Cistanche Tubulosa, Apoptoz ve Glial Hücreden Kaynaklanan Nörotrofik Faktörün Düzenlenmesi Yoluyla Dopaminerjik Nöronları Korur: in vivo ve in vitro-Ⅱ

Davranış Testleri

Yüzme Testi (Zhu ve diğerleri, 2014)

Farelerde vücut hareketinin koordinasyonu Yüzme testi ile ölçüldü. Fareler ayrı ayrı 10 cm su içeren bir su tankına (25 cm yüksekliğinde ve 10 cm çapında) yerleştirildi ve 5 dakika boyunca hareketsiz kalma sürelerinin kaydedilmesi için sessiz bir ortamda test edildi.

Açık Alan Testi (Kawai ve diğerleri, 1998)

Lokomotor aktivitesi Açık alan testi kullanılarak ölçüldü. Fareler sessiz ve loş bir ortamda test edildi ve alt kısmında 6 cm x 6 cm ayırma ızgarası bulunan 30 cm x 30 cm x 15 cm şeffaf akrilik kap içerisine tek tek yerleştirildi. Farelere çevreye uyum sağlamaları için 10 dakika süre verildi ve ardından ortalama değerleri elde etmek için ızgara sayısının ambulasyonu ve bireysel farelerin yetiştirme sıklığı art arda beş kez ölçüldü.

CİNSEL FONKSİYONU GELİŞTİREN DOĞAL CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Beyin Dokusu Örneklemesi

Doku numunesi alınmadan önce fareler, suya serbestçe erişebilecekleri şekilde istenildiği kadar beslendiler ve art arda 14 gün boyunca ilaç müdahalesi aldılar. Her gruptan dört fare seçildi ve hızla başları kesildi. Her hayvandan SN (Bregma: -2,75 mm -2,92 mm) izole edildi ve buz üzerine yerleştirildi. Beyin dokuları, kanın uzaklaştırılması için %0,9% buz soğukluğunda sodyum klorür çözeltisi ile durulandı ve -80◦C'de saklanmadan önce filtre kağıdı üzerinde kurutuldu. Her gruptan dört fareye intraperitoneal olarak anestezi uygulandı ve göğüsleri açıldı. Daha sonra her hayvanın sol ventrikülüne bir infüzyon iğnesi yerleştirildi. Dolaşım sistemindeki kanı uzaklaştırmak için sağ atriyal eklenti kesildi ve ardışık perfüzyonu sağlamak için hayvana, karaciğer soluklaşana kadar 4◦C normal salin aşılandı. Sağ atriyumun akıntısı berraklaştığında, her hayvana %4 paraformaldehit fiksatifi perfüze edildi. Perfüzyondan sonra her hayvanın beyin dokusu dikkatlice parçalara ayrıldı ve 24 saat boyunca %4 paraformaldehit içerisinde sonradan sabitlendi. Sabit beyin dokuları daha sonra akan su altında durulandı, dereceli bir dizi etanol solüsyonunda kurutuldu ve ksilen solüsyonunda temizlendi. Bunu parafine batırma ve gömme takip etti.

HPLC Tarafından Ölçülen DA Miktarındaki Değişiklikler

Her gruptan nanotoz haline getirilmiş SN, 0%9 sodyum klorür çözeltisi (1:9 oran) içeren bir buz banyosuna yerleştirildi. Beyin dokusu, ultrasonik hücre bozucu kullanılarak homojenleştirildi ve süpernatantı elde etmek için 1200 rpm'de 20 dakika boyunca 4◦C'de santrifüj edildi. HPLC için 30◦C kolon sıcaklığında bir Hypersil AA-ODS kolonu (2,1 mm x 200 mm, 5 µm) kullanıldı. Floresan tespiti 280 nm λex ve 340 nm λem'de gerçekleştirildi. Enjeksiyon hacmi 10 µL idi.

