Cistanche Tubulosa Feniletanoid Glikozitler H22 Hepatosellüler Karsinom Hücrelerinde Hem Dışsal hem de İçsel Sinyal Yolları Yoluyla Apoptozu İndükler

Daha fazla bilgi için:ali.ma@wecistanche.com

Pengfei Yuan¹ ve diğerleri

Soyut

Arka fon: Cistanche tübüloza(Schenk) R. Wight, Tamarix bitkisinin köklerini parazitleştiren ve erkek iktidarsızlığı, kısırlık, vücut zayıflığı tedavisinde ve tonik olarak kullanılan geleneksel bir Çin tıbbıdır. Bununla birlikte, hepatosellüler karsinom üzerindeki antitümör etkisi hala belirsizdir. Burada antitümör etkisini araştırdık.Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler(CTPG) H22 hepatoselüler karsinom hücreleri üzerinde hem in vitro hem de in vivo ve mekanizmaları.

Yöntemler:Morfoloji, canlılık,apoptozH22 hücrelerinin , hücre döngüsü ve mitokondriyal membran potansiyeli (Δψm) sırasıyla ters mikroskopi, MTT tahlili ve akış sitometrisi ile analiz edildi. proteinlerin ekspresyonu ve aktivasyonuapoptozyolu Western blot ile tespit edildi. İn vivo antitümör etkisi, erkek Kunming fareleri kullanılarak oluşturulan bir tümör fare modelinde değerlendirildi.

Sonuçlar:CTPG tedavisi, H22 hücre büyümesini doza ve zamana bağlı bir şekilde önemli ölçüde bastırdı;apoptozve G0/G1 ve G2/M fazlarında hücre döngüsü durması. Ayrıca, CTPG ile tedavi edilen H22 hücrelerinde kromozomal yoğunlaşma gözlendi. CTPG tedavisi Bax/Bcl-2 oranını önemli ölçüde arttırdı, Δψm'yi azalttı ve sitokrom c salınımını arttırdı. Hem dışsal hem de içsel sinyal yollarındaki bölünmüş kaspaz-8 ve kaspaz-9 seviyeleri, PARP'ı parçalamak için sıralı olarak aktive edilen kaspaz-7 ve-3 önemli ölçüde arttı. Son olarak, CTPG farelerde H22 hücrelerinin büyümesini engelledi ve tümör farelerinin hayatta kalma oranını iyileştirdi.

Sonuçlar: Bu sonuçlar, CTPG'nin hem dışsal hem de içsel yoluyla H22 hücre büyümesini baskıladığını gösterdi.apoptozyollar.

Anahtar Kelimeler: Cistanche tübüloza, feniletanoid glikozitler, apoptoz, Sinyal yolu, Tümör fare modeli

Organik Cistanche tubulosa feniletanoid glikozitler için tıklayın

Arka fon

Karaciğer kanseri, dünya çapında kanser insidansı için altıncı ve kanser ölümleri için dördüncü sırada yer aldı. Ayrıca, düşük sosyodemografik indeksi olan ülkelerde kanser insidansı için dördüncü ve kanser mortalitesi için ilk sırada yer aldı [1]. Çin'de karaciğer kanseri, 2015 yılında kansere bağlı ölümlerin üçüncü önde gelen nedenidir [2]. Dünyadaki primer karaciğer kanserlerinin yüzde 90'ından fazlası hepatosellüler karsinomdur (HCC). Şu anda, HCC tedavisi için ana seçenek hepatik rezeksiyondur. Bununla birlikte, HCC'li hastaların yüzde 30'undan azı küratif karaciğer rezeksiyonu kriterlerini karşıladı ve yüksek nüks oranı nedeniyle toplam 5-yıllık sağkalım oranı hala yüzde 35-50 kadar düşük [4, 5] . Orta ila ileri HCC'li hastalar için tedavi seçeneklerinin mevcudiyeti çok sınırlıdır. Moleküler olarak hedeflenen bir ilaç olan Sorafenib, FDA tarafından ileri HCC için birinci basamak tedavi olarak onaylanmıştır. Bununla birlikte, sorafenib sadece yaklaşık 3 aylık sağkalımı uzatır ve yanıt oranı yüzde 4'ten azdır [6, 7]. HCC'ye karşı yeni ilaçlar veya stratejiler geliştirmek acildir.

