedenle iskemi-reperfüzyon hasarını tersine çevirecek etkili stratejiler geliştirilmelidir. Kapsamlı kanıtlar, oksidatif stresin reperfüzyon sırasında serebral enfarktüsün gelişimini ve ilerlemesini destekleyen önemli bir faktör olduğunu desteklemektedir[3,4]. Bu nedenle, etkili keşfetmeksinir koruyucuROS'u azaltabilen ve oksidatif stresi baskılayabilen ajanlar, araştırmalarda büyük ilgi görmüştür. Parkinson hastalığıyla ilişkili proteinDJ-1, anti-apoptotik ve antioksidatif gen ekspresyonunu uyararak nöro-korumaya aracılık eder [4,5]. DJ-1, oksidatif stres ve mitojen stimülasyonu ile mitokondriye yer değiştirebilir ve meme kanseri, melanom ve OGD/RP hasarı gibi patolojik koşullar altında hücre dışı matrikse salgılanabilir [6]. Ayrıca, DJ-1, anti-oksidasyondaki kritik rolü nedeniyle iskemik nörodejenerasyon için terapötik hedeflemede faydalıdır [4,7]. Son 10 yılda, birkaç grup DJ-1'insinir koruyucuin vivofokal serebral iskemi modelleri ve in vitro OGD/RP modelleri [6-9] üzerindeki etkiler. Bu arada, siklosporin A ve sodyum fenilbutirat dahil bazı ilaçlar, DJ-1 upregülasyon inkememi inme yoluyla nöronal hücre ölümünü ortadan kaldırır [9,10] ].

cistancheçöl çiçeği, ayrılmaz kurutulmuş bitkicistancheçöl çiçeğiYCMa ve Cistanche tubulosa Wight, esas olarak kuzey ve kuzeybatı Çin'in çöl bölgelerinde üretilmektedir [11]. C. Deserticola yenilebilir ve 'Çöllerin Ginseng'i' olarak onurlandırılmıştır. Akupunktur noktası reçetesinde, kronik böbrek hastalığı, cinsel iktidarsızlık, kadın kısırlığı, beyaz akıntı, metroraji ve yaşlılık kabızlığı için bir tedavi olarak kullanılır [12].C. Deserticola polisakkaritleri, izole edilen önemli bir aktif bileşencistanche çöl çiçeği. CDP, bağışıklık fonksiyonunu ve lipid dengesini modüle eder ve yaşlanma, oksidasyon ve karaciğer hasarına karşı koruma sağlar.(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)kalp ve karaciğerde iskemi-reperfüzyon hasarını önler [13,14]. Son araştırmalar, CDP'nin(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)toksik değildir[12,15,16] ve C. Deserticola'dan ekstrakte edilen ekinakozit, izoakteozit, ateozit ve salidrosid dahil olmak üzere diğer fitokimyasallar sergilerler.sinir koruyucuetkiler [11,12]. Bununla birlikte, iskemik inme hasarının iyileştirilmesi için CDP'nin potansiyel kullanımı daha önce bildirilmemiştir.

Bu çalışmada, CDP'nin(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)Nöroproteksiyon için oksidatif stresi inhibe eder. CDP'nin potansiyel koruyucu etkileri(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)inishemia inme hasarı, OGD/RP hasarlı PC12 hücreleri kullanılarak incelendi. Daha sonra DJ-1 ile ilişkili temel etkileşimler araştırıldı.

2. Yöntemler

2.1. Hücre kültürü ve OGD/RP modeli

PC12 hücreleri, yüzde 5 C02 içeren normoksik bir inkübatörde 37 derecede yüzde 10 FBS içeren RPMI 1640 ortamında kültürlendi. Ortam her 48 saatte bir değiştirildi. OGD/RP modeli hazırlandı. PC12 hücreleri yıkandı ve Earle'ün dengeli tuz çözeltisine maruz bırakıldı. Daha sonra hücreler, 37 derecede 4 saat boyunca yüzde 5 CO2 ve yüzde 95 N2 içeren bir anaerobik odaya aktarıldı ve daha sonra reoksijenasyona girmesine izin verildi. Bu aşamada, hücrelere aynı hacimde kültür ortamı ilave edildi. Reoksijenasyondan sonra hücreler, 24 saat boyunca normoksik bir inkübatöre yerleştirildi.

2.2. İlaç uygulaması

CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)Yuanye Biological Technology Co., Şanghay, Çin'den satın alındı ​​(C23J7Y18405, > yüzde 98 saflık). İskemi inme için birinci basamak koruyucu bir ilaç olan nimodipin, pozitif kontrol bileşiği olarak kullanıldı [17–19]. Nimodipin enjeksiyonu Bayer firmasından yapılmıştır. Hücreler rastgele kontrol, araç (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP olmak üzere altı gruba ayrıldı.(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)(0.05 ug/ml), CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)(0,5 ug/ml) ve CDP (5 ug/ml). Nimodipin ve CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)reperfüzyondan önce eklendi. Kontrol grubu normal bir ortamda kültürlendi ve normoksik bir koşul altında inkübe edildi.

2.3. Hücre Canlılığı: MTT ve NRU tahlilleri

PC12 hücreleri (kuyu başına 6 x 103), bir 96-kuyu kültür plakasına ekildi. Hücreler, her grubun gereksinimlerine göre muamele edildi. Hücrelere 5 mg/ml konsantrasyonda MTT (Solarbio, Çin) ilave edildi ve 4 saat 37 derecede inkübe edildi. Formazan, canlı hücrelerde süksinat dehidrojenazın indirgenme ürünüdür [20]. Oluşan mavi formazanın çözünmesi için DMSO eklendi. Hücreler 25 derecede 10 dakika çalkalandıktan sonra Mikroplaka Okuyucu (Thermo,USA) ile 490 nm dalga boyunda absorbans tespit edildi. Hücre canlılığı sonuçları, kontrol grubunun yüzdesi olarak gösterildi [21].

