Ekinakozit, 5-FU'nun İndüklediği Miyelosüpresyon Farelerinde Hematopoietik Fonksiyonu İyileştiriyor

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Saisai Wang, et al

Soyut

Amaçları:etkilerini araştırmayı amaçladık.ekinakozit(ECH) açıkhematopoietik5-FU'nun neden olduğu kemik iliği depresyonu farelerinde işlev görür.

Ana yöntemler:In vitro, ECH ile stimülasyondan sonra, kemik iliği (BM) hücrelerinin ve kemik iliği stromal hücrelerinin (BMSC'ler) proliferasyon yeteneği,miyelosupresyonfareler, sırasıyla CCK8 tahlili ve morfolojisi ile değerlendirildi. İn vivo, 5-FU ile indüklenen miyelosupresyon veya kontrol farelerine, her iki ECH ile intragastrik olarak uygulandı.(ekinakozit)BM hücreleri koloni oluşturan hücre tahlili için izole edilmeden önce 12 gün boyunca günlük 15 mg/kg veya eşit hacimde normal salin. Bu arada, BMSC'ler, büyüme paterni için hücreler gözlemlenmeden önce 4 hafta boyunca kültürlendi, hücre kültürü süpernatanları, ELISA ile GM-CSF salgılaması için toplandı ve hücrelerin RNA'sı, EPO ve GM-CSF RT-PCR için özümlendi. 24 saat veya 48 saat boyunca ECH ile uyarılan BM hücreleri veya BMSC'ler, protein ekstraksiyonu ve Western blotlama için toplandı.

Önemli bulgular:ECH(ekinakozit)BM hücrelerinin büyümesini uyardı, ancak 5-FU ile tedavi edilen farelerden türetilen BMSC'leri değil. ECH'nin intragastrik uygulaması(ekinakozit)5-FU ile tedavi edilen farelerde toplamhematopoietikprogenitör hücreler ve GM progenitör hücreler, sağlıklı kontrol fareleri seviyesine, ancak BFU progenitör hücrelere değil. ECH ile muamele edilmiş BMSC'lermiyelosupresyonfareler daha kuvvetli büyüdü ve daha fazla GM-CSF ifade etti, ancak EPO'yu ifade etmedi. ECH, 5-FU bastırılmış BM hücrelerinde PI3K sinyal yolunu aktive etti.

Önem:ECH(ekinakozit)iyileştirebilirhematopoietik5-FU ile indüklenen kemik iliğinin işlevimiyelosupresyonfareler. ECH(ekinakozit)kemoterapi veya HSC transplantasyonu sırasında hastalar için alternatif etkili bir tedavi olarak düşünülebilir.

Anahtar Kelimeler:Ekinakozid, Hematopoetik, Miyelosüpresyon, GM-CSF, PI3K sinyal yolu

Ekinakozit içindecistanche

giriiş

Florourasil veya 5-FU, kanserlerin adjuvan ve palyatif tedavisi için en çok reçete edilen kemoterapötik ajanlardan biridir [2,9,28]. Hidrojen yerine C-5 konumunda bir flor atomu olan bir urasil analoğudur ve timidilat sentazın aktivitesini geri dönüşümsüz olarak inhibe ederek ve ardından DNA replikasyonunu inhibe ederek çalışır [20]. Lökopeni ve atrofihematopoietikinsanlarda, farelerde ve domuzlarda 5-FU uygulamalarıyla ilgili iki baskın toksisitedir [15,17,22].miyelosupresyonüzerindeki inhibitör ve sitotoksik etkilerinin bir sonucu olarakhematopoietikprogenitör hücreler [10] ve kemik iliği üzerindeki oksidatif stres [25], 5-FU bazlı kemoterapilerin klinik uygulamasını sınırlar.

5-FU tarafından indüklenen kemik iliği baskılanması, tüm kan hücresi sayımlarının azalmasına neden olur. Sonuç klinik semptomlar ateş, anemi ve kanamayı içerir ve tedaviler esas olarak transfüzyonlara ve büyüme faktörü takviyelerine bağlıdır [4]. Transfüzyon, kırmızı kan hücrelerini ve trombositleri yenilemede etkili olabilir, ancak rahatlama kısa sürelidir ve tekrarlanan tedaviler gerektirir. Büyüme faktörleri arasında eritropoietin, granülosit koloni uyarıcı faktör (G-CSF) ve granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF) bulunur. Bu faktörler doğal kimyasallardır ve kemik iliği performansını artırabilir [7,21], ancak para tüketir ve beyaz kan hücresi büyümesini teşvik etmek için yararlı değildir. Alternatif etkili tedaviler talep görmektedir. Geleneksel Çin tıbbı, popülerlik kazanan mevcut bir seçenektir [5]. Geçtiğimiz birkaç yıl içinde, birçok çalışma, Çin bitkisel ilaçlarının kemoterapi ile ilişkili hastalıkları önleme ve tedavi etme üzerindeki etkilerine odaklandı.miyelosupresyon[33,35].

