İki Tür Cistanche Deserticola'nın Ham ve Şarapla İşlenmiş Ürünlerindeki Sekiz Kimyasal Bileşenin İçerik Farklılıklarının UPLC II'ye Göre Karşılaştırılması
Jun 16, 2025
2. Yöntemler ve Sonuçlar
2.1 Kromatografik Koşullar
UPLC analizi bir cihaz kullanılarak gerçekleştirildi.Waters ACQUITY UPLC™ BEH C18 kolonu (100 mm × 2,1 mm, 1,7 μm parçacık boyutu). Mobil faz şunlardan oluşuyordu:metanol (A)Ve%0,1 formik asit sulu çözeltisi (B)aşağıdaki gradyan elüsyonu ile:
0–4 dk: %10 → %26 A
4–18 dk: %26 → %40 A
18–20 dk: %40 → %50 A
Akış hızı:0,3 mL/dak
Enjeksiyon hacmi:3 μL
Sütun sıcaklığı:35°C
Algılama dalga boyu:330 nm
2.2 Çözümlerin Hazırlanması
2.2.1 Karma Referans Çözümü
Aşağıdaki standart bileşikleri doğru şekilde tartın:cistanosid F, ekinekozit, cistanosid A, verbaskozit, tübülosid A, izoverbaskozit, 2'-asetilverbaskozit, Vetübülosit B. Aşağıdaki konsantrasyonlara (μg·mL⁻¹) sahip bir referans karışımı hazırlamak için %50 metanolde çözün:
Cistanoside F: 32,7
Ekinekozit: 102.4
Sistanosid A: 50,2
Verbaskozit: 80.6
Tubulosid A: 25,6
İzoverbaskozit: 86.3
2'-Asetilverbaskozit: 77,3
Tübülosit B: 60,8
2.2.2 Örnek Çözüm
Ham Cistanche dilimleriBitkinin yumuşatılması, dilimlenmesi ve kurutulmasıyla hazırlandı.
Şarapla buharda pişirilmiş Cistancheçiğ dilimlerin %30 pirinç şarabına batırılması, karışımın 12 saat buharda pişirilmesi, soğutulması ve tekrar kurutulmasıyla hazırlandı.
Yaklaşık olarak0.2 gKurutulmuş tozun bir kısmı (65 gözenekli bir elekten geçirilmiş), 50 mL'lik amber renkli bir balon jojede tartılmış, 25 mL %50 metanol ile ekstrakte edilmiş, 40 dakika boyunca sonikasyona tabi tutulmuş (250 W, 35 kHz) ve tekrar ağırlığa getirilmiştir. Çözelti bir filtreden süzüldü0,22 μm membranve süzüntü analiz için kullanıldı.
Not: H. Çöl Cistanche'si; G. Tubulosa Cistanche; RH. Cistanche Deserticola çiğ dilimleri; RG. Cistanche tubulosa çiğ dilimleri; ne? Şarapla pişirilmiş Cistanche Deserticola; WG. Şarapla pişirilmiş Cistanche tubulosa; Şekil 4 ila 7 aynıdır.
Şekil 1 Cistanche Deserticola ve Cistanche Tubulosa tıbbi malzemelerinin, çiğ dilimlerinin ve şarapla pişirilmiş resimlerinin resimleri
Çin'de satılan ünlü bir cistanche şarabı
Wecistanche'nin Destekleyici Hizmeti-Örnek Veya Toptan Satış Detayları Almak İçin Bize Ulaşın
E-posta:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
2.3 Ham ve Şarapla İşlenmiş Cistanche'deki 8 Ana Bileşiğin Kantitatif Analizi
2.3.1 Sistem Uygunluğu
Açıklanan kromatografik koşullar altında teorik plaka numarasıekinekozit exceeded 6000 with good resolution (>1.5). Karışık standart, çiğ çöl Cistanche ve şarapla işlenmiş numunelerin kromatogramları Şekil 2'de gösterilmektedir.
