İnsan Böbrek Perfüzyonu Sırasında Sitokin Emilimi Gecikmiş Greft Fonksiyonu ile İlişkili İnflamatuar Gen İmzasını Azaltır

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

John R. Ferdinand1,2|Sarah A.Hosgood2,3|Tom Moore2,3|Ashley Ferro1|Christopher J. Ward1|Tomas Castro-Dopico1|Michael L. Nicholson2,3|Menna R. Clatworthy1,2

1 Moleküler Bağışıklık Birimi, Cambridge Üniversitesi Tıp Bölümü, Moleküler Biyoloji Laboratuvarı, Cambridge, İngiltere

2 Ulusal Sağlık Araştırmaları Enstitüsü Organ Bağışında Kan ve Nakil Araştırma Birimi, Cambridge, Birleşik Krallık

3 Cambridge Üniversitesi Cerrahi Bölümü, Cambridge, Birleşik Krallık

Transplantasyon, son dönem hastalarının çoğu için optimal tedavidir.böbrekhastalıkancak organ kıtlığı büyük bir zorluktur. Marjinal organları yenilemek için normotermik makine perfüzyonu (NMP) kullanılmıştır; bununla birlikte, NMP'nin organlara fayda sağlayabileceği mekanizmalar iyi anlaşılmamıştır. Aynı donörden elde edilen insan böbreği çiftlerini kullanarak, NMP'nin etkisini soğuk depolama ile küresel çevre üzerindeki etkisini karşılaştırdık.böbrektranskriptome. Soğuk depolamanın, inflamatuar yol genleri ve oksidatif fosforilasyon (OXPHOS) gibi enerji üretim süreçleri için gerekli olanlar dahil olmak üzere gen ekspresyonunda küresel bir azalmaya yol açtığını bulduk. Buna karşılık, NMP sırasında, OXPHOS genlerinin ve ayrıca bir dizi immün ve inflamatuar yol genlerinin belirgin bir şekilde yukarı regülasyonu vardı. Daha sonra nakledilen NMP uygulanan böbreklerden alınan biyopsileri kullanarak, uzun süreli gecikmiş greft fonksiyonuna (DGF) sahip organlarda daha yüksek inflamatuar gen ekspresyonunun meydana geldiğini bulduk. Bu nedenle, proinflamatuar sitokinleri uzaklaştırmak için bir hem-adsorber (HA) kullandık. Bu zayıflatılmış enflamatuar gen ekspresyonu, OXPHOS yolu genlerini arttırdı ve DGF ile ilişkili bir gen imzasının ekspresyonunu azaltmada potansiyel olarak klinik olarak önemli etkilere sahipti. Birlikte, verilerimiz perfüzattan proinflamatuar mediatörlerin adsorpsiyonunun organ canlılığını artırabilecek potansiyel bir müdahaleyi temsil ettiğini göstermektedir.

ANAHTAR KELİMELER:klinik araştırma/uygulama, gecikmiş greft fonksiyonu (DGF), donörler ve bağış: merhum,böbrek(allogreft) işlev / işlev bozukluğu,böbrekhastalık: bağışıklık / inflamatuar, böbrek

Cistanche bitkisi böbrek fonksiyonlarını iyileştiriyor

1. GİRİŞ

Böbrektransplantasyon, çoğu hasta için optimal tedaviyi temsil eder.son evreböbrekhastalıkhem kalite hem de nicelik açısından yararları vardır.1 Organ kıtlığı büyük bir zorluktur ve mevcut böbrek sayısını artırmak için merhum dolaşım ölümü (DCD) donörlerinin ve genişletilmiş kriter donörlerinin (ECD) kullanımı dahil olmak üzere çeşitli stratejiler kullanılmıştır. ), her ikisi de ölen beyin sapı ölümü (DBD) donörü ile karşılaştırıldığında daha yüksek gecikmiş greft fonksiyonu (DGF) oranları ile ilişkilidir.2,3 DCD böbreklerinde, dolaşımın kesilmesi sürecinde sıcak iskemiye maruz kalma, DGF'ye önemli bir katkı sağlar. . DGF, interlökin (IL)1 ve IL18'in oluşumuna yol açan NLRP3 inflamatuar düzeneği yoluyla doğuştan gelen bağışıklık aktivasyonunu uyarabilen iskemik tübüler hücre hasarı veya ölümü nedeniyle oluşur.4-6 Gerçekten de, idrarda inflamatuar sitokinlerin varlığı, biyobelirteç olarak kullanılanakutböbrekincinmeve DGF.7-9

Normotermik makine perfüzyonu (NMP), tamamlayıcı ve nötrofiller de dahil olmak üzere dolaşımdaki bağışıklık bileşenlerinin yokluğunda, nakledilen organların sıcak, oksijenli kırmızı kan hücreleriyle perfüze edilmesini sağlar.10-14 Bu süreç, marjinal organları15 değerlendirmek ve " Ulusal bir organ tahsis servisi aracılığıyla yapılan bir teklifin ardından başlangıçta reddedilen böbreklerin transplantasyonunu kolaylaştırmak için organları yenileyin.16 Daha önceki NMP deneyimimiz, DCD böbreklerinde DGF'yi önlemedeki etkinliğini değerlendirmek için randomize kontrollü bir çalışmanın gerekçesini sağladı,17 ancak NMP'nin transplant böbreklerine fayda sağlayabileceği mekanizmalar tam olarak anlaşılmamıştır. Ayrıca, ek manipülasyon olup olmadığı sorusuböbrekNMP sırasında, örneğin proinflamatuar sitokinlerin ve kemokinlerin perfüzattan uzaklaştırılması, organın transplantasyondan önce optimize edilmesinde ek faydalar sunabilir, insan böbreklerinde ele alınmamıştır, ancak domuz NMP çalışmamız umut verici sonuçlar göstermiştir.18

Burada, insanın transkriptomik analizini kullanarak bu iki soruyu ele almak için tarafsız bir yaklaşım izledik.böbrekGen ekspresyonundaki global değişiklikleri değerlendirmek için NMP'nin başında ve sonunda alınan biyopsiler. Tek bir donörden alınan insan böbreği çiftlerini kullandık ve aynı genetik arka plana sahip organlarda farklı müdahalelerin etkisinin karşılaştırılmasını sağladık ve bu değişikliklerin greft sonucunun tahmini üzerindeki etkisini değerlendirebildik.