Ekinakozit(ECH) (Şekil 1), geleneksel Çin tıbbı Herba Cistanches'ten elde edilen ve kan dolaşımını teşvik edici bir ajan, böbrek yetmezliği ilaçları ve nörodejeneratif hastalıklar için yaygın olarak kullanılan bir feniletanoid bileşiğidir [24]. ECH(ekinakozit)kemik rejenerasyonu [18], anti-oksidasyon [8,14,27], bağışıklık düzenlemesi, nöroproteksiyon ve davranışsal iyileştirme [11,16] gibi birçok farmakolojik aktiviteye sahiptir. Ayrıca hepatotoksisiteye [32] ve akut akciğer hasarına [34] karşı koruyucu bir ajan olarak ortaya çıktı. Trk reseptörleri ve aşağı akım Trk-ERK yolu, rotenon hasarına karşı nöronal koruma aktivitesinde rol oynayabilir [36]. ECH'nin teşvik etmedeki rolü ve yeni mekanizmalarımiyelosupresyonkemik iliği hücre büyümesi tam olarak anlaşılamamıştır. Bu çalışmada, ECH'nin etkilerini değerlendirdik.(ekinakozit)üzerindehematopoietik5-FU ile indüklenen kemik iliği depresyonu farelerinde in vitro ve in vivo işlev ve ilgili mekanizmalar.

Malzemeler ve yöntemler

Kimyasallar ve biyokimyasallar

EkinakozitRonghe Medical Technology and Development Corporation'dan (Shanghai, China) satın alındı ​​(saflık yüzde 98'den büyük veya buna eşit, HPLC ile belirlendi) ve DMSO içinde çözüldü. 5-FU, HaoRan Biotechnology Corporation'dan (Shanghai, China) elde edilmiştir. Fare hücreleri için rekombinant sitokinlere sahip metilselüloz ortamı (MethoCult ortamı), Stem Cell Technologies'den (Vancouver, Kanada) satın alındı.

vücut geliştirme

Hayvanlar ve deneysel tasarım

Ağırlığı 15-18 g arasında olan, spesifik patojen içermeyen, 5- ila 6-haftalık dişi Balb/c fareler, Shanghai Laboratory Animal Company'den (SLAC, Şanghay, Çin) satın alınmıştır. Fareler, Çin'deki Zhejiang Üniversitesi'ndeki hayvan tesisinde tutuldu. Hayvan deneyleri, Zhejiang Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı ve laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Rehber'i izliyordu [1,31].

Choi EH ve diğerleri tarafından tarif edildiği gibi kemik iliği depresyonunu oluşturmak için farelere bir doz 200 mg/kg 5-FU intraperitoneal olarak enjekte edildi. [6]. İn vitro çalışma için, 5-FU enjeksiyonundan 2 gün sonra kemik iliği (BM) hücreleri ve kemik iliği stromal hücreleri (BMSC'ler) izole edildi. İn vivo, fareler rastgele 4 gruba ayrıldı, her grupta 5-6 fare (n=5–6): 5-FU/ECH grubu, 5-FU/kontrol grubu, ECH(ekinakozit)grup ve kontrol grubu. 5-FU/ECH grubunda, 5-FU enjeksiyonundan sonra fareler, 12 gün boyunca günde 15 mg/kg ECH ile günlük intragastrik olarak beslendi. 5-FU/kontrol grubunda ECH yerine(ekinakozit), 5-FU enjekte edilen farelere eşit hacimde normal salin uygulandı. ECH grubu ve kontrol grubu için, 5-FU ile tedavi edilmemiş farelere aynı yöntemle ECH veya normal salin uygulandı. 12. günde farelere ötenazi uygulandı ve ileri çalışmalar için kemik iliği hücreleri çıkarıldı. Ayrıntılı olarak, BM hücreleri koloni oluşturan hücre (CFC) tahlili için hazırlandı, BMSC'ler çoğalma tahlili içindi ve BMSC'lerin hücre kültürü süpernatanları GM-CSF ELISA için toplandı ve BMSC'lerin RNA'sı EPO ve GM-CSF RT için ekstre edildi. -PCR. Deneyler 3 kez tekrarlandı.

BM hücrelerinin ve BMSC'lerin hazırlanması

BM hücreleri, fare kemik iliğinden ekstrakte edilen tek hücreli süspansiyonlardan hazırlandı. Kısaca, farelere ötenazi uygulandı ve 5 dakika boyunca etanol içinde ıslatıldı. Hücreler, tibia ve femur kemiğinin medüller kanalından bir 23-ölçer iğnesi ile tekrar tekrar yıkanarak yıkandı ve tek hücreli süspansiyonlar elde etmek için 100 um'lik bir hücre süzgecinden elendi. Eritroid kemik iliği hücreleri, amonyum klorür tamponu ile kısa süreli inkübasyon (30 s) ve ardından bir kültür ortamı ile tekrarlanan yıkama adımları ile parçalandı. Canlılık ve hücre sayısı, bir hemositometre kullanılarak tripan mavisi dışlama yöntemiyle belirlendi.