Tepe Tanımlaması:
Cistanoside F
Ekinekozit
Cistanosid A
Verbaskozit
Tubulosid A
İzoverbaskozit
2'-Asetilverbaskosit
Tübülosid B
Cistanche Deserticola
cistanche tubulosa
2.3.2 Doğrusallık ve Algılama Sınırları
Referans karışımının 0,1 ila 5,0 mL konsantrasyonlardaki seri seyreltmeleri kullanılarak standart kalibrasyon eğrileri oluşturuldu. Kalibrasyon eğrileri çizilerek oluşturuldukonsantrasyon (X)karşıtepe alanı (Y). Saptama sınırları (LOD, S/N=3) ve nicelik sınırları (LOQ, S/N=10) belirlendi ve test edilen aralıklar boyunca iyi doğrusallık doğrulandı.
2.3.3 Hassasiyet
Karışık referans çözeltisinin altı tekrarlı enjeksiyonu şunu gösterdi:bağıl standart sapmalar (RSD'ler)arasında değişen pik alanların%0,48 ila %2,14, mükemmel alet hassasiyetini gösterir.
2.3.4 Kararlılık
Örnek çözümlerham Cistanche tozu (Parti No. 160901)0, 2, 4, 8, 12 ve 24. saatlerde analiz edildi. 8 bileşiğin tümü için pik alanlarının RSD'leri şu aralıkta değişmektedir:%0,71 ila %1,93, onaylıyor24 saat içinde çözüm stabilitesi.
Tablo 1. Cistanche Malzemelerinin Örnek Bilgileri
| Kaynak Türleri | Örnek kimliği | Menşei | Parti Numarası |
|---|---|---|---|
| Cistanche Deserticola | H1 | İç Moğolistan | 160901 |
| H2 | Sincan | 1712301 | |
| H3 | Sincan | 1712305 | |
| H4 | Sincan | 1712306 | |
| H5 | Sincan | 1712307 | |
| H6 | İç Moğolistan | 1712308 | |
| H7 | Sincan | 180710 | |
| H8 | Sincan | 180710 | |
| H9 | Sincan | 180710 | |
| H10 | Sincan | 180711 | |
| Cistanche tubulosa | G1 | Sincan | 151201 |
| G2 | Sincan | 170301 | |
| G3 | Sincan | 1709001 | |
| G4 | Sincan | 170601 | |
| G5 | Sincan | 1712302 | |
| G6 | Sincan | 1712303 | |
| G7 | Sincan | 1712304 | |
| G8 | Sincan | 180710 | |
| G9 | Sincan | 180710 | |
| G10 | Sincan | 180712 |
| Ekinekozit |
| Cistanosid A |
| Verbaskozit |
2.3.5 Tekrarlanabilirlik
Aynı Cistanche grubunun bağımsız olarak hazırlanmış altı kopyası iyi bir tekrarlanabilirlik gösterdi. Ortalama içerik (mg·g⁻¹) ve RSD'ler aşağıdaki gibidir:
| Birleştirmek | Ortalama İçerik (mg/g) | RSD (%) |
|---|---|---|
| Cistanoside F | 0.24 | 1.24% |
| Ekinekozit | 4.49 | 0.25% |
| Cistanosid A | 0.56 | 1.93% |
| Verbaskozit | 2.52 | 1.40% |
| Tubulosid A | 0.59 | 1.15% |
| İzoverbaskozit | 1.49 | 0.71% |
| 2'-Asetilverbaskosit | 1.23 | 1.94% |
| Tübülosid B | 0.86 | 1.02% |
2.3.6 Kurtarma Testi
İyileşme ani artışlarla test edildialtı kopya Cistanche tozu (0,1 g)8 referans bileşiğinin bilinen konsantrasyonları ile. Ortalama geri kazanımlar arasında değişiyordu%95,56 ila %102,71, RSD'ler arasında%1,44 ve %2,97, belirtenmükemmel ekstraksiyon ve miktar belirleme güvenilirliği.
Not: A. Karışık referans; B. Ham Cistanche Deserticola; C. Şarapta haşlanmış Cistanche Deserticola; 1. Cistancheside F; 2. Ekinekozit; 3. Cistancheside A; 4.Verbascoside; 5. Tubulosid A; 6. İzoverbaskozit; 7. 2΄-asetilverbaskosit; 8. Tubulosid B.
