2 Konakçıdan Tablo Cistanches Herba'daki Feniletanol Glikozitlerin Farkı UPLC-QQQ-MS ve PLS-DA Analizi Üzerinde Yapılan UPLC-QQQ-MS ve PLS-DA Analizine Göre Tablo Cistanches Herba'dan 2 Konakçıdan Feniletanol Glikozitlerin Farkı
May 30, 2025
Cistanche DeserticolaOrobanchaceae familyasına ait çok yıllık holoparazit bir bitkidir. Pul benzeri yapraklarla kaplı kurutulmuş etli saptır.Cistanche Deserticola YC Ma[1-2]. Bu bitki esas olarak İç Moğolistan, Sincan ve Gansu'da parazitlenerek dağıtılmaktadır.Haloksilon ammodendron (CA Mey.) Bunge, Chenopodiaceae kserofitik bir çöl bitkisidir [3-4]. Birincil aktif bileşenlerCistanche Deserticolaüreme fonksiyonunun korunması, antioksidant ve karaciğerin korunması [8-10] gibi özellikler sergileyen feniletanoid glikozitler, iridoidler ve polisakkaritleri içerir [5-7]. Çin'de 2.000 yılı aşkın kullanımıyla canlılığı güçlendirmeyi amaçlayan geleneksel Çin tıbbı reçetelerinde birinci, yaşlanma karşıtı formülasyonlarda ise ikinci sırada yer almaktadır. Ancak aşırı hasat ve çevresel tahribat nedeniyle yabani kaynaklarCistanche Deserticolanesli tükenmenin eşiğinde olduğundan ulusal olarak korunan bir bitki (Kategori II) olarak sınıflandırılmasına veUluslararası Yabani Bitki Koruma Listesi[12]. İlaç pazarındaki arz-talep dengesizliğini gidermek amacıyla yapay ekim, dünyanın sürdürülebilir kalkınması için vazgeçilmez hale geldi.Cistanche Deserticolaendüstri.
Satılık Cistanche Deserticola Ekstraktı
Son çalışmalar başarılı aşılama bildirmiştirCistanche DeserticolaAçıkAtriplex canescens[13], Chenopodiaceae familyasının yaprak dökmeyen bir çalısı. Yaygın olarak "biyolojik tuz giderici" olarak anılır.Atriplex canescenstuzlu-alkali toprakların iyileştirilmesinde yüksek kaliteli bir ağaç türüdür [14]. YetiştirmeCistanche DeserticolaAçıkAtriplex canescensyüksek verim ve üstün kalite gibi önemli avantajlar sunmaktadır. Sonuç olarak kalitenin değerlendirilmesiAtriplex canescens-Cistanche Deserticolabir araştırma merkezi haline geldi [15-16]. Önceki araştırmalar esas olarak kurutulmuş etin tıbbi özelliklerine odaklanmıştı.Cistanche DeserticolaAktif bileşenlerin taze formundaki çalışmalar ise az kalmaktadır. Özellikle dahil edilmesinin ardındanCistanche DeserticolaDeneme yönetim sistemi kapsamında bir gıda ve tıbbi madde olarak (Ulusal Sağlık Komisyonu. 9 Sayılı Bildiri, 2023), çift amaçlı şifalı bir bitki olarak geliştirilmesi ve kullanılması, geleneksel Çin tıbbı alanında büyük ilgi görmüştür [17]. TazeCistanche DeserticolaMükemmel tadı ve kullanışlılığı nedeniyle tercih ediliyor ve bu da onu gelişim açısından son derece umut verici kılıyor. Taze tıbbi malzemeler, tedavi edici veya sağlığı geliştirici özelliklere sahip işlenmemiş taze bitki, hayvan veya mantar maddelerini ifade eder. Yaygın olarak kullanılan 2.000 Çin şifalı bitkisinin 486'sı taze çeşitlerdir [18].