İmmünohistokimya ile Tespit Edilen TH, GDNF, GFR 1 ve Ret Ekspresyonu

Her bir hayvandan bireysel beyin dokusunun parafin kesitleri (5 µm kalınlığında) izole edildi ve düzleştirilmesi ve cam slaytlara yapıştırılması için 40◦C'lik ılık su banyosuna yerleştirildi. Doku slaytlarının tümü 60◦C'lik bir fırında 3-6 saat süreyle inkübe edildi, ardından ksilen mum giderme, gradyan etanol dehidrasyonu ve sitrik asit tamponunda inkübe edilerek ve mikrodalgada 20 dakika ısıtılarak antijen geri kazanımı yapıldı. Doku slaytları daha sonra oda sıcaklığında 10 dakika boyunca %3 H2O2 solüsyonunda inkübe edildi. PBS'de üç kez yıkandıktan sonra doku slaytları, kapalı bir odada oda sıcaklığında 20 dakika boyunca normal serumla inkübe edildi. İmmünohistokimyasal boyama üreticinin talimatlarına göre yapıldı. Pozitif boyalı hücrelerdeki entegre optik yoğunluğun değerini hesaplamak için bir Motic Med 6.0 görüntü analizörü kullanıldı.

Farelerin Beyin Dokularında Western Blot Analizi

Bu çalışma, tirozin hidroksilaz (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 ve Bax'ın protein ekspresyonunu değerlendirdi. Her grubun beyin lizatı buz üzerinde 3{{10}} dakika boyunca homojenleştirildi, ardından 4 ◦C'de 20,000 rpm'de düşük sıcaklıkta santrifüjleme yapıldı. Süpernatantı toplamak için 5 dakika. Protein örnekleri yukarıda açıklandığı gibi %10 SDS-PAGE jeli kullanılarak sabit basınç altında ayrıldı. Birincil antikor konsantrasyonu: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml ve Bax 0,11 mg/ml. Prosedür yukarıdakiyle aynıydı.

ANTI-AGING ANTI-ALZHEIMER PHGS İÇİN DOĞAL CISTANCHE TUBULOSA%75 ECH %30 ACT %12

İstatistiksel Analiz

Bu çalışmada veri işleme ve analiz için SPSS 20.0 istatistik yazılımı kullanıldı. Parametre değerleri ortalama ± standart sapma (¯x ± S) olarak ifade edildi. Tek faktörlü veri analizi için ANOVA kullanıldı. Grupları karşılaştırmak için LSD veya Games-Howell testi kullanıldı. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

SONUÇLAR

C. tubulosa Nanopowder'ın Aktif Bileşenleri

200-400 nm tarama aralığında, C. tubulosa'daki ECH ve 330 nm'deki VER, 20 dakika içinde ortaya çıkan maksimum emilim zirvesine sahipti. ICA, 270 nm'de maksimum emilim zirvelerine sahipti ve 20 dakika sonra ortaya çıktı (Şekil 1A). Sonuçlar, negatif numunelerin tespite müdahale etmediğini gösterdi (Şekil 1B). Numuneler ve kontrol aynı kromatografik zirvelere sahipti ve negatif numunede hiç yoktu. Bu, numunedeki diğer bileşenlerin ölçülen bileşene müdahale etmediğini gösterdi. Ayrıca, üç bileşen ve bitişik tepe noktaları ayırma taban çizgisine ulaşabilmektedir ve ayırma derecesi 1,5'tan büyük olmuştur.

C. tubulosa Nanopowder, MES23.5 Hücrelerinde MPP+ -İndüklenen Sitotoksisiteyi Azalttı

MES23.5 hücrelerinin canlılığı, MPP+ konsantrasyonlarının artmasıyla önemli ölçüde azaldı. Şekil 2F, farklı MPP+ konsantrasyonlarının önemli sitotoksisitesini göstermektedir.

C. tubulosa nanotoz, MPP+-nin neden olduğu sitotoksisiteyi azalttı ve MES23.5 hücrelerinin canlılığını arttırdı. Şekil 2G, 10–250 µg/mL'lik C. tubulosa nanotoz dozajlarının, MPP+- ile tedavi edilen MES23.5 hücreleri üzerinde doza bağlı koruyucu etkiler gösterdiğini göstermektedir.