2.3.7 Ham ve Şarapla İşlenmiş Cistanche'de Aktif Bileşiklerin Miktarının Belirlenmesi
Her numune iki kopya halinde test edildi. 8 hedef bileşiğin miktarı şu şekilde belirlendi:10 parti Cistanche Deserticola(çiğ ve şarapla işlenmiş) ve10 parti Cistanche tubulosa. Sonuçlar Tablo 3'te özetlenmiştir ve aşağıdaki hususlara ilişkin bilgiler sunmaktadır:
Bileşimdeki türe özgü farklılıklar
Şarap işleme sonrasında fitokimyasal içerikteki değişiklikler
Cistanche kalite kontrolü için analitik parmak izi alma
Tablo 2. Sekiz Bileşik için Kalibrasyon Eğrileri, Korelasyon Katsayıları (r), Doğrusal Aralıklar, LOD ve LOQ
| Birleştirmek | Kalibrasyon Denklemi | r | Doğrusal Aralık (μg·mL⁻¹) | LOD (μg·mL⁻¹) | LOQ (μg·mL⁻¹) |
|---|---|---|---|---|---|
| Cistanoside F | Y=4.89 × 10⁹X + 3.31 × 10³ | 0.9999 | 0,327–32,700 | 0.0521 | 0.1300 |
| Ekinekozit | Y=3.88 × 10⁹X + 1.71 × 10⁴ | 0.9999 | 1.024–102.400 | 0.0422 | 0.1339 |
| Cistanosid A | Y=5.08 × 10⁹X + 3.45 × 10³ | 0.9999 | 0,502–50,600 | 0.1006 | 0.4035 |
| Verbaskozit | Y=3.88 × 10⁹X + 3.43 × 10³ | 0.9999 | 0,806–80,600 | 0.0732 | 0.1871 |
| Tubulosid A | Y=4.42 × 10⁹X + 1.07 × 10³ | 0.9999 | 0,256–25,600 | 0.0865 | 0.2876 |
| İzoverbaskozit | Y=4.81 × 10⁹X + 5.29 × 10³ | 0.9999 | 0,863–86.300 | 0.0242 | 0.0734 |
| 2'-Asetilverbaskosit | Y=5.30 × 10⁹X + 2.99 × 10³ | 0.9999 | 0,773–77,300 | 0.0317 | 0.1024 |
| Tübülosid B | Y=5.17 × 10⁹X + 3.39 × 10³ | 0.9999 | 0,608–60,800 | 0.1794 | 0.3876 |
2.4 Cistanche Türleri Arasındaki Kimyasal Kompozisyonun Karşılaştırmalı Analizi
Araştırmak içinfitokimyasal farklılıklararasındaCistanche DeserticolaVeCistanche tubulosa, sekiz anahtarın konsantrasyonlarıfeniletanoid glikozitleritibaren10 parti ham ve şarapla işlenmiş numunekullanılarak her bir türün görselleştirilmesi sağlandı.kutu grafikleri (Şekil 3). İstatistiksel analiz şunu ortaya çıkardı:2'-asetilverbaskozitVetübülosit Bdiğer bileşiklerin çoğunun gösterdiğiönemli farklar (P <0.05)iki tür arasında hem ham hem de işlenmiş formlarda.
Özellikle:
İçindeham Cistanche, içeriğicistanoside F, ekinakozit, izoverbaskozit, tubulozit A ve verbaskositöyleydiönemli ölçüde daha düşükiçindeC. DeserticolanazaranC. tubulosa(P <0.05).
şarapla işlenmiş örneklerbenzer eğilimleri yansıtıyordu.
Özellikle,cistanosid Aşurada bulundudaha yüksek seviyelerC. Deserticolave öyleyditespit edilemeziçindeC. tubulosaolarak hizmet edebileceğini öne sürüyorpotansiyel işaretleyici bileşikTür farklılaşması için.
Cistanche Türlerinin PLS-DA Kemometrik Analizi
A Kısmi En Küçük Kareler Diskriminant Analizi (PLS-DA)sekiz bileşiğin konsantrasyon verileri kullanılarak yapıldı. Ortaya çıkanpuan grafikleri (Şekil 4A)her iki türden de ham ve işlenmiş numunelerinaçıkça ayrılmış gruplar halinde kümelenmemek.
Fakat,rastgele permütasyon testleri (Şekil 4B)model olduğunu ortaya çıkardıfazla donatılmamışgerçek değerleri olarakR²Y ve Q²permütasyonlu modellere göre daha yüksektir. Nispetendüşük Q² değerleritavsiye etmeksınırlı öngörülebilirlikmuhtemelen nedeniylegrup içi değişkenlikVeörtüşen bileşik aralıklarıHam ve işlenmiş formlar arasında.