Ultra performanslı sıvı kromatografisi-üçlü dört kutuplu tandem kütle spektrometresi (UPLC-QQQ-MS) yöntemi oldukça hassastır ve bu da onu düşük konsantrasyonlu ve karmaşık bileşenlerin tespit edilmesi için uygun kılar [19]. Yüksek su içeriği sorununu çözmek içinCistanche DeserticolaFeniletanoid glikozitlerin, içeriğin azalmasıyla sonuçlanan enzimatik hidrolize eğilimli olduğu durumlarda, bir enzim inaktivasyonu kurutma yöntemi, feniletanoid glikozit içeriğini etkili bir şekilde korur [20]. Bu çalışma, taze gıdalarda anahtar aktif bileşenler olarak ekinakosid ve akteozit dahil 8 feniletanoid glikoziti değerlendirmek için UPLC-QQQ-MS'yi kullanmaktadır.Cistanche Deserticolaiki konukçu bitkiden [21-22]. Çalışma, taze meyve suyu ve kalıntının bileşen içeriğindeki farklılıkları inceliyorCistanche Deserticolaiki konakta büyümüştür. Ek olarak kalıntı, 80 derecede 5 dakika boyunca enzim inaktivasyon işlemine tabi tutuldu, ardından kurutuldu ve aktif bileşenlerin vücutta tutulması daha ayrıntılı olarak karşılaştırıldı.Cistanche Deserticola. Bulgular, taze gıdanın çift amaçlı değeri için bilimsel kanıt ve teknik destek sağlamayı amaçlıyor.Cistanche Deserticolave işleme tekniklerinin optimizasyonu.
1 Aletler ve Malzemeler
1.1 Araçlar
1290-6460 ultra performanslı sıvı kromatografisi-üçlü dört kutuplu tandem kütle spektrometresi (Agilent Technologies, ABD).
AL104 elektronik analitik terazi (Mettler-Toledo, İsviçre).
H-2050R santrifüj (Changsha Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd.).
SB25-12DTD ultrasonik temizleyici (Ningbo Xinzhi Biological Technology Co., Ltd.).
1.2 Malzemeler
Atriplex canescens-Cistanche DeserticolaVeHaloxylon ammodendron-Cistanche Deserticolanumuneler 2024 yılının Mart, Nisan ve Mayıs aylarında toplandı.Cistanche DeserticolaGansu Eyaleti, Jingtai İlçesi, Xiquan Kasabasındaki ekim üssü. Örnekler Gansu Ziraat Üniversitesi'nden Profesör Sun Xuegang tarafından etli saplar olarak tanımlandı.Cistanche Deserticola YC Maölçek yaprakları ile.
Referans standartları:
Ekinakozit (parti numarası: 23031605; saflık: %99,74).
Acteoside (parti numarası: 21102103; saflık: %98,83).
Cistanoside A (parti numarası: 23041703; saflık: %98,30).
İzoakteosid (parti numarası: 23052508; saflık: %99,90).
2'-Asetillakteosid (parti numarası: 210053102; saflık: %97,12).
Salidrosid (parti numarası: 22051208; saflık: %98,43).
Cistanoside B (parti numarası: 20120903; saflık: %98,57).
Tubulosid A (parti numarası: 21060302; saflık: %93,24).
Hepsi Chengdu Pfeide Bioteknoloji Co., Ltd.'den satın alındı.
Reaktifler:
Metanol (parti numarası: O1140576, kromatografik olarak saf).
Asetonitril (parti numarası: S3641440, kromatografik olarak saf). Her ikisi de Shanghai Anpu Experimental Technology Co., Ltd.'den satın alındı.
Formik asit (parti numarası: 20230710, kromatografik olarak saf), Tianjin Kermio Chemical Reagent Co., Ltd.'den satın alındı.
Arıtılmış su (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.).
2 Yöntem ve Sonuçlar
2.1 Yöntemler
2.1.1 Numune Hazırlama
Üç partiAtriplex canescens-Cistanche Deserticola(parti numaraları: 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) ve üç partiHaloxylon ammodendron-Cistanche Deserticola(parti numaraları: 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), parti başına beş bitki olmak üzere toplam altı parti toplandı. Bitkiler su ile temiz bir şekilde yıkandı.
İşleme:
Numuneler ezildi ve suyu sıkıldı, sonuçta iki konakçıdan türetilen meyve suyu ve kalıntı oluştuCistanche Deserticola.