Nötr kırmızı alım (NRU) tahlili, daha önce yayınlanmış protokole [22] göre yapıldı. Reperfüzyon periyotları tamamlandığında hücrelere 50 ug/ml konsantrasyonda nötr kırmızı (Solarbio, Çin) eklendi. Karışım 3 saat inkübe edildi. Daha sonra hücreler, yüzde 0,5 formaldehit ve yüzde 1 kalsiyum klorür içeren bir çözelti ile hızla yıkandı. Hücreler daha sonra yüzde 1 etil asit ve yüzde 50 susuz etanol içeren bir karışıma eklendi. Hücreler 37 derecede 20 dakika çalkalandıktan sonra plakalar 540 nm absorbansta okundu. Hücre canlılığının sonuçları, kontrol grubunun yüzdesi olarak gösterildi.

Cistanche Deserticola polisakkaritlerisahip olmakNöroprotektif etki

2.4. Sitotoksisitenin değerlendirilmesi

LDH, laktat topiruvatın oksidasyonunu katalize eden sitoplazmik bir enzimdir. LDH, hücre zarı hasar gördüğünde hücre dışı sıvıya hızla salınır. Bu nedenle, sitotoksisite değerlendirmesi için genellikle LDH tespiti yapılır. [23]. Deney prosedürü, LDH tahlil kiti (Jiancheng, Çin) tarafından sağlanan ticari kit talimatlarını takip etti. Her numunenin absorbansı, bir mikroplaka okuyucu ile 440 nm'de tespit edildi. Hücre ölümünün yüzdesi, aşağıdaki formül kullanılarak hesaplandı: Canlılık (yüzde)=(OD Tedavisi - ODTreatment boş)/(OD Max LDH aktivitesi - OD Max LDH aktivitesi boş) × yüzde 100.

2.5. Hücre içi Ca2 artı konsantrasyonunun tespiti

Ca2 plus'ın hücre içi konsantrasyonu Fluo-3/AM [15] ile ölçüldü. PC12 hücreleri üç kez PBS ile yıkandı ve ardından karanlıkta 37 derecede 30 dakika 2 uM Fluo-3/AM (Beyotime, Çin) ile inkübe edildi. Hücreler daha sonra hücre dışı boyanın temizlenmesi için üç kez PBS ile yıkandı. Fluo-3/AM'nin floresan yoğunluğu bir lazer taramalı konfokal mikroskopta (Olympus, Japonya) belirlendi. Gri tonlama değerlerinin hesaplanması için Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer ve ImageJ yazılım paketi kullanıldı

2.6. MMP ölçümü

JC-1 (5,5',6,6'-Tetrakloro-1,1',3,3'-tetraetil-imidakarbosiyanin;Beyotime, China) genellikle boyama için kullanılan uygun, voltaja duyarlı bir probdur. hücreler ve MMP'nin değerlendirilmesi [24]. PC12 hücreleri iki kez soğuk PBS ile yıkandı ve ardından yüzde 50 ortam ve yüzde 50 çalışma sıvısı içeren bir karışım ile karanlıkta 37 derecede 15 dakika inkübe edildi. Daha sonra karışım atıldı ve yeni bir ortam ile değiştirildi. Kırmızı ve yeşil floresan görüntüler, lazer taramalı konfokal mikroskopi ile yakalandı. MMP ölçümü için kırmızı ve yeşil floresan sinyallerinin nispi oranı kullanıldı [25]. Gri tonlama değerlerinin hesaplanması için Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer ve ImageJ yazılım paketi kullanılmıştır.

2.7. Apoptoz saptama testi, Hoechest33342 ve akış sitometrisi analizi

Hücre apoptozunun incelenmesi için bir DNA bağlayıcı boya olan Hoechst33342 kullanıldı [26]. Reperfüzyondan sonra, PC12 hücreleri üç kez PBS ile yıkandı ve karanlıkta 37 derecede 15 dakika boyunca 5 ug/ml konsantrasyonda Hoechst33342 (Beyotime, Çin) ile inkübe edildi. Daha sonra hücreler lazer taramalı konfokal mikroskop altında gözlemlendi. Apoptotik hücreler yoğun mavi floresan ve çekirdek yoğunlaşması sergiledi. Her boyama deneyi için, rastgele üç alan yakalandı ve nicelendirildi. Gri tonlama değerlerinin hesaplanması için Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer ve ImageJ kullanıldı. Apoptotik hücrelerin yüzdeleri şu formülle hesaplandı: apoptotik miktar/toplam miktar x yüzde 100 [27].

2.8. ROS üretiminin ölçümü

Floresan probu 2',7'-diklorofloresin-diasetat (DCFH-DA;Jiancheng, Çin) hücre zarlarından geçebilir ve floresan olmayan DCFH'ye hidrolize edilebilir. DCFH, hücre içi ROS tofloresan DCF tarafından oksitlenir [29]. Reperfüzyondan sonra hücreler iki kez PBS ile yıkandı ve daha sonra DCFH-DA ile 10 µM nihai konsantrasyonda 45 dakika karanlıkta 37 derecede inkübe edildi. Floresans, 485 nm uyarma dalga boyuna ve 535 nm emisyon dalga boyuna sahip afloresan spektrofotometre ile gözlendi.