BMSC'lerin üretilmesi için, BM hücrelerinin 24 saat boyunca TC-plakalarının oyuklarında büyümesine izin verildi, yapışkan olmayan hücreler çıkarıldıktan ve kültür ortamı ile tekrar tekrar yıkandıktan sonra, yapışık hücreler BMSC'ler olarak alındı.

Hücreler, yüzde 10 ısıyla inaktive edilmiş fetal sığır serumu (FBS), penisilin/streptomisin (100 U/ml) ve L-glutamin ile tamamlanan Dulbecco'nun Değiştirilmiş Kartal Ortamı (DMEM) içindeki nemli bir inkübatörde yüzde 5 CO2 ile 37 derecede kültürlendi. (2nM). Tüm hücre kültürleme reaktifleri Invitrogen'den (Shanghai, China) satın alındı.

CCK8 tahlili ile in vitro BM hücrelerinin proliferasyonu

5-FU ile tedavi edilen farelerden alınan BM hücreleri, bir 96-yuvalı plakada (Costar) 1 x 103 hücre/kuyu yoğunluğunda kaplandı ve farklı ECH konsantrasyonları ile desteklenmiş bir ortamda kültürlendi(ekinakozit)({{0}} μM, 0.1 μM, 1 μM, 10 μM, 25 μM, 50 μM, sırasıyla). 3. veya 6. günde, hücreler 20 ul CCK-8 solüsyon reaktifi (Beyotime, Jiangsu) ile "darbelendi" ve 4 saat daha kültürlendi. Hücre proliferasyonu, 450 nm'de bir ultra mikroplaka okuyucu (Molecular Devices) üzerinde kolorimetrik CCK8 ölçülerek test edildi.

Ekinakozit içindecistanche

In vitro BMSC proliferasyonu ve morfolojisi

BMSC'ler, BM hücrelerinin (ayrıca 5-FU ile tedavi edilen farelerden alınan) başlangıç ​​yoğunluğunun 3.5 x 106 hücre/kuyu olduğu bir 6-kuyulu plakanın oyuklarında hazırlandı. 24 saat sonra kültür ortamı, ECH (50 ug/ml) içeren bir ortam ile değiştirildi. Her hafta, süpernatanların yarısı çıkarıldı ve yeni bir kültür ortamı (ECH içeren veya içermeyen) ile değiştirildi.(ekinakozit)belirtildiği gibi). 4 haftalık kültürden sonra, BMSC'lerin morfolojisi ters çevrilmiş bir mikroskop altında gözlendi.

Koloni oluşturan hücre (CFC) tahlili

MethoCult ortamındaki CFC tahlili, üreticinin talimatları izlenerek gerçekleştirilmiştir. Kısaca, farklı fare gruplarından BM hücreleri, ml başına 2 x 105 olacak şekilde hazırlandı. Daha sonra hücre karışımını yapmak için 4 ml MethoCult ortamına 0,4 ml hücreler ilave edildi. Bir 16-gösterge kör uçlu iğne ile iyice karıştırıldıktan sonra, 1.1 ml hücre karışımı her 35 mm kültür kabına (Kök Hücre Teknolojileri) dağıtıldı, üç kopyalandı ve yüzde 5 CO2'lik nemli atmosferde 37 derecede inkübe edildi. 7 gün boyunca. 7 günlük kültürden sonra, en az 30 hücreden oluşan koloniler tanımlandı ve sayıldı.

Ters transkriptaz-polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ve GM-CSF ELISA

Farklı fare gruplarından türetilen BMSC'ler, yukarıda tarif edildiği gibi 4 hafta boyunca kültürlendi. 4-haftalık kültürden sonra, RNAsimple Total RNA kiti (TianGen, Beijing) ile toplam RNA ekstraksiyonu için BMSC'ler toplandı. Birinci iplikli cDNA, iScript cDNA sentez kiti (Bio-Rad, Richmond, CA) kullanılarak 1 ug toplam RNA (DNaz ile muamele edilmiş) kullanılarak sentezlendi. Granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör (GM-CSF) ve Eritropoietin (EPO) ifadeleri yarı niceliksel RT-PCR ile belirlendi. PCR primer dizileri aşağıdaki gibidir: GM-CSF: 5′-GGCCTTGGAA GCATGTAGAGG-3′ (ileri) ve 5′-GGAGAACTCGTTAGAGACGA CTT-3′ (ters); EPO: 5′-CCTCATCTGCGACAGTCG AG-3′ (ileri) ve 5′-ACAACCCAT CGTGACATTTTCT-3′ (ters); temizlik geni Beta-aktin: 5′-GTATCCTGACCCT GAAGTACC-3' (ileri) ve 5′-TGAA GGTCTCAAACATGATCT-3' (ters). PCR amplifikasyonu 2720 Thermal Cycler (Applied Biosystems) üzerinde yapıldı ve ürünler agaroz jel elektroforezi kullanılarak analiz edildi. Hedeflerin mRNA ekspresyon seviyeleri, beta-aktininkine normalleştirildi. BMSC'lerin süpernatanları, üreticinin talimatlarına göre GM-CSF ELISA kiti (JinSui, Shanghai) kullanılarak GM-CSF ELISA testi için toplandı.