Geleneksel Çin tıbbı (TCM) tek başına veya diğer stratejilerle birlikte HCC'yi tedavi etmek için kullanılmış ve uzun sağkalım süresi, iyileştirilmiş yaşam kalitesi, azaltılmış advers reaksiyonlar vb. dahil olmak üzere klinik faydalar göstermiştir [8, 9]. Bir tür TCM olan Cistanche, anti-oksidasyon, anti-inflamasyon, anti-aging ve nöro-koruma gibi çeşitli biyolojik fonksiyonlara sahiptir [10, 11].feniletanoid glikozitlerAntioksidasyon, anti-inflamasyon, hepatoproteksiyon ve nöroproteksiyon dahil olmak üzere çeşitli aktivitelere sahip olan Cistanche'nin ana aktif bileşenleri olarak kabul edilmiştir [12-15]. Grubumuz bildirdiCistanche tübüloza feniletanoid glikozitler(CTPG) neden olabilirapoptozmelanom B16-F10 hücrelerinde bulunur ve farelerde tümörlerin büyümesini engeller [16]. Bu çalışmada, CTPG'nin hem in vitro hem de in vivo HCC H22 hücreleri üzerindeki antitümör etkisini ölçtük ve mekanizmalarını araştırdık. CTPG'yi bulduk(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)uyarılmışapoptozH22 hücrelerinde hem dışsal hem de içsel sinyal yolları yoluyla ve farelerde H22 tümörlerinin büyümesini bastırdı.

yöntemler

Hücre çizgisi

Fare H22 hepatoselüler karsinoma hücreleri, Xinjiang Biyolojik Kaynaklar ve Genetik Mühendisliği, Xinjiang Üniversitesi (Urumqi, Xinjiang, Çin) Xinjiang Key Laboratory'den elde edildi ve 100 U/ml penisilin ve 100 ug/ml ile takviye edilmiş RPMI 1640 ortamında (Gibco) kültürlendi. streptomisin ve yüzde 10 ısıyla inaktive edilmiş fetal sığır serumu (Gibco) 37 derecede, yüzde 5 CO2'lik nemli bir atmosferde.

MTT tahlili

CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)Hetian Dichen Biotech Co., Ltd.'den (Hetian, Xinjiang, Çin) satın alındı ​​ve CTPG'nin ana bileşikleri(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile nitelenmiş ve nicelleştirilmiştir [16]. Hücre canlılığı 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolyum bromür (MTT) (Sigma, St. Louis, MO) ile değerlendirildi. , ABD) tahlil. H22 hücreleri, kuyu başına 100 ul ortam içinde 2 x 104 hücre yoğunluğunda 96-kuyucuklu plakalara aşılandı ve 37 derecede kültürlendi. 24 saat sonra hücreler, sırasıyla 24, 48 ve 72 saat boyunca farklı konsantrasyonlarda CTPG (0,100, 200, 300 ve 400 ug/ml) veya yüzde 0,3 DMSO (400 ug/ml CTPG'dekine eşit) ile işlendi. 7 dakika 1000 rpm'de santrifüj edildikten sonra süpernatan atıldı ve her bir oyuğa 100 ul MTT solüsyonu (PBS içinde 5 mg/ml) ilave edildi. Plakalar 4 saat 37 derecede inkübe edildi ve oluşan formazan kristallerini çözmek için 100 ul DMSO eklendi. OD490 değerleri, bir 96-kuyulu mikroplaka okuyucu (Bio-Rad Laboratories, CA, ABD) tarafından tespit edildi. Hücre canlılığı şu formüle göre hesaplandı: Hücre canlılığı (yüzde)=(ODtedavi edilmiş/ODtedavi edilmemiş) x yüzde 100.

Cistanche tubulosa feniletanoid glikozitler

Apoptoz tespiti

H22 hücreleri, farklı konsantrasyonlarda CTPG ile tedavi edildi(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)({0}}, 100, 200, 300 ve 400 ug/ml) veya 24 saat boyunca yüzde 0,3 DMSO ve ardından Annexin VFITC/Propidium iyodür (PI) ile boyandıapoptozAlgılama Kiti (YEASEN, Çin) üreticinin talimatlarına göre. Örnekler akış sitometrisi (BD FACSCalibur, ABD) ile analiz edildi.

Mitokondriyal membran potansiyelinin tespiti

H22 hücreleri, farklı konsantrasyonlarda CTPG ile tedavi edildi(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)(0, 200 ve 400 ug/ml) 24 saat süreyle uygulandı ve ardından 20 dakika boyunca 37 derecede membran geçirgen JC-1 boyası (Beyotime, Çin) ile boyandı. JC-1 tamponu ile iki kez yıkandıktan sonra, numuneler 300 ul JC-1 tamponu ile yeniden süspanse edildi ve akış sitometrisi (BD FACSCalibur, ABD) ile analiz edildi.