Kalıntılar iki koşul altında kurutuldu:
Enzim inaktivasyonu olmadan.
Enzim inaktivasyonu ile (fırında 80 derecede 5 dakika).
Kurutulan kalıntılar daha ileri analizler için saklandı. Her tıbbi malzeme grubu Tablo 1'de gösterildiği gibi dört gruba ayrıldı.
Sekme. 1 Örnek gruplandırma bilgileri
| Grup | Tip | Atriplex canescens-Cistanche Deserticola | Haloxylon ammodendron-Cistanche Deserticola |
|---|---|---|---|
| ① | Kalıntı | C1 | S1 |
| ② | meyve suyu | C2 | S2 |
| ③ | Enzimle inaktive edilmiş kalıntı (5 dakika kurutma, ezilmiş) | C3 | S3 |
| ④ | Enzimle inaktive edilmemiş kalıntı (kurutulmuş ve ezilmiş) | C4 | S4 |
2.1.2 Kromatografik Koşullar
Kolon: Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 kolonu (2,1 mm × 150 mm, 1,8 μm).
Akış hızı: 0,3 mL/dak.
Enjeksiyon hacmi: 1 μL.
Sütun sıcaklığı: 35 derece.
Mobil faz: Su (A) ve asetonitril (B) içinde %0,1 formik asit.
Analiz zamanı: 12 dakika.
Elüsyon gradyanı:
0–1,5 dk: %10 → %20 B.
1,5–3 dk: %20 → %30 B.
3–5 dk: %30 → %32 B.
5–8 dk: %32 → %38 B.
8–9,6 dk: %38 → %10 B.
9,6–12 dakika: %10 B.
Karışık referans standartlarının ve test numunelerinin kromatogramları Şekil 1'de gösterilmektedir.(Lütfen mobil fazın su (A) ve asetonitril (B) içindeki %0,01 formik asit olup olmadığını doğrulayın.)
Şekil. 1 Referans maddelerinin (A) ve numunenin (B) kromatogramları 1−salidrosid; 2−ekinakozit; 3−sistanosidA; 4−tubulosidA; 5−akteosid; 6−izoakteosid; 7−2'-asetillakteosid; 8-tubulosid B.
2.1.3 Kütle Spektrometresi Koşulları
İyon kaynağı türü: Elektrosprey iyonizasyonu (ESI).
Mod: Negatif iyon modunda çoklu reaksiyon izleme (MRM).
İyon kaynağı sıcaklığı: 350 derece.
Nebulizatör basıncı: 35 psi.
Çarpışma gazı: Azot, orta seviyeye ayarlandı.
Analiz edilecek bileşenlerin kütle spektrometresi parametreleri Tablo 2'de gösterilmektedir.
2.1.4 Karışık Standart Çözeltinin Hazırlanması
Referans standartlarının uygun miktarlarını doğru bir şekilde tartınekinekozit, akteozit, cistanosid A, izoakteozit, 2'-asetillakteosid, salidrosid, cistanosid B, Vetübülosid Ave bunları 10 mL'lik amber reaktif şişelerine yerleştirin. 0,2 mg·mL⁻¹ konsantrasyona sahip karışık standart bir çözelti hazırlamak için %50 metanol ekleyin ve bunu daha sonra kullanmak üzere saklayın.
2.1.5 Test Çözümlerinin Hazırlanması
0,2 g taze ürünü doğru şekilde tartınAtriplex canescens-Cistanche Deserticolakalıntı (C1), tazeHaloxylon ammodendron-Cistanche Deserticolakalıntı (S1), kurutulmuşAtriplex canescens-Cistanche Deserticolakalıntılar (C3, C4) ve kurutulduHaloxylon ammodendron-Cistanche Deserticolakalıntılar (S3, S4). Numuneleri 10 mL'lik amber hacimsel şişelere yerleştirin, %50 metanol ekleyin, hacme getirin ve kütleyi kaydedin. 0,5 saat bekletin, 40 dakika (250 W, 35 kHz) ultrasonikasyona tabi tutun, oda sıcaklığına soğutun ve kütleyi yeniden kaydedin. Herhangi bir ağırlık kaybını telafi etmek için %50 metanol kullanın, iyice karıştırın, santrifüjleyin ve çözeltinin çökelmesine izin verin. Süzüntüyü elde etmek için süpernatantı 0,22 μm'lik mikro gözenekli bir membrandan filtreleyin.
