Şap Hastalığı Aşısı için Bağışıklık Düzenleyici ve Adjuvan Olarak Cistanche Deserticola YC Ma'dan Ham Polisakkaritler

Daha fazlası için lütfen iletişime geçinoscar.xiao@wecistanche.comdaha fazlası için

Soyut

Cistanche Deserticola YC Ma (CD), sağlık sorunları için ideal bitkisel ilaçlardır. Bu çalışmada, CPCD'nin aktivasyon üzerindeki modülatör aktiviteleri,dentritik hücreler(DC'ler) ve şap hastalığı aşısı (FMDV) için adjuvan potansiyeli değerlendirildi. olmadan CPCDsitotoksisitefenotipik belirteçleri ve antijen alımını yukarı regüle ederek indüklenen DC aktivasyonu. TLR-2 veya TLR-4 antikorları, DC'lerde CPCD aracılı CD40 ve CD86 ve ayrıca IL-6 ve IL-1 düzeylerini bastırdı. CPCD, MAPK'lerle ilgili moleküllerin ve NF-KB'nin fosforilasyonunu indükledi. Farelerde FMDV ile birlikte kas içinden enjekte edildiğinde, CPCD, FMDV'ye özgü antikoru, lenfosit proliferasyonunu, efektör T hücrelerini arttırdı. Spesifik olarak, CPCD, CD4 artı IFN-, CD8 artı IFN- ve CTL yanıtının daha yüksek ifadeleriyle gösterildiği gibi Th1 yanıtını ortaya çıkardı. CPCD, DC'lerde MHC-II, CD80, CD86 ve CD40 ifadelerini geliştirdi ve Treg frekansını düşürdü. Bu nedenle, CPCD, DC aktivasyonunu TLR-2/TLR-4 ile ilgili MAPK'ler ve NF-κB yolları aracılığıyla modüle ederek daha güçlü hümoral ve hücresel tepkileri etkili bir şekilde uyarabilir.

Daha fazla bilgi için lütfen buraya tıklayın

giriiş

ÇoğupolisakkaritlerŞifalı bitkilerden elde edilen türler, düşük toksisiteleri ve geniş spektrumlu bağışıklık güçlendiricileri nedeniyle adjuvanlar alanında artan ilgiyi çekmiştir (Chen ve Huang, 2018; He ve diğerleri, 2020). Birçok araştırmacı, birçok aşı için yardımcı adaylar olarak şifalı bitkileri başarıyla kullanmıştır. Astragalus polisakkarit, Panax ginseng polisakkarit, Poria cocos polisakkarit ve lentinan dahil olmak üzere tipik polisakkaritler, çeşitli bulaşıcı hastalıkların aşılarında adjuvan olarak yaygın şekilde kullanılmaktadır (P. Li & Wang, 2015; Rey Ladino, Ross, Cripps, McManus ve Quinn, 2011; B. Sun ve diğerleri, 2018). Cistanche Deserticola YC Ma (Çince'de C. Deserticola, "Rou Cong-Rong") geleneksel olarak Çin Farmakopesi'ne göre Geleneksel Çin Tıbbında (TCM) hastalıkların tedavisi için tonik bir bitkisel takviye olarak yüzyıllardır kullanılmaktadır (S. Li , Wu ve Le, 2021; Yong ve Tu, 2009). In vivo ve in vitro çalışmalar, C. Deserticola ekstraktlarının birçokfarmakolojik fonksiyonlaryorgunluğu gidermek dahilantienflamatuvar, nöroprotektif, anti-viral ve immünomodülatör işlevler (Fu, Fan, Wang ve Gao, 2018; Tian Wang, 2012). C. Deserticola'nın aktif bileşenleri olan C. Deserticola'dan elde edilen polisakkaritlerin, bağışıklık tepkisinin modülasyonu ve antioksidatif anti-inflamatuar ve anti-yorgunluk fonksiyonları (Dong, Yao, Fang ve Ding) dahil olmak üzere geniş kapsamlı biyolojik aktivitelere sahip olduğu kanıtlanmıştır. , 2007; W. Zhang ve diğerleri, 2016). 2018 ve 2019'da, C. Deserticola'nın (CPCD) ham polisakkaritlerinin, Th1/Th2 immün yanıtlarını destekleyen OVA antijeni için bir adjuvan olarak hareket ettiğini gösterdik. CPCD, Toll benzeri reseptör 4 (TLR-4) aracılığıyla DC aktivasyonunu indükleyebilir (Zhang ve diğerleri, 2018). CPCD'nin ayrıca farelerde influenza aşısına karşı IFN salgılaması ve IgG2a üretimi de dahil olmak üzere Th1 bağışıklık tepkilerini ortaya çıkardığı bulundu (Zhao, Lian, Wang, Li ve Zhang, 2019). Bu nedenle, CPCD'nin neden olduğu immün yanıtın altında yatan mekanizmayı ve CPCD'nin inaktive FMDV üzerindeki immüno-güçlendirici etkisini ortaya çıkarmak gerekir.