Cistanche Deserticola polisakkaritlerisahip olmakNöroprotektif etki

2.9. Oksidatif stres göstergelerinin belirlenmesi: CAT, GSH-Px ve T-AOC seviyeleri

Hücreler kazındı ve PBS içinde yeniden süspanse edildi. Elde edilen hücre süspansiyonları, buz üzerinde 45 kez sonikasyona tabi tutuldu ve 4 derecede 10 dakika boyunca 1000r/dk'da santrifüjlendi. Süpernatanlar tutuldu ve tespit için kullanıldı [24]. Hücre süpernatantının toplam protein içeriği, bir BCA protein tahlil reaktif kiti (KeyGEN, Çin) ile ölçüldü. CAT, GSH-Px ve T-AOC seviyelerinin aktiviteleri üreticilerin talimatlarına göre ölçüldü (Jiancheng, Çin). Her numunenin absorbansı bir mikroplaka okuyucu ile tespit edildi.

2.10. Hücre dışı DJ-1 konsantrasyonunun ölçümü

PC12 hücreleri (kuyu başına 6 x 103), 96-kuyu kültür plakalarına ekildi. Reperfüzyonun ardından hücre süpernatanı toplandı ve DJ-1/PARK-7 ELISA Kiti (Raybio, ABD) ile analiz edildi. ) üreticinin talimatına göre [9]. Her numunenin absorbansı, Mikroplaka Okuyucu ile 450 nm veya 540 nm'lik çift dalga boyunda tespit edildi.

2.11. Western blot analizi

Hücresel proteinler, üreticilerin talimatlarına göre (KeyGEN, Çin) buz gibi soğuk lizis tamponu ile özümlendi. Protein konsantrasyonu, bir BCA protein tahlil reaktif kiti ile belirlendi. Her gruptan eşit miktarlarda protein lizatları (20 ug) yüzde 12 sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezinde çözüldü ve ardından bir nitroselüloz zara aktarıldı. Membran, oda sıcaklığında 2 saat boyunca yüzde 5 yağsız süt içeren PBS ile inkübe edildi ve ardından gece boyunca 4 derecede anti-PARK7/DJ-1 antikorları (ab76008, Abcam; seyreltme 1:1000) ile problandı. Daha sonra membran üç kez PBST ile yıkandı ve sekonder antikor keçi anti-tavşan IgG (SA00001-2, Proteintech Group; seyreltme 1:5000) ile oda sıcaklığında 2 saat inkübe edildi. Antikor anti- -Tubulin(10759-1-AP, Proteintech Group; seyreltme 1:1000) kontrol olarak kabul edildi. Protein bantları, geliştirilmiş kemilüminesans (ECL) reaksiyon reaktifleri ile görselleştirildi. Bant yoğunlukları QuantityOne Analysis yazılımı v.4.6.9 ile ölçüldü.

2.12. İmmünositokimya analizi

PC12 hücreleri, reperfüzyon işleminden sonra oda sıcaklığında 15 dakika boyunca yüzde 4 paraformaldehit içinde sabitlendi [9]. Aşırı paraformaldehit uzaklaştırıldıktan sonra hücreler, oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 0%0,3 Triton X-100 içeren PBS içinde inkübe edildi. Daha sonra hücreler, 1 saat boyunca yüzde 5 normal keçi serumu ile inkübe edilmeden önce üç kez PBS ile yıkandı. Hücreler daha sonra mitokondrinin boyanması için tavşan fare monoklonal anti-ATP sentaz zinciri (MABS1304, EMD Millipore, seyreltme 1:200) ile inkübe edildi ve ardından anti-PARK7/DJ-1 antikoru ile inkübe edildi (seyreltme 1: 100) protein DJ'inin araştırılması için-1. Hücreler yıkandı ve keçi anti-tavşan IgG-Alexa 488 (yeşil; A11034, Invitrogen; seyreltme 1:1000) ve keçi anti-fare IgG-Alexa 594 (kırmızı; A11032; Invitrogen; seyreltme 1:1000) ile 90 dakika inkübe edildi. dk. Son olarak hücreler üç kez PBS ile yıkandı ve DAPI içeren bir montaj ortamı ile cam slaytlara monte edildi. İmmünofloresan görüntüler, Lazer Taramalı Konfokal Mikroskop kullanılarak görselleştirildi.

Cistanche Deserticola polisakkaritlerisahip olmakNöroprotektif etki

2.13. Veri/istatistiksel analiz

Tüm değerler ortalama ± SD olarak gösterildi. Önem, Tek Yönlü bir varyans analizi (ANOVA) ve ardından Dunnett'in çoklu karşılaştırma testi ile belirlendi. p < .05="" istatistiksel="" anlamlılık="" olarak="" kabul="" edildi.="" deneysel="" veriler="" spss="" 17.0="" istatistik="" yazılımı="" kullanılarak="" analiz="">

3. Sonuçlar

3.1. CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)OGD/RP kaynaklı hücre hasarını inhibe etti

OGD/RP'ye maruz bırakılan PC12 hücrelerinin sayısında önemli bir azalma görüldü. Hücre şekli değişti ve hücre zarı kırıldı. MTT tahlilinde, CDP'deki hücre canlılıkları(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)gruplar ({{0}}.05, 0.5 ve 5 ug/ml) sırasıyla yüzde 58.91 ± yüzde 5.40, yüzde 61.13 ± yüzde 3.81 ve yüzde 68.57 ± yüzde 3.24 idi, p < .05="" (şekil="" 1a)="" ve="" bu="" araçla="" yüzde="" 51,68="" ±="" yüzde="" 3,89="" idi.="" bu="" değerler,="">(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)hücreleri OGD/RP hasarına karşı korudu ve hücre ölümünü azalttı. Ayrıca, Nimo grubundaki hücre canlılığı yüzde 77.02 ± yüzde 5.22 idi, bu da 5 ug/ml CDP'dekine neredeyse eşittir.(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)tedavi edilen grup

NRU testinde, CDP'deki hücre canlılıkları(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)gruplar ({{0}}.05, 0.5 ve 5 ug/ml) sırasıyla yüzde 52.03 ± 4.72, yüzde 58.49 ± yüzde 2.50 ve yüzde 69.17 ± 3.91 idi (Şekil 1B) ve araçla yüzde 47,14 ± yüzde 2,88 oldu. Değerler, CDP'nin konsantrasyona bağlı koruyucu etkisini gösterdi.