Cistanche özü yararı: akut önlemeböbrekincinme

2. SONUÇLAR

2.1. Eşleştirilmiş böbrekler genetik olarak benzerdir ve müdahaleleri değerlendirmek için faydalı bir modeldir.

Organ korunması ve NMP ile ilişkili transkripsiyonel değişiklikleri, her biri beş çift böbrek içeren iki bağımsız çalışmada araştırdık ve toplam 10 çift/20 insan böbreği oluşturduk. Bunlardan ikisi DBD'den ve sekizi DCD donörlerindendi (Tablo S1, S2 ve Şekil S1). Bu çalışmalarda, müdahale öncesi ve sonrası (soğuk depolama veya NMP) kortikal biyopsiler aldık ve RNA dizilimini (RNA-Seq) kullanarak transkripsiyonel ortamı araştırdık. Aynı böbrekten eşleştirilmiş böbrek ve eşleştirilmiş biyopsilerin kullanımıböbrekbiyolojik varyasyonu kontrol etmemize ve bu karıştırıcıyı analizden çıkarmamıza izin verdi (Şekil S2A). bunu onayladıkböbrekçiftler ortak bir transkripsiyonel manzara (Şekil S2B) ile ve her birine farklı müdahaleler uygulayarak başlar.böbrekbir çiftte, biyolojik varyasyondan bağımsız bir müdahalenin etkisini inceleyebiliriz.

ŞEKİL 1 Soğuk depoya maruz bırakılan böbrekler, NMP'ye maruz kalanlara kıyasla gen ekspresyonunda sınırlı değişiklikler gösterir. Transplantasyonda kullanılması reddedilen bir çift böbrek elde edildi. Birböbrekstatik soğuk hava deposunda muhafaza edildi ve diğerine normotermik makine perfüzyonu (NMP) uygulandı. Başlangıçta ve 2 saat sonra dış korteksten biyopsiler alındı. B, başlangıç ​​ile karşılaştırıldığında belirtilen grup için 2 saatte gen ifadesinde bir değişikliği gösteren Volkan grafiği. Kırmızı noktalar, ayarlanmış bir P değerine sahip farklı şekilde eksprese edilmiş genleri gösterir<0.05 and="" the="" experimental="" group="" is="" indicated="" above="" the="" plot.="" c,="" gene="" set="" enrichment="" analyses="" of="" the="" differential="" expressions="" from="" b="" against="" the="" hallmarks="" pathways.="" only="" significant="" pathways="" (fdr="" q="" value=""><0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="" (nes).="" d,="" heatmap="" of="" the="" top="" 20="" significantly="" upregulated="" genes="" during="" nmp,="" genes="" are="" ranked="" by="" log2="" fold="" change.="" e,="" string="" analysis="" of="" the="" top="" 50="" genes="" upregulated="" during="" nmp.="" the="" color="" of="" each="" node="" indicates="" membership="" of="" each="">

ŞEKİL 2 NMP'yi takiben transkriptomun gecikmiş greft fonksiyonunun uzunluğu ile korelasyonu. Bir Gen ifadesi, randomize bir klinik araştırmanın parçası olarak NMP'yi takiben alınan biyopsilerde DGF'nin uzunluğu ile ilişkilendirildi. Sonuçla en büyük korelasyona sahip 1000 genin ekspresyon seviyeleri çizildi. B, GSEA, A'dan ayırt edici veri seti ile korelasyon için yapıldı. Yalnızca önemli yollar (FDR q değeri<0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="">

2.2. NMP, soğuk depolama ile karşılaştırıldığında OXPHOS ve inflamatuar yol genlerinde bir artışa neden olur

NMP'nin böbrekleri etkileyebileceği potansiyel mekanizmaları araştırmak için başlangıçta beş tane aldık.böbrekçiftler (n {{0}} DCD donörü ve n=1 merhum beyin sapı ölümü [DBD] donörü, Şekil S1, Tablo S1) ve bir kez 0 (0 saat) kortikal biyopsi gerçekleştirdi . Bu noktada, böbrekler daha önce 10 (Şekil 1A) açıklandığı gibi statik soğuk depoya veya NMP'ye randomize edildi. 2 saat sonra her iki böbrekten ikinci biyopsi alındı ​​ve RNA-Seq yapıldı. 0- ve 2-saatlik biyopsiler arasındaki gen ekspresyonunu karşılaştırırken, statik soğuk depoya yerleştirilen böbreklerin çoklu test için düzeltildiğinde herhangi bir tek genin ekspresyonunda istatistiksel olarak anlamlı bir değişiklik olmadığını bulduk (Şekil 1B). , sol panel). Buna karşılık, 2 saatlik NMP sırasında 956 gen yukarı regüle edildi ve 353 gen aşağı regüle edildi (Şekil 1B, sağ panel). Daha sonra ortak bir yoldaki gen gruplarının ifadesindeki değişiklikleri değerlendirdik, herhangi bir bireysel gen yerine onlarca veya yüzlerce geni karşılaştırdık, böylece biyolojik bireyler arası varyasyonun analiz üzerindeki etkisini daha da azalttık. Bu, işlevsel olarak önemli yollarda, o yoldaki her bir genin ifadesinin, istatistiksel anlamlılığa ulaşmak için yeterli büyüklükte değiştirilmediği değişiklikleri ortaya çıkardı. Bu gen seti zenginleştirme analizi (GSEA), soğuk depolamanın bir dizi metabolik yol üzerinde önemli bir etkisi olduğunu göstermiştir (Şekil 1C, sol panel). Özellikle, ATP üretmek için gerekli bir anahtar yol olan oksidatif fosforilasyonda (OXPHOS) yer alan genlerde belirgin bir azalma oldu.19 Buna karşılık, OXPHOS, NMP sırasında önemli ölçüde yukarı regüle edilen yollar arasındaydı (Şekil 1C, sağ panel), potansiyel faydalarıyla hücre canlılığı ve hücresel homeostazın restorasyonu için. Ek olarak, NMP sırasında, en büyük artışı gösteren "NFkB yoluyla TNF sinyalleşmesi" ile, bağışıklık veya enflamatuar süreçlerde yer alan bir dizi yolak indüklendi. Buna uygun olarak, TNF'nin yanı sıra IL1B ve nötrofil toplayan kemokinler CXCL8 (IL8) ve CXCL2, 2-saatlik NMP biyopsilerinde en fazla düzenlenmiş genler arasındaydı (Şekil 1D). En üstteki 50 yukarı regüle edilmiş genin dizi analizi, dört ana düğümde kümelenen biyokimyasal olarak ilişkili genlerin yukarı regülasyonunu ortaya çıkardı; IL8 ve nötrofil toplayan kemokinler, İnflamasomla ilişkili genler, NFkB sinyali ve transkripsiyonel düzenleme (Şekil 1E). Not olarak, DBD ve DCD böbrekleri başlangıçta transkripsiyonel olarak benzerdi (Şekil S2C) ve NMP sırasında değişen gen yolları DBD ve DCD böbreklerinde benzerdi (Şekil S2D). Birlikte, analizimiz, NMP sırasında, organ için potansiyel olarak faydalı etkileri olan, enerji üretimini destekleyen genlerin ekspresyonunun arttığını, ancak aynı zamanda zararlı olabilecek pro-inflamatuar genlerin indüklendiğini göstermektedir.