Şap hastalığı (FMD), yüksek ekonomik kayıplara ve sosyal sonuçlara yol açabilmesi nedeniyle hayvanlarda önemli bir viral hastalıktır. İnaktive FMD aşıları (FMDV), FMD'nin en etkili kontrol önlemleridir. Mevcut inaktive edilmiş FMDV güvenlidir ancak düşük antikor üretimi, kısa antikor kalıcılığı süresi ve ayrıca domuzlarda zayıf bağışıklık tepkileri nedeniyle zayıf immünojeniktir (Y. Cao, Lu ve Liu, 2016; Doel, 2003). Daha yüksek aşı dozları veya artırılmış tedavi süreleri, farklı enjeksiyon yolları (kas içi aşıya karşı deri içi aşılama) ve hızlandırılmış doz programları, aşıların koruyucu etkinliğini geliştirmek için önemli stratejiler olarak kullanılmıştır. Artan kanıtlar, adjuvanların bulaşıcı hastalıklara karşı aşı etkinliklerini artırabileceğini göstermiştir (Steven G. Reed, Orr ve Fox, 2013; N. Zhang ve diğerleri, 2010). Yeni adjuvanlar ve bunların FMDV'ye dahil edilmesi immünojenisiteyi artırabilir ve hatta koruma süresini iyileştirebilir (Y. Cao, 2014; Dar, Kalaivanan, Sied, Mamo ve Kondabattula, 2013). Şu anda, uyarlanmış bir bağışıklık tepkisi ile immünojenisiteyi en üst düzeye çıkarabilen güvenli ve etkili adjuvanlar geliştirmeye yönelik birçok çaba sarf edilmektedir (Pulendran & O'Hagan, 2021). Aşılar için çeşitli adjuvanlar gereklidir. Geleneksel adjuvanlarla karşılaştırıldığında, TCM'den elde edilen polisakkarit adjuvanları, lenfositleri, sitokinleri ve antikor seviyelerini modüle ederek ve daha güçlü hücresel ve hümoral immün yanıtlar üreterek FMDV üzerinde immüno-güçlendirici etkiler uygulamaya yardımcı olabilir.

Dendritik hücrelerin (DC'ler) aktivasyonunun, adaptif bağışıklık tepkilerini başlattığı ve Th1/Th2 bağışıklık dengesini düzenlediği kanıtlanmıştır (Kapsenberg, 2003). Yeni adjuvanların DCS üzerindeki etkisinin açıklığa kavuşturulması gerekmektedir. TCM polisakkaritleri, MHC II, CD80, CD86 ve CD40 dahil DC'ler üzerindeki yüzey moleküllerinin ekspresyonunu iyileştirebilir ve IL-6 ve IL{{ gibi pro-inflamatuar sitokinlerin seviyesini artırabilir. 8}} (J. Li, Li ve Zhang, 2015). TCM polisakkaritlerinin immünomodülatör aktiviteleri, DC'ler üzerindeki membran reseptörlerini doğrudan bağlayarak elde edilir (Jiang, Zhu ve Jiang, 2010). Başka bir deyişle, CPCD'nin immünoadjuvan aktivitesi, DC'ler üzerindeki immünomodülatör etkiler ile ilişkilidir. Ek olarak TLR'ler, DC'lerin aktivasyonunu ve işe alınmasını teşvik eden ve B hücresi ve T hücresi tepkilerini tetikleyen sentinel reseptörlerdir. Mitojenle aktive olan protein kinaz (MAPK) ve nükleer faktör kappa-B (NF-κB) yolları, TLR'lerin aşağı akış yönündeki kritik yollarıdır ve bu yolları aktive etmek, IL-6 ve IL{{15} dahil olmak üzere proinflamatuar sitokinlerin üretimini indükleyebilir. } (Akira & Takeda, 2004). Bu nedenle, enfeksiyona karşı immün hücre yanıtlarını anlamak amacıyla TLR ile ilişkili aşağı akış yollarını araştırmak gereklidir.