C. tubulosa Nanotozunun Sitomorfolojik Etkisi

Normal MES23.5 hücreleri iyi hücre yapışmasına sahipti ve net hücre sınırları ve sinapsları olan iğ şeklindeydi. MPP+-hasarlı MES23.5 hücreleri, zayıf hücre yapışması ve büzülme sergiledi ve birçoğu, kasılmış sinapslarla ortamda asılı kaldı. Bu hücreler toplanmış, büzülmüş ve içlerinde boşluklar bulunan yuvarlaklaşmıştı ve çekirdekler parçalanmış veya çökmüştü. Farklı dozajlardaki C. tubulosa nanotozu, araç grubunun hücre yapışmasını ve sinaptik klirensini geliştirerek MES23.5 hücrelerinin sitomorfolojisini farklı derecelerde iyileştirdi. Yüksek doz C. tubulosa tedavi grubundaki MES23.5 hücreleri normal kontrol grubuna benzer morfoloji gösterdi (Şekil 2A-E).

C. tubulosa Nanopowder'ın Hücrelerde TH Ekspresyonu ve Apoptoz Üzerine Etkisi

Şekil 3, araç grubundaki TH protein ekspresyonunda önemli bir azalmayı göstermektedir. TH protein ekspresyonu, farklı dozajlarda C. tubulosa ile tedavi edilen gruplarda farklı şekilde arttı. Ancak LSD testi, tedavi edilen üç grup arasında anlamlı bir fark olmadığını gösterdi.

Şekil 4, akış sitometrisi kullanılarak apoptoz değerlendirmesinin sonuçlarını göstermektedir. Araç grubundaki apoptoz oranı diğer gruplara göre anlamlı derecede yüksekti. Farklı dozajlarda C. tubulosa nanotozu ile tedavi edilen hücreler, araç grubuyla karşılaştırıldığında apoptotik oranda farklı derecelerde düşüş gösterdi. Orta ve yüksek doz C.tubulosa tedavi grubundaki hücreler, diğer C.tubulosa tedavi gruplarıyla karşılaştırıldığında apoptotik oranda en belirgin iyileşmeyi gösterdi. LSD testi, tedavi edilen iki grup arasında anlamlı bir fark olmadığını ancak düşük doz grubu arasında da anlamlı bir fark olduğunu gösterdi.

C. tubulosa Nanopowder'ın Hücrelerdeki Bcl2/Bax Protein İfadesi Üzerindeki Etkisi

Şekil 5, araç grubunun hücrelerinde Bcl2 proteininin ekspresyonunun, normal kontrol grubuyla karşılaştırıldığında önemli ölçüde düşük olduğunu göstermektedir. Buna karşılık, araç grubunun hücrelerinde Bax proteininin ekspresyonu, normal kontrol grubuna göre önemli ölçüde daha yüksekti. C. tubulosa tedavi grupları, MPP+- ile tedavi edilen MES23.5 hücrelerinde Bcl2 protein ekspresyonunda artış ve Bax protein ekspresyonunda azalma gösterdi. Tedavi edilen üç grup arasında LSD testinde önemli farklılıklar vardı. Bu etkiler doza bağımlıydı.

Davranış Testleri

Yüzme testinin sonuçları, araç grubundaki farelerin nispeten uzun hareketsiz sürelere sahip olduğunu ve bu sürenin zamanla arttığını ortaya koydu. 14. günde, araç grubundaki fareler, normal kontrol grubundaki farelere göre önemli ölçüde daha uzun bir hareketsiz süreye sahipti. Farelerin hareketsiz kalma süresi

düşük dozC. tubulosatedavi grubu, araç grubundaki farelerinkinden önemli ölçüde farklı değildi. Ancak yüksek doz C.tubulosa tedavi grubundaki farelerin hareketsiz kalma süresi, araç grubundaki farelerinkinden önemli ölçüde daha kısaydı.

