HIF-1 / PKM2'ye Dayalı 5/6 Nefrektomili Sıçanlarda Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatmasının Apoptoz ve Böbrek Dokusunun Fibrozisi Üzerine Etkisi

3.4 Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatmasının CRF Sıçanlarının Böbrek Dokusunda -SMA, TGF-, FN ve Kolajen-1'in Protein İfadeleri Üzerindeki Etkileri

Şekil 3 ila 6'da gösterildiği gibi sahte operasyonlu grupla karşılaştırıldığında, model grubun böbrek dokusunda -SMA, TGF-, FN ve kollajen-1'in protein ekspresyonları önemli ölçüde arttı (P<0.05). Compared with the model group, the protein expressions of α-SMA, TGF-β, FN, and collagen-1 in renal tissue of all drug-administered groups were significantly decreased (P<0.05). The effect of Bushen Huoxue Xiezhuo Decoction was dose-dependent.

Tablo 2 Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatmasının CRF sıçanlarında (x̄±s, n=10) serum Üre, Scr ve ₂-MG düzeyleri üzerindeki etkileri

Grup	Üre/(mmol/L)	Scr/(μmol/L)	₂-MG/(mg/L)
Sahte operasyonlu grup	6.23±0.63	37.35±0.83	0.98±0.13
Model grubu	23.02±0.73*	118.57±1.03*	3.95±1.07*
Düşük doz grubu	21.23±0.69#	112.45±0.87#	2.57±0.35#
Orta doz grubu	18.02±0.54#	93.18±1.17#	1.98±0.09#
Yüksek doz grubu	15.23±0.33#	87.24±1.08#	1.13±0.17#
Benazepril grubu	19.09±0.59#	105.77±0.67#	2.48±0.15#

Not: *P<0.05 vs. sham-operated group; #P<0.05 vs. model group

3.5 Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatmasının CRF Sıçanlarının Böbrek Dokusunda HIF-1, PKM2 ve HK2'nin mRNA İfadeleri Üzerindeki Etkileri

Şekil 7'de gösterildiği gibi sahte operasyonlu grupla karşılaştırıldığında, model grubun böbrek dokusunda HIF-1, PKM2 ve HK2'nin mRNA ifadeleri önemli ölçüde arttı (P<0.05). Compared with the model group, the mRNA expressions of HIF-1α, PKM2, and HK2 in renal tissue of all drug-administered groups were significantly decreased (P<0.05). The effect of Bushen Huoxue Xiezhuo Decoction was dose-dependent.

 

Şekil 3. Böbrek Tonlayıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Ortadan Kaldıran Formülün, CRF Sıçanlarının Böbrek Dokusunda -SMA Protein Ekspresyonu Üzerindeki Etkileri (ICH, ×400)

A. Sham tarafından işletilen Grup
B. Model Grubu
C. Düşük Doz Böbrek Tonlayıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formül Grubu
D. Orta Dozda Böbrek Tonlandırıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formül Grubu
E. Yüksek Dozda Böbreği Güçlendiren, Kanı Aktive Eden ve Bulanıklığı Ortadan Kaldıran Formül Grubu
F. Benazepril Grubu

 

Şekil 4. Böbrek Tonlayıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formülün CRF Sıçanlarının Böbrek Dokusunda TGF-Protein Ekspresyonu Üzerindeki Etkileri (ICH, ×400)

A. Sham tarafından işletilen Grup
B. Model Grubu
C. Düşük Doz Böbrek Tonlayıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formül Grubu
D. Orta Dozda Böbrek Tonlandırıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formül Grubu
E. Yüksek Dozda Böbreği Güçlendiren, Kanı Aktive Eden ve Bulanıklığı Ortadan Kaldıran Formül Grubu
F. Benazepril Grubu

 

 

Daha fazla ayrıntı için tıklayın

 

Wecistanche Destek Hizmeti-İşbirliği hakkında daha fazla bilgi için
E-posta:wallence.suen@wecistanche.com