Bir aracın aksine (yüzde 44,73 ± yüzde 3,30), CDP'de LDH salınımı önemli ölçüde azaldı(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)gruplar. CDP'de(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)gruplarda ({{0}}.05, 0.5 ve 5 ug/ml), LDH sızıntı oranları sırasıyla yüzde 32.41 ± yüzde 3.70, yüzde 27.13 ± 2.79 ve yüzde 23.13 ± yüzde 4.59, p < .01="" (şek.="" .1c).="" ayrıca,="" nimo="" grubundaki="" ldh="" sızıntı="" oranları="" yüzde="" 21,99="" ±="" yüzde="" 4,02="" idi,="" bu="" da="" 5="" ug/ml="" cdp="" ile="" tedavi="" edilen="" gruptakine="" neredeyse="">

3.2. CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)zayıflatılmış OGD/RP kaynaklı [Ca2 artı ]i artışı

PC12 hücrelerindeki hücre içi Ca2 artı seviyeleri, kontrol grubunun (373.62 ± 75.69) aksine OGD/RP yaralanmasından sonra 4146.60 ± 195.97'ye yükseltildi. CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)grupları ({{0}}.05, 0.5 ve 5ug/ml) doza bağlı olarak hücre içi Ca2 artı seviyesini sırasıyla 2921.25 ± 222.19, 2015.85 ± 230.53 ve 1768.43 ± 426.12'ye düşürebilir (Şekil 2A ve C ). Ayrıca, 5 ug/ml CDP ile tedavi edilen gruptaki Ca2 artı seviyesi, Nimo grubundaki (1591.19 ± 213.21) ile karşılaştırılabilir bir seviyeye düştü.

3.3. CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)zayıflatılmış OGD/RP kaynaklı MMP dağılımı

Kontrol grubu (1.67 ± 0.89) ile karşılaştırıldığında, araç grubu (0.48 ± 0.10) kırmızı FL'den daha fazla yeşil FL floresansı sergiledi floresan (Şekil 2B ve D). Kırmızı ve yeşil FL floresansı arasındaki oranlar 0,5 ve 5 ug/ml CDP'de 1.11 ± 0.26 ve 1.18 ± 0.16'ya düşürüldü.(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)muamele edilen gruplar sırasıyla, p < .01.="" yeşil="" fl="" floresansı="" önemli="" ölçüde="">

3.4. CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)OGD/RP kaynaklı hücre apoptozunu önledi

Yoğunlaştırılmış kromatinler veya parçalanmış çekirdekler sergileyen hücreler, apoptotik hücreler olarak puanlandı [30]. Hoechst33342 tahlil sonuçları, OGD/RP'den sonra yoğunlaştırılmış çekirdeklerin görünümünü ortaya çıkardı (Şekil 3A ve C). Araç grubundaki çekirdeklerde yüksek bir FL floresan yoğunluğu gözlendi. Çekirdeklerin FL floresan yoğunluğu 5 ug/ml CDP'de zayıfladı(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)tedavi edilen grup FITC-Annexin V/PI çift boyamasını kullanarak diğer sitometri ile PC12 hücrelerinde apoptotik oranı analiz ettik (Şekil 3B ve D). Kontrol grubu yüzde 4.16 ± 0.24 hücre apoptotik orana sahipken, araç grubu yüzde 22.98 ± 0.66'ya sahipti. 5 ug/ml CDP ile tedavi edilen grupta, hücre apoptoz oranı yüzde 7.86 ± yüzde 1.16 idi.

3.5. CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)zayıflatılmış OGD/RP kaynaklı hücre içi ROS birikimi ve korunmuş redoks durumu

CDP'nin etkileri(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)ROS üretimi, GSH-Px, CAT aktiviteleri ve T-AOC seviyeleri temelinde oksidatif stres üzerinde gösterilmiştir. OGD/RP ile hasarlı PC12 hücrelerindeki ROS seviyeleri arttı ve kontrol grubundan önemli ölçüde daha yüksek hale geldi (p < .01).="" bu="" arada,="" cdp'deki="" ros="">(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)gruplar ({{0}}.05, 0.5 ve 5 ug/ml) doza bağlı bir şekilde azaldı (p < .01;="" şekil="" 4a).="" ayrıca,="" cdp="" ayrıca="" araçla="" karşılaştırıldığında="" t-aoc="" (p="">< .05;="" şekil="" 4b),="" cat="" (p="">< .05;="" şekil="" 4c)="" ve="" gsh-px="" (p="">< .05;="" şekil="" 4d)="" seviyelerini="" önemli="" ölçüde="" artırdı.="" grup.="" cdp'deki="" endojen="" antioksidanların="">(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)gruplar arttı.