Taze içinAtriplex canescens-Cistanche Deserticolameyve suyu (C2) ve tazeHaloxylon ammodendron-Cistanche Deserticolameyve suyu (S2), her birinden 10 mL alın, doğru şekilde tartın, iyice karıştırın, santrifüjleyin ve çözeltinin çökmesini bekleyin. Süzüntüyü elde etmek için süpernatantı 0,22 μm'lik mikro gözenekli bir membrandan filtreleyin.
2.1.6 Doğrusallık Çalışması
Bölüm 2.1.4'te hazırlanan karışık standart çözeltinin uygun miktarları, bir konsantrasyon gradyanı oluşturmak üzere seyreltildi.51,2, 128,0, 320,0, 800,0, 4.000,0 ve 20.000,0 ug·L⁻¹. Numuneler, bölüm 2.1.2 ve 2.1.3'te açıklanan koşullar izlenerek düşükten yüksek konsantrasyona doğru sırayla enjekte edildi. Enjeksiyon konsantrasyonunun X ekseni ve tepe alanının Y ekseni olarak kullanılmasıyla doğrusal bir regresyon gerçekleştirildi. Sekiz bileşenin doğrusal ilişkileri Tablo 3'te gösterilmektedir.
Sekme. 3 Cistanches Herba tablosundaki 8 bileşenin doğrusal ilişki inceleme sonuçları
| Bileşen | Regresyon Denklemi | r | Doğrusal Aralık (ug·L⁻¹) |
|---|---|---|---|
| Ekinekozit | Y = 16.410 × X − 0.804 | 0.9996 | 51.2–20,000.0 |
| Akteozit | Y = 102.794 × X − 55.793 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| İzoakteozit | Y = 31.007 × X − 45.169 | 0.9999 | 51.2–20,000.0 |
| 2'-Asetillakteosid | Y = 110.235 × X − 8.953 | 0.9992 | 51.2–20,000.0 |
| Salidrosid | Y = 19.678 × X − 0.557 | 0.9993 | 51.2–20,000.0 |
| Tubulosid A | Y = 26.785 × X − 13.630 | 0.9997 | 51.2–20,000.0 |
| Tübülosid B | Y = 71.810 × X − 0.993 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Cistanosid A | Y = 0.578 × X + 1.531 | 0.9994 | 51.2–20,000.0 |
2.1.7 Hassasiyet Testi
Bölüm 2.1.4'teki koşullar altında hazırlanan karışık standart çözelti, %50 metanol ile seyreltildi ve bölüm 2.1.2 ve 2.1.3'teki koşullar altında arka arkaya altı kez enjekte edildi. Zirve alanlarının bağıl standart sapmaları (RSD'ler)ekinekozit, akteozit, izoakteozit, 2'-asetillakteosid, salidrosid, cistanosid B, tübülosid A, Vecistanosid Asırasıyla %0,95, %1,47, %0,56, %1,05, %0,93, %1,08, %1,19 ve %0,91 olup, bu da iyi bir hassasiyete işaret etmektedir.
2.1.8 Stabilite Testi
Tek bir örnekCistanche Deserticola(S4), bölüm 2.1.5'te açıklanan koşullar altında hazırlandı. Test çözeltisi enjekte edildi ve bölüm 2.1.2 ve 2.1.3'te açıklanan koşullar altında 0, 2, 4, 8, 12 ve 24 saatte analiz edildi. En yoğun alanların RSD'leriekinekozit, akteozit, izoakteozit, 2'-asetillakteosid, salidrosid, cistanosid B, tübülosid A, Vecistanosid Asırasıyla %1,46, %0,79, %0,95, %1,29, %1,22, %0,56, %0,49 ve %1,18 olup, numune çözeltisinin 24 saat içinde stabil olduğunu gösterir.