Açık alan testinin sonuçları, farelerde MPTP'nin neden olduğu hasardan sonra, araç grubundaki farelerin, yetiştirme sıklığı ile gösterildiği gibi, spontan aktivite yeteneklerinde önemli bir düşüş gösterdiğini göstermektedir. 14-günlük bir yönetimden sonraC. tubulosa nanotozOrta ve yüksek doz tedavi gruplarındaki fareler, araç grubundaki farelere kıyasla önemli ölçüde daha yüksek yetiştirme frekanslarına sahipti (Şekil 6A, B).

C. tubulosa Nanopowder'ın Farelerde DA İçeriği Üzerine Etkisi

SN'nin DA içeriğindeki değişiklikler HPLC ile belirlendi. Araç grubunun beynindeki DA içeriğinin önemli ölçüde azaldığı tespit edildi. Düşük doz C.tubulosa tedavi grubundaki PD farelerinin beyinlerindeki DA içeriği, araç grubundaki farelerden önemli ölçüde farklı değildi. Fakat,C. tubulosa tedavisiPD farelerinin beyinlerindeki DA seviyelerini doza bağlı bir şekilde arttırdı. Yüksek doz C. tubulosa ile tedavi edilen PD farelerinin beyinleri, araç grubundaki farelerin beyinlerinden önemli ölçüde daha yüksek bir DA içeriğine sahipti (Şekil 6C).

C. tubulosa Nanopowder'ın Farelerde TH İfadesi Üzerindeki Etkisi

MPTP ile indüklenen PD farelerinin SN'sindeki TH pozitif hücrelerin sayısı ve TH protein ekspresyonunun seviyesi, kontrol grubundaki farelerle karşılaştırıldığında daha düşüktü. C.tubulosa tedavisinden sonra, MPTP ile indüklenen PD farelerinin SN'sindeki TH-pozitif hücrelerin sayısı ve TH protein ekspresyonunun seviyesi arttı; yüksek doz C.tubulosa tedavi grubu ile araç grubu arasında anlamlı bir fark oluştu. LSD testi ile; ve tedavi edilen üç grup arasında önemli farklılıklar vardı (Şekil 7).

C. tubulosa Nanotozunun Farelerde GDNF ve Reseptörleri, GFR 1 ve Ret'nin Protein Ekspresyonu Üzerindeki Etkisi

Pozitif boyalı hücrelerde GDNF ve reseptörleri GFR 1 ve Ret'in protein ekspresyonu immünohistokimya kullanılarak değerlendirildi. Farklı fare gruplarının SN'sindeki protein ekspresyon seviyelerini değerlendirmek için Western blot analizi kullanıldı. Farklı gruplara yönelik bulgular, iki tespit yöntemi kullanılarak benzerdi. Araç grubundaki farelerin SN'sindeki pozitif boyalı hücrelerde GDNF ve reseptör proteinleri GFR 1 ve Ret'in ekspresyonu, normal kontrol grubundaki farelere göre önemli ölçüde daha düşüktü. C. tubulosa tedavisinin farklı dozajları GDNF-, GFR 1- ve Ret-pozitif hücrelerin sayısını arttırdı (Şekil 8A–S).

Araç grubundaki farelerin SN'sinde GDNF, GFR 1 ve Ret'in protein ekspresyonu, kontrol grubundaki farelere göre önemli ölçüde düşüktü. Arıtma konsantrasyonlarının arttırılmasıC. tubulosa nanogücübu proteinlerin ekspresyonunu önemli ölçüde arttırdı. Yüksek doz C. tubulosa tedavi grubundaki farelerin SN'sinde GDNF, GFR 1 ve Ret'in protein ekspresyonu, araç grubundaki farelere göre önemli ölçüde daha yüksekti (P< 0.01; Figures 8T, U). 