3.6. CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)DJ'in salgılanmasını teşvik etti-1 ve DJ'in ifadesini geliştirdi-1

Hücre süpernatantındaki DJ-1 konsantrasyon değişiklikleri tespit edildi ve DJ-1 ile CDP arasındaki olası ilişkiyi ortaya çıkardı(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler). OGD/RP hasarlı PC12 hücrelerinden DJ-1 salımı gözlemlendi (Şekil 5). DJ-1, 5 ug/ml CDP'de önemli ölçüde yukarı regüle edildi(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)- tedavi edilen grup (38.66 ± 8.44 pg/ml) ve vehikül grubu (18.33 ± 3.80 pg/ml, p < .01) ve kontrol grubundaki (9.67 ± 3.96 pg/ml, p < .01)kinden önemli ölçüde arttı .

CDP'nin etkilerini araştırmak için(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)DJ-1'in hücre içi ifadesinde, DJ-1 protein seviyelerini Western blot yöntemiyle ölçtük. DJ-1 protein ekspresyon seviyeleri, reperfüzyondan 24 saat sonra önemli ölçüde arttı. Buna karşılık, tedavi sonrası 5 ug/ml CDP, araç grubu ile karşılaştırıldığında DJ-1 aşırı ekspresyonunu önemli ölçüde arttırdı (p < .01,="" şekil="">

3.7. CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)mitokondriye gelişmiş DJ-1 translokasyonu

PC12 hücreleri, anti-PARK7/DJ-1 ve anti-ATP sentaz zinciri antikorları ile boyandı (Şekil 7 ve 8). Anti-ATP sentaz zinciri antikoru, mitokondriyal kompleks I ile bağlanır ve bağlayıcı antijen, mitokondriyal iç zarda lokalize olmuştur. Sonuçlar, DJ-1'in OGD/RP hakaretini takiben mitokondriyal iç zara yer değiştirdiğini ortaya koydu (Şekil 8). Bu arada, DJ-1 ve mitokondri çift boyama sonuçları, CDP'nin(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)kolaylaştırılmış DJ- 1 mitokondriyal translokasyon ve ortak lokalizasyon (Şekil 8). Bu sonuçlar, DJ-1 vesinir koruyucuCDP'nin etkisi(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)(Şek. 9).

4. Tartışma

Bu çalışmada, CDP'nin ilk elden rapor ettik.(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)DJ-1 proteininin yukarı regülasyonu yoluyla OGD/RP kaynaklı PC12 hücre hasarını etkili bir şekilde azaltır. CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)gelişmiş hücre canlılığı, azaltılmış hücre zarı hasarı, hücre içi Ca2 artı homeostazı muhafaza etti, MMP kaybını önledi, hücre apoptozunu azalttı, oksidatif stresi bastırdı, DJ'in ekspresyonunu destekledi-1 ve mitokondriye DJ-1 translokasyonunu artırdı. DJ-1, yakın zamandasinir koruyucuetki ve mitokondriyal bütünlük. Bu sonuçlar ikna edici kanıtlar sağladı.sinir koruyucuCDP'nin etkileri(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)iskemiye karşı. Ayrıca, CDP ve DJ-1 arasındaki etkileşim,sinir koruyucuOGD/RP kaynaklı PC12 hücre hasarındaki rolü. Yukarıdaki sonuçlar, CDP'nin faydalı etkisine ilişkin anlayışımızı geliştirebilir ve gelecekte inme tedavisi için faydalı bilgiler sağlayabilir.

İskemi inme, eksitotoksisite, aşırı kalsiyum yüklenmesi ve oksidatif stres dahil olmak üzere karmaşık bir dizi biyokimyasal ve moleküler mekanizmaya bağlanmıştır [31]. OGD/RP yaygın olarak bir in vitro iskemi-reperfüzyon modeli olarak kullanılır ve nörolojik ve biyokimyasal değişikliklerin araştırılması için kullanılır. PC12 hücre çizgisi, OGD/RP hasarına duyarlıdır [2]. Sempatik nöronların bir takım özelliklerini ve özelliklerini sergiler [32] ve dolayısıyla inmeye bağlı nörolojik hasarın mekanizmalarıyla ilgili araştırmalar için yaygın olarak kullanılan nöronal hücre dizileri [33,34]. Çok sayıda çalışma, oksidatif stresin inme ve beyin iskemi hasarında hayati bir rol oynadığını göstermiştir [35-37]. Parkinson hastalığıyla ilişkili protein DJ-1, ROS aracılı nöronal hasarı azaltarak iskemik nörodejenerasyonu ve davranışsal işlev bozukluğunu önleyebilir [7]. Bu nedenle, araştırmak için OGD/RP yaralanması PC12 hücre modelini kullandık.sinir koruyucuCDP'nin etkisi(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler).