2.1.9 Tekrarlanabilirlik Testi
Tek bir topluCistanche Deserticola(S4) numunesi (parti numarası: 20240420-2), bölüm 2.1.5'te açıklanan koşullar altında altı paralel test çözeltisi halinde hazırlandı. Numuneler bölüm 2.1.2 ve 2.1.3'te açıklanan koşullar altında enjekte edildi ve analiz edildi. İçeriğin RSD'leriekinekozit, akteozit, izoakteozit, 2'-asetillakteosid, salidrosid, cistanosid B, tübülosid A, Vecistanosid Asırasıyla %1,26, %0,98, %1,55, %1,06, %1,33, %0,99, %1,65 ve %0,95 olup, iyi bir tekrarlanabilirlik göstermektedir.
2.1.10 Kurtarma Testi
Aynı gruptan dokuz örnekCistanche Deserticola(S4, parti numarası: 20240420-2) numune başına 0,1 g olacak şekilde hazırlandı. Numuneler, grup başına üç kopya olacak şekilde üç gruba ayrıldı. Her gruba referans standart içeriğinin %80, %100 ve %120'si eklendi.Cistanche Deserticolaörnek. Test çözeltileri bölüm 2.1.5'te açıklanan yöntem izlenerek hazırlandı ve bölüm 2.1.2 ve 2.1.3'teki koşullar altında analiz edildi. Sekiz feniletanoid glikozidin geri kazanımları hesaplandı ve sonuçlar Tablo 4'te gösterildi.
Sekme. 4 Cistanches Herba'da test edilen 8 bileşenin kurtarma oranları
| Bileşen | Örnek İçerik (mg) | Çivili (mg) | Ölçülen (mg) | Ortalama İyileşme (%) | RSD (%) |
|---|---|---|---|---|---|
| Ekinekozit | 0.513 8 | 0.410 1 | 0.911 2 | 99.85 | 1.37 |
| Ekinekozit | 0.513 8 | 0.513 8 | 1.015 2 | 99.88 | 0.95 |
| Ekinekozit | 0.513 8 | 0.616 5 | 1.129 4 | 99.85 | 1.06 |
| Akteozit | 0.421 5 | 0.337 2 | 0.759 6 | 99.90 | 1.02 |
| Akteozit | 0.421 5 | 0.421 5 | 0.843 5 | 99.87 | 1.18 |
| Akteozit | 0.421 5 | 0.505 8 | 0.926 7 | 99.84 | 1.24 |
| İzoakteozit | 0.327 1 | 0.261 7 | 0.588 6 | 99.85 | 0.86 |
| İzoakteozit | 0.327 1 | 0.327 1 | 0.654 2 | 99.86 | 1.05 |
| İzoakteozit | 0.327 1 | 0.392 5 | 0.719 1 | 99.84 | 1.13 |
| 2'-Asetillakteosid | 0.110 2 | 0.088 2 | 0.198 3 | 99.87 | 1.15 |
| 2'-Asetillakteosid | 0.110 2 | 0.110 2 | 0.220 1 | 99.86 | 1.09 |
| 2'-Asetillakteosid | 0.110 2 | 0.132 2 | 0.242 4 | 99.85 | 1.21 |
| Salidrosid | 0.081 6 | 0.065 3 | 0.146 7 | 99.84 | 1.18 |
| Salidrosid | 0.081 6 | 0.081 6 | 0.163 1 | 99.85 | 1.02 |
| Salidrosid | 0.081 6 | 0.097 9 | 0.179 7 | 99.84 | 1.17 |
| Tübülosid B | 0.072 3 | 0.057 9 | 0.130 0 | 99.86 | 1.09 |
| Tübülosid B | 0.072 3 | 0.072 3 | 0.144 1 | 99.86 | 1.05 |
| Tübülosid B | 0.072 3 | 0.086 8 | 0.159 2 | 99.84 | 1.24 |
| Tubulosid A | 0.043 8 | 0.035 0 | 0.078 5 | 99.86 | 1.16 |
| Tubulosid A | 0.043 8 | 0.043 8 | 0.087 5 | 99.86 | 1.02 |
| Tubulosid A | 0.043 8 | 0.052 5 | 0.096 2 | 99.84 | 1.15 |