C. tubulosa Nanotozunun Farelerde Bcl2/Bax'ın Protein Ekspresyonu Üzerine Etkisi

Araç grubundaki farelerin SN'sinde Bcl2 protein ekspresyonu önemli ölçüde azaldı ve Bax protein ekspresyonu önemli ölçüde arttı (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

TARTIŞMA

PD ve Apoptoz

PD nörodejeneratif bir hastalıktır. Zhang ve arkadaşlarına göre. (2005), prevalansın 55 yaş üstü Çin nüfusunda %10,7, 65 yaş üstü nüfusta ise %1,67 olduğunu belirtmektedir. Küresel yaşlanmanın hızlanmasıyla birlikte Parkinson hastalarının sayısı her yıl artmakta ve hastaların ailelerine ağır bir mali yük getirmektedir. ve genel olarak toplum. Beyinde dopaminerjik nöronlar esas olarak DA'nın sentezinde ve salgılanmasında rol oynar. Merkezi sinir sisteminde yaygın olarak dağılırlar ve esas olarak SN'de (%80) bulunurlar. TH, DA sentezi için anahtar hız sınırlayıcı enzimdir. Böylece TH aktivitesinin inhibisyonu DA sentezini azaltır (Huot ve Parent, 2007). Parkinson hastalığının ana patolojik ve biyokimyasal değişiklikleri, SN'deki dopaminerjik nöronların apoptozu, nigrostriatal DA'da önemli bir azalma ve dopaminerjik nöronlarda Lewy cisimciklerinin oluşumudur (Dexter ve Jenner, 2013). PH'nin etiyolojisi ilişkili genetik faktörleri, çevresel faktörleri ve sinir sisteminin yaşlanmasını içerir (Allam ve ark. 2005). Modern tıpta PD'nin patogenezi belirsizliğini koruyor. 1960'ların sonlarından beri levodopa replasman tedavisi Parkinson hastalığının tedavisinde başarıyla kullanılmış ve Parkinson tedavisinde önemli bir dönüm noktası olarak kabul edilmiştir. Ancak bu tedavinin uzun süreli uygulanması yan etkilere neden olmakta ve tedavi PH'nin altında yatan nedenleri tedavi etmemektedir (Del Sorbo ve Albanese, 2008). Bu nedenle dopaminerjik nöronların korunmasını hedefleyen yeni ilaç veya tedavi yöntemlerinin aktif olarak araştırılması Parkinson hastalığının tedavisinde büyük önem taşımaktadır.

Daha önceki çalışmalarda, terminal deoksinükleotidil transferaz aracılı dUTP çentik ucu etiketlemesinin uygulanması, Parkinson hastalarının SN'sindeki dopaminerjik nöronların 0.6%-4.8%'inin apoptoz gösterdiğini gösterdi (Mochizuki ve diğerleri, 1996). Elektron mikroskobu, dopaminerjik hücrelerde kromatik yoğunlaşma ve apoptotik cisimcikler dahil olmak üzere apoptotik özellikler gösterdi (Anglade ve diğerleri, 1997). Tompkins ve diğerleri. (1997) PH, AD ve yaygın Lewy cisimciği hastalığı (DLBD) olan hastalardan alınan beyin dokusu otopsilerinin ultrastrüktürel bir analizini gerçekleştirdiler. PH ve DLBD hastalarında SN'nin yoğun katmanında apoptotik cisimcikler buldular ve bu da PH ve ilgili hastalıklarda nöronal apoptozun kesin kanıtını sağladı. Bu nedenle dopaminerjik nöronlarda apoptozun azaltılması veya baskılanması PH tedavisi için temeldir.