Hücre döngüsü analizi

H22 hücreleri, 60 mm kültür kaplarına aşılandı ve 24 saat boyunca farklı konsantrasyonlarda CTPG (0, 100,200, 300 ve 400 ug/ml) veya yüzde 0,3 DMSO ile işleme tabi tutuldu. . Tüm hücreler toplandı ve iki kez PBS ile yıkandı. Hücreler, 2 saat boyunca -20 derecede yüzde 70 buz gibi soğuk etanol içinde sabitlendi ve iki kez PBS ile yıkandı, ardından 300 ul Propidium iodide/RNase boyama tamponunda (BD Biosciences) yeniden süspanse edildi. Oda sıcaklığında 10 dakika sonra örnekler akış sitometrisi (BD FACSCalibur, ABD) ile toplandı ve hücre döngüsü dağılımı ModFit LT 3.0 yazılımı ile analiz edildi.

feniletanoid glikozitleriçindeCistanche tübüloza

Hoechst 33.258 boyama

H22 hücre çekirdeklerinin morfolojik değişiklikleri, zar geçirgen DNA bağlayıcı boya Hoechst 33.258 boyaması ile analiz edildi. H22 hücreleri, 2 ml'lik bir ortam içinde 1 x 105 hücre/kuyu konsantrasyonunda bir 6-kuyu plakasına ekildi. Yüzde 60 ~ yüzde 70 izdihamdan sonra hücreler CTPG ile tedavi edildi(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)(0, 100, 200, 300 ve 400 ug/ml) 24 saat süreyle. Hücreler toplandı ve yüzde 4 buz gibi soğuk Paraformaldehit ile 4 derecede 10 dakika sabitlendi. PBS ile yıkandıktan sonra hücreler Hoechst 33.258 (Beyotime, Çin) ile 4 derecede 10 dakika boyandı. Örnekler, ters çevrilmiş bir floresan mikroskobu (Nikon Eclipse Ti-E, Japonya) ile gözlemlendi.

Batı lekesi

Anti-kaspaz-3, anti-parçalanmış kaspaz-3, Anti-Bcl-2 ve anti-Bax, Beyotime Biotech Co., Ltd.'den (Shanghai, Çin) satın alınmıştır. Anti-kaspaz-7, anti-parçalanmış-kaspaz-7,anti-kaspaz-8, anti-yarılmış-kaspaz-8, anti-kaspaz-9, anti bölünmüş-kaspaz-9, anti-PARP, anti-yarılmış PARP, antimouse IgG-HRP ve anti-rabbit IgG-HRP, Cell Signaling Technology'den satın alındı. Anti- -aktin, Beijing ComWin Biotech Co., Ltd.'den (Pekin, Çin) satın alındı.

H22 hücreleri, farklı konsantrasyonlarda CTPG ile tedavi edildi(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)({{0}}, 100, 200, 300 ve 400 ug/ml) veya 24 saat boyunca yüzde 0,3 DMSO. Hücreler toplandı ve Cell Lysis Solution RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) ile buz üzerinde 30 dakika boyunca parçalandı. Süpernatanları toplamak için numuneler döndürüldü (12,000 g, 4 derecede 15 dakika) ve protein konsantrasyonları BCA kiti (Thermo Fisher Scientific, ABD) ile ölçüldü. Her numunede eşit miktarda protein yüzde 12 SDS-PAGE ile izole edildi ve PVDF membranlarına (Biosharp, Çin) aktarıldı. Yüzde 5 yağsız süt içeren TBST tamponu ile bloke edildikten sonra, membranlar sırasıyla ilgili birincil antikorlar ve yaban turpu peroksidaza (HRP) konjuge edilmiş ikincil antikorlar ile inkübe edildi. TBST ile yıkandıktan sonra, hedef proteinler ECL tahlil kiti (Beyotime, Çin) ile saptandı.

Hayvanlar ve etik beyanı

6-8 haftalık erkek Kunming fareleri, Xinjiang Tıp Üniversitesi (Urumqi, Xinjiang, Çin) Hayvan Laboratuvarı Merkezi'nden satın alındı. Fareler, Xinjiang Üniversitesi'nin standart sıcaklık kontrollü, hafif döngülü bir hayvan tesisinde tutuldu. Tüm hayvan çalışmaları, Xinjiang Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nin yönergelerine göre yapıldı. Protokol, Sincan Üniversitesi, Sincan Biyolojik Kaynaklar ve Genetik Mühendisliğinin (BRGE-AE001) Temel Laboratuvarı Hayvan Deneyleri Etiği Komitesi tarafından onaylandı.