Western blotlama

5-FU kaynaklı BM hücreleri ve BMSC'lermiyelosupresyonfareler veya kontrol fareleri, 6-kuyulu plakalarda oyuk başına 5 x 106'lık bir başlangıç ​​yoğunluğunda plakalandı. 24 saat sonra, kültür ortamına 50 ug/ml'de ECH ilave edildi ve hücreler, 1 mM fenilmetilsülfonil florür içeren 1 x RIPA tamponu (CST, Danvers, MA) içinde parçalanmadan önce 24 saat veya 48 saat daha büyümeye bırakıldı. (PMSF). Protein konsantrasyonu, BCA protein tahlili ile belirlendi. 30 ug toplam protein yüzde 10 sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jelleri üzerinde elektroforeze tabi tutuldu ve PVDF zarlarına (Millipore, MA, ABD) aktarıldı. Zarlar bloke edici tamponla ((Beyotime, Haimen, Çin) 37 derecede 1 saat bloke edildi ve daha sonra gece boyunca -aktin (#4967, CST), fosfo-PI3 kinaz p85 (Tyr458)/p55'e karşı antikorlarla 4 derecede inkübe edildi. (Tyr199) (#4228, CST), fosfo-Akt (Ser473) (#4060, CST), Akt (pan) (C67E7) (#4691, CST), fosfor-Stat1(Tyr701)(#9167, CST), Phospho-Stat3 (Tyr705) (#9415, CST), Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)(#9215, CST), Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204)(#4377, CST ), p38 MAPK(#9212, CST), p44/42 MAPK (Erk1/2)(#4695, CST), Phospho- SAPK/JNK (Thr183/Tyr185)(#4668, CST) ve SAPK/JNK(# 9258, CST). CA, ABD).

istatistiksel analiz

Veriler ortalama ± SEM olarak sunuldu Her grup arasındaki farkların önemi Student t-testi ile belirlendi. Bir p değeri b 0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

vücut geliştirme

Sonuçlar

In vitro sağlanan ECH(ekinakozit)5-FU bastırılmış BM hücrelerinin çoğalmasını uyarır

5-FU kaynaklı BM hücrelerimiyelosupresyonfareler ECH ile tedavi edildi(ekinakozit)3 gün veya 6 gün boyunca 0.01 ila 50 uM arasında değişen çeşitli konsantrasyonlarda ve hücre çoğalması CCK8 tahlili ile değerlendirildi. Şekil 2'de gösterildiği gibi, ECH ile muamele edilmiş BM hücrelerinin proliferasyon seviyesi, hem 3 hem de 6 günlük kültürden sonra ECH ile muamele edilmemiş hücrelerden daha yüksekti. Uyaran etkisi doza bağımlı bir şekilde gösterdi.

In vitro sağlanan ECH(ekinakozit)5-FU'nun baskıladığı BMSC proliferasyonu üzerinde hiçbir etkisi yoktur

5-FU kaynaklı BMSC'lermiyelosupresyonfareler ECH ile tedavi edildi(ekinakozit)4 hafta boyunca 50 ug/ml konsantrasyonunda ve hücre proliferasyonu, ters çevrilmiş bir ışık mikroskobu altında hücre morfolojisinin gözlemlenmesiyle değerlendirildi. Şekil 3'te gösterildiği gibi, hücrelerin büyüme modeli ve morfolojisi, ECH tedavisi olsun veya olmasın benzerdi.

İntragastrik olarak uygulanan ECH(ekinakozit)5-FU ile indüklenen miyelosupresif granülosit-makrofajın (CFU-GM) hematopoietik işlevini uyarır, ancak eritroid (BFU-E) progenitör hücrelerini uyarmaz

5-FU/ ECH, 5-FU/kontrol, ECH'den BM hücrelerinin çoğalma ve farklılaşma kalıpları(ekinakozit), ve kontrol grubu CFC testi ile değerlendirildi. BM hücrelerinin MethoCult ortamında 7 günlük kültüründen sonra, CFC'ler bir ışık mikroskobu altında in situ sınıflandırıldı ve numaralandırıldı. Şekil 4'te gösterildiği gibi, progenitör seviyelerinin analizi, 5-FU/ECH grubunda CFU-GM sayısında önemli (pb 0.0001) artış olduğunu ortaya çıkardı. 5-FU/kontrol grubu (169.3 ± 11.1'e karşı 54.5 ± 3.1) ve kontrol grubu (169.3 ± 11.1'e karşı 129.3 ± 5.6) ile karşılaştırıldığında (sırasıyla pb 0.05). Her gruptaki BFU-E sayısı arasında fark yoktu (73.0 ± 11.1'e karşı 74.7 ± 8.6'ya karşı 91.2 ± 5.5). ECH grubundaki CFU-GM ve BFU-E sayısı, kontrol grubundaki ile hemen hemen aynıydı (veriler gösterilmemiştir).