Önceki çalışmalar MPTP'nin PH benzeri semptomlara neden olduğunu gösterdi. MPTP, kan-beyin bariyerini geçer ve astrositlerdeki B tipi monoamin oksidazlar tarafından metabolize edilir. Daha sonra DA taşıyıcısının protein alımı yoluyla dopaminerjik nöronların mitokondrisinde biriken toksik MPP+'ye dönüştürülür. Böylece mitokondriyal solunum zincirinin kompleks I aktivitesini ve ATP sentezini inhibe eden aşırı oksijensiz radikaller üretir. Bu olaylar ayrıca serbest radikal oluşumunu ve oksidatif stres reaksiyonlarını teşvik eder ve sonunda dopaminerjik nöronların dejenerasyonuna ve ölümüne yol açar. Dolayısıyla bu çalışmada, MES23.5 dopaminerjik nöronlarda in vitro bir araç oluşturmak için MPP+ ve karşılıklı doğrulama için bir araç faresini tetiklemek üzere MPTP kullanıldı. MTT tahlilinin sonuçlarına göre, MPP+, MES23.5 hücrelerinin canlılığını önemli ölçüde azaltmıştır; bu da MPP+'nın dopaminerjik nöronlar için sitotoksik olduğunu düşündürmektedir. Sonuçlar aynı zamanda C. tubulosa'nın anti-apoptotik proteinlerin ekspresyonunu etkili bir şekilde arttırdığını ve MPP+- ile indüklenen apoptozun artışını inhibe ettiğini de gösterdi.

PD ve GDNF

GDNF, ilk kez Lin ve arkadaşları tarafından izole edilen nörotrofik bir faktördür. (1993). Lin ve diğerleri. (1993) ayrıca GDNF'nin sıçanların orta beynindeki dopaminerjik nöronlar üzerinde spesifik beslenme etkilerine sahip olduğunu gösterdi. GDNF, neurturin (NTN), persephin (PSP) ve artemin (ART), GDNF ailesini oluşturur. Yapısal olarak benzer ve işlevsel olarak ilişkili salgı proteinleridir (Kotzbauer ve diğerleri, 1996; Baloh ve diğerleri, 1998; Milbrandt ve diğerleri, 1998; Woodbury ve diğerleri, 1998).

GDNF reseptörü iki bileşenden oluşur. İlk bileşen olan GFR, glikosilfosfatidilinositolün (GPI) dış zarına sabitlenir ve konneksinin yüzeyine sabitlenir. İkinci bileşen Ret proteinidir. Araştırmalar GFR'nin dört farklı tipinin olduğunu göstermiştir: GFR 1, GFR 2, GFR 3 ve GFR 4. GFR 1, GDNF'nin yüksek afiniteli bir reseptörüdür (Onochie ve diğerleri, 2000; Chen ve diğerleri, 2001; Lindahl). ve diğerleri, 2001). Ret proteini, GDNF'nin fonksiyonel bir reseptörüdür. GDNF'nin homodimer molekülü, kompleksler oluşturmak için doğrudan GFR 1'e bağlanır ve Ret ile etkileşime girerek Ret'in dimerizasyonu ve aktivasyonuyla sonuçlanır. Ret'in otofosforilasyonu nedeniyle Ret, birçok yaygın TH sinyal yolunu aktive eder. Ret proteininin yokluğunda GDNF, mRNA ekspresyonuna ve reseptör proteini GFR 1 yoluyla C-fos'un fonksiyonel aktivitesine ek olarak MAPK, PI-3 ve PLC-'nin protein fosforilasyonuna neden olur (He ve diğerleri, 2008).