Tümör fare çalışması

Tümör fare modelinin uyarılması için, erkek Kunming farelerine, 100 ul PBS içinde 1 x 106 H22 hücresi deri altından sağ kanata enjekte edildi. 3 gün sonra fareler rastgele 3 gruba ayrıldı (7 fare/grup). Kontrol grubuna tümör çevresine deri altından 0.1 ml DMSO enjekte edildi. CTPG-200 ve CTPG-400 gruplarına 200 veya 400 mg/kg CTPG deri altından enjekte edildi(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)tümör çevresinde 0.1 ml DMSO içinde. Fareler 21 güne kadar 2 günde bir tedavi edildi. Tümör boyutları 25 güne kadar kumpaslar kullanılarak ölçüldü ve tümör hacmi şu formüle göre hesaplandı: tümör hacmi (mm3)=(uzunluk x genişlik2)/2. 25 gün sonra, tümör farelerinin hayatta kalması, bu çalışmanın sonuna kadar her gün izlendi.

istatistiksel analiz

İstatistiksel anlamlılık, tedavi ve kontrol grupları arasında tek yönlü varyans analizi ile hesaplandı. Tüm veriler ortalama ± standart sapma (SD) olarak ifade edildi. p < 0.05="" istatistiksel="" olarak="" anlamlı="" kabul="">

Sonuçlar

CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)H22 hücrelerinin canlılığını in vitro azalttı

CTPG'nin antitümör etkisini araştırmak için(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)HCC üzerinde, H22 hücreleri, in vitro olarak farklı konsantrasyonlarda CTPG (0, 100, 200, 300 ve 400 ug/ml) ile muamele edildi. 24 saat sonra, ters bir mikroskop kullanılarak H22 hücrelerinin morfolojisi gözlendi. H22 hücrelerinin morfolojisinin CTPG tedavisi ile çarpıcı biçimde değiştiğini bulduk. Artan CTPG konsantrasyonu ile hücreler küçüldü ve yuvarlaklaştı ve hücre sayısı da büyük ölçüde azaldı (Şekil 1a). Sırasıyla 24, 48 ve 72 saat boyunca CTPG işleminden sonra H22 hücrelerinin canlılığını analiz etmek için MTT tahlili kullanıldı. CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)Doza bağlı ve zamana bağlı bir şekilde H22 hücre canlılığını önemli ölçüde azalttı (Şekil 1b). CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)300 ug/ml'de en iyi inhibitör orana ulaştı (Şekil 1c). H22 hücreleri için CTPG'nin IC50 değerleri 24 saatte 236 ug/ml ve 48 saatte 169.8 ug/ml'dir.

CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)H22 hücrelerinde indüklenen apoptoz

H22 hücrelerinin azalan canlılığının, indüksiyonunun aracılık edip etmediğini araştırmak.apoptoz, H22 hücreleri, 24 saat boyunca farklı CTPG konsantrasyonları (0,100, 200, 300 ve 400 ug/ml) ile işlendi ve PI ve Annexin V ile boyandı. Akış sitometrisi sonuçları, CTPG'nin(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)önemli ölçüde uyarılmışapoptozH22 hücrelerinin (erken ve geçapoptoz) doza bağlı bir şekilde (Şekil 2a). Yüksek dozda CTPG olmasına rağmen(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)H22 hücrelerinin nekrozu da önemli ölçüde artar, nekroz, H22 hücre büyümesinin inhibisyonunda küçük bir rol oynar (yüzde 8.3)apoptoz(yüzde 52,6). Ayrıca, CTPG'den sonra H22 hücrelerinin toplam proteinleri izole edildi.(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)tedavi ve anti-apoptotik B hücreli lenfoma 2 (Bcl-2) ve proapoptotik BCL-2-ilişkili X proteininin (Bax) ifadeleri Western blot ile tespit edildi. Gri tonlamalı tarama verileri, Bax ve Bcl-2 ekspresyon seviyelerinin sırasıyla arttığını ve azaldığını gösterdi. Bax/Bcl-2 oranı önemli ölçüde arttı (Şekil 2b). Bu sonuçlar, CTPG'nin indüklediğini göstermektedir.apoptozH22 hücrelerinde.

CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)H22 hücrelerinde kromozomal yoğunlaşmayı ve hücre döngüsü durmasını indükler

İlaçların neden olduğu DNA hasarının ve hücre döngüsü durmasının tümör hücresi büyümesini engelleyebileceği ve neden olduğu bildirilmiştir.apoptoztümör hücrelerinde [17, 18]. CTPG'den sonra H22 hücrelerinde çekirdek morfolojisini tespit etmek(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)24 saat muamele, H22 hücreleri Hoechst 33.342 ile boyandı ve ters floresan mikroskopi kullanılarak gözlemlendi. CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)tedavi edilen hücreler, parlak bir şekilde yoğunlaştırılmış çekirdek kromatininde doza bağlı bir artış gösterirken, tedavi edilmeyen hücreler homojen olarak boyanmış çekirdekler gösterdi (Şekil 3a). H22 hücrelerinde hücre döngüsü dağılımı, 24 saat boyunca CTPG işleminden sonra PI boyama ile ayrıca analiz edildi. Şekil 3b'de gösterildiği gibi, CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)tedavi, G0/G1- ve G2/M fazı hücrelerinin oranını önemli ölçüde arttırdı ve S fazı hücrelerinin oranını önemli ölçüde azalttı, bu da CTPG'nin(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)H22 hücrelerinde indüklenmiş G0/G1 ve G2/M fazı tutuklaması. Yüksek dozda CTPG, alt G1 hücrelerinin oranını da önemli ölçüde arttırdı.

CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)mitokondriyal membran potansiyelini azalttı ve sitokrom c salınımını artırdı

mitokondriyal bağımlı yol, indüklenmesinde önemli bir rol oynar.apoptoz[19, 20]. Mitokondriyal membran potansiyelindeki (Δψm) değişiklikler şunlar olabilir:

JC-1 agrega (kırmızı floresan) nedeniyle JC-1 boyaması ile izlenir ve Δψm'nin azalmasıyla monomere (yeşil floresan) parçalanabilir [21]. CTPG'den sonra(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)24 saat muamele, H22 hücreleri JC-1 boyası ile boyandı. Akış sitometrisi verileri, FL-2 kanalındaki kırmızı floresansın ve FL-1 kanalındaki yeşil floresansın CTPG üzerine önemli ölçüde azaldığını ve arttığını gösterdi.(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)tedavi. PE−FITC artı hücrelerin oranı önemli ölçüde arttı (Şekil 4a), bu da CTPG'nin(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)H22 hücrelerinde Δψm'yi azalttı. Bu, artan Bax/Bcl-2 oranıyla tutarlıdır. Sonuç olarak, CTPG üzerine sitokrom c salınımının önemli ölçüde arttığını gözlemledik.(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)tedavi (Şekil 4b). Bu sonuçlar, CTPG'nin kısmen indükleyebileceğini gösterdi.apoptozH22 hücrelerinde mitokondriyal bağımlı (içsel) bir yol aracılığıyla.

CTPG kaspaz yolunu aktive etti ve DNA onarımını engelledi

Daha sonra, CTPG tarafından indüklenen kaspaz aktivasyonu(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)hem dışsal hem de içsel sinyal yolları aracılığıyla analiz edildi. CTPG'den sonra(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)24 saat muamele, toplam proteinler H22 hücrelerinden izole edildi ve pro- ve bölünmüş kaspazların seviyeleri Western blot ile tespit edildi. Tedavi edilmemiş veya DMSO kontrolü ile karşılaştırıldığında, CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)tedavi, yalnızca bölünmüş kaspaz-8 düzeyini (dışsal yol) değil, aynı zamanda bölünmüş kaspaz-9 düzeyini de (iç yol) önemli ölçüde yukarı regüle etti (Şekil 5). Sırayla, aktive edilmiş kaspaz-8 ve -9, Şekil 5'te gözlemlenen aşağı akış pro-kaspazını-3 ve -7 böldü. Aktive edilmiş kaspaz-3 DNA'yı parçaladı. Şekil 3a'da görüldüğü gibi DNA onarımını önlemek ve DNA hasarını biriktirmek için poli (ADP-riboz) polimerazın (PARP) onarım enzimi. Bu sonuçlar, CTPG'nin(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)uyarılmışapoptozH22 hücrelerinde hem dışsal hem de içsel sinyal yolları yoluyla.

CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)H22 HCC'nin in vivo büyümesini baskılar ve tümör farelerinin hayatta kalma oranını artırır

Son olarak, CTPG'nin antitümör etkisi(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)HCC üzerinde H22 hücrelerinin deri altı enjeksiyonu ile oluşturulan bir tümör fare modelinde değerlendirildi. 3 günlük H22 hücre enjeksiyonundan sonra, tümör fareleri CTPG ile tedavi edildi.(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)8 kez. Farelerin vücut ağırlığı ve tümör boyutları belirtilen zaman noktalarında izlendi. Şekil 6a'da gösterildiği gibi, her gruptaki farelerin vücut ağırlığı önemli bir farklılığa sahip değildir, bu da seçilen CTPG dozlarının(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)belirgin yan etkileri yoktur. İlginç bir şekilde, hem 200 mg/kg hem de 400 mg/kg CTPG ile tedavi edilen farelerde tümör büyümesi önemli ölçüde inhibe edildi (Şekil 6b). Ayrıca, iki doz CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)tedavi, deneyin sonunda kontrol grubu (0/7) ile karşılaştırıldığında tümör farelerinin (3/7, 3/7) hayatta kalmasını büyük ölçüde iyileştirdi (Şekil 6b). Ayrıca, CTPG'nin, erkek Kunming farelerinden izole edilen splenositlerin proliferasyonunu doza bağımlı bir şekilde önemli ölçüde arttırdığını bulduk (Şekil 6c), bu da CTPG'nin(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)immünostimülatör bir etkiye sahiptir.