OGD/RP tarafından indüklenen PC12 hücrelerinde yaralanma derecesi, MTT, NRU ve LDH salma deneyleri ile değerlendirildi. CDP'nin yönetimi(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)({{0}}.05, 0.5 ve 5 ug/ml) hücre sağkalımını iyileştirdi ve LDH salınımını azalttı. CDP tedavisinin faydalı etkileri arasında hücre içi kalsiyum yüklenmesinin azalması ve MMP'nin korunması da yer aldı. Hücre içi Ca2 artı konsantrasyonunun anormallikleri, özellikle mitokondriyal kalsiyum yüklenmesi, nöronal apoptoz ve iskemi inme tarafından indüklenen ölümle ilişkilendirilmiştir [38]. MMP, elektron taşıma zincirinin etkinliğini yansıtabilir ve bu sistemin patolojik bir bozukluk indeksi olarak belirtilmiştir [39]. Hem hücre içi Ca2+ konsantrasyonunun yükselmesi hem de MMP kaybı, nöron yapısının kararsızlaşmasına yol açabilir ve sonunda hücre hasarı veya hücre ölümü ile sonuçlanabilir [21,40]. Bu çalışmada, sonuçlar CDP'nin OGD/RP-hasarlı PC12 hücrelerinde hücre içi Ca2 artı aşırı yüklenmesini ve artan MMP seviyelerini önemli ölçüde inhibe ettiğini göstermiştir. Apoptoz, serebral iskemi-reperfüzyon hasarının karmaşık patofizyolojisinde hayati bir rol oynar. Artan veriler, apoptozun mitokondriyal disfonksiyonla ilişkili olduğunu ileri sürdü; MMP'nin dağılması, hücre apoptozisi ile sonuçlanan erken bir olaydır [8,39]. Apoptoz, fazla hücreleri atmak için enerjiye bağlı programlanmış hücre ölümü sürecidir. İskemik inmedeki birçok nöron apoptoza uğrayacaktır [41]. Bu çalışmada, CDP'nin apoptoz üzerindeki etkisini incelemek için Hoechst33342 ve Annexin V-FITC/PI boyaması yaptık [23,28]. Sonuçlar, CDP'nin çekirdeğin bütünlüğünü koruduğunu ve hücre apoptoz oranını azalttığını gösterdi. Tüm bu sonuçlar, CDP'nin anti-apoptotik aktivitesinin, PC12 hücrelerinde nöronal hasarda faydalı etkiye katkıda bulunduğunu gösterdi.

Aşırı ROS birikiminin neden olduğu iskemi hasarına maruz kalan hücreler, lipid peroksidasyonuna, hücre zarı hasarına, aşırı kalsiyum yüklenmesine ve mitokondriyal disfonksiyona yol açabilir ve sonuçta hücre apoptosisi ve ölümü ile sonuçlanır [42]. SOD, CAT ve GSH-Px gibi endojen antioksidanların tüketimi de bu oluşumu gösterdi Şekil 9. CDP'nin koruyucu etkileri için olası mekanizmalar(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)OGD/RP kaynaklı PC12 hücre hasarına karşı. CDP tedavisi oksidatif stresi baskılar, Ca2 artı konsantrasyonu ve MMP'yi stabilize eder, mitokondride DJ-1 ekspresyonunu ve lokalizasyonunu geliştirir. Y. Liu ve ark. Biyotıp ve Farmakoterapi 99 (2018) 671–680 678iskemi-reperfüzyon sırasındaki oksidatif stres. Bu çalışmada, OGD/RP grubu, 5 ug/ml CDP ile tedavi edilen grupla karşılaştırıldığında, ROS'ta önemli bir artış ve CAT, GSH-Px ve T-AOC'de bir azalma gösterdi. Bununla birlikte, CDP gruplarında ROS üretimi ve endojen antioksidanların (CAT, GSH-Px ve T-AOC) tüketim oranlarında önemli düşüşler gözlemledik. 5 ug/ml CDP grubundaki faydalı etkiler, Nimo grubundakilere yakındı. Sonuçlar, CDP'nin ROS oluşumunu engellediğini ve enzimatik antioksidan savunmayı geri yüklediğini gösterdi.

DJ-1, bir anahtar redoks reaktifidirsinir koruyucuİnmede oksidatif stresin düzenlenmesinde rol oynayan protein. DJ-1 aşırı ekspresyonunun yararlı etkileri, iskemi-reperfüzyondan hücre sağkalımını ve mitokondriyal fonksiyonun korunmasını ve mitokondri geçirgenliği geçiş gözenek açılmasını hızlandırmak gibi morfolojiyi içerir [39,43]. Önceki çalışmalar, OGD/RP'ye maruz kalan hücrelerde DJ-1'in koruyucu etkisinin, antioksidan özellikleri ve mitokondri translokasyonu ile ilişkili olduğunu göstermiştir [43–45]. DJ-1, translokasyon yoluyla mitokondriyal kusurları hafifletmede etkili endojen nöroproteksiyon gerçekleştirir [46]. Birkaç çalışma, DJ-1 translokasyonunun mitokondriyal hareket üzerinde bir etkisi olabileceğini, hücre-hücre etkileşimini geliştirebileceğini ve diğer hücre hayatta kalma yanlısı süreçleri teşvik edebileceğini göstermiştir.

DJ-1, hem in vitro hem de in vivo modellerde hücre göçü ve adezyon, kemotaksis, proliferasyon ve apoptoz gibi çeşitli süreçleri etkiler [6,9,47,48]. OGD/RP hasarlı PC12 hücre inme modelini kullanarak, CDP arasındaki potansiyel ilişkiyi araştırdık.(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)ve DJ-1. DJ- 1 aşırı ekspresyonu, ELISA ve Western blot ile belirlendi. Bu işlevin yanı sıra, deneylerdeki önemli bir bulgu, DJ-1'in önemli ölçüde aşırı ifadesinin CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)(5 ug/ml) reperfüzyondan önce uygulandı. Bu olası önerdisinir koruyucuCDP ve DJ ilişkisinde etkisi-1. Ayrıca, OGD/RP koşulları altında mitokondride yer alan DJ-1'in ve bol miktarda DJ-1 ifadesinin ROS'a hücresel duyarlılığı azalttığını ve oksidatif stresi inhibe ettiğini gözlemledik [45]. Sonuçlar, CDP'nin, mitokondri disfonksiyonu ile oksidatif stres arasında moleküler bir bağlantı görevi gören ve inmeye özgü ikincil hücre ölümünün ilerlemesini sağlayan DJ-1'i düzenlediğini ve geliştirdiğini ima etti [5,47,49-51]. Mitokondride DJ-1 stabilizasyonu ile paralel olarak, CDP(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)tedavi hücre sağkalımını artırdı, Ca2 artı homeostazını stabilize etti, MMP dağılımını iyileştirdi ve mitokondriyal ilişkili apoptozu önledi [43]. Genel olarak, sonuçlarımız CDP'nin bir yenilik uyguladığını gösterdi.sinir koruyucuiskemik inme tedavisinde mekanizma.