Çalışmalar GDNF'nin dopaminerjik nöronlar üzerinde en güçlü koruyucu etkiye sahip olduğunu göstermiştir (Rangasamy ve diğerleri, 2010; Campos ve diğerleri, 2012). Dopaminerjik nöronlarda hasarı tetiklemek için MPTP ve 6-hidroksidopamin (6-OHDA) kullanan araçlarda GDNF, apoptozu azaltarak ve kök hücre farklılaşmasını teşvik etmek için aksonal büyümeyi teşvik ederek dopaminerjik nöronları korur (Lucas ve diğerleri, 2012; Littrell ve diğerleri, 2013). Lin ve diğerleri. (1993), GDNF'nin, nöronlarda DA alımını teşvik etmek için dopaminerjik nöronların canlılığını, farklılaşmasını ve aksonal büyümesini spesifik olarak desteklediğini gösterdi. Çalışma aynı zamanda GDNF'nin yalnızca akut toksisiteyi önlemekle kalmayıp aynı zamanda dopaminerjik nöronlardaki MPP+ veya 6-OHDA'nın uzun vadeli toksisitesini de hafiflettiğini, ayrıca stresli veya hasar görmüş hücrelerde hücre ölümünü önlediğini gösterdi (Yu ve diğerleri, 2010). Ek olarak GDNF, dopaminerjik nöronları retrograd dejenerasyondan kurtarmak için orta beyindeki dopaminerjik nöronlara doğru nöral kök hücre çoğalmasını ve farklılaşmasını destekledi (Lindsay, 1995).

Çalışmalar, SN'deki GDNF ifadesinin hayvan taşıtlarında önemli ölçüde azaldığını göstermiştir (Yang ve diğerleri, 2010). Bu durum PH sıçanlarında patogenez mekanizmalarından biri olabileceğini düşündürmektedir. MPTP ile indüklenen bir araç hayvanının lateral ventrikülüne veya striatumuna art arda üç ay boyunca 5-15 µg/gün GDNF enjeksiyonu, araç hayvanında dopaminerjik sistemin nigrostriatal onarımını destekledi (Grondin ve diğerleri, 2002). Hayvan taşıyıcılarında PD için GDNF tedavisine ilişkin çalışmalar, SN, kaudat çekirdek ve lateral ventrikül gibi farklı beyin bölgelerine intraserebral GDNF enjeksiyonunun, motor aktivitede azalma, kas sertliği ve kas sertliği dahil olmak üzere PD hayvan modelleriyle ilişkili hareket bozukluklarını iyileştirdiğini göstermiştir. titreme (Grondin ve diğerleri, 2002). Ancak GDNF doğrudan kan-beyin bariyerini geçemez. Bu nedenle, GDNF'nin lokal serebral enjeksiyonu, klinik uygulamada önemli risk ve zorluklar içerir. Kontrollü salımlı mikroküreler, sürekli salımlı kapsüller ve viral genler yoluyla ekzojen GDNF'yi uygulamaya yönelik uygulamalar halen araştırılmaktadır (Liang ve diğerleri, 2010; Yang ve diğerleri, 2010; Qiao ve diğerleri, 2012). Ekzojen GDNF'yi beyne sokmaya yönelik çeşitli tekniklerin sınırlamaları göz önüne alındığında, endojen GDNF'nin salınmasını destekleyen nöroprotektif ajanlar, klinik uygulama için önemlidir.

PD veC. tubulosaNanotoz

PH orta yaşlı erişkinlerde ve yaşlılarda daha sık görülür. Geleneksel Çin tıbbı teorisi, PD'nin öncelikle beyinde bulunduğunu ve hayati enerji ve kan yetersizliğine ek olarak esas olarak karaciğer ve böbrek yetmezliğinden kaynaklandığını düşünmektedir. Bu teoriye göre Parkinson tedavisi böbrek ve kemik iliğinin güçlendirilmesine odaklanmalıdır.Yang ve diğerleri. (2010)randomize, çift-kör ve plasebo kontrollü klinik çalışmalar kullandı ve Madopar ve böbrek tonlayıcı tarifler kullanılarak yapılan kombinasyon terapisinin Parkinson hastalarının motor fonksiyon bozukluklarını hafiflettiğini buldu. Tedavi sonucu Madopar'ın kullanıldığı tek bir tedaviden daha iyiydi. PD'de TCM monoterapisinin veya bileşik reçetesinin tedavi etkinliği, PD hayvan modellerinde ve klinik uygulamalarda doğrulanmıştır. Böbrekleri güçlendirmek ve kan dolaşımını teşvik etmek için geleneksel Çin tıbbı uygulamaları, Parkinson hastalığı için Madopar kullanılarak uygulanan monoterapinin dozajını azalttı. Bazı çalışmalar, TCM'nin PH semptomlarını iyileştirdiğini ve endojen GDNF ekspresyonunun teşviki ile yakından ilişkili olabilecek dopaminerjik nöronları koruduğunu ileri sürmüştür.Hong-Juan ve diğerleri, 2011; Qiao ve diğerleri, 2012).