Şekil 4. İntragastrik olarak uygulanan ECH(ekinakozit)uyarırhematopoietik5-FU'nun indüklediği işlevmiyelosupresyongranülosit-makrofaj (CFU-GM), ancak eritroid (BFU-E) progenitör hücreleri değil. (A) Koloni oluşturan birimlerin temsili bir görüntüsü. CFU-GM: koloni oluşturan birimler-granülosit makrofaj. BFU-E: patlama oluşturan birim eritroid. (B) Her grubun koloni oluşturan birimlerinin temsili görüntüleri. (C) Her grubun koloni oluşturan birimlerinin sayısı. BM hücreleri her gruptan izole edildi ve Malzemeler ve yöntemler bölümünde açıklandığı gibi CFU-GM ve BFU-E progenitör hücre kolonisi oluşturma deneyi için tohumlandı. Sonuçlar 3 bağımsız deneyden elde edildi ve ortalama ± SEM, n=5–6 olarak ifade edildi. * pb 0.05 kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, ## pb 0.0001 5-FU grubuyla karşılaştırıldı.

İntragastrik olarak uygulanan ECH(ekinakozit)5-FU ile indüklenen miyelosupresyon BMSC proliferasyonunu uyarır.

4 haftalık kültürden sonra, BMSC'lerin proliferasyonu, ışık ters çevrilmiş bir mikroskop altında hücre morfolojisinin gözlemlenmesiyle değerlendirildi. Şekil 5'te gösterildiği gibi, 5-FU/ECH'deki BMSC'ler(ekinakozit)grup, kontrol grubuna göre daha hızlı büyüdü.

İntragastrik olarak uygulanan ECH(ekinakozit)5-FU ile indüklenen miyelosupresif BMSC'lerin GM-CSF üretimini uyarır

BMSC'lerin kültüründen 4 hafta sonra, hücrelerin GM-CSF ve EPO'sunun mRNA ifadeleri RT-PCR ile belirlendi. Şekil 6A'da gösterildiği gibi, ECH ile tedavi edilen kemik iliği baskılama farelerinden alınan BMSC'lerdeki GM-CSF ekspresyonu, 5-FU/kontrol grubu ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde arttı. Hücre kültürü süpernatanlarında GM-CSF üretimi ELISA ile belirlendi. Şekil 6B'de gösterildiği gibi, 5-FU/ kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, 5-FU/ECH(ekinakozit)grup daha yüksek bir GM-CSF ifadesi sergiledi (pb 0.05) ve neredeyse kontrol grubu kadardı.

ECH(ekinakozit)5-FU baskılanmış BM hücrelerinde PI3K sinyal yolunu aktive eder

5-FU kaynaklı BM hücreleri ve BMSC'lermiyelosupresyonveya kontrol fareleri ECH ile uyarıldı(ekinakozit)protein ekstraksiyonu ve Western blot için hücreler toplanmadan önce 24 saat veya 48 saat boyunca 50 ug/ml konsantrasyonunda. ECH mekanizmalarından beri(ekinakozit)fazla çalışılmamışsa, JAK/STAT1, JAK/STAT3, SAPK/JNK, p-38 MAPK, p44/42 MAPK ve PI3K/Akt sinyal yolları dahil olmak üzere ilgili sinyal yollarının bir panelini taradık. Şekil 7'de gösterildiği gibi, ECH, BMSC'lerde veya kontrol gruplarında indüksiyonun açık olmadığı 5-FU farelerinden türetilen BM hücrelerinde p-PI3K p85/p55'in yüksek ekspresyonunu indükleyebilir. Diğer tüm yollar için büyük farklılıklar görmedik (veriler gösterilmemiştir).

Tartışma

ECH olduğu doğru görünüyordu(ekinakozit)5-FU tedavisi görmemiş fareler için, ECH'deki hematopoietik progenitör hücrelerin sayısı(ekinakozit)morfoloji, GM-CSF ve EPO salgılarının gösterdiği gibi BMSC'lerin proliferasyonu ve aktivasyonu da kontrol grubununkiyle hemen hemen aynıydı. Böylece, sonuç oturumunda, ECH'den gelen veriler(ekinakozit)grup bir kontrol grubu ile birleştirildi ve kontrol olarak tanımlandı.

5-FU'nun kanser tedavisinde kemoterapi ilacı olarak kemik iliği işlevi üzerinde etkileri vardır. 5-FU'nun yüksek dozda kullanımı ciddi kemik iliği baskılanmasına neden olabilir [19]. Çalışmamızda, azalan koloni oluşturan birimler ve BMSC'lerin morfolojisi tarafından desteklenen 5-FU tedavisi ile farelerde kemik iliği baskılama modeli başarıyla kurulmuştur.