5. Sonuç

Sonuçlarımız, CDP'nin(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)PC12 hücrelerini, kısmen DJ-1 aracılı yola atfedilen antioksidan etkileri aracılığıyla OGD/RP kaynaklı hasara karşı korur. Bu etkiler, hücre zarı hasar oranında bir azalmayı, [Ca2 artı ] I homeostazının korunmasını, MMP dağılımının iyileştirilmesini, hücre apoptozunun inhibisyonunu, hücre içi ROS'un zayıflamasını ve DJ-1 seviyelerinin modülasyonunu içerir. Sonuçlar ayrıca CDP ve DJ-1 arasındaki etkileşimlerin nöroproteksiyonu güçlendirdiğini ve mitokondriyal bütünlüğü koruduğunu gösterdi. Bu nedenle, savunmasız nöronlar CDP tarafından korunabilir.(sandıkağrıçöl çiçeğipolisakkaritler)iskemi inme sırasında DJ-1 ifadesinin geliştirilmesi yoluyla.

Teşekkür

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (hibe 81360649), Ulusal Bilim ve Teknoloji Anahtar Programı (hibe 2015BAK45B01) ve Ningxia Hui Özerk Bölgesi Bilim ve Teknoloji Destek Programı (hibe 2016BZ07) tarafından desteklenmiştir.

Cistanche Deserticola polisakkaritlerisahip olmak Nöroprotektif etki

Referanslar

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans, HDAC1/6, Neuromol'ü aşağı regüle ederek kortikal nöronları hipoksi kaynaklı toksisiteye karşı korur. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: Çin'de inme için hızlı yanıt programı, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Roman inme terapötikleri: çözülen inme patofizyolojisi ve klinik tedaviler üzerindeki etkisi, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, NADPH oksidazla ilişkili patofizyoloji inme deneysel modellerinde, Int. J. Mol. bilim (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, DJ'in oksidasyon durumları{{ 1}}, 4-hpr tarafından tetiklenen oksidatif strese yanıt olarak hücre kaderini belirler: otofaji veya apoptoz? Antioksit Redoks İşareti. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1, muhtemelen mitokondriyal yol, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56-61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira, et al., DJ{{ 1}} sıçanlarda fokal serebral iskemi ve reperfüzyonun neden olduğu nörodejenerasyona karşı korur, J. Cereb. Kan akışı. Tanışmak. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, Oksijen-glukozdan yoksun bırakılmış sıçan birincil sinir hücreleri, DJ-1 sağlıklı mitokondriye translokasyon sergiler: güçlü bir felç tedavi hedefi, CNS Neurosci. orada. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Cyclosporine A tedavisi, Parkinson hastalığıyla ilişkili protein DJ'in yukarı regülasyonu yoluyla mitokondriyal bütünlüğü koruyarak iskemi kaynaklı nöronal hücre ölümünü ortadan kaldırır-1, CNS Neurosci. orada. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu, et al., Sodyum Fenilbütirat ile Ön Tedavi Serebral iskemiyi/ DJ-1 proteinini yukarı doğru düzenleyerek reperfüzyon hasarı, Front. Nörol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Bir nörofarmakoloji incelemesi, Ön. farmakol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Geleneksel Çin tıbbının en iyi farmasötik hediyelerinden biri olan Front. farmakol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Çin Bitkisel tıbbının miyokardiyal iskemi-reperfüzyon hasarını iyileştirmedeki etkileri ve mekanizmaları, Kanıta Dayalı Kompl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches, H9c2 kardiyomiyositlerinde mitokondriyal solunumdan üretilen reaktif oksijen türleri tarafından hücresel glutatyon redoks döngüsünü uyarır, Pharm. Biol. 51 (2013) 64-73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,cistancheDeserticola YC Ma, "Çöl ginsengi": bir inceleme, Am. J.Çin. Med. 40 (2012) 1123-1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,cistancheçöl çiçeğikaynatma, erkek farelerde hidroksiürenin neden olduğu testis toksisitesini hafifletir, Asian J. Androl. 15 (2013) 838-840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Investigation of thesinir koruyucunimodipinin cerrahi benzeri bir stres modeli aracılığıyla Neuro2a hücreleri üzerindeki etkisi, Int. J. Mol. bilim 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,nöroprotektifNoskapin'in serebral oksijen-glikoz yoksunluğu hasarı üzerindeki etkisi, Pharmacol. 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A, oksijen-glikoz yoksunluğunun ardından sıçan kortikal nöronlarının birincil kültüründe iskemik bozulmaya karşı korur reperfüzyon yoluyla, J. Neurosci. Araş. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, Trans-sinnamaldehit, PC12 hücrelerini oksijen ve glikoz yoksunluğuna karşı korudu /reperfüzyon (OGD/R) kaynaklı hasar, anti-apoptoz ve anti-oksidatif stres yoluyla, Mol. Hücre Biyokimyası. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Aloinin oksijen üzerindeki koruyucu etkileri ve PC12 hücrelerinde glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma, Brain Res. Boğa. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol, hipoksi ile ilişkili transkripsiyon faktörlerini inhibe ederek ve antioksidan savunma enzimlerinin seviyelerini artırarak iskemik PC12 hücrelerini korur, ACS Kimya Nörobilim. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B, PC12 hücrelerini, ubikuitine bağımlı indüksiyon yoluyla mitokondriyal homeostazı koruyarak oksijen-glikoz yoksunluğu kaynaklı nöronal ölüme karşı korur p53 protein bozulması, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu, ve diğerleri, aloperin'in neonatal sıçan primeri üzerinde koruyucu etkileri oksijen-glikoz yoksunluğu ve reperfüzyon tarafından yaralanan kültürlenmiş hipokampal nöronlar, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib, Bcl-2, Neurochem'i yukarı regüle ederek fare kortikal nöronlarını OGD/R kaynaklı nörotoksisiteye karşı korur. Araş. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4, HER2 ekspresyonunu stabilize eder ve yumurtalık kanseri hücrelerinde kanser kök hücre popülasyonunu korur, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, RGC-5 hücrelerini H(2)O( 2) PI3K/Akt/eNOS Sinyalleme yolunu aktive ederek indüklenen oksidatif stres hakaretleri, Int. J. Mol. bilim 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, propolisin diklorometan özleri, hücreyi oksijen-glikoz yoksunluğu kaynaklı oksidatif stresten korur Y. Liu ve ark. Biyotıp ve Farmakoterapi 99 (2018) 671–680 679apoptozu azaltarak, Food Nutr. Araş. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,nöroprotektifNeuroserpin'in in vitro oksijen-glikoz yoksunluğu ve reoksijenasyon ile tedavi edilen sıçan astrositlerinde etkisi, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Lityum iyonları, Akt/FoxO1 sinyalinin düzenlenmesi yoluyla PC12 hücrelerinde serum yoksunluğu kaynaklı apoptozu hafifletir yollar, Psikofarmakoloji (Berl) 12 (2015) 625-633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, ve diğerleri, Yönetici özeti kalp hastalığı ve felç istatistikleri 2016 güncellemesi. Amerikan Kalp Derneği'nden bir rapor, Circulation 133 (2016) 447-454.