Bu çalışmada kullanılan böbrek tonlayıcı bileşik,C. tubulosananotoz, içerdiğiCistanche, epimedyum, VeRizoma poligonati. Modern araştırmalar, kimyasal bileşiminCistancheMPTP'nin indüklediği PD farelerinde SN'deki dopaminerjik nöronları koruyan ve DA ile DA taşıyıcısının azalmasını engelleyen ECH'dir (Zhao ve diğerleri, 2010). Ayrıca DA'da 6-OHDA kaynaklı azalmayı önler ve striatal dopaminerjik nöronları korur (Chen ve diğerleri, 2007). Epimedium kaspaz-3'ın aktivasyonunu inhibe eder ve nöroprotektif rol oynar (Liu ve diğerleri, 2011). Epimedyumlu flavonoidler, nöral kök hücre proliferasyonunu ve farklılaşmasını etkili bir şekilde teşvik eder.Yao ve diğerleri, 2010).

Bu çalışmada,C. tubulosananotoz MPP artışını antagonize etti+doza bağımlı bir şekilde indüklenen apoptoz. TH ifadesini önemli ölçüde iyileştirdi.in vitroaraç ve dopaminerjik nöronlarda önemli anti-apoptotik etkilere sahipti. MPTP ile indüklenen araç fareleri davranış bozuklukları gösterdi ve PD'nin tipik patolojik özellikleri olan orta beyin dokularında ve DA seviyelerinde TH ekspresyonunu önemli ölçüde azalttı. Farklı dozajlarC. tubulosananotoz hareketsiz kalma süresini kısalttı, otonom aktiviteleri arttırdı, davranış bozukluklarını iyileştirdi, beyindeki DA düzeylerini yükseltti ve araçlarda TH ifadesini artırdı. Bu sonuçlar şunu önerdiC. tubulosaNanotoz, dopaminerjik nöronlarda koruyucu etkiler göstererek araçların davranışsal bozukluklarını iyileştirdi. Farklı dozajlarC. tubulosananopowder, araç farelerinin beynindeki GDNF proteini ve reseptör proteinlerinin ekspresyonunu arttırdı. Yüksek dozC. tubulosatedavi, Bcl2 ekspresyonunu önemli ölçüde arttırdı ve Bax ekspresyonunu azalttı; bu, şunu öne sürdü:C. tubulosananotozMPTP'den zarar görmüş fare beyninde GDNF ekspresyonunu ve salgılanmasını teşvik edebilir. Ek olarak, dopaminerjik nöronlarda nöroprotektif etkiler gösterebilir ve GDNF'nin nörotrofik destek rolleri yoluyla nöronal apoptozu en aza indirebilir.

Bu çalışma şunu gösterdi:C. tubulosananotoz her ikisinde de dopaminerjik nöronlarda koruyucu etkiler gösterdiin vitroVein vivove DA içeriğini geliştirmek için TH ifadesinin arttırılması. Aynı zamanda MPTP ile indüklenen araç farelerinde davranış bozukluklarını iyileştirdi, GDNF'nin protein ekspresyonunu ve SN'deki reseptör proteinlerini düzenledi ve PD farelerinde anti-apoptotik etkilere sahipti. Klinik etkilerinin altında yatan mekanizmaC. tubulosaPH'de nanotoz, beyindeki endojen GDNF içeriğinin arttırılmasını ve dolayısıyla dopaminerjik nöronlara verilen hasarın azaltılmasını içerebilir.

CİNSEL FONKSİYONU GELİŞTİRMEK İÇİN DOĞAL CISTANCHE TUBULOSA PHGS75% ECH 30% ACT 12