Ağ Farmakolojisi ve Deneysel Doğrulama, TNF/PI3K/Akt Yolu Yoluyla NAYKH Tedavisinde Cistanche Feniletanoid Glikozitlerin Mekanik Rolünü Ortaya Çıkarıyor
Oct 29, 2025
3. Sonuçlar
3.1 Ağ Farmakolojisi
3.1.1 Aktif Bileşikler ve Potansiyel Hedefler
Proje ekibinin önceki araştırmalarına ve veritabanları ile literatürdeki bilgilere dayanarak, farmakolojik aktiviteye sahip on temsili bileşik seçilmiştir [10-11]:verbascoside, isoverbascoside, ekinacoside, 2′-asetil-verbascoside, cistanoside A, cistanoside B, salidroside, isocrenatoside II, cistanche glikozid A ve cistanche glikozid F.
Kan Lipid Tedavisinde Yüksek İçerikli Verbascoside(acteoside) Cistanche Ekstresi
Cistanche ekstresi özellikler listesi
Kullanmaİsviçre Hedef Tahmini44 hedef elde edildi;NetInferilk 20 hedefi tahmin ederek 45 hedef elde etti;SüperPred118 hedef elde edildi. Kopyaları birleştirip kaldırdıktan sonra,195 benzersiz hedeftespit edildi.
itibarenGSE8963239 NAFLD örneğini ve 24 normal örneği içeren veri seti,589 diferansiyel olarak ifade edilen gentarandı. Verilerin birleştirilmesiGen KartlarıVeDisGeNET, 2.315 NAYKH ile ilişkili hastalık genitekilleştirme sonrasında elde edildi (Şekil 1A–1B). Bileşikle ilgili hedefleri hastalık hedefleriyle kesiştirerek,77 örtüşen hedefCistanche feniletanoid glikozitlerinin NAFLD'ye karşı potansiyel terapötik hedefleri olarak tanımlandı (Şekil 1C).
Bu hedefler içe aktarıldıSİCİM database with an interaction threshold >0.400. İzole edilmiş düğümler kaldırıldı ve ağ,Sitoscape, sonuç olarak75 düğüm ve 408 kenardan oluşan PPI ağı(Şekil 1D). Cytoscape'teki "Ağı Analiz Et" işlevi kullanılarak, derece değerine göre ilk 10 hedef, temel hedefler olarak belirlendi:TNF, NFKB1, TLR4, HSP90AA1, ESR1, HIF1A, STAT1, APP, PRKACA, SMAD3.
3.1.2 GO, KEGG ve DO Zenginleştirme Analizleri
GO zenginleştirme analizi için 93 terim ortaya çıktımoleküler fonksiyon (MF), 38 içinhücresel bileşen (CC)ve 989 içinbiyolojik süreç (BP). Her kategorideki ilk 10 giriş görselleştirildi (Şekil 2). Sonuçlar, Cistanche feniletanoid glikozitlerinin, aşağıdakilerle ilgili yollar yoluyla anti-NAFLD etkileri gösterebileceğini gösterdi:inflamasyon, sitokinler, metabolizma ve immün yanıt.
DO zenginleşmesi belirlendi833 hastalıkhedeflerle ilişkilendirilmiş, ilk 25'i görselleştirilmiş olarak (Şekil 4),metabolik, bağışıklık, kardiyovasküler, obezite ile ilişkili ve karaciğer hastalıklarıhepsi NAYKH ile yakından ilişkilidir.
3.1.3 "Bileşik-Hedef-Yol" Ağı
KEGG zenginleştirme sonuçlarına dayanarak,"bileşik-hedef-yol" ağıkullanılarak inşa edildiCytoscape 3.9.1. Yeşil kareler aktif bileşikleri, mavi daireler hedefleri ve turuncu V şeklindeki düğümler yolları temsil eder (Şekil 5). Bu, Cistanche feniletanoid glikozitlerinin NAFLD karşıtı etkiler gösterdiğini göstermektedir.çoklu bileşikler, hedefler ve yollar, ileekinekozit ve verbaskozit2020 baskısında en çok bulunan ve listelenen işaretleyici bileşiklerdir.Çin Farmakopesi.