Daha Fazla PLS-DA Modellemesi ve VIP Analizi
Her iki türün ham ve şarapla işlenmiş numuneleri için ayrı PLS-DA modelleri oluşturuldu.türe özgü kimyasal farklılıklar. Aşağıdakiler gözlemlendi:
Puan grafikleri (Şekil 5A ve 5C)gösterdifarklı kümelenmearasındaC. DeserticolaVeC. tubulosahem ham hem de işlenmiş formlarda.
Model doğrulama (Şekil 5B ve 5D)aşırı uyum olmadan iyi tahmin gücü doğrulandı.
Projeksiyon (VIP) grafiklerinde Değişken Önem (Şekil 6A ve 6B)Tür ayrımcılığına katkıda bulunan temel bileşikleri belirledik:
İçinham numuneler: Cistanosid A, cistanosid F, ekinekozit, Veverbaskozitçok bilgilendiriciydi.
İçinşarapla işlenmiş örnekler: Cistanosid AVetübülosit Bbaskın roller oynadı.
2.5 Şarap İşlemenin Cistanche Fitokimyası Üzerindeki Etkisi
Partiler arasında bileşik içeriğindeki önemli farklılıklar nedeniyle,ikili karşılaştırmalarham ve şarapla işlenmiş numuneler arasında yapılmıştır.aynı parti. Sonuçlar, kullanılarak görselleştirildikeman grafikleri (Şekil 7), şunları ortaya çıkardı:
İçindeC. Deserticola, seviyeleri2'-asetilverbaskosit, cistanoside A, cistanoside F, ekinakozit, tübülozit A ve verbaskosit önemli ölçüde azaldıişlem sonrası (P <0.05), ikentübülosit B artırılmış.
İçindeC. tubulosa, seviyeleri2'-asetilverbaskosit, ekinakozit ve verbaskositAyrıcaazaldı, sırasındaizoverbaskozit ve tübülozit B artırılmışönemli ölçüde (P <0.05).
Bu bulgular şarap işlemeninhidroliz, izomerizasyon, veyakimyasal dönüşümaktif maddelerden oluşur.
3. Tartışma
göreÇin Farmakopesi'nin 2020 baskısı, Cistanche Deserticolaen azını içermeli0.3%birleştirilmiş içeriğininekinekozit ve verbaskozit, halbukiCistanche tubulosaen azını içermeli1.5%bu iki bileşikten. Bu çalışmada, bir parti (180710) hariç tüm ham ve işlenmiş numuneler bu standartları karşıladı.
Aksinepartiden partiye değişkenlikher tür içinde (tubulosid A ve izoverbaskozid gibi bazı bileşikler 10 kata kadar farklılık gösterir), iki tür arasında bileşik içeriğinde istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar tutarlı bir şekilde gözlemlendi. Bu şunu doğruluyortür kökeni önemli bir faktördürfitokimyasal kompozisyonu etkilemektedir.
Ek olarak,cistanosid Aöyleydiyalnızca şurada tespit edildiC. Deserticolave yokC. tubulosabunu bir hale getiriyoruztürlerin kimlik doğrulaması için değerli işaretleyiciözellikle farmakognostik veya kalite kontrol ortamlarında.
🔬 Şarap İşlemenin Kimyasal Bileşime Etkisi
Şarap işlendikten sonra her iki tür de tutarlı bir eğilim gösterdi:
Azalan seviyelerile ilgili:
Cistanoside F, ekinakozit, cistanosid A, verbaskozit, tübülozit A ve 2'-asetilverbaskozit
Artan seviyelerile ilgili:
Tubulosid B ve izoverbaskozit
Bu eğilimler şunlardan kaynaklanabilir:kimyasal hidroliz, bozulma, veyayapısal yeniden düzenlemebuharlama işlemi sırasında. İlginç bir şekilde,Değişikliklerin büyüklüğü ve yönü partiler arasında değişiklik gösterdimuhtemelen aşağıdaki farklılıklar nedeniyle:
Başlangıç bileşik konsantrasyonları
Bitki morfolojisi (boyut, kalınlık)
İşleme koşullarına duyarlılık
Bu, aşağıdakilerin önemini vurgulamaktadır:işleme parametrelerinin standartlaştırılmasıve yürütmekpartiye özel kalite değerlendirmeleriBitkisel hazırlık sırasında.