Kemik iliği önemlihematopoietikhematopoietik kök hücreler (HSC'ler) ve kemik iliği stromal hücrelerinden (BMSC'ler) oluşan organ [13]. Eski hücreler, kırmızı hücreler, trombositler, monositler, granülositler ve lenfositler dahil olmak üzere kan hücreleri üretebilir. İkinci hücreler, mezenkimal veya stromal hücreler olarak tanımlanan yağ, kıkırdak ve kemik üretebilir [26]. BMSC'lerin, bu iki kök hücre popülasyonunun birbirini yakından takip ettiği HSC nişinin anahtar bileşenleri olduğu kabul edilmektedir.hematopoietikve iskelet homeostazı [29]. BMSC'ler, FL [23], GM-CSF [12] ve SCF [12,3] gibi düzenleyici molekülleri ve sitokinleri salgılayarak HSC'lerin çoğalmasını uyarabilir ve artırabilir.

In vitro veriler, ECH'nin(ekinakozit)BM hücrelerinin çoğalmasını uyarabilirmiyelosupresyonfarelerde doza bağımlı bir şekilde, genel olarak hücreler, muhtemelen in vitro kültür ortamının bir sonucu olarak 3. günde 6. güne göre daha güçlü bir şekilde büyüdü. Aksine, ECH(ekinakozit)5-FU ile tedavi edilen farelerden BMSC'lerin çoğalması üzerinde hiçbir etkisi olmadı. Negatif etkinin hücre büyüme koşulundan kaynaklanmama olasılığını dışlamak için, deneysel ortamda BMSC'leri uyardığı kanıtlanmış bir bitki bileşeni olan Rg1'i de dahil ettik.miyelosupresyonpozitif kontrol olarak farelerin büyümesi [33].

In vivo veriler, ECH'nin(ekinakozit)hematopoezi etkili bir şekilde yeniden yapılandırabilir, büyük olasılıkla granülositopoezi ve megakaryositopoezi değil, eritropoezi değilmiyelosupresyonfareler. ECH'nin intragastrik uygulaması(ekinakozit)12 gün boyunca 5-FU ile tedavi edilen farelere, her ikisinin de toplam sayısının artmasıyla sonuçlandıhematopoietikprogenitör hücreler ve granülosit-makrofaj progenitör hücreler, ancak CFC testlerinden CFU-GM ve BFU-E sayısı ile belirtildiği gibi eritroid progenitör hücreler değil. İlginç bir şekilde, 5-FU/ECH'deki CFU-GM sayısının(ekinakozit)grubu, kontrol gruplarından bile daha yüksekti. CFU-GM'nin hızlı bir şekilde genişlemesini speküle ettik ve bunun telafisi olarak gerçekleşti.miyelosupresyon5-FU tarafından yönetilen koşul. Verilerimiz ayrıca ECH'nin BMSC proliferasyonunu ve GM-CSF'yi uyarabildiğini, ancak EPO üretimini uyaramadığını ortaya koydu.miyelosupresyonCFC sonuçlarıyla tutarlı olan fareler.

Şimdiye kadarki sonuçlar ECH'nin yeni bir yolunu işaret etti.(ekinakozit)geliştirmek için kullanılabilecekhematopoietikişlevmiyelosupresyonfareler (Şekil 8'de gösterildiği gibi): Bir HSC niş ortamında, in vitro veya kemik iliğinde in situ karışık BM kültürü ile ECH, BMSC proliferasyonunu ve GM-CSF üretimini uyarır, böylece proliferasyonu ve farklılaşmayı uyarır ve arttırır HSC'lerin. HSC'lerin varlığı olmadan ECH, BMSC proliferasyonunu uyaramaz.

GM-CSF reseptörü (ligand bağlama) ve (sinyalleme) alt birimlerinden oluşur. GM-CSF önce alt birime bağlanır, ardından efektör proteinlerin alt birim ile etkileşimi yoluyla aşağı akış sinyalleşme basamaklarını indükler [30]. alt birim, aşağı akış sinyalleşmesini başlatan JAK2'yi transaktive etti. Aktive edilen sinyal modülleri, Janus kinaz/sinyal dönüştürücü ve transkripsiyon aktivatörü (JAK/STAT) yolunu, mitojenle aktive olan protein kinaz (MAPK) yolunu ve fosfatidilinositol 3-kinaz (PI3K) yolunu içerir [30]. İlginç bir şekilde, taramamızın sonucu, 5-FU ile tedavi edilen farelerden türetilen BM hücrelerinde PI3K yolunun aktive olduğunu, ancak 5-FU baskılanmış BMSCS'de ve normal BM hücrelerinde veya BMSC'lerde belirgin olmadığını gösterdi. GM-CSF/PI3K yolunun aktivasyonu yoluyla ECH'nin(ekinakozit)BM hücrelerinin büyümesini seçici olarak uyarır.

cistanche içinde ekinakozit

Sonuçlar

Özetle, ECH'nin(ekinakozit)üzerinde umut verici bir teşvik edici etkiye sahiptir.hematopoietik5-FU ile indüklenen kemik iliği baskılama farelerinde, özellikle granülositik ve makrofagositik hücrelerde işlev görür, bu da ECH'nin(ekinakozit)kimyasallarla tedaviden sonra kemoterapi veya HSC transplantasyonu sırasında kemik iliği inhibisyonunda klinik uygulama potansiyeline sahip olabilir.