Tartışma

TCM, uzun bir tarih boyunca kanserler de dahil olmak üzere çeşitli hastalıkları tedavi etmek için kullanılmıştır. TCM'nin indükleyebileceği bildirildiapoptozhem dışsal (ölüm reseptörü aracılı) hem de içsel (mitokondriye bağımlı) sinyal yolları yoluyla farklı tümör hücrelerinde antitümör etkiler [22-25]. İki yol sırasıyla kaspaz-8 ve -9'yi aktive edebilir [24, 26]. Burada, CTPG'nin(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)apoptoz ve hücre döngüsü durmasının indüklenmesi yoluyla H22 hücre büyümesini önemli ölçüde bastırdı. Bölünmüş kaspaz-8 ve -9 seviyeleri, CTPG tarafından önemli ölçüde yukarı regüle edildi(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)tedavi, hem dışsal hem de içsel sinyal yollarının indüklenmesinde rol oynadığını düşündürür.apoptoz. Önceki çalışmamız CTPG'nin(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)melanom B16-F10 hücrelerinde, bölünmüş kaspaz-9 düzeyini artıran ancak kaspaz-8 [16] düzeyini artıran mitokondriyal bağımlı bir yolla apoptozu indükledi. CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)farklı tümör hücrelerinde farklı sinyal yollarını aktive edebilir.

Mitokondriyal membran bütünlüğü, Bax ve Bcl-2 dahil olmak üzere BCL-2 protein ailesinin üyeleri tarafından sıkı bir şekilde düzenlenir [27, 28]. Bax'ın Bcl'ye oranı-2 mitokondriye bağımlı olarak kritik bir rol oynar.apoptozyol [29]. CTPG ile tedavi edilen H22 hücrelerinde(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler), Bax/Bcl-2 oranı önemli ölçüde yukarı regüle edildi, bu da Δψm azalmasına ve bu çalışmada gözlenen sitokrom c salınımına neden olabilir. Sonuç olarak, pro-kaspaz-9 parçalandı ve aktive edildi. Son olarak, aktif kaspaz-8 ve -9 başlatıcıları, DNA onarımını önlemek için PARP'ı parçalamak üzere kaspaz-3 cellatını aktive etti. Birlikte ele alındığında, bu sonuçlar CTPG'nin indüklediğiapoptozH22 hücrelerinde hem dışsal hem de içsel sinyal yolları yoluyla. Bir tümör fare modelinde, CTPG, H22 HCC'nin büyümesini önemli ölçüde bastırdı ve tümör farelerinin hayatta kalmasını büyük ölçüde geliştirdi. İlginç bir şekilde, CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)Doza bağımlı olarak, önceki çalışmamızla tutarlı olan Kunming farelerinden splenositlerin çoğalmasını teşvik etti [16]. Bu sonuçlar, CTPG'nin farelerde hem doğrudan antitümör etkisi hem de dolaylı bağışıklık geliştirme yoluyla H22 HCC'nin büyümesini baskılayabileceğini ileri sürdü.

Cistanche tülülozaÜrün:% s

Sonuçlar

CTPG(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)hem in vitro hem de in vivo olarak H22 hücrelerinin büyümesini baskılamış ve indüklenmişapoptozH22 hücrelerinde hem dışsal hem de içsel sinyal yolları yoluyla. Bu veriler, CTPG'nin(Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler)HCC tedavisi için potansiyel bir aday olabilir.

Kısaltmalar

Bax: BCL-2-ilişkili X proteini; Bcl-2: B hücreli lenfoma 2; CTPG:Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitler; HCC: hepatoselüler karsinom; HRP: yaban turpu peroksidazı; MTT: 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolyum bromür; PARP: poli (ADP-riboz)polimerazın DNA onarım enzimi; TCM: geleneksel Çin tıbbı; Δψm: mitokondriyal zar potansiyeli

Finansman

Bu çalışma, Xinjiang Uygur Özerk Bölgesi'nin JL'ye Üst Düzey Yetenek Giriş Projesi, JL'ye Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Hibesi (31460241) ve Xinjiang Üniversitesi Doktora Başlangıç ​​Fonu (BS160261'den XW'ye ve BS150236'ya) tarafından desteklenmiştir. YL).

Veri ve materyallerin mevcudiyeti

Bu çalışma için ham veriler, ilgili yazara makul bir talep üzerine sağlanabilir.