[32] JE Jumblatt, TA, PC12 feokromositoma hücrelerinde sinir büyüme faktörü ile muskarinik ligand bağlanma bölgelerinin düzenlenmesi, Nature 297 (1982) 152-154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid allopregnanolone, yüksek glikoz kaynaklı apoptozu azaltır ve deneysel diyabetik nöropatik ağrıyı önler: in vitro ve in vivo çalışmalar, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol, PC12 hücrelerini mitokondriyal aracılı sinyal yolu aracılığıyla OGD/ R kaynaklı apoptoza karşı korur, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, iskemi/reperfüzyonda bir oksidatif stres kaynağı ve moleküler hedef olarak NADPH oksidazlar yaralanma, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Oksidatif stres aracılı reperfüzyon hasarında kırmızı şarap özütü, resveratrolün Organ koruyucu etkileri, Oksit. Med. Hücre Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Distinct mPTP aktivasyon mekanizmaları in iskemi-reperfüzyon: Ca2 plus plus, ROS, pH ve inorganik polifosfat, Cardiovasc'ın katkıları. Araş. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Düşük doz etanol ön koşullandırma, büyük iletkenliği aktive ederek oksijen-glikoz yoksunluğuna/ Reoksijenasyon kaynaklı nöronal hasara karşı koruma sağlar , Ca2 artı artı aktifleştirilmiş K artı artı Kanallar İn Vitro, Neurosci. Boğa. 33 (2017) 28-40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, İskemi/reperfüzyon hasarı sırasında sıçan hipokampal nöronlarında mitokondriyal fisyonun inhibe edilmesinin enerji metabolizması üzerindeki etkisi, Neurol. Araş. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun, ve diğerleri, Protective efffects of Oksijen-glikoz yoksunluğu ve reperfüzyonla yaralanan neonatal sıçan birincil kültürlü hipokampal nöronlar üzerindeki Lycium barbarum polisakkarit, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Serebral iskemi sonrası apoptotik mekanizmalar, İnme 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin, astrositleri in vitro hipoksiden korur, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, Kalsiyum/kalmodulin bağımlı protein kinaz, PINK1/Parkin ve DJ'i düzenler{{3} } sepsis sırasında mitofajinin yolları, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7, hipoksi ile indüklenen hücresel tepkilerin önemli bir aracısıdır, Proc. Natl. Acad. bilim ABD 106 (2009) 1111-1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Kalsiyum/kalmodulin bağımlı protein kinaz, PINK1/ Sepsis sırasında mitofajinin parkin ve DJ-1 yolları, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, DJ-1'den PTEN'e Transnitrosilasyon nöronal hücre ölümünü hafifletir Parkinson hastalığı modellerinde, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 hücre ölümüne karşı korur akut kardiyak iskemi-reperfüzyon hasarını takiben, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} yüksek riskli endometriyal kanseri ayırt etmek için güvenilir bir serum biyobelirteç, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan, et al., DJ-1 nigrostriatal'i korur AKT yolunun modülasyonu ile nörotoksin MPTP'den eksen, Proc. Natl. Acad. bilim ABD 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, The Parkinson hastalığı protein DJ-1sinir koruyucusistein-sülfinik asit güdümlü mitokondriyal lokalizasyon nedeniyle, Proc. Natl. Acad. bilim ABD 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Hipergliseminin neden olduğu DJ inhibisyonu-1 ifade, sıçanlarda, Oxid'de iskemik koşullandırma sonrası kardiyoproteksiyonun etkinliğini tehlikeye attı. Med. Hücre Longev. (2013) (2013) 564902.