Çıkar çatışması beyanı

Herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Referanslar

[1] ESD Alleva, Laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için rehber, Ethology 103 (1997) 1072-1073.

[2] J. Bergh, T. Wiklund, B. Eriksen, E. Lidbrink, H. Lindman, P. Malmstrom, et al., Adjuvan tedavi olarak kemik iliği destekli yüksek doz kemoterapi ile karşılaştırıldığında Uyarlanmış fluorourasil, epirubisin ve siklofosfamid yüksek riskli meme kanseri için: randomize bir çalışma. İskandinav Göğüs Grubu 9401 çalışması, Lancet 356 (2000) 1384-1391.

[3] A. Bernstein, L. Forrester, AD Reith, P. Dubreuil, R. Rottapel, The murine W/c-kit and steel loci and control of hematopoiesis, Semin. Hematol. 28 (1991) 138-142.

[4] PJ Carey, İlaç kaynaklımiyelosupresyon: tanı ve yönetim, Drug Saf. 26 (2003) 691-706.

[5] F. Cheung, TCM: Çin'de üretilmiştir, Nature 480 (2011) S82–S83.

[6] EH Choi, HE Ok, Y. Yoon, BA Magnuson, MK Kim, HS Chun, Yaban mersini (Vaccinium myrtillus L.) antosiyanin açısından zengin özütün 5-fluorouracil, BioFactors ( Öküz İngiltere) 29 (2007) 55-65.

[7] J. Crawford, H. Ozer, R. Stoller, D. Johnson, G. Lyman, I. Tabbara, ve diğerleri, Küçük hastalarda kemoterapi tarafından indüklenen granülosit koloni uyarıcı faktör ateş ve nötropeni ile azalma - hücre akciğer kanseri, N. Engl. J. Med. 325 (1991) 164–170.

[8] L. Dalby-Brown, H. Barrett, AK Landbo, AS Meyer, P. Molgaard, Echinacea purpurea'dan alkamidlerin, kafeik asit türevlerinin ve polisakkarit fraksiyonlarının insan düşük yoğunluklu lipoproteinlerinin in vitro oksidasyonu üzerindeki sinerjistik antioksidatif etkileri, J. Agric. Gıda Kimyası 53 (2005) 9413–9423.

[9] WH de Vos tot Nederveen Cappel, HJ Meulenbeld, JH Kleibeuker, FM Nagengast,

FH Menko, G. Griffioen, ve diğerleri, kalıtsal polipozis olmayan kolorektal kanserde evre III kolon kanseri için adjuvan 5-FU tedavisinden sonra hayatta kalma, Int. J. Kanser 109 (2004) 468-471.

[10] LE Friberg, MO Karlsson, için mekanik modellermiyelosupresyon, Araştır. Yeni İlaçlar 21 (2003) 183–194.

[11] X. Geng, X. Tian, ​​P. Tu, X. Pu, Nöroprotektif etkileriekinakozitParkinson hastalığının fare MPTP modelinde, Eur. J. Pharmacol. 564 (2007) 66-74.

[12] JY Han, RY Goh, SY Seo, TH Hwang, HC Kwon, SH Kim ve diğerleri, Kordon kanının kotransplantasyonuhematopoietikSCID farelerinde kök hücreler ve kültürle genişletilmiş ve GM-CSF-/SCF ile transfekte edilmiş mezenkimal kök hücreler, J. Korean Med. bilim 22 (2007) 242–247.

[13] EL Herzog, L. Chai, DS Krause, Kemik iliğinden türetilen kök hücrelerin plastisitesi, Blood 102 (2003) 3483–3493.

[14] C. Jia, H. Shi, W. Jin, K. Zhang, Y. Jiang, M. Zhao, ve diğerleri, Metabolism ofekinakozit, iyi bir antioksidan, sıçanlarda: safra metabolitlerinin izolasyonu ve tanımlanması, İlaç Metab. Elden çıkar. 37 (2009) 431-438.

[15] S. Kojima, K. Takaba, N. Kimoto, T. Takeda, M. Kakuni, M. Mizutani, ve diğerleri, Glutatyonun 5-florourasil ile indüklenen üzerindeki koruyucu etkilerimiyelosupresyonfarelerde, Arch. Toksikol. 77 (2003) 285–290.

[16] R. Kuang, Y. Sun, W. Yuan, L. Lei, X. Zheng, Koruyucu etkileriekinakozitPC12 hücrelerinde H(2)O(2) ile indüklenen sitotoksisite üzerinde feniletanoid glikozitlerden biri, Planta Med. 75 (2009) 1499–1504.

[17] JC Laurenz, M. Hadjisavas, GW Chovanec, FW Bazer,miyelosupresyondomuzda (Sus scrofa): uteroferrin, genç domuzlarda 5-florourasil'in miyelosupresif etkilerini azaltır, Comp. Biyokimya. Fizyol. Bir Physiol. 116 (1997) 369-377.

[18]
F. Li, Y. Yang, P. Zhu, W. Chen, D. Qi, X. Shi, ve diğerleri,EkinakozitMC3T3-E1 hücrelerinde OPG/RANKL oranını artırarak kemik yenilenmesini destekler, Fitoterapia 83 (2012) 1443–1450.

[19] A. Lindner, D. Santilli, J. Hodgett, C. Nerlinger, Etkileri 5-florourasilhematopoietikfare sistemi, Cancer Res. 20 (1960) 497-502.

[20] DB Longley, DP Harkin, PG Johnston, 5-florourasil: etki mekanizmaları ve klinik stratejiler, Nat. Rev. Kanser 3 (2003) 330–338.

[21] BR Luce, JW Singer, JM Weschler, CD Buckner, SH Sheingold, K. Shannon-Dorcy, et al., Lenfoid kanser için otolog kemik iliği transplantasyonundan sonra rekombinant insan granülosit-makrofaj koloni uyarıcı faktör: ekonomik bir analiz randomize, çift kör, plasebo kontrollü bir çalışma, PharmacoEconomics 6 (1994) 42-48.

[22] M. Malet-Martino, R. Martino, 5-Florourasil'in (kapesitabin, UFT, S-1) üç oral ön ilacının klinik çalışmaları: bir inceleme, Oncologist 7 (2002) 288-323 .

[23] S. Mishima, A. Nagai, S. Abdullah, C. Matsuda, T. Taketani, S. Kumakura, ve diğerleri, Etkili ex vivo genişlemehematopoietikosteoblast ile farklılaşmış mezenkimal kök hücreler kullanan kök hücreler CXCL12'ye bağlıdır, Eur. J. Hematol. 84 (2010) 538-546.

[24] M. Mostafa, N. Nahar, M. Mosihuzzaman, T. Makhmoor, MI Choudhary, AU Rahman, Leucas indica Linn'den serbest radikal süpürücü feniletanoid glikozitler, Nat. Ürün Araş. 21 (2007) 354-361.

[25] S. Numazawa, K. Sugihara, S. Miyake, H. Tomiyama, A. Hida, M. Hatsuno, ve diğerleri, 5-Fluorourasil aracılı oksidatif stresin olası katılımımiyelosupresyonfarelerde, Basic Clin. farmakol. Toksikol. 108 (2011) 40–45.

[26] DJ Prockop, İliğin sürekli yenilenmesi için kök hücreler olarak İlik stromal hücrelerihematopoietik olmayandokular ve gen terapisi için potansiyel vektörler olarak, J. Cell. Biyokimya. (1998) 284-285.

[27] BD Sloley, LJ Urichuk, C. Tywin, RT Coutts, PK Pang, JJ Shan, Farklı Ekinezya türlerinin kimyasal bileşenlerinin ve antioksidan kapasitelerinin karşılaştırılması, J. Pharm. farmakol. 53 (2001) 849-857.

[28] C. Twelves, A. Wong, MP Nowacki, M. Abt, H. Burris III, A. Carrato, ve diğerleri, evre III kolon kanseri için adjuvan tedavi olarak Capecitabine, N. Engl. J. Med. 352 (2005) 2696–2704.

[29] M. Valtteri, A. Sorrentino, Homeostaziye mezenkimal stromal hücre katkısı, J. Cell. Fizyol. 217 (2008) 296–300.

[30] L. van de Laar, PJ Coffer, AM Woltman, GM-CSF tarafından dendritik hücre gelişiminin düzenlenmesi: moleküler kontrol ve immün homeostazı ve tedavisi için çıkarımlar, Blood 119 (2012) 3383-3393.

[31] JMBK Worley, M. Bloomsmith, K. Coleman, TL Koban, Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nun sekizinci baskısı (2011); davranışsal yönetim için çıkarımlar, Am. J. Primatol. 73 (2011) 98.

[32] Y. Wu, L. Li, T. Wen, YQ Li, Koruyucu etkileriekinakozitsıçanlarda karbon tetraklorür kaynaklı hepatotoksisite üzerine, Toksikoloji 232 (2007) 50-56.

[33] SF Xu, LM Yu, ZH Fan, Q. Wu, Y. Yuan, Y. Wei, ve diğerleri, ginsenosid Rg1'in iyileştirilmesihematopoietiksiklofosfamid kaynaklı işlevmiyelosupresyonfareler, Avr. J. Pharmacol. 695 (2012) 7–12.

[34] Y. Zhang, J. Xing, T. Ai, T. Wen, L. Guan, J. Zhao, Protection ofekinakozitSıçanlarda oleik asidin neden olduğu akut akciğer hasarına karşı, Free Radic. Araş. 41 (2007) 798-805.

[35] AB Zhao, B. Yu, XL Wu, KJ Cao, EQ Li, QM Li, et al., Koruyucu etkilermiyelosupresyonÜç farklı klasik Çin tıbbı formülü ile tedavi edilen fareler, Pharmacogn. Mag. 7 (2011) 133–140.

[36] M. Zhu, C. Lu, W. Li, Geçici maruz kalmaekinakozitTrk sinyalini aktive etmek ve nöronal hücreleri rotenondan korumak için yeterlidir, J. Neurochem. 124 (2013) 571–580.