Yazar katkıları

JL ve JL deneyleri tasarladı. PY, JL, AA ve YY deneyleri gerçekleştirdi. LX, XW ve YL verileri analiz etti. PY, JL ve JL taslağı yazdı. Tüm yazarlar nihai makaleye katkıda bulundu ve onayladı.

etik onayı

Hayvan çalışması, Xinjiang Üniversitesi, Sincan Biyolojik Kaynaklar ve Genetik Mühendisliği Ana Laboratuvarı Hayvan Deneyleri Etiği Komitesi tarafından onaylandı.

rekabet eden çıkarlar

Yazarlar, rekabet eden çıkarları olmadığını beyan eder.

Yayıncının Notu

Springer Nature, yayınlanan haritalarda ve kurumsal bağlantılarda yargı yetkisi iddiaları konusunda tarafsız kalır.

Yazar Ayrıntıları

¹Xinjiang Biyolojik Kaynaklar ve Genetik Mühendisliği Ana Laboratuvarı, Yaşam Bilimleri ve Teknoloji Koleji, Xinjiang Üniversitesi, 666 Shengli Yolu, Urumçi, Xinjiang 830046, Çin.²College of Life Science, Xinjiang Normal University, 102 Xinyi Road, Urumqi 830054, Xinjiang, China.³Xinjiang Tıp Üniversitesine Bağlı Tümör Hastanesi, Urumçi 830011, Çin.

Cistanche tülülozaÜrün:% s

İtibaren: 'Cistanche tübüloza feniletanoid glikozitlerteşvik etmekapoptozPengfei Yuan1 ve ark.

---Yuan ve diğerleri. BMC Tamamlayıcı ve Alternatif Tıp (2018) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1

Referanslar

1. Global Burden of Disease Cancer Collaboration, Fitzmaurice C, Allen C, Barber RM, Barregard L, Bhutta ZA, Brenner H, Dicker DJ, Chimed-Orchir O, Dandona R, et al. Küresel, bölgesel ve Ulusal Kanser İnsidansı, ölüm oranı, kaybedilen yaşam yılı, engellilikle geçirilen yıllar ve engelliliğe göre ayarlanmış yaşam yılları, 32 Kanser grubu, 1990-2015: küresel hastalık yükü çalışması için sistematik bir analiz. JAMA Oncol. 2017;3:524–48.

2. Chen W, Zheng R, Baade PD, Zhang S, Zeng H, Bray F, Jemal A, Yu XQ, He J.Cancer istatistikleri in China, 2015. CA Cancer J Clin. 2016;66:115–32.3. Avrupa Karaciğer Araştırmaları Derneği, Avrupa Kanser Araştırma ve Tedavi Örgütü. EASL-EORTC klinik uygulama kılavuzları: hepatoselüler karsinomun yönetimi. JHepatol. 2012;56:908–43.

4. Roayaie S, Obeidat K, Sposito C, Mariani L, Bhoori S, Pellegrinelli A, Labow D, Llovet JM, Schwartz M, Mazzaferro V. Hepatosellüler kanserin rezeksiyonu 2 cm'den küçük veya eşit: iki batı merkezinden elde edilen sonuçlar. Hepatoloji. 2013;57:1426–35.

5. Ting CT, Cheng YY, Tsai TH. Sıçanlarda hepatotoksisite, Histopatoloji ve Farmakokinetik üzerine geleneksel Hepatoprotektif formülasyon ile Sorafenib arasındaki bitki-ilaç etkileşimi. Moleküller. 2017;22:E1034.

6. Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, Santoro A, Raoul JL, Forner A, ve diğerleri. İleri hepatosellüler karsinomda sorafenib. N Engl J Med. 2008;359:378–90.

7. Cheng AL, Kang YK, Chen Z, Tsao CJ, Qin S, Kim JS, Luo R, Feng J, Ye S, Yang TS, ve diğerleri. Asya-Pasifik bölgesindeki ileri hepatoselüler karsinomalı hastalarda sorafenib'in etkinliği ve güvenliği: faz III randomize, çift kör, plasebo kontrollü bir çalışma. Lancet Oncol. 2009;10:25–34.

8. Shi Z, Song T, Wan Y, Xie J, Yan Y, Shi K, Du Y, Shang L. Cerrahi olmayan hepatoselüler karsinom tedavisi için geleneksel böcek Çin ilaçlarının kombine kemoterapisinin sistematik bir incelemesi ve meta-analizi. Sci Rep.2017;7:4355.

9. Yang Z, Liao X, Lu Y, Xu Q, Tang B, Chen X, Yu Y. Geleneksel Çin tıbbı ile ek tedavi, hepatosellüler karsinomda sonuçları iyileştirir ve olumsuz olayları azaltır: randomize kontrollü çalışmaların bir meta-analizi. Kanıta Dayalı Tamamlayıcı Alternatif Med. 2017;2017:3428253.

10. Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR. Kemirgenlerde Cistanche Deserticola'nın neden olduğu anti-nosiseptif ve antiinflamatuar aktivite. J Etnofarmakol. 2002;83:177–82.