Cistanche tubulosa özü: böbrek fonksiyonunu iyileştirir

2.3. Uzun süreli gecikmiş greft fonksiyonu ile ilişkili NMP böbreklerinde inflamatuar yol genleri

Soğuk depolama ve NMP sırasında meydana gelen transkripsiyonel değişiklikleri klinik sonuçlarla ilişkilendirmek için, şu anda etkinliğini değerlendiren randomize bir klinik araştırmanın parçası olarak NMP geçirmiş 33 DCD böbreğinden alınan biyopsilerde RNA-Seq uyguladık.17 daha sonra nakledilen çalışmanın NMP koluna randomize edilmiş bir böbrek alt kümesi (Tablo S3, Şekil S1). DGF, DCD böbreklerinde daha yaygındır ve klasik olarak transplantasyondan sonraki ilk haftada diyaliz gereksinimi olarak tanımlanır. Bununla birlikte, nakilden hemen sonraki dönemde, bazı hastalar hiperkalemi için tek bir diyaliz atağı alırlar ve bu, mutlaka önemli akut tübüler nekroz varlığını yansıtmaz. Bu nedenle, transplant cerrahisi ile son diyaliz seansı arasındaki zamanla (yani, DGF süresi) gen ekspresyonunu ilişkilendiren bir model kullandık. Bu, nakil sonrası ilk 24 saatin ötesinde diyaliz gerektiren nakillerde daha belirgin transkripsiyonel değişikliklerin (Şekil 2A) yanı sıra "NFkB yoluyla TNFA sinyali" ve "enflamatuar yanıt" yolları dahil olmak üzere enflamatuar yol genlerinin ekspresyonu arasında önemli bir pozitif korelasyon gösterdi ve DGF'nin uzunluğu, nakil sonrası daha uzun süreli DGF yaşayan böbreklerde bu yolların daha fazla zenginleşmesiyle (Şekil 2B). Tersine, DGF'nin uzunluğu, "OXPHOS" yolu genlerinin ekspresyonunun büyüklüğü ile negatif olarak ilişkilidir (Şekil 2B). Birlikte ele alındığında bu veriler, NMP'yi takiben, enflamatuar yol genlerinin daha düşük ekspresyonuna ve "OXPHOS" yol genlerinin daha yüksek ekspresyonuna sahip böbreklerin, uzun süreli DGF posttransplantına daha az duyarlı olduğunu gösterir. Bu, NMP sırasında meydana gelen moleküler değişikliklerin hem faydalı (OXPHOS yolu genlerinin indüklenmesi) hem de zararlı (inflamatuar yolak genlerinin indüklenmesi) etkilerinin olabileceği sonucunu destekleyecektir.

2.4. NMP sırasında idrar çıkışı ve renal kan akışı, OXPHOS ve inflamatuar yol genleri ile farklı ilişkiler gösterir.

NMP sırasında üretilen idrar miktarı, organ kullanım kararlarını yönlendirmek için kullanılan cerrahi kalite değerlendirme puanlarında yer alan bir dizi parametreden biridir15, ancak NMP sırasında yüksek idrar çıkışının böbrek için gerçekten iyi bir prognozu ve altta yatan moleküler yolakları işaret edip etmediğini gösterir. yüksek idrar çıkışı olan böbrekler belirsizdir. NMP geçiren toplam 10 böbrekte (yalnızca NMP böbrekler, Tablo S1 ve S2, Şekil S1), 2-saatlik perfüzyon süresi boyunca 0 ila 340 ml arasında bir dizi idrar çıkışı gözlemledik (Şekil 3A sol panel). Not olarak, iki bağımsız deneyde beş böbrekte NMP sırasında değişen yolları karşılaştırdığımızda, deneysel tasarımımızın tekrarlanabilirliğini ve bireysel genler yerine yolları karşılaştırmanın faydasını doğrulayan benzer yolların indüklendiğini (Şekil S3A) bulduk. Perfüzyon sonrası 2-saatlik biyopsilerde, 11 genin ifadesi, bu süre boyunca üretilen idrar hacmi ile önemli ölçüde koreledir. Bunlar, artan idrar çıkışı ile pozitif korelasyon gösteren ısı şoku proteinlerini (HSP'ler), HSPA1A, HSPA1B ve HSPH1'i içeriyordu (Şekil 3A sağ panel). Gen seti zenginleştirme analizi, idrar çıkışının ayrıca "NFkB yoluyla TNF sinyali" yolağı genleri ile pozitif korelasyon gösterdiğini ve postperfüzyon biyopsilerinde OXPHOS genleri ile negatif korelasyon gösterdiğini gösterdi (Şekil 3B, S3C). Benzer şekilde, perfüzyon öncesi biyopsilerde, OXPHOS, bu böbreklerdeki idrar çıkışı ile negatif korelasyon gösterirken, "NFkB yoluyla TNF sinyali" ve "allogreft reddi" dahil olmak üzere bağışıklık aktivasyonu ile ilişkili yollar, idrar çıkışı ile pozitif olarak ilişkiliydi, bu da NMP'nin bu süreçler üzerinde çok az etkisi olduğunu düşündürdü. veya yüksek idrar çıkışı böbreklerde analiz edilen diğer yollarda (Şekil 3B, S3C-D). Uzun süreli DGF'li klinik örneklerimizde inflamatuar yol genlerinin indüklenmesi gözlemlendiğinden (Şekil 2B), bu veriler yüksek idrar çıkışının daha canlı, "sağlıklı" böbreklerde meydana geldiği dogmasına meydan okur ve aslında bu böbreklerin daha fazlasına sahip olabileceğini düşündürür. inflamatuar potansiyel, daha az enerji üretebilir ve bu, NMP sırasında önemli ölçüde değişmez.

Perfüzyon sırasında böbrek kan akışı da sonraki transplant işlevini yansıtabilecek bir parametre olarak değerlendirilmiştir.15 İncelenen 10 böbrekte, 2 saatlik perfüzyonda böbrek kan akışı 14.1 ila 168.8 ml/dakika arasında değişmiştir (Şekil 3C sol panel). Perfüzyon sonrası 2-saatlik biyopsilerde, HSPA1L dahil olmak üzere artan renal kan akışıyla (Şekil 3C sağ panel) sekiz gen önemli ölçüde pozitif korelasyon gösterdi, ancak bu gen listesi ile idrar çıkışı ile ilişkili olanlar arasında doğrudan bir örtüşme yoktu (Şekil 3A). ). Gen seti zenginleştirme analizi, yüksek renal kan akışının 0-saatlik biyopsilerde OXPHOS genleri ile pozitif korelasyon gösterdiğini, ancak en yüksek idrar çıkışına sahip olanların aksine perfüzyonun önemli bir etkisi olduğunu ve "OXPHOS" ile negatif bir korelasyon ile sonuçlandığını gösterdi. yol genleri 2 saat (Şekil 3D, Şekil S4A-B). Böbrek kan akışları, idrar çıkışının (Şekil 3B, Şekil S3C) aksine, hem 0- hem de 2-saatlik biyopsilerde (Şekil 3D, Şekil S4B) bir dizi immün ve inflamatuar gen yolu ile negatif korelasyon göstermiştir. Bu veriler birlikte, böbrek kan akışı ve idrar çıkışının daha canlı bir böbreğin eşdeğer göstergeleri olmayabileceğini, ancak öncekinin bir böbreğin daha sadık bir şekilde tanımlayabileceğini göstermektedir.böbrekuzun süreli DGF'ye sahip olma olasılığı daha düşüktür.

cistanche'nin yararları ve yan etkileri: iltihap önleyici

2.5. Perfüzyon devresine hem emicinin eklenmesi perfüzyon parametreleri üzerinde hiçbir etkiye sahip değildir, ancak NLRP3 ve IL1B dahil olmak üzere inflamatuar gen ekspresyonunu önemli ölçüde azaltır

analizleriböbrekperfüzat, hipotermik ve NMP sırasında proinflamatuar sitokinlerin ve kemokinlerin konsantrasyonunda önemli bir artış göstermiştir.20,21 Bu biyoaktif moleküller, daha fazla inflamasyonu indükleme potansiyeli ile böbreğe geri döner. Nakledilen analizlerimiz göz önüne alındığındaböbrekörnekler, NMP böbreklerinde TNF'ye bağlı genlerin uyarılmasının DGF ile ilişkili olduğunu gösterdi (Şekil 2B), perfüzyon devresinden sitokinlerin ve kemokinlerin çıkarılmasının böbrek için potansiyel yararlı etkilerle birlikte inflamatuar gen indüksiyonunu azaltabileceğini varsaydık. Böyle bir yaklaşım, sistemik inflamatuar yanıt sendromu olan hastalarda bir miktar etkinlik göstermiştir22,23 ve NMP uygulanan domuz böbreklerinde artan renal kan akışı ile ilişkilendirilmiştir.18 Bunu insan böbreklerinde test etmek için, beş böbrek çifti daha aldık ve 0, 2. ve 4. saatlerde alınan biyopsilerle 4 saat boyunca NMP (Şekil S1). Her durumda, moleküler ağırlığı 10-50 kDa olan molekülleri uzaklaştıran bir sitozol hem-adsorberi (HA), her çiftteki bir böbreğin perfüzyon devresine eklenmiştir (NMP artı HA) (Şekil 4A). Beklendiği gibi, HA'nın eklenmesi perfüzatta çeşitli sitokinlerin daha düşük konsantrasyonlarıyla sonuçlandı (Şekil 4B), ancak böbrek kan akışı, idrar çıkışı veya bileşimi, oksijen tüketimi ve asit-baz homeostazı üzerinde hiçbir etkisi olmadı (Şekil 4C, Tablo S4, S5). Bu nedenle, 4 saatten fazla NMP, HA'nın kalite değerlendirme puanları oluşturmak için şu anda klinik olarak kullanılan perfüzyon parametreleri üzerinde hiçbir etkisi olmadı, ancak gen ekspresyonu üzerinde önemli bir etkisi oldu; NMP'yi takiben, TNF ve IL6 dahil olmak üzere sırasıyla 2 ve 4 saatte 1794 ve 4026 genleri yukarı doğru düzenlenmiştir (Şekil 4D, E). ancak HA mevcutken bu sayının sadece yarısı (n=898 ve n=2606) arttı (Şekil 4D, Şekil S5A ve B). Aşağı regüle edilen genlerin sayısı da HA ilavesiyle azaltıldı (Şekil 4D). 4 saatlik NMP'den sonra, HA ilavesiyle 46 gen önemli ölçüde yukarı regüle edildi ve 181 aşağı regüle edildi (Şekil 4F). Bu zayıflatılmış transkripsiyonel yanıt, IL1B, NLRP3 ve CASP1 (Şekil 4G, Şekil S4B) gibi NLRP3 iltihaplanma aktivasyonu ile ilişkili genleri ve daha önce hayvan modellerinde böbrek hasarı ile ilişkilendirilen bazı nötrofil toplama kemokinlerini (Şekil S5C) içeriyordu.24,25 Bu, çözünür aracıların serbest bırakıldığını gösterir.böbrekorgan içinde inflamatuar genlerin de novo ekspresyonunu yeniden sirküle eder ve yönlendirir, ancak bu, bunların perfüzyon devresinden çıkarılmasıyla hafifletilebilir.

ŞEKİL 4 Normotermik makine perfüzyon devresine bir hem-adsorberin eklenmesi, perfüzat ve transkriptomdaki sitokin seviyesi üzerinde önemli etkilere sahiptir, ancak teçhizatta kaydedilen fiziksel parametreler üzerinde değildir. Aynı donörden bir çift insan böbreği alındı, çiftlerden birine 4 saat boyunca standart normotermik makine perfüzyon (NMP) protokolü uygulandı ve diğeriböbrekdevreye bir hem-adsorber eklenmesiyle NMP uygulandı. Perfüzyondan önce (0 saat), 2 saat sonra ve sonunda (4 saat) RNA-Seq için örnekler alındı. B, 4 saatlik NMP'den sonra perfüzattaki anahtar sitokinlerin konsantrasyonu. Çizgi böbrek çiftlerini gösterir. Sitokin ölçümleri, toplam perfüzat protein içeriğine göre normalleştirildi. Belirtilen P değeri, HA ilavesiyle sitokinlerin indirgenmesi için eşleştirilmiş bir t-testi testinden alınmıştır. C, Perfüzyon süresi boyunca idrar üretimi ve renal kan akımı (RBF). Greenline, tek başına NMP'yi ve hem-adsorber ilavesiyle turuncuyu gösterir. D, 2-saat veya 4-saat numunelerini ön(0-saat) numunelerle karşılaştırırken önemli ölçüde farklı şekilde ifade edilen genlerin sayısını gösteren Venn diyagramı. Kırmızı diyagramlar yukarı regüle edilmiş genler ve mavi aşağı regüle edilmiş genlerdir. Kesişim, aynı yönde her iki zaman noktasında da saygıyla ifade edilen genlerdir. E, doku transkriptomundan perfüzyon boyunca belirtilen genler için log2 normalleştirilmiş ekspresyon değerleri, standart hata çubukları gösterilir. F, 4 saatte NMP artı HA ile tek başına NMP'nin ikili karşılaştırması için Volkan grafiği. Kırmızı, ayarlanmış bir P değerine sahip diferansiyel olarak eksprese edilmiş genleri gösterir<0.05. g,="" as="" for="">

böbrek hastalıkları cistanche özü tedavi

2.6. Gecikmiş bir aşı fonksiyonuyla ilişkili gen imzasında bir azalma ile ilişkili HA

Gen seti zenginleştirme analizi, tek başına NMP ile karşılaştırıldığında NMP artı HA böbreklerinde "NFkB yoluyla TNF sinyalleşmesi" yolunda önemli bir düşüş gösterdi (Şekil 5A-B). Özellikle HA'nın mevcudiyeti, sadece inflamatuar gen ekspresyonunu azaltmakla kalmamıştır.böbrekama aynı zamanda, her ikisi de enerji üretimine katkıda bulunan OXPHOS ve yağ asidi metabolizması yollarını arttırdı (Şekil 5A-B). Bu nedenle, HA ile meydana gelen gen ekspresyon yollarındaki değişiklikler, her ikisi de daha kısa bir süre ile ilişkili olan "NFkB yoluyla TNFA sinyalini" azalttığı ve "OXPHOS" yolu genlerini arttırdığı için, etkilerinin klinik olarak faydalı olduğu sonucunu destekleyecektir. DGF süresi (Şekil 2B).

NMP'deki transkripsiyonel değişiklikler ile klinik sonuçlar arasındaki ilişkiyi daha fazla araştırmak için böbreklerde bulunan bir gen imzasını DGF ile iyileştirmeye çalıştık. 33 klinik deneme örneğinde (Şekil 5C, Veri S1) DGF'nin uzunluğu ile korele olan ilk 100 pozitif (UP) ve negatif (DOWN) düzenlenmiş geni (log kat değişimi ile sıralanmıştır) tanımladık. Daha yüksek idrar çıkışı olan numunelerde (Şekil 5D) artan DGF uzunluğu ile ilişkili gen imzasında önemli bir zenginleşme bulduk, bu da NMP sırasında yüksek idrar çıkışının böbrekleri daha uzun süreli DGF riski altında tanımladığını düşündürür. DGF imzası ile daha yüksek renal kan akışıyla ilişkili genler arasında istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki yoktu (Şekil 5E). Daha sonra, HA'nın NMP devresine eklenmesinin DGF "UP" ve "DOWN" gen imzalarının ifadesini etkileyip etkilemediğini ve nasıl etkilediğini değerlendirdik. Dikkat çekici bir şekilde, bu, artan DGF uzunluğu ile ilişkili gen imzasının ekspresyonunun, HA ilavesiyle önemli ölçüde azaldığını ve DGF'nin azalan uzunluğu ile bağlantılı imzanın, HA ilavesiyle önemli ölçüde arttığını gösterdi (Şekil 5F).

Genel olarak, tanımladığımız transkripsiyonel değişiklikler, böbrekte enerji üretimi üzerindeki etkileri açısından NMP'nin soğuk depolamaya göre potansiyel faydaları olduğunu göstermektedir. Bununla birlikte, perfüzyon sırasında, bazı biyoaktif moleküller böbrekten perfüzyon devresine salınır ve böbreğe yeniden girdiklerinde iltihabı harekete geçiren bir amplifikasyon döngüsü oluşturur. Bu moleküllerin uzaklaştırılması bu döngüyü kesintiye uğratır ve inflamasyonu azaltmak ve enerji üretimini arttırmak, NMP'nin faydalı etkilerini daha da arttırmak ve DGF'ye duyarlılığı azaltmak için faydalı olabilir (Şekil 6).

ŞEKİL 5 Jambon adsorbe edicinin eklenmesi, DGF ile ilişkili bir gen imzasını azaltır. Genesetlerin ayırt edici yollarına karşı 4 saat NMP'den sonra transkriptom'a HA ilavesinin etkisinin bir GSEA analizi. Yalnızca önemli yollar çizilir. Kırmızı noktalar pozitif zenginleştirmeyi ve mavi negatifi gösterir, noktanın boyutu FDR q değeriyle ters orantılıdır ve konum normalleştirilmiş zenginleştirme puanını (NES) gösterir. B, A'dan karşılaştırma için Hallmark veri tabanından anahtar yollar için GSEA'dan Zenginleştirme grafikleri. Çizgi, devam eden zenginleştirme puanını gösterir ve keman grafiği, her analizde kullanılan sıralanmış gen listesi boyunca geneset üye genlerinin dağılımını gösterir. C, DGF uzunluğu ile en büyük dört pozitif (UP) ve negatif (DOWN) korelasyonun ısı haritası ve DGF için gen ekspresyon imzasının bir parçası olarak kullanılır. Ek verilerde verilen tam DGF imzası. DF, DGF ile ilişkili gen imzası, 2-saat idrar çıkışının 2-saat transkriptom (D), 2-saat RBF korelasyonunda imzanın ifadesini araştırmak için GSEA ile kullanıldı. 2-saat transkriptom (E) ile ve HA ilavesinin 4 saatte transkriptom üzerindeki etkisi (F). A için arsalar

ŞEKİL 6 Grafiksel özet. A, Soğuk depolama sırasında, transkripsiyonda küresel bir azalma vardır. NMP sırasında, oksidatif fosforilasyon (OXPHOS) ve TNF, IL8 ve NFkB gibi inflamatuar yol genleri dahil olmak üzere bir dizi yolakta genlerin ekspresyonu yukarı doğru düzenlenir. B sol panel, NMP sırasında, inflamatuar mediatörler (sarı daireler) serbest bırakılır.böbrekperfüzyon çözeltisine alınır. Böbrekte proinflamatuar gen transkripsiyonunu yeniden sirküle eder ve uyarır ve enerji yolu üretim genlerinde bir azalma ile ilişkilidir ve ATP'yi azaltır. Sağ panel, Hem-adsorberin (HA) varlığı bu inflamatuar amplifikasyon döngüsünü kırar

Cistanche bitkisi böbrek fonksiyonlarını iyileştiriyor

3. TARTIŞMA

Verilerimiz, soğuk depolamanın gen ifadesindeki önemli değişiklikleri sınırlamada etkili olduğunu göstermektedir. Bu, soğuk depoda 18 saate kadar saklanan böbreklerin, IL1, TNF ve IL6.26 dahil olmak üzere proinflamatuar sitokinlerin ekspresyonunda çok az değişiklik gösterdiği kemirgen modelleriyle uyumludur. az sayıda aday genin ölçümü, belirli yollar içinde bulunan gen gruplarının ifadesini analiz etmemize izin verdi. Bu, soğuk depolanmış insan böbreklerinde ATP'nin azaldığını gösteren önceki bir çalışma ile paralel olarak, soğuk depolanan böbreklerde OXPHOS ve glikoliz yolu genlerinin ekspresyonunda önemli bir azalma olduğunu ortaya çıkardı ve bu böbreklerin ATP üretme kapasitesini potansiyel olarak azalttı.27 NFkB aracılığıyla TNF aktivasyonu ve potansiyel olarak faydalı olabilecek reaktif oksijen türleri yolları dahil olmak üzere, proinflamatuar yolakların sayısı da soğuk depolama sırasında aşağı regüle edildi. Bununla birlikte, soğuk depolamanın bu yolakları yalnızca geçici olarak tutması ve alıcıda reperfüzyonun ardından, NMP'de gözlendiği gibi inflamatuar gen ekspresyonunda benzer değişikliklerin meydana gelmesi olabilir.

NMP, OXPHOS ve glikoliz yolu genleri üzerinde soğuk depolamaya zıt bir etkiye sahipti ve ATP üretmek ve homeostazı yeniden sağlamak için hücresel kapasiteyi artırma potansiyeli ile ekspresyonlarını artırdı. Unutulmamalıdır ki, insan böbreklerinin hipotermik oksijenli perfüzyonunun, soğuk depolama 27 ile karşılaştırıldığında ATP seviyelerini arttırdığı gösterilmiştir, bu nedenle oksijenasyonun restorasyonu, normotermiden ziyade bu süreçler için ana uyarıcı olabilir. Bununla birlikte, OXPHOS yolu genlerinin artan ekspresyonu ile uzun süreli DGF arasındaki negatif korelasyona dair gözlemimiz göz önüne alındığında, bu değişikliklerin organ için faydalı olması muhtemeldir.

Hameed ve arkadaşlarının 28 yakın tarihli bir makalesi de NMP uygulanan üç böbrekte NMP'nin transkriptomik analizini gerçekleştirdi. Ne yazık ki, yazarlar verilerini kamuya açık hale getirmediler, bu nedenle veri setimizle derinlemesine bir karşılaştırma yapmak mümkün değil. Bununla birlikte, makaleleri, bulgularımız ile uyumlu olan IL1B, CXCL2 ve TNF dahil olmak üzere NMP sırasında bağışıklık tepkisi ile ilgili genlerin indüklendiğini gösterdi.

Klinik bir deneme bağlamında NMP uygulanan böbreklere ilişkin analizimizde, gen ekspresyon imzalarını DGF insidansından ziyade bir DGF uzunluğu ile ilişkilendirdik (transplantasyondan sonraki ilk hafta içinde diyaliz ihtiyacı olarak tanımlanır). Özellikle, 1 gün veya daha kısa süreli DGF'ye sahip böbrekler, DGF'si olmayanlara yüksek oranda transkripsiyonel olarak benzerdi ve muhtemelen gerçek DGF'den ziyade peri-operatif ilişkili hiperkalemiden kaynaklanan diyaliz ihtiyacını yansıtıyordu. Daha uzun bir DGF'nin, NFkB yolu genleri aracılığıyla TNFA sinyallemesinin daha yüksek ifadesi ve OXPHOS ile bağlantılı genlerin daha düşük ifadesi ile ilişkili olduğunu bulduk. Bu veriler, artmış OXPHOS'lu ve azalmış immün sinyallemeli böbreklerin, donör böbrekleri olarak daha iyi potansiyel sunabileceğini düşündürmektedir, ancak bu sonucun daha geniş bir prospektif çalışmada doğrulanması gerekmektedir.

Ayrıca NMP sırasında idrar çıkışı ve böbrek kanı ile ilişkili moleküler süreçleri de değerlendirdik. Bu parametreler daha önce perfüze böbreklerin kalite değerlendirme skorunu oluşturmak için bir dizi başka önlemle birlikte kullanılmıştır. Yüksek idrar çıkışı ve renal kan akımı değerlerinin daha canlı bir grefti yansıttığı düşünülmüştür.15 Verilerimiz, yüksek idrar çıkışı ve yüksek renal kan akımı ile ilişkili yolakların farklılık gösterdiğini ortaya koymaktadır ve aslında bu parametreler, inflamatuar yolaklarla kutupsal zıt ilişkiler göstermektedir. . Yüksek idrar çıkışı, bağışıklık yolu genlerinin daha yüksek ekspresyonu ile ilişkilendirilirken, yüksek böbrek kan akışı bu yolaklarla negatif olarak ilişkilidir. Ayrıca ürettiğimiz DGF gen imzasının, NMP sırasında yüksek idrar çıkışı olan böbreklerde zenginleştiğini bulduk, bu parametrenin mevcut dogmanın aksine daha uzun bir DGF riski taşıyan böbrekleri tanımlayabileceğini düşündürdü. Potansiyel bir açıklama, çok yüksek bir idrar çıkışının, idrarı konsantre etme yeteneğinden yoksun olan daha fazla tübüler hasara sahip böbrekleri yansıtmasıdır. Bu nedenle, idrar çıkışı ile ilgili olarak bir "Goldilocks etkisi" olabilir, burada düşük/az idrar çıkışı olan böbrekler, süzüntü oluşumunda önemli anormallikler olan böbrekler, çok yüksek idrar çıkışı olanlar, idrar konsantrasyonunu engelleyen önemli tübüler hasara sahiptir. Bu hipotezin daha sonra nakledilen daha fazla sayıda böbrekte test edilmesi gerekecektir.

4 saatlik NMP sırasında, böbrekte inflamatuar genlerin indüksiyonu vardı. Bununla birlikte, mevcut klinik uygulamanın sadece 1 saatlik NMP'yi içerdiğini ve bu etkinin daha kısa perfüzyon süresi boyunca belirgin olmayabileceğini belirtmekte fayda var. Bununla birlikte, daha uzun perfüzyon, oksijenasyonun ve enerji üretiminin restorasyonu açısından faydalar sağlayabilir ve bizim deneyimizde, bir sitozol HA'nın perfüzyon devresine eklenmesiyle immün gen indüksiyonunun olumsuz etkileri büyük ölçüde ortadan kaldırılabilir. Bu veriler, NMP sırasında böbrek tarafından üretilen enflamatuvar aracıların perfüzyon devresine girdiğini ve steril enflamasyonu alevlendirebildiğini ve bunların çıkarılmasının NMP sırasında gözlemlenen enflamasyon yolu genlerinin indüklenmesini iyileştirdiğini gösterir. Önemli olarak, HA ilavesinin klinik olarak daha kötü sonuçlarla ilişkili genlerin ekspresyonunu etkilediğini gösterdik. DGF gen imzamız, etkinliğini değerlendiren bir klinik araştırmanın parçası olarak NMP'ye tabi tutulan örneklerden türetilmiştir ve bu, eşleştirilmiş böbrek çalışmalarımızda gözlemlediğimiz değişiklikleri, transplant yapılan böbreklerdeki klinik son noktalarla sağlam bir şekilde ilişkilendirmemizi sağlar. Bununla birlikte, transplantasyon öncesi böbreklere uygulanmasının faydasını kesin olarak kanıtlamak için bir klinik araştırma bağlamında uygulanması gerekecektir. HA spesifik değildir ve organ için zararlı olanlara ek olarak yardımcı olan molekülleri de çıkarabilir. HA'nın böbrek transkriptomu üzerindeki net etkisinin faydalı göründüğünü bulduk, ancak kanıtlanmış, zararlı aracıları spesifik olarak ortadan kaldırmak için yapılan bir iyileştirme daha da etkili olabilir.

Kullandığımız böbrek çiftleri aynı bireydendi ve bu nedenle genetik olarak aynıydı ve donörün yaşamı boyunca benzer bir ortam yaşamıştı. 0 transkriptomlarının son derece benzer olduğunu doğruladık (Şekil S2 A, B). Bununla birlikte, bu biyopsiler böbreğin küçük bir bölümünü örnek alır ve böbrek çiftleri, örneğin kistler veya küçük damar hastalığı gibi patolojilerden asimetrik olarak etkilenebilir. Ek bir uyarı, burada sunulan müdahale deneylerinde kullanılan tüm böbreklerin nakil için reddedildiği ve bazılarının nakledilen organları kalite spektrumunun alt ucunda temsil ettiğidir. Yine de, beş böbrekli gruplardaki gen yollarını karşılaştırırken yüksek oranda tekrarlanabilir sonuçlar gözlemledik. Ayrıca DCD ve DBD'den alınan böbreklerin perfüzyona benzer bir tepki verdiğini gösterebildik. Bunu küratörlü NMP sonrası DGF imzamızla birleştirerek, potansiyel klinik faydaları tahmin edebildik. Bu deneysel yaklaşım, klinik deneyler için aday müdahalelerin rasyonel seçimini mümkün kılmak için potansiyel terapötik etkinlik için gelecekteki müdahaleleri taramak için klinik öncesi bir araç olarak kullanılabilir.

Özetle, çalışmamız NMP'ye maruz kalan insan böbreklerinin ilk global transkripsiyonel profilini sunmakta, soğuk depolama ile karşılaştırıldığında NMP'de aktive olan farklı moleküler yolakları çözmektedir ve NMP sırasında böbrekten üretilen veya salınan biyoaktif moleküllerin zararlı etkilerinin olabileceğini göstermektedir. HA eklenmesiyle tersine çevrilebilir. Ayrıca, bu müdahale, böyle bir müdahalenin gelecekteki bir klinik deneye uygulanması için güçlü bir mekanik gerekçe sağlayarak, uzun süreli DGF ile ilişkili genlerin ekspresyonunu azalttı. Verilerimizin ayrıca karaciğer ve akciğer transplantasyonu dahil olmak üzere böbreğin ötesindeki perfüzyon stratejileri için çıkarımları vardır, bu da biyoaktif moleküllerin perfüzatlardan uzaklaştırılmasının NMP'nin giderek daha fazla kullanıldığı bu bağlamlarda araştırılması gerektiğini düşündürmektedir. Son olarak, çalışmamız, eşleştirilmiş olarak küresel transkripsiyonel profillemenin faydasını vurgulamaktadır.böbreklerperfüze organlara yeni müdahaleleri değerlendirmek için; transkripsiyonel değişiklikler, protein bolluğundaki değişikliklerden önce gelir (geleneksel olarakböbrekyaralanma) ve on binlerce gen transkripti kolaylıkla ölçülebilir. Bu nedenle, RNA ölçümü, gelecekteki çalışmalara uygulanabilecek, transplantasyon için alınan insan organlarının hücresel fonksiyonunun erken ve hassas bir okumasını sağlama potansiyeline sahiptir.

TEŞEKKÜRLER

Yazarlar tüm organ bağışçılarına ve ailelerine teşekkür eder. Clatworthy Lab, MRC Moleküler Biyoloji Laboratuvarı tarafından sağlanan temel olanaklar için minnettardır. Bu çalışma, Cambridge Üniversitesi Araştırma Bilgi İşlem Hizmeti tarafından işletilen Cambridge Service for Data-Driven Discovery (CSD3) tarafından sağlanan kaynaklar kullanılarak, Mühendislik ve Fizik Bilimleri Araştırmasından Katman-2 finansmanı kullanılarak Dell EMC ve Intel tarafından sağlanan kaynaklar kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Konsey (sermaye hibesi EP/P020259/1) ve Bilim ve Teknoloji Tesisleri Konseyi'nden (www. Dirac. ac. Birleşik Krallık) DiRAC finansmanı.

AÇIKLAMA

Yazarların American Journal of Transplantation tarafından açıklandığı şekilde ifşa edecekleri bir çıkar çatışması yoktur.

YAZAR KATKILARI

JRF, SH, MLN ve MRC, çalışmayı tasarladı ve verileri yorumladı. JRF, SH, TM, CJW, AF ve TCD deneyleri gerçekleştirdi. JRF, SH ve MRC, şekiller ve tablolar oluşturdu. Ana taslağı MRC yazdı. JRF ve SH, yöntemleri ve şekil açıklamalarını oluşturdu, JRF, SH ve MLN el yazmasını düzenledi.

Cistanche faydası: böbrek fonksiyonunu iyileştirir

Referanslar:
1. Methven S, Steenkamp R, Fraser S. UK Renal Registry 19. Yıllık Rapor: Bölüm 5 2015'te Renal Replasman Tedavisi Alan Birleşik Krallık Erişkin Hastalarda Sağkalım ve Ölüm Nedenleri: Ulusal ve Merkeze Özgü Analizler. nefron 2017;137(1):117–150.
2. Summers DM, Johnson RJ, Allen J, et al. Birleşik Krallık'ta kardiyak ölümden sonra bağışlanan böbreklerin transplantasyonundan sonra sonucu etkileyen faktörlerin analizi: bir kohort çalışması. Lancet. 2010;376(9749):1303-1311.
3. Summers DM, Johnson RJ, Hudson A, Collett D, Watson CJ, Bradley JA. Birleşik Krallık'ta dolaşım ölümü sonrasında bağışlanan böbrek alıcılarında donör yaşı ve soğukta saklama süresinin sonuca etkisi: bir kohort çalışması. Lancet. 2013;381(9868):727-734.
4. Friedewald JJ, Rabb H. İskemik akut böbrek yetmezliğinde inflamatuar hücreler.BöbrekInt. 2004;66(2):486-491.
5. Kono H, Kaya KL. Ölmekte olan hücreler bağışıklık sistemini tehlikeye karşı nasıl uyarır? Nat Rev İmmünol. 2008;8(4):279–289.
6. Berry M, Clatworthy MR. Akut için immünoterapiböbrekincinme. İmmünoterapi. 2012;4(3):1–12.
7. Parikh CR, Coca SG, Thiessen-Philbrook H, et al. Ameliyat sonrası biyobelirteçler akut durumu öngörürböbrekyetişkin kalp cerrahisi sonrası yaralanma ve kötü sonuçlar. J Am Soc Nephrol. 2011;22(9):1748–1757.
8. Salon IE, Yarlagadda SG, Coca SG, et al. IL-18 ve üriner NGAL, diyaliz ve sonrasında greft iyileşmesini öngörür.böbrektransplantasyon. J Am Soc Nephrol. 2010;21(1):189–197.
9. Malyszko J, Lukaszyk E, Glowinska I, Durlik M. Akut bir form olarak gecikmeli aşı fonksiyonunun biyobelirteçleriböbrekyaralanmaböbrektransplantasyon. Bilim Temsilcisi 2015;5:11684.
10. Hosgood SA, Nicholson ML. Ex vivo normotermik perfüzyondan sonra insan böbrek transplantasyonunda ilk. Transplantasyon. 2011;92(7):735–738.
11. Yong C, Hosgood SA, Nicholson ML. Böbrek transplantasyonunda ex-vivo normotermik perfüzyon: geçmiş, şimdi ve gelecek. Curr Opin Organ Nakli. 2016;21(3):301–307.
12. Fisher A, Andreasson A, Chrysos A, et al. Birleşik Krallık akciğer transplantasyonunda Donör Ex Vivo Akciğer Perfüzyonunun gözlemsel bir çalışması: DEVELOP-UK. Sağlık Teknolojisi Değerlendirmesi. 2016;20(85)::1–276.
13. Slama A, Schillab L, Barta M, et al. Normotermik ex vivo akciğer perfüzyonu ile standart donör akciğer alımı: Prospektif bir randomize klinik çalışma. J Kalp Akciğer Nakli. 2017;36(7):744–753.
14. Nasralla D, Coussios CC, Mergental H, et al. Karaciğer transplantasyonunda randomize bir normotermik koruma denemesi. Doğa. 2018;557(7703):50–56.
15. Barlow AD, Hamed MO, Mallon DH, et al. Atılan İnsan Donör Pankreaslarının Kalite Değerlendirmesi için Ex Vivo Normotermik Perfüzyon Kullanımı. J Nakli miyim. 2015;15(9):2475–2482.

16. Hosgood SA, Saeb-Parti K, Hamed MO, Nicholson ML. Nakledilemez olarak kabul edilen ancak Ex Vivo Normotermik Makine Perfüzyonu ile Canlandırılan İnsan Böbreklerinin Başarılı Nakli. J Nakli miyim. 2016;16(11):3282–3285.
17. Hosgood SA, Saeb-Party K, Wilson C, Callaghan C, Collett D, Nicholson ML. Dolaşım ölümü böbrek transplantasyonundan sonra bağışta statik soğuk depolamaya karşı ex vivo normotermik perfüzyonun randomize kontrollü, açık etiketli bir denemesinin protokolü. BMJ Açık. 2017;7(1):e012237.
18. Hosgood SA, Moore T, Kleverlaan T, Adams T, Nicholson ML. Hemoadsorpsiyon, inflamatuar yanıtı azaltır ve deneysel bir modelde ex vivo renal perfüzyon sırasında kan akışını iyileştirir. J Transl Med. 2017;15(1):216.
19. Krebs HA. Trikarboksilik asit döngüsünün tarihi. Perspect Biol Med. 1970;14(1):154–170.
20. Hoogland ER, de Vries EE, Christiaans MH, Winkens B, Snoeijs MG, van Heurn LW. DCD'de makine perfüzyon biyobelirteç konsantrasyonunun değeriböbrektransplantasyonlar. Transplantasyon. 2013;95(4):603–610.
21. van Balkom BWM, Gremmels H, Ooms LSS, et al. Dolaşım Ölümünden Sonra Donörlerden Alınan Böbreklerde Gecikmiş Greft Fonksiyonunun Öngörücüleri Olarak Koruyucu Sıvıdaki Proteinler. Clin J Am Soc Nephrol. 2017;12(5):817-824.
22. Kogelmann K, Jurczak D, Scheller M, Druner M. Septik hastalarda CytoSorb tarafından hemoadsorpsiyon: bir vaka serisi. Kritik Bakım. 2017;21(1):74.
23. David S, Thamm K, Schmidt BMW, Falk CS, Kielstein JT. Septik şoklu bir hastada ekstrakorporeal sitokin uzaklaştırılmasının vasküler bariyer fonksiyonuna etkisi. J Yoğun Bakım. 2017;5:12.
24. Li L, Huang L, Vergis AL, et al. Nötrofiller tarafından üretilen IL-17, farede IFN-gama aracılı nötrofil göçünü düzenlerböbrekiskemi-reperfüzyon hasarı. J Clin Invest. 2010;120(1):331–342.
25. Hayama T, Matsuyama M, Funao K, et al. Sıçanlarda nötrofil elastaz inhibitörünün renal sıcak iskemi-reperfüzyon hasarı üzerindeki faydalı etkisi. Nakil İşlemi 2006;38(7):2201–2202.
26. Saat TC, Susa D, Roest HP, et al. Beyin ölümü ve kardiyak ölüm donörlerinden böbreklerde inflamatuar, sitoprotektif ve hasarlı gen ekspresyon profillerinin karşılaştırılması. Transplantasyon. 2014;98(1):15–21.
27. Ravaioli M, Baldassare M, Vasari F, et al. İnsan Marjinalinde 20 Saatten Fazla Soğuk İskemi Süresinden Sonra Adenozin Trifosfat (ATP) Seviyesini Geri Yükleme StratejileriBöbrekGreftler. Anne Nakli. 2018;23:34–44.
28. Hameed AM, Lu DB, Patrick E, et al. Kısa Normotermik Makine Perfüzyonu Atılan İnsan Böbreklerini Gençleştirir. Doğrudan Nakil. 2019;5(11):e502.