3.1.4 Moleküler Bağlantı
ÜFE ağındaki ilk beş temel hedef (TNF, NFKB1, TLR4, HSP90AA1, ESR1) aktif bileşiklerle kenetlendi ve minimum bağlanma enerjileri hesaplandı (Şekil 6). Tüm kenetlenme puanları şundan düşüktü:–6 kcal/mol, güçlü bağlanma afinitelerini gösterir.TNF en güçlü yakınlığı gösterdi. Bazı yerleştirme sonuçları kullanılarak görselleştirildiPyMOL(Şekil 7).
3.2 Hücre Deneyleri
3.2.1 FFA'nın HepG2 Hücrelerinde Lipid Birikimi Üzerindeki Etkileri
Gösterildiği gibiŞekil 8FFA konsantrasyonlarının 0,5 mmol/L'den 2 mmol/L'ye yükseltilmesi, kırmızı lipit damlacıklarında bir artışa yol açtı; bunlar, büyük lipit damlacıkları halinde birleşti ve başarılı lipit yüklemesini gösterdi.
3.2.2 FFA ve Cistanche Feniletanoid Glikozitlerin Hücre Canlılığı Üzerindeki Etkileri
Gösterildiği gibiŞekil 9A, FFA konsantrasyonları1 mmol/L ve altıhücre canlılığı üzerinde anlamlı bir etkisi yoktu (P > 0.05); Böylece,1 mmol/Lmodelleme için seçilmiştir. Gösterildiği gibiŞekil 9B, Cistanche feniletanoid glikozitler200 μg/mLcanlılığı önemli ölçüde etkilemedi (P> 0.05), ancak400 μg/mLcanlılığı önemli ölçüde inhibe etti (P <0.01). Öyleyse,25, 50 ve 100 μg/mLTedavi için düşük, orta ve yüksek dozlar olarak seçilmiştir.
3.2.3 Lipid Birikimi Üzerindeki Etkiler
Gösterildiği gibiŞekil 10model grubu, kontrol grubuna kıyasla önemli kırmızı lipid damlacık birikimi sergiledi (P <0.01), bu da başarılı modellemeyi doğruladı. İle tedavi50 ve 100 μg/mLCistanche feniletanoid glikozitlerin lipid damlacık oluşumunu önemli ölçüde azalttığı görüldü (P < 0.01). İçindeŞekil 11, TG ve TC düzeyleri model grupta yükselmiş (P < 0.01), tüm tedavi grupları ise model gruba kıyasla önemli ölçüde azalmış düzeyler göstermiştir (P < 0.01).
3.2.4 Mitokondriyal Hasar Üzerindeki Etkiler
JC-1 boya sağlıklı mitokondride birikir ve kırmızı floresans yayar; hasarlı mitokondride monomerik formda kalır ve yeşil floresans yayar. Gösterildiği gibiŞekil 12Kontrol grubunda kırmızı floresans hakimken, model grubunda yeşil floresans öne çıktı. Tedavi gruplarında yeşil floresansta azalma ve kırmızı floresansta artış görüldü; bu da mitokondriyal membran potansiyelinin arttığını gösteriyor.
3.2.5 Hücre İçi ROS Düzeyleri Üzerindeki Etkiler
Gösterildiği gibiŞekil 13model grubu, yüksek ROS'u gösteren önemli ölçüde artan floresan yoğunluğu (P <0.01) sergiledi. Cistanche feniletanoid glikozitlerle tedavi, tüm konsantrasyonlarda ROS seviyelerini önemli ölçüde azalttı (P < 0.01).
3.2.6 Apoptoz Üzerindeki Etkiler
Hoechst 33342, parlak mavi, yoğunlaştırılmış veya parçalanmış morfoloji gösteren apoptotik çekirdeklerle çekirdekleri boyar. Görüldüğü gibiŞekil 14, kontrol grubunda minimum parlak floresans vardı, oysa model grubu bol miktarda parlak mavi apoptotik çekirdek gösterdi. Tedavi grupları, apoptozun azaldığını gösteren azalmış floresan yoğunluğu sergiledi.
3.2.7 TNF/PI3K/Akt Sinyal Yolu ve Bax İfadesi Üzerindeki Etkiler
Gösterildiği gibiŞekil 15, kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, model grubu anlamlı derecede yüksek ifade gösterdiTNF-α, PI3K p85, Akt ve Baxproteinler (P <0.05, P <0.01). Tedavi sonrasında:
Tüm Cistanche feniletanoid glikozit gruplarında azalma görüldüTNF-aifadesi (P <0.01),
50 μg/mLgrup azaltılmış gösterdiPI3K p85ifadesi (P <0.01),
100 μg/mLgrup azaltılmış gösterdiAkt ve Baxifadesi (P <0.05).
4. Tartışma
NAFLD, metabolik bozukluklarla ilişkili karmaşık bir karaciğer hastalığıdır.lipid metabolizması dengesizliği, insülin direnci ve oksidatif stres[12]. Son yıllarda,geleneksel Çin tıbbı (TCM)NAFLD'nin tedavisinde önemli umut vaat etti.
Modern araştırmalar şunu ortaya çıkardı:Cistanche'den feniletanoid glikozitlerkaraciğerdeki lipid ve glukoz metabolizmasını düzenleyebilir ve oksidatif stresi, inflamasyonu ve fibrozisi inhibe edebilir [13-15]. Karaciğer kullanırβ-oksidasyonyağ asitlerini metabolize etmek veCYP7A1lipit homeostazisi için kolesterolü safra asitlerine dönüştürmek için kullanılır [16-18]. Yağın yüksek olduğu ortamlarda metabolik dengesizlik lipid birikimine ve NAYKH'ye yol açmaktadır [19].
Bu çalışma şunu doğruladıFFA kaynaklı HepG2 hücrelerilipit damlacıklarının arttığını ve TC ve TG seviyelerinin yükseldiğini gösterdi. Cistanche feniletanoid glikozitleriyle tedavi, lipit damlacık oluşumunu ve TC/TG seviyelerini önemli ölçüde azaltarak hepatik steatozu iyileştirdi.
Mitokondriyal fonksiyon bozukluğu, β-oksidasyonun azalmasına, aşırı ROS üretimine ve lipid peroksidasyonuna yol açar [20]. ROS mitokondriye daha fazla zarar vererek steatozu kötüleştirir [21]. Sonuçlarımız Cistanche feniletanoid glikozitlerinROS'u azaltın, geliştirmekmitokondriyal membran potansiyelive hafifletmekoksidatif stresböylece yağ birikimini azaltır.
Ağ farmakolojisi, anti-NAFLD etkilerinin birden fazla etkiyi içerdiğini gösterdi.metabolik ve apoptozla ilişkili yollar. Moleküler kenetlenme, özellikle aktif bileşikler ve hedefler arasında güçlü bağlanma afiniteleri gösterdi.TNFmerkezi rolünü öne sürüyor.
TNF yoluHücre sinyalleşmesinde kritik öneme sahiptir. TNF-α bağlanırTNFR1, ölüm reseptör yollarını aktive eder ve apoptozu indükler [22]. Aynı zamanda şunları da etkinleştirir:PI3K/Akt yoluparakrin sinyalleme yoluyla [23-24]. Anormal PI3K/Akt sinyallemesi, NAFLD'de lipid birikimi, inflamasyon ve fibrozis ile bağlantılıdır [25]. Verilerimiz Cistanche feniletanoid glikozitlerinapoptozu inhibe etmekve ifadesini azaltmakTNF-α, PI3K, Akt, VeBaxağ tahminleriyle tutarlı olarak,TNF/PI3K/Akt yolu.
Çözüm
Cistanche feniletanoid glikozitler, NAFLD'yi aşağıdaki yollarla düzenler:çoklu süreçler ve yollar, içermek:
Lipid birikiminin azaltılması,
Oksidatif stresin engellenmesi,
Mitokondriyal hasarın hafifletilmesi,
Apoptozun baskılanması.
Bu etkiler yakından bağlantılı olabilir.TNF/PI3K/Akt sinyal yolu. Bu çalışma yalnızca Cistanche feniletanoid glikozitlerinin NAFLD tedavisinde uygulanmasına yönelik bilimsel destek sağlamakla kalmıyor, aynı zamanda yeni terapötik ilaçların geliştirilmesi ve klinik araştırmaları için de bir referans sağlıyor.