11. Wu CR, Lin HC, Su MH. Sulu ekstraktlarla tersine çevrilmesiCistanche tübülozaAlzheimer hastalığı benzeri sıçan modelindeki davranışsal eksikliklerden: amiloid birikimi ve merkezi nörotransmitter işlevi için alaka düzeyi. BMC Tamamlayıcı Alter Med. 2014;14:202.

12. Jiang Y, Tu PF. Cistanche türlerinde kimyasal bileşenlerin analizi. JChromatogr A. 2009;1216:1970–9.

13. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Çöl bitkisinden hepatoprotektif aktiviteye sahip asillenmiş feniletanoid oligo glikozitlerCistanche tubulosa.Bioorg Med Chem. 2010; 18:1882–90.

14. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF.feniletanoid glikozitlerTarim çölünde yetiştirilen Cistanche Deserticola'nın gövdelerinden anti-inflamatuar aktiviteler ile. Fitoterapia.2013;89:167–74.

15. Deng M, Zhao J, Tu P, Jiang Y, Li Z, Wang Y. Ekinakozit, SHSY5Y nöronal hücrelerini TNF kaynaklıapoptoz. Eur J Pharmacol. 2004;505:11–8.

16. Li J, Li J, Aipire A, Gao L, Huo S, Luo J, Zhang F.feniletanoid glikozitleritibarenCistanche tübülozaindüksiyonu ile hem in vitro hem de in vivo olarak B16-F10 hücrelerinin büyümesini inhibe eder.apoptozmitokondriyal bağımlı bir yolla. J Kanser. 2016;7:1877–87.

17. Shang HS, Chang CH, Chou YR, Yeh MY, Au MK, Lu HF, Chu YL, Chou HM, Chou HC, Shih YL, et al. Curcumin, DNA hasarına neden olur ve HeLa insan rahim ağzı kanseri hücrelerinde ilişkili protein ekspresyonunu etkiler. Oncol Rep. 2016;36:2207–15.

18. Wang R, Zhang Q, Peng X, Zhou C, Zhong Y, Chen X, Qiu Y, Jin M, Gong M, Kong D. Stellettin B, G1 tutuklamasına neden olur,apoptozve PI3K/Akt/mTOR yolunu bloke ederek insan küçük hücreli olmayan akciğer kanseri A549 hücrelerinde otofaji. Bilim Temsilcisi 2016;6:27071.

19. Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Oksidatif stres: vücudun mitokondriye bağımlı ve mitokondriden bağımsız yollarıapoptoz. Ark Toksikol. 2013; 87:1157-80.

20. Zhang YS, Shen Q, Li J. Özofagus kanseri tedavisi için apoptotik mekanizmaları hedefleyen geleneksel Çin tıbbı. Acta Pharmacol Sin. 2016; 37:295–302.

21. Chong ZZ, Lin SH, Li F, Maiese K. Sirtuin inhibitörü nikotinamid, AKT, BAD, PARP ve mitokondriyal ilişkili "anti-apoptotik" yollar yoluyla akut anoksik yaralanma sırasında nöronal hücre sağkalımını arttırır. Curr Neurovasc Res. 2005;2:271–85.

22. Hu B, Wang SS, Du Q. Hepatokarsinomun önlenmesi ve tedavisi için geleneksel Çin tıbbı: tezgahtan yatağa. Dünya J Hepatol. 2015;7:1209–32.

23. Hu B, An HM, Wang SS, Chen JJ, Xu L. Çin bitkisel bileşiklerinin hepatoselüler karsinoma karşı önleyici ve terapötik etkileri. Moleküller. 2016;21:142.

24. Xu H, Zhao X, Liu X, Xu P, Zhang K, Lin X. Geleneksel Çin tıbbının hücresel apoptotik yolu hedefleyen antitümör etkileri. İlaç Des Devel Ther. 2015;9:2735–44.

25. Li-Weber M. HedeflemeapoptozÇin tıbbına göre kanserde yollar. Kanser Let. 2013;332:304–12.

26. Xu G, Shi Y.apoptozsinyal yolları ve lenfosit homeostazı. Hücre Araş. 2007;17:759–71.

27. Kuyruk SW, Yeşil DR. Mitokondri ve hücre ölümü: dış zar geçirgenliği ve ötesi. Nat Rev Mol Hücre Biol. 2010;11:621–32.

28. Galluzzi L, Kepp O, Kroemer G. Mitokondri: tehlike sinyalinin ana düzenleyicileri. Nat Rev Mol Hücre Biol. 2012;13:780–8.

29. Martinou JC, Youle RJ. mitokondriapoptoz: Bcl-2 aile üyeleri ve mitokondriyal dinamikler. Geliştirici Hücresi. 2011;21:92–101.