 

3.6 Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatmasının CRF Sıçanlarının Böbrek Dokusunda HIF-1, PKM2 ve HK2'nin Protein İfadeleri Üzerindeki Etkileri

Şekil 8'de gösterildiği gibi sahte operasyonlu grupla karşılaştırıldığında, model grubun böbrek dokusunda HIF-1, PKM2 ve HK2'nin protein ifadeleri önemli ölçüde arttı (P<0.05). Compared with the model group, the protein expressions of HIF-1α, PKM2, and HK2 in renal tissue of all drug-administered groups were significantly decreased (P<0.05). The effect of Bushen Huoxue Xiezhuo Decoction was dose-dependent.

3.7 Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatmasının CRF Sıçanlarının Böbrek Dokusunda Bax, Bcl-2 ve Kaspaz-3'ün Protein İfadeleri Üzerindeki Etkileri

Şekil 9'da gösterildiği gibi sahte operasyonlu grupla karşılaştırıldığında, model grubun böbrek dokusunda Bax ve Kaspaz-3'ün protein ifadeleri önemli ölçüde artarken, Bcl-2'nin protein ifadesi önemli ölçüde azaldı (P<0.05). Compared with the model group, the protein expressions of Bax and Caspase-3 in renal tissue of all drug-administered groups were significantly decreased, and the protein expression of Bcl-2 was significantly increased (P<0.05). The effect of Bushen Huoxue Xiezhuo Decoction was dose-dependent.

 

Şekil 7. Böbrek Tonlayıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Ortadan Kaldıran Formülün, CRF Sıçanlarının Böbrek Dokusunda HIF-1, PKM2 ve HK2 mRNA'nın Ekspresyonu Üzerindeki Etkileri

A. Sham tarafından işletilen Grup
B. Model Grubu
C. Düşük Doz Böbrek Tonlayıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formül Grubu
D. Orta Dozda Böbrek Tonlandırıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formül Grubu
E. Yüksek Dozda Böbreği Güçlendiren, Kanı Aktive Eden ve Bulanıklığı Ortadan Kaldıran Formül Grubu
F. Benazepril Grubu
Not: Sahte operasyonlu grupla karşılaştırıldığında,

∗ P<0.05; Compared with the model group,

#P<0.05

Şekil 8. Böbrek Tonlayıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formülün CRF Sıçanlarının Böbrek Dokusundaki HIF-1, PKM2 ve HK2 Proteinleri Üzerindeki Etkileri

A. Sham tarafından işletilen Grup
B. Model Grubu
C. Düşük Doz Böbrek Tonlayıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formül Grubu
D. Orta Dozda Böbrek Tonlandırıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formül Grubu
E. Yüksek Dozda Böbreği Güçlendiren, Kanı Aktive Eden ve Bulanıklığı Ortadan Kaldıran Formül Grubu
F. Benazepril Grubu

 

Şekil 9. Böbrek Tonlayıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Ortadan Kaldıran Formülün, CRF Sıçanlarının Böbrek Dokusunda Bax, Bcl-2 ve Kaspaz-3 Proteinlerinin Ekspresyonu Üzerindeki Etkileri

A. Sham tarafından işletilen Grup
B. Model Grubu
C. Düşük Doz Böbrek Tonlayıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formül Grubu
D. Orta Dozda Böbrek Tonlandırıcı, Kan Aktive Edici ve Bulanıklığı Giderici Formül Grubu
E. Yüksek Dozda Böbreği Güçlendiren, Kanı Aktive Eden ve Bulanıklığı Ortadan Kaldıran Formül Grubu
F. Benazepril Grubu

Not: Sahte operasyonlu grupla karşılaştırıldığında,

∗ P<0.05; Compared with the model group,

#P<0.05

 

4 Tartışma

Son yıllarda KBH'li hastaların sayısı giderek artıyor ve prevalansı da önemli ölçüde arttı. Profesör Tan Jinchuan, KBH'nin temel patogenezini "fazlalıkla komplike olan eksiklik" olarak temel alarak, böbrek ve dalağın güçlendirilmesi, kan dolaşımının etkinleştirilmesi ve bulanıklığın boşaltılması terapötik ilkesini önerdi. Önceki çalışmalar Bushen Huoxue Xiezhuo Decoction'ın böbrek fonksiyonunu korumak için otofaji, apoptoz ve fibroz gibi yolları düzenleyebildiğini göstermiştir. İlgili çalışmalar ravent, astragalus, angelica, salvia miltiorrhiza ve bunların aktif bileşenlerinin hepsinin renal fibrozisi inhibe edebildiğini ve böbrek fonksiyonunu koruyabildiğini göstermiştir [7]. Bu çalışmanın sonuçları, model grubuyla karşılaştırıldığında, Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatma'nın tüm doz gruplarının, serum Üre, Scr ve ₂-MG seviyelerinin yanı sıra böbrek dokusunda kollajen lifi birikimini değişen derecelerde iyileştirdiğini gösterdi; bu, Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatmanın böbrek fonksiyonunu korumada ve böbrek fibrozisini geciktirmede önemli bir rol oynadığını ortaya koydu.

Özellikle, "çöl ginseng'i" olarak bilinen ve üst düzey böbrek besleyici tıbbi malzeme olarak kabul edilen klasik bir TCM bitkisi olan Cistanche tubulosa için benzer renal koruyucu etkiler rapor edilmiştir [15]. Geleneksel Çin Tıbbı teorisine göre, Cistanche tubulosa, "böbrek yang'ını canlandırma ve özü yenileme" yeteneği nedeniyle oldukça değerlidir ve modern araştırmalar, ekinekosid, verbaskosid ve flavonoidler gibi aktif bileşenler açısından zengin olduğunu doğrulamıştır [15]. Bu bileşenler renal hücre apoptozunu inhibe edebilir, renal hücre proliferasyonunu teşvik edebilir, hasarlı renal dokuyu onarabilir ve renal kan damarlarını genişletebilir; bu etkiler Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatmada gözlemlenen böbrek koruyucu mekanizmalarla uyumludur [15]. Bu tür bulgular, KBH tedavisinde böbrekleri besleyen özelliklere sahip geleneksel Çin tıbbı bitkilerinin potansiyelini vurgulamaktadır.

Apoptoz, CRF patogenezinin altında yatan önemli mekanizmalardan biridir. Fizyolojik koşullar altında pro-apoptotik ve anti-apoptotik aile üyeleri arasında hassas bir dinamik denge korunur. Apoptoz aşırı derecede aktive olduğunda glomerüllerde ve böbrek tübüllerinde patolojik değişikliklere yol açarak böbrek fonksiyonuna zarar verir. Pro-apoptotik protein Bax aktive edildiğinde, mitokondriyal dış membran geçirgenliğinde bir artışa neden olur, bu da mitokondriyal iç membran potansiyelinin çökmesine ve sitokrom C'nin (CytC) sitoplazmaya salınmasına neden olur, bu da Kaspaz-9'u aktive eder ve ayrıca Kaspaz-3'e bağlı apoptotik kaskadını tetikler [8]. İlgili çalışmalar, proksimal tübüler epitel hücrelerinde Bax geninin devre dışı bırakılmasının veya Bcl-2 ekspresyonunun yukarı regüle edilmesinin apoptotik süreci etkili bir şekilde inhibe edebildiğini göstermiştir [9]. Bu çalışma, Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatma'nın tüm dozlarının, pro-apoptotik faktörler Bax ve Kaspaz-3'ün ifadelerini önemli ölçüde aşağı regüle ettiğini ve anti-apoptotik faktör Bcl-2'nin ekspresyonunu yukarı regüle ettiğini buldu; bu, Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatma'nın apoptotik yolu bloke ederek böbrek fonksiyonunu iyileştirebileceğini öne sürdü.

Renal fibroz, birden fazla sitokinin aracılık ettiği, birden fazla sinyal yolu tarafından düzenlenen ve birden fazla faktör tarafından yönlendirilen kronik bir böbrek hastalığıdır. Böbrek dokusu hasarı, inflamasyon, ECM birikimi ve tübüler epitelyal-mezenkimal geçiş ile karakterize son dönem böbrek hastalığına yol açan yaygın bir yoldur. Renal fibroz, glomerüler fibrozis ve tübülointerstisyel fibrozisi içerir [8]. Çalışmalar, erken KRF'nin ana patolojik belirtisinin böbrek fibrozisi olduğunu ve böbrek fibrozisinin ilerlemesinin geciktirilmesinin, böbrek hasarını azaltmak ve böbrek yetmezliğinin ilerlemesini hafifletmek için büyük önem taşıdığını doğrulamıştır [10]. TGF-, Smad sinyal yolu yoluyla ECM sentezini düzenleyen, fibrozu yönlendiren önemli bir alt tiptir. FN, hücre yapışması, göçü ve ECM toplanmasında rol oynar. Aşırı ECM birikiminin ana hücresel kaynağı miyofibroblastlardır ve bunların yapısal transdiferansiyasyonu renal fibrozun oluşumunda ve gelişiminde anahtar bir faktördür. Kolajen-1 temel olarak miyofibroblastlardan türetilir ve miyofibroblastların ana morfolojik özelliklerinden ve aktivasyon belirteçlerinden biri olan -SMA'dan türetilir; her ikisinin de ekspresyon seviyeleri renal fibrozun derecesi ile pozitif olarak ilişkilidir [11]. İlgili çalışmalar, çeşitli kronik böbrek hastalıklarında, -SMA ve Kollajen-1'in mRNA ve protein ekspresyonlarının önemli ölçüde arttığını ve buna ciddi böbrek fibrozisinin eşlik ettiğini göstermiştir [12]. Bu çalışmada Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatma, -SMA, TGF-, FN ve Kollajen-1 gibi fibroz belirteçlerinin ifadelerini önemli ölçüde azalttı; bu, Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatma'nın böbrek fonksiyonunu iyileştirme ve böbrek fibrozunun ilerlemesini yavaşlatma üzerinde önemli etkilere sahip olduğunu gösterdi.

HIF-1 /PKM2 sinyal yolu apoptozla yakından ilişkilidir. HIF-1, Bax'i transkripsiyonel olarak aktive ederek ve Bcl-2'yi inhibe ederek apoptozu teşvik edebilir ve PKM2, nükleer translokasyondan sonra p53 gibi apoptozla ilişkili proteinleri düzenleyerek etkiler gösterebilir [13]. Memeli hipoksik tepkisinin temel düzenleyicilerinden biri olarak HIF-1, renal interstisyel fibrozis modelinde hipoksik renal tübüler epitel hücrelerinde HIF-1 aracılığıyla TGF- ekspresyonunu yukarı doğru düzenleyebilir, böylece Smad ile ilişkili yolakları aktive eder ve -SMA ve Collagen-1 gibi fibroz belirteçlerinin ekspresyonunu indükler. PKM2, apoptoz düzenlemesine katılmanın yanı sıra glikolitik metabolizmayı düzenleyerek fibrotik hücrelerin enerji ihtiyaçlarını da destekler [14]. Bu çalışmanın sonuçları, CRF model grubunun böbrek dokusunda HIF-1, PKM2 ve HK2 seviyelerinin önemli ölçüde arttığını, TCM gruplarındakilerin ise önemli ölçüde azaldığını gösterdi; bu, Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatmasının böbrek dokusunda HIF-1 /PKM2 yolunun aktivasyonunu baskılayarak apoptozu önleyebileceğini ve böbrek fibrozisini geciktirebileceğini düşündürüyor.

Özetle, Bushen Huoxue Xiezhuo Kaynatma, CRF sıçanlarında hücre apoptozunu ve fibrozisini inhibe edebilir, CRF model sıçanlarda böbrek hasarını iyileştirebilir ve mekanizması, HIF-1 /PKM2 sinyal yolunun düzenlenmesiyle ilişkili olabilir.

Referanslar

[1] Amerikan Sağlık Sistemi Eczacılığı Dergisi. Kronik böbrek hastalığının değerlendirilmesi ve yönetimi için Kdigo 2024 klinik uygulama kılavuzu[J]. Böbrek Uluslararası, 2024, 105(4S): 117-314.[2] Zhang L, Liu L, Bai M ve diğerleri. Tübüler epitel hücrelerinde hipoksinin neden olduğu HE4, NF-κB[J] yoluyla hücre dışı matris birikimini ve böbrek fibrozisini teşvik eder. FASEB Dergisi, 2020, 34(2): 2554-2567.[3] Hu D, Wang L, Zhang Y, ve diğerleri. Sanqi oral solüsyonu, kronik böbrek hastalığında[J] HIF-1 /PKM2/glikoliz yolu yoluyla fibroblast aktivasyonunu baskılayarak böbrek fibrozisini iyileştirir. Etnofarmakoloji Dergisi, 2024, 335: 118679.[4] Palsson-Mcdermott EM, Curtis AM, Goel G, ve diğerleri. Piruvat kinaz M2, Hif-1 aktivitesini ve IL-1 indüksiyonunu düzenler ve LPS ile aktifleştirilen makrofajlarda[J] Warburg etkisinin kritik bir belirleyicisidir. Hücre Metabolizması, 2015, 21(1): 65-80.[5] Bkz. EJ, Cullen V. Kronik böbrek hastalığında kan basıncının yönetimine yönelik KDIGO klinik uygulama kılavuzunun 2021 güncellemesine ilişkin yorum[J]. Nefroloji (Carlton, Vic), 2025, 30(1): e14414.[6] Wu ZH, Cao WX, Tan M, ve diğerleri. MTORC1/p70S6K yoluna[J] dayanarak kronik böbrek yetmezliği olan sıçanlarda Rhubarb Xiezhuo Kaynatmasının otofaji ve apoptoz üzerindeki etkilerinin araştırılması. Lishizhen Medicine ve Materia Medica Research, 2023, 34(2): 321-324.[7] Wang J, Li YT, Liu DW, ve diğerleri. Ravent antrakinonlarının ana aktif bileşenlerinin böbrek fibrozuna karşı mekanizması üzerine araştırma ilerlemesi[J]. Geleneksel Çin Tıbbı Araştırması, 2023, 36(10): 92-96.[8] Askari H, Seifi B, Kadkhodaee M, ve diğerleri. Hidrojen sülfürün oksidatif stresi, inflamasyonu ve apoptozu azaltarak kronik böbrek hastalığı üzerindeki koruyucu etkileri[J]. EXCLI Dergisi, 2018, 17: 14-23.[9] Solà-Riera C, García M, Ljunggren HG, ve diğerleri. Hantavirüs, hayatta kalma yanlısı faktörün BCL-2[J] yukarı regülasyonu yoluyla mitokondriyal membran potansiyel kaybını önleyerek apoptozu inhibe eder. PLoS Patojenleri, 2020, 16(2): e1008297.[10] Yuan L, Wang L, Wang H ve diğerleri. İcariin, Epo promoter hipermetilasyonunu inhibe eder, perisit-miyofibroblast geçişini düzenler ve 5/6 nefrektomize sıçanlarda renal anemiyi iyileştirir[J/OL]. Çin Materia Medica'nın Farmakolojisi ve Klinikleri: 1-17 [2025-12-17]. https://doi.org/10.13412/j.cnki.zyyl.20250408.004.[11] Sravani S, Saifi MA, Godugu C. Riociguat, bir hayvan modelinde böbrek hasarını ve fibrozisi iyileştirir[J]. Biyokimyasal ve Biyofiziksel Araştırma İletişