Adjuvansız Yeni Bir Polivalan Dermatofit Aşısının Geliştirilmesi, Hazırlanması ve Değerlendirilmesi

Saçkıran, tüm dünyada ekonomik, zoonotik ve sağlık sorunu oluşturan, hem insanları hem de hayvanları enfekte eden, dünya çapında yaygın bulaşıcı bir hastalıktır. Son on yılda, bu tür hastalıkların kontrolünde ideal bir yaklaşım olarak aşılamaya dikkat çekildi. Bu çalışmada, lokal olarak izole edilmiş sıcak ve öldürücü dermatofit türlerinden Trichophyton verrucosum (T. verrucosum), Trichophyton mentagrophytes (T. mentagrophytes) ve Microsporum canis (M. canis) adjuvansız polivalan aşılar immünolojik olarak değerlendirildi. Hazırlanan aşı değerlendirmesi, kobaylar kullanılarak immünojenisite ve koruyucu etkinlik yönlerine odaklandı.

Enfeksiyon hastalıkları ile bağışıklık arasında yakın bir ilişki vardır. İnsan vücudu, vücudu istila eden patojenleri tanıyabilen ve bunlara saldırabilen ve çeşitli enfeksiyon ve hastalıklara karşı savunma yapabilen bir bağışıklık sistemine sahiptir. Bununla birlikte, vücudun bağışıklığı zayıflarsa, enfeksiyona ve hastalığa yol açan patojenlerin saldırısına uğraması kolaydır. Bulaşıcı hastalıklar karşısında, bağışıklık sistemi, patojenlere saldırmak için antikorları ve bağışıklık hücrelerini salgılamak için yanıt mekanizmasını otomatik olarak etkinleştirecek, böylece hastalık semptomlarını azaltacak veya patojenleri ortadan kaldıracaktır. Aksine, vücudun bağışıklığı düşükse, patojenleri zamanında tanıyıp saldıramayabilir, bu da hastalığın ağırlaşmasına ve hatta yaşamı tehdit etmesine neden olabilir.

Bu nedenle, sağlıklı bir bağışıklık sistemini sürdürmek bulaşıcı hastalıkları önlemenin anahtarıdır. Sağlıklı beslenmeye, iyi yaşam alışkanlıklarına, egzersiz yapmaya ve stresi azaltmaya dikkat ederek bağışıklığınızı güçlendirebilir ve hastalıkların oluşmasını önleyebilirsiniz. Aynı zamanda aşılama, bağışıklığı iyileştirmek için de etkili bir önlemdir. Bu nedenle günlük hayatta bağışıklığımızı geliştirmeye özen göstermeliyiz. Cistanche bağışıklığı artırabilir. Cistanche, C vitamini, C vitamini, karotenoidler vb. gibi çeşitli antioksidan maddeler açısından zengindir. Bu bileşenler serbest radikalleri temizleyebilir ve oksidatif stresi azaltabilir Bağışıklık sisteminin direncini uyarır ve geliştirir.

Tıklayın cistanche tubulosa faydaları

Hem canlı hem de inaktive edilmiş formlarında, aşı kaynaklı önemli hümoral ve hücre aracılı bağışıklık tepkileri, kobayların homolog ve heterolog dermatofit suşları ile zorlu enfeksiyonlara karşı uygun şekilde korunmasını sağlar. Öte yandan, dermatofit ekso-keratinazlar üzerinde yapılan araştırmalar, saf keratin (3 g/L) içeren mineral bazlı bir ortamda, insan saçı katkılı aynı ortama (2,6 g/L) göre daha iyi üretildiğini ve daha fazla ifade edildiğini göstermiştir. .

Ekzo-keratinazların maksimum dermatofit üretkenliğinin inkübasyondan 18 ila 21 gün sonra olduğu bulundu. Sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) kullanılarak, dahil olan üç dermatofit türünün kültür fltratında moleküler ağırlıkları 40 kDa (fraksiyon I) ve 28 kDa (fraksiyon II) olan iki fraksiyon tanımlanmıştır. Her iki fraksiyon da keratinolitik aktivite göstermiştir. İzole keratinazların spesifik aktivitesi (Keratinaz birimleri (KU)/mg protein sayısı), 12.9, 8.74 ve 12 KU/mg'ye kıyasla 18.75, 15.38 ve 14 KU/mg proteine ​​ulaştığı fraksiyon I'de daha güçlüydü. sırasıyla T. verrucosum, T. mentagrophytes ve M. canis'in fraksiyon II'sindeki protein.

Dermatofit ekso-keratinazlar, yüksek keratinaz-spesifik antikor titrelerini uyararak ve aşılanmış hayvanlarda güçlü gecikmiş cilt aşırı duyarlılık reaksiyonlarını uyararak immünojenik olduklarını kanıtladılar. Anti-keratinaz-spesifik IgG, kaplama antijeni olarak dermatofit ekzo-keratinazlar kullanılarak ev yapımı bir enzime bağlı immünosorbent deneyi (ELISA) ile inaktive edilmiş veya canlı polivalan dermatofit aşılarla aşılanmış kobayların serumlarında tespit edilmiştir. Dermatofit ekso-keratinazların intradermal enjeksiyonu, inaktive edilmiş veya canlı polivalan dermatofit aşıları ile aşılanmış kobaylarda spesifik gecikmiş deri reaksiyonlarını indüklemiştir.

Kontrol sensitize edilmemiş kobaylarda dermatofit ekso-keratinazların intradermal enjeksiyonu kaşıntı, şişme ve kanlı yara oluşumu ile ilişkilendirildi, ancak cilt sertleşmesi oluşmadı. Kontrol sensitize edilmemiş sağlıklı kobay grubunda bu ekzo-keratinaz enjeksiyonu sonrası reaksiyonların gelişimi, ekzo-keratinazların dermatofitoz patogenezinde olası bir rol oynadığını düşündürür.

T. mentagrophytes ve zoofilik grupları temsil eden M. canis'in özel olarak belirtilmesiyle yakından ilişkili bir keratinolitik mantar grubu olarak dermatofitler; Sırasıyla T. benzamid kompleksi ve M. canis kompleksi ve ayrıca dünya çapında yüzeysel mikoz ile enfekte hayvanlardan en baskın şekilde izole edilen dermatofit türleri olarak kabul edilir. Ayrıca T. verrucosum, aşılamaya dayalı kontrol protokollerinin artması nedeniyle dünya çapında daha az dağılım gösteren, ancak ağırlıklı olarak Orta Doğu'da varlığını sürdüren T. benhamiae kompleksinin başka bir üyesidir. Dermatofitoz hem üretken hayvanlarda hem de evcil hayvanlarda ekonomik açıdan önemli bir sağlık sorunu oluştururken, diğer yandan alışkanlıkla artan hayvan-insan birlikteliği nedeniyle özellikle günümüzde insanlar ve özellikle çocuklar için ciddi bir zoonotik tehdit oluşturmaktadır1–14.

Dermatofitoz, bazı teşhis karmaşıklıkları, uygun küratif tedavi seçimi güçlükleri ve uygun bir vaka odaklı tedavi protokolü uygulama periyodunun insan-insan bulaşıcı veya bulaşıcı kaynaklı veya hayvan-insan zoonotik bazlı yayılmaya yönelik genel enfeksiyon tehdidini garanti etmesi nedeniyle hala tıbbi bir sorun olarak kabul edilmektedir. .

Bu nedenle, engellerle uğraşan aktif dermatofit vakalarından kaçınmak için uygun bir kontrol tekniği ideal bir yaklaşım gibi görünmektedir15-18. Öldürülmüş veya canlı zayıflatılmış dermatofit aşıları15,19-24 kullanılarak hayvanlarda dermatofit enfeksiyonuna karşı aktif aşılamaya dayalı aşı bazlı dermatofit kontrol stratejileri geliştirmeye yönelik çeşitli çalışmalar yapılmıştır. Norveç'te, zayıflatılmış bir T. verrucosum türü içeren bir aşı, 1980'den beri sığır saçkıranına karşı kullanılmaktadır. Hümoral ve hücresel bağışıklık tepkilerini uyararak hastalığa karşı koruma sağlar. Nüfusun yoğun olduğu ülkelerdeki aşılama kampanyaları saçkıran salgınlarının sayısında önemli bir azalmaya katkıda bulunmuştur15. Bununla birlikte, farklı ülkelerde dermatofit aşılarının etkinliği ile ilgili çelişkili sonuçlar bildirilmiştir25-27.

Öte yandan dermatofit keratinazlar, patogenezde ve dermatofitoza karşı bağışıklıkta önemli bir rol oynuyor gibi görünmektedir28-34. Ayrıca, keratinazlar gibi dermatofit virülans faktörleri ve bunların hastalık gelişimindeki potansiyel rolleri hakkındaki mevcut bilgilere dayanarak dermatofit alt birim aşıları hazırlamak için girişimlerde bulunulmuştur, ancak şimdiye kadar sınırlı başarı elde edilmiştir15. Bir M. canis rekombinant 31.5 kDa keratinaz ve bir ham ekzo-antijen, kobaylarda deneysel bir enfeksiyon modelinde aşı olarak değerlendirildi. Aşılama, her iki antijene karşı oldukça yüksek ve anlamlı antikor tepkileri ve yüksek hücre aracılı bağışıklık tepkileri indükledi. Bununla birlikte, mücadeleden sonra, dermatofit lezyonlarının ciddiyetini yansıtan puanlar, mücadeleden sonraki herhangi bir zamanda aşılanmış ve kontrol grupları arasında önemli ölçüde farklılık göstermedi35.

Birkaç mikrobiyal ajana karşı etkili aşıların mevcudiyetine rağmen, mantar ajanlarına ve özellikle dermatofitoza neden olan ajanlara karşı aşılama, hem hayvanlarda hem de insanlarda iyileştirme ve daha fazla geliştirme gerektirir. Bu nedenle, mevcut çalışmanın amacı, en sık görülen ve izole edilmiş dermatofit türlerinden hazırlanan, yeni geliştirilen adjuvanlanmamış polivalan dermatofit aşıların koruyucu ve bağışıklaştırıcı etkinliğinin hazırlanması ve değerlendirilmesidir. Ayrıca, dermatofit keratinazlarının dermatofitik immün-patojenik döngüdeki rolünü vurgular.

araç ve yöntemler

Dermatofit türleri.

Trichophyton verrucosum str. Tv-96-3, T. mentagrophytes str. Tm-96-1, Micro‑ sporum canis str. Mc-97-5 ve Trichophyton rubrum (T. rubrum) str. Tr-98-1 suşları, Kahire Üniversitesi Veteriner Fakültesi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı'ndan temin edildi. Bu suşlar izole edildi ve aynı departmanda daha fazla doğrulanmış mikolojik laboratuvar araştırması için sunulan klinik aktif hayvan vakalarından tanımlandı ve Brandebusemeyer, 199036 tarafından bildirilen kriterlere göre aşı hazırlığı için seçildi. dermatofit aşı suşu; Kötü şekilde enfekte olmuş hayvanlardan izole edilirler, in vitro olarak hızla büyürler, bol miktarda mantar örtüsü oluştururlar ve dermatofitlerin güçlü immünojenik determinantlarını taşıdıkları bilinen mantar mikrokonidyaları açısından zengindirler.

Dermatofit kültürlerinin hazırlanması, ayrılması ve liyofilizasyonu.

T. mentagrophytes ve M. canis ayrı ayrı {{0}.5L Sabouraud's dekstroz suyuna (OXOID) aşılandı ve 25 derecede 4 hafta süreyle inkübe edildi, T. verrucosum ise 0.5L Sabouraud's dekstroz suyuna (OXOID) aşılandı tiamin (HIMEDIA) ve inositol (HIMEDIA) ile 37 derecede 6 hafta inkübe edildi. Elde edilen mat batık mantar büyümesi daha sonra steril gazlı bez kullanılarak ayrıldı. Hasat edilen mantar örtüleri liyofilize edildi ve ince bir toz oluşturmak üzere aseptik koşullar altında öğütüldü. Liyofilize dermatofit tozunun koloni oluşturan birim (CFU)/mg sayısı, Sabouraud dekstroz agar (SDA) plakaları37 üzerinde belirlendi.

Adjuvanlanmamış polivalan dermatofit aşılarının hazırlanması.

Her türden canlı ve inaktif olmak üzere iki dermatofit aşı preparasyonu hazırlandı. Canlı aşı formunda, seçilen üç dermatofit türünden liyofilize toz karıştırıldı ve 1 ml'lik şişelerde 6×106 toplam CFU/şişe dozunda dağıtıldı (her dermatofit türünden 2×106 CFU). Aynı şekilde ve inaktivasyon Rybnikar, et al. öldürme etkinliğini ve ilgili dermatofit suşları için bunu başarabilen minimum dozu doğrulamak için maruz kalma sonrası kültürleme yoluyla canlılık.

Gine domuzlarının aşılanması.

Bu deneyde üç grup yetişkin dişi kobay kullanıldı, her grup üç hayvandan oluşuyordu. Birinci grup inaktif aşı ile, ikinci grup canlı aşı ile, üçüncü grup ise aşısız kontrol olarak bırakıldı. Ayrıca, diğer bir on üyeli sağlıklı aşılanmamış kobay grubu, canlı aşı ile aşılanmış (ikinci grup) temaslı kontrol olarak tutulmuştur. İlk iki grupta, her bir hayvana 2 hafta arayla iki kez kas içinden (I/M) 6×106 CFU/ml içeren polivalan aşının 0.2 ml süspansiyonu enjekte edildi. İkinci dozdan iki hafta sonra, test edilen aşı preparasyonlarının bağışıklama ve koruyucu etkileri, gelişmiş bağışıklık tepkilerinin yanı sıra bir zorlama testi ile belirlendi.

Çalışmaya dahil olan tüm hayvanlardan asemptomatik karınca vakalarını dışlamak için aşılamadan önce ve ilk aşılama dozundan sonra haftalık olarak ve tabii ki yükleme enfeksiyonundan sonra sıfırıncı gün kan örnekleri toplandı.

Bağışıklık yanıtı değerlendirme testi.

Hümoral bağışıklığı temsil eden spesifik antikor üretimi, ev yapımı bir ELISA39,40 kullanılarak saptandı ve hücre aracılı bağışıklık yanıtı, bir Trichophytin cilt testi41 kullanılarak belirlendi.

Ev yapımı dermatofit ELISA gelişimi. Yukarıda homolog antijenler olarak belirtilen üç dermatofit türünden ve ayrıca heterolog antijen olarak bir Trichophyton rubrum (T. rubrum) suşundan hazırlanan sulu tam dermatofit özü antijenleri, bahsedilen ev yapımı ELISA39'u değerlendiren hümoral bağışıklıkta plaka kaplama antijenleri olarak kullanıldı.

Aşılama sonrası zorlu enfeksiyon. Tüm hayvanlar, tam olarak aşağıdaki bölgede derinin bir bölgesinde dört dermatofit türünün 0.2 ml 21 günlük kültür süspansiyonu ile enfeksiyona maruz bırakıldı; kılların kesildiği kaudal toraks ve cilt yüzeyi steril zımpara kağıdı ile hafifçe çizildi.

Keratinaz üretim araştırması.

T. verrucosum, T. mentagrophytes ve M. canis, insan saçı (2,6 g/L) veya keratin (3 g/L) ile zenginleştirilmiş bir mineral ortama ayrı ayrı her suşun birleşik bir mantar süspansiyonunun (5 x 106 ) aşılanmasıyla araştırıldı. ) ve 30 gün inkübe edildi. Dermatofit ekso-keratinaz aktivitesinin keratinolitik aktivitesi, Siesenop, U. 199842'ye göre her 3 günde bir belirlendi. Ekzo-keratinazın karakterizasyonu, SDS-PAGE36,43 kullanılarak yapıldı.

Dermatofit ekzo‑keratinaz fraksiyonlarına karşı bağışıklık yanıtı çalışmaları.

Canlı ve inaktive dermatofit aşıları ile aşılanmış kobaylarda dermatofit ekso-keratinazlara karşı geliştirilen hümoral ve hücre aracılı bağışıklık tepkileri, antijen olarak 4 dermatofit türünün ekzo-keratinaz fraksiyonları kullanılarak ev yapımı ELISA ve Trichophytin deri testleri ile belirlendi.

Etik beyan.

Yürütülen mevcut çalışma (Animal Research: Reporting of In-Vivo Experiments-ARRIVE) yönergeleri tarafından rapor edilmiştir. Tüm deney protokolleri, Kahire Üniversitesi'ndeki veterinerlik fakültesinin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi-IACUC tarafından onaylandı. (Kahire Üniversitesi Veteriner Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi-IACUC) yönergeleri, mevcut çalışma aracılığıyla hayvan kullanımını içeren herhangi bir prosedür sırasında tamamen izlendi. Tüm hayvana bağlı metodolojik prosedürler, bilinçli canlı hayvanlar üzerinde etik olarak yapılabilen, ağrıya neden olmayan veya düşük ağrıya neden olan prosedürler olarak kabul edildiğinden, bu çalışma sırasında dahil edilen hayvanla hiçbir anestezi veya ötenazi protokolü kullanılmadı.

Sonuçlar

Adjuvanlanmamış polivalan dermatofit aşıların koruyucu etkinliği.

Adjuvansız etkisizleştirilmiş polivalan aşı, öldürücü T. verrucosum suşları ile tehditlere karşı yüzde 90.0, 90.9, 66.97 ve 41.67'lik bir koruma oranı oluşturdu. Sırasıyla T. mentagrophytes, M. canis ve T. rubrum. Adjuvanlanmamış canlı polivalan aşının koruyucu etkinliği, inaktive olandan önemli ölçüde daha yüksekti ve T. verrucosum tehdidine karşı 100, 100, 83.33 ve 66.67'ye ulaştı. Sırasıyla T. mentagrophytes, M. canis ve T. rubrum. Aynı suşlar ile aşılanmamış kontrol hayvanlarının enfeksiyonuna meydan okuma, sırasıyla yüzde 83.33, yüzde 91.67, yüzde 100 ve yüzde 100'lük enfeksiyon oranlarını indükledi (Şekil 1).

Canlı polivalan aşı ile aşılanan kobaylar arasında, sadece iki hayvanda aşılama bölgesinde saçkıran lezyonları gelişti. Her iki olgudan da M. canis izole edilmiştir. Öte yandan, aynı kafeslerde tutulan aşılanmamış temaslı hayvanlar, yüklemeden sonra 8 haftaya kadar uzayan gözlem süresi boyunca sağlıklı kaldılar.

Adjuvanlanmamış polivalan dermatofit aşıya karşı bağışıklık tepkileri.

Hümoral bağışıklık tepkisi. Adjuvanlanmamış etkisizleştirilmiş veya canlı polivalan dermatofit aşıları ile aşılanan kobaylar, ELISA ile ölçülen anti-dermatofite özgül IgG geliştirdiler. İnaktive aşı ile aşılanmış kobaylarda, T. verrucosum, T. mentagrophytes, M. canis ve T. rubrum'a karşı IgG'ye özgü antikor titrelerinin Geometrik ortalama titreleri (GMT) 1810, 905'e eşittir. 640 ve 40 ELISA sırasıyla ikinci dozdan 2 hafta sonra ölçüldüğünde, virülan dermatofit suşları ile yüklemeden 2 hafta sonra antikor titrelerinde önemli bir artış ölçülmüştür. Antikor titreleri T. verrucosum, T. mentagrophytes, M. canis'e karşı 5120 birim/ml'ye ve T. rubrum'a karşı 905 birim/ml'ye ulaştı (Şekil 2A).

Adjuvanlanmamış canlı polivalan aşı ile aşılanmış kobaylarda önemli ölçüde daha yüksek antikor titreleri ölçüldü (Şekil 2B). İkinci aşı dozundan 2 hafta sonra ölçülen IgG'nin spesifik GMT'si T. verrucosum, T. mentagrophytes, M. canis ve T. rubrum'a karşı sırasıyla 2560, 1810 ve 5120 ve 40 ELISA ünitesi/ml'ye ulaştı. Antikor titrelerinde daha fazla artış, yüklemeden 2 hafta sonra kaydedildi, GMT, T. verrucosum'a karşı 7241 birim/ml'ye ve T. mentagrophytes'e karşı 10.240 birim/ml'ye ulaştı.

Hücre aracılı bağışıklık tepkisi. Trichophytin cilt testi kullanılarak, aşılanmış kobaylarda homolog ve heterolog dermatofit Trichophytin'e karşı güçlü gecikmiş aşırı duyarlılık reaksiyonları kaydedildi. Deri reaktivitesi canlı aşı ile bağışıklananlarda daha belirgindi (Şekil 3 ve 4).

Dermatofit ekso‑keratinazların izolasyonu ve karakterizasyonu.

Dermatofit ekso-keratinazlar, saf keratin (3 g/L) içeren bir mineral ortamda, insan saçı ile aynı ortamda (2.6 g/L) olduğundan daha iyi üretildi. Ekzo-keratinazların maksimum üretiminin inkübasyondan sonraki 18 ila 21 gün arasında olduğu bulundu (Şekil 5). Üç dermatofit türünden alınan kültür süzüntüleri ile benzer, hatta özdeş fraksiyonasyon modelleri gösterilmiştir. Jel kromatografisi ile ayrılan ve SDS-PAGE ile izlenen ekso-keratinaz fraksiyonları, her dermatofitin kültür fltratında iki bant ortaya çıkardı. Birinci bant, yaklaşık 40 kDa'lık bir moleküler ağırlığa karşılık gelir ve ikinci fraksiyon, 28 kDa'lık bir moleküler ağırlığa sahiptir (Şekil 6), (Ek Şekil S1).

Ekzo‑keratinazların biyolojik aktiviteleri.

Saflaştırılmış dermatofit ekso-keratinazın spesifik keratinolitik aktivitesi (KU/mg protein sayısı) belirlendi. T. ver‑ racism, T. mentagrophytes ve M'nin II. sırasıyla canis.

Dermatofit ekzo‑keratinazların immünolojik aktiviteleri.

Hümoral bağışıklık tepkisi. ELISA testinde kaplama antijenleri olarak ısıyla inaktive edilmiş ekzo-keratinazlar kullanılarak, adjuvanlanmamış inaktive edilmiş veya canlı polivalan dermatofit aşılarla aşılanmış kobay serumlarında anti-keratinaz spesifik IgG ölçüldü (Şekil 7). Anti-keratinaz IgG antikorları, etkisizleştirilmiş dermatofit aşısı ile aşılamayı takiben yavaşça arttı ve yüklemeden iki hafta sonra keskin bir şekilde maksimum 1810 ELISA ünitesi/ml seviyesine ulaştı. Antikor titreleri, canlı aşı ile aşılanmış hayvanların serumlarında önemli ölçüde daha yüksekti ve yüklemeden 2 hafta sonra 2560 ELISA birimi/ml seviyesine ulaştılar.

Hücre aracılı bağışıklık tepkisi. Dermatofit ekzo-keratinazların (havuzlanmış fraksiyon I veya havuzlanmış fraksiyon II) intradermal enjeksiyonu, adjuvanlanmamış inaktive edilmiş veya canlı polivalan dermatofit aşıları ile immünize edilmiş kobaylarda spesifik gecikmiş cilt reaksiyonunu indüklemiştir (Şekil 7). Te reaksiyonu, enjeksiyon yerlerinde gecikmeli yapıya sahip güçlü hücresel reaksiyonun gelişimi ile ilişkilendirilmiştir. Bu reaksiyon kaşıntı, sertleşme ve kanlı skar oluşumunu içeriyordu. Ayrıca, hassaslaştırılmamış kontrol kobaylarına dermatofit keratinaz enjeksiyonunun, deri sertleşmesi olmadan eritem, kaşıntı ve kanlı kabuk oluşumu ile ilişkili enflamatuar reaksiyonları indüklediği gözlemlenmiştir.

Tartışma

Veteriner klinik dermatoloji tarihinde, klinik dermatofit enfeksiyonunun en sık genç hayvanlarda görüldüğü ve orijinal dermatofit enfeksiyonunun iyileşmesini veya temizlenmesini takiben, orijinal dermatofit türleri veya farklı bir tür tarafından yeniden enfeksiyonun nadir olduğu gözlenmiştir. bir44. Bu gözlem, hayvanlarda dermatofitoza karşı aktif aşılama geliştirmek için tekrarlanan denemelerin arkasında durmaktadır.

Bu çalışmada, önceki literatürde izole edilme sıklıklarına göre sığır ve evcil hayvanlardan en sık izole edilen dermatofit türleri olan T. verrucosum, T. mentagrophytes'e karşı geniş spektrumlu polivalan dermatofit aşısı geliştirilmesi amaçlanmıştır. ve M. canis bu aşı için aday olarak seçilmiştir.

İki tip adjuvanlanmamış polivalan dermatofit aşısı hazırlandı ve bunların bağışıklama ve koruyucu etkinlikleri bir kobay modelinde değerlendirildi. İlk aşı, gama radyasyonu38,45 ile inaktive edildi, burada 400 k rad'lık bir doz, üç dermatofit türünün tamamen inaktivasyonunu indükledi. Yukarıda belirtilen üç dermatofit türünden hazırlanan adjuvansız inaktive edilmiş polivalan dermatofit aşısı, kobayları virülent homolog suşlarla (yüzde 66,67-100) enfeksiyona karşı korudu. Elde edilen sonuçlar, aynı alanda daha önce yürütülen birkaç çalışma tarafından bildirilenlerle uyumluydu21–24,46–49.

Aşılanmış kobaylara heterolog bir dermatofit türü, yani T. rubrum suşu uygulandığında yüzde 41,67'lik bir koruma oranının kaydedildiğini belirtmekte fayda var. Bu dermatofit türü, aşılanmamış kontrol hayvanları arasında yüzde 100 enfeksiyon oranını indükledi. Kaydedilen çapraz koruma, farklı dermatofit türleri44,50,51 arasındaki çapraz antijenik ilişkiye bağlanabilir. Canlı polivalan aşı, inaktive aşıdan önemli ölçüde daha koruyucuydu, bu da diğer araştırmacılar tarafından bildirilenlerle karşılaştırılabilir15,20.

Aşılanmış kobaylar üzerinde herhangi bir olumsuz yan etkiye neden olmayan inaktive edilmiş dermatofit aşısının aksine, canlı aşının kullanımı, bununla birlikte, aşılanmış hayvanlardan ikisinde saçkıranın klinik belirtilerini geliştirdiği için bazı dezavantajlarla ilişkilendirildi. Bu vakalarda geri kazanılan dermatofit türü M. canis'tir. Koruyucu bir antijen olarak M.canis'in başarısızlığı da daha önce DeBoer ve arkadaşları tarafından rapor edilmiştir. 200225. Canlı aşının olumsuz yan etkileri ve enfeksiyona neden olma olasılığı, aşının koruyucu değerini kesinlikle azaltır. Bununla birlikte, canlı aşının kullanımıyla ilişkili lezyonlar meydana gelirse hafiftir ve enfekte hayvanlar hızlı bir şekilde iyileşir. Aşı hazırlama sırasında dermatofit mantar kütlesinin liyofilizasyon işlemi, canlı dermatofit aşının kas içi enjeksiyon yolu ile birlikte, dermatofit türlerinin canlılığını ve virülansını önemli ölçüde azaltır52. Westhof ve ark., 201021,22 tarafından dermatofitozun kontrolünde inaktive dermatofit aşılarının kullanımı, kanıtlanmış güvenliği nedeniyle önerilmektedir.

Koruyucu etkinliğine ek olarak, test edilen dermatofit aşısı, önemli hümoral ve hücresel bağışıklık tepkilerini indükledi. Birkaç yazar, dermatofit15,20,39,40,51,53,54 ile aşılama veya enfeksiyon sonrasında hayvanlarda hümoral ve hücresel bağışıklık tepkilerinin üretimini belgelemiştir. Aktif bir enfeksiyonun temizlenmesinde veya yaklaşmakta olan dermatofit enfeksiyonlarına karşı dirençte immün yanıtların rolü, çeşitli araştırmalar tarafından bildirilmiştir20,47,51,55-60.

Farklı öldürücü dermatofitler ile aşılanmış hayvanların mücadelesi, antikor titrelerinde önemli bir artış ile ilişkilendirilmiştir39. Bu artış, tehdit heterolog bir dermatofit olan T. rubrum tarafından yapıldığında da önemliydi. Dermatofitler arasındaki güçlü çapraz antijenik ilişkiyi ve hazırlanan aşının aşı hazırlamada kullanılanlardan ziyade uzun bir dermatofit türü listesine karşı olası geniş spektrumlu koruyucu değerini belgelediğinden bu özellikle önemlidir50.

Selvam ve ark. 201261, mikrobiyal keratinazın birkaç önemli biyoteknolojik uygulaması vardır ve dermatofit keratinazları, dermatofitoza karşı profilaktik ve terapötik uygulama için olası bir umut vaat eden aday olarak kabul edilir. Dermatofit keratinazlar tanımlanmış ve birkaç araştırmacı tarafından incelenmiştir31,32,34,35,37,62–67. Mevcut çalışmada, T. verrucosum, T. mentagrophytes ve M. canis tarafından üretilen dermatofit ekso-keratinazlarının, aşılanmış hayvanlarda yüksek antikor titrelerinin ve güçlü gecikmiş cilt aşırı duyarlılık reaksiyonunun indüklenmesiyle gösterildiği gibi, oldukça immünojenik olduğu kanıtlanmıştır. Aşağıdaki çalışmalarda27,35,68-70 karşılaştırılabilir sonuçlar kaydedilmiştir.

Dermatofit ekso-keratinazlar enjekte edilmiş sağlıklı aşılanmamış hayvanlarda enflamatuar reaksiyon, kaşıntı ve kanlı yara oluşumu gelişimi, bunun enflamatuar reaksiyondaki ve dermatofitozla ilişkili kaşıntıdaki olası rolünü açıklar. Ancak bu reaksiyon, aşılanmış hayvanlarda kaydedilen ve spesifik gecikmiş aşırı duyarlılık reaksiyonuna özgü deri endürasyonu gösteren reaksiyondan farklıdır. Trichophytin cilt testinde, homolog veya heterolog dermatofit türlerinden elde edilen tüm Trichophytin preparatları, aşılanmış kobaylarda gecikmiş aşırı duyarlılık reaksiyonlarını indüklemiştir. Bu bulgu, üzerinde o çapraz reaktivite reaksiyonunun meydana geldiği dermatofit grubuna özgü antijen(ler)in var olma olasılığını göstermiştir.

Sonuç olarak, polivalan bir dermatofit aşısı geliştirmek, sırasıyla inaktive ve canlı aşılar söz konusu olduğunda aşılama sonrası reaksiyon hiç veya minimum reaksiyon ile dermatofitoza karşı durabilecek umut verici bir koruyucu profilaktik seçenek göstermiştir (Ek Bilgi).

Veri kullanılabilirliği

Mevcut çalışma sırasında test edilen hayvan vakalarıyla ilgili olarak kullanılan ve/veya analiz edilen veri setleri, makul talep üzerine ilgili yazardan temin edilebilir.

Referanslar

1. Weber, A. Mycozoonoses, sığır saçkıranı ile özel olarak ilgili. Mikozlar 43, 20–22 (2000).

2. Kumar, R. & Khurana, R. Hisar'daki sığır çiftliklerinde dermatofitoz prevalansı. Haryana Vet. 44, 39–42 (2005).

3. Bond, R. Yüzeysel veteriner mikozları. klinik Dermatol. 28(2), 226–236 (2010).

4. Aghamirian, MR & Ghiasian, SA İran'da süt sığırlarında ve insanlarda epizoonozların bir nedeni olarak dermatofitler: Epidemiyolojik ve klinik yönler. Mikozlar 54(4), 52–56 (2011).

5. Kano, R. Japonya'da hayvanlardan kaynaklanan kutanöz mikozlar. Med. Mikol. J.53(1), 19–23 (2012).

6. Nweze, EI Evcilleştirilmiş hayvanlarda dermatofitoz. Rev. Enst. Med. Trop. Sao Paulo 53(2), 94–99 (2012).

7. Moretti, A. ve ark. Hayvanlarda dermatofitoz: Epidemiyolojik, klinik ve zoonotik yönler. G İtalya. Dermatol. Venereol. 148(6), 563–572 (2013).

8. Ndiaye, D. ve ark. Dermatofitoz, 2007 ve 2011 yılları arasında Dakar'daki Le Dantec Hastanesi'nin parazitoloji ve mikoloji laboratuvarında teşhis edildi. J. Mycol. Med. 23(4), 219–224 (2013).

9. Nweze, EI & Eke, IE Afrika'nın doğu ve güney bölgelerindeki dermatofitler ve dermatofitozlar. Med. Mikol. 56, 13–28. https://doi.org/10.1093/mmy/myx025 (2018).

10. Paryuni, AD, Indarjulianto, S. & Widyarini, S. Evcil hayvanlarda dermatofitoz: Bir gözden geçirme. Veteriner. Dünya 13(6), 1174–1181 (2020).

11. Hassan, AH, Hamed, R. & Elyazeed, HA Mısır'ın Büyük Kahire Bölgesi'ndeki evcil hayvanlarda dermatofitler ve diğer keratinofilik mantarların neden olduğu dermatolojik rahatsızlıklar üzerine kesitsel çalışma. Av. Animasyon Veteriner. bilim 9, 615–622 (2021).

12. Segal, E. & Elad, D. İnsan ve zoonotik dermatofitozlar: Epidemiyolojik yönler. Ön. Mikrobiyol. 12, 713532. https://doi.org/ 10.3389/fmicb.2021.713532 (2021). 13. Chang, C.-C. et al. Kuzey Tayvan'daki evcil tavşanlarda zoonotik dermatofit enfeksiyonunun yaygınlığı ve risk faktörleri. J. Mantarlar 8, 627.

14. Čmoková, A. et al. Trichophyton benzamide kompleksinde ortaya çıkan zoonotik patojenlerin taksonomisinin çözülmesi. Mantar Dalgıçları. 104, 333–387.

15. Lund, A., Bratberg, AM, Næss, B. & Gudding, R. Norveç'te aşılama ile sığır saçkıranının kontrolü. Veteriner. immünol. İmmü-Pathol. 158(1–2), 37–45 (2013).

For more information:1950477648nn@gmail.com