Bu çalışmada, hedeflenen hayvanların uygunsuz kullanımı nedeniyle adjuvan ve aşı potensi arasındaki bir ilişkiyi belirlemek için FMDV laboratuvarında genellikle model hayvan olarak ICR faresi seçilmiştir ve bir FMDV adjuvanı olarak CPCD, keşfetmek için in vitro ve in vivo olarak araştırılmıştır. TLR-2/TLR-4-ilgili aşağı akış MAPK'leri ve NF-κB yolları tarafından DC'lerin etkinleştirilmesindeki rolü. Bu çalışma, hedeflenen hayvanlarda FMDV için bir polisakarit adjuvanı olarak CPCD'nin potansiyelinin yanı sıra CPCD tarafından immünomodülatör aktivitelerin indüksiyon mekanizmalarının anlaşılması için temel sağlar.

araç ve yöntemler

C. Deserticola (No. CD17042001) tanımlaması Profesör Jiang He tarafından sağlandı. İnaktive edilmiş FMD viral O-serotip 146S antijeni ve ISA-206 adjuvanı Tecon Biology Co., Ltd. (Çin) tarafından nazikçe sunuldu. Fetal sığır serumu (FBS), Biological Industries'dendi. RPMI 1640 ortamı, GIBCO'dan (ABD) satın alındı. polimiksin B (PMB), Lipopolisakkarit (LPS), 3-(4,5-dimetil tiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazolyum bromür (MTT) Sigma ürünü. Hücre Sayma Kiti-8 (CCK-8) Biosharp'tan (Çin) alındı. Murin granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF) PeproTech'ten (ABD) temin edilmiştir. IL-6 ve IL-1 kitleri Boster'dan (Çin) alındı.

Golgistop, Cytofix/Cytoperm, Perm/Wash tamponu ve CD3, CD4, CD8, CD44, CD11c, MHC-II, CD80, CD86, CD40'a karşı antikorlar BD Biosciences'dan (ABD) alındı. Nükleer ve sitoplazmik ekstraksiyon kitleri ve BCA protein niceleme kitleri Cwbiotech'ten (Çin) alındı. Anti-TLR-2 ve anti-TLR-4 antikorları Novus Biologicals'dan (ABD) satın alındı. MAPK'ler ve NF-KB yolu kitleri, Cell Signaling Technology'den (ABD) alındı. Southern Biotech'ten (ABD) yaban turpu peroksidaz etiketli anti-fare/tavşan antikorları (IgG/IgG1/IgG2a). eBiosciences'dan (ABD) Treg boyama kiti.

sonuç

Nötr karbonhidrat içeriği yüzde 50.53 ± yüzde 1.28 ve asidik karbonhidrat içeriği yüzde 17.81 ± 0.51 olarak belirlendi. CPCD'nin ortalama moleküler ağırlığı (Mw), tutma süresi ile 46.77 kDa olarak hesaplandı (Şekil 1A). CPCD'nin monosakarit bileşimi, CPCD'nin başlıca şeker bileşenlerinin yüzde 33.17, yüzde 28.98, yüzde 16.39, yüzde 10.97, yüzde 8.05, yüzde 2.42 molar yüzdelerinde Glc, Ara, Gal, Rha, GlaA ve Man olduğunu ortaya koymaktadır (Şekil 1B). ). Şekil 1C, CPCD'nin FT-IR spektrumunu gösterir. 3383.64 cm-1'deki markalar hidroksil grubundan kaynaklanmaktadır. Alkil grubunun absorpsiyon bantları 2926.97 cm-1 ve 1417.99 cm-1'de gözlendi. Karbonil grubunun absorpsiyon bantları 1635.56 cm-1'de gözlendi. 1257.06'dan 1032.02 cm− 1'e kadar olan sinyaller, piranoz halkalarının varlığını gösterdi. MAPK'lerin ve NF-KB yollarının CPCD tedavisi ile aktive edilip edilmediğini daha fazla araştırmak için DC'ler farklı bir zamanda CPCD ile uyarıldı ve iki yola dahil olan anahtar proteinlerin ifadeleri incelendi. CPCD, zamana bağlı bir şekilde JNK, ERK ve p38'in fosforilasyonunu indükledi ve JNK, ERK ve p38'in fosforilasyon seviyeleri 15-30 dakika sonra en yüksek seviyedeydi (Şekil 5A D). Ek olarak, sitoplazmik NF-KB p65, IκB, IKK / ve nükleer NF-KB p65'in fosforilasyonu da zamana bağlı bir şekilde indüklenmiştir. Sitoplazmik p65, IκB ve IKK / 'nin fosforilasyon seviyeleri ve çekirdekteki p65 oranı, farklı zamanlardan sonra en yüksekti: p65 için 15-30 dakika, IκB için 30 dakika, IKK / için 60 dakika ve için 20 dakika p65'in çekirdekteki oranı (Şekil 5E-5 J).

şuradan ayıklanıyorJournal of Functional Foods 87 (2021) 104800 dergi ana sayfası: www.elsevier.com/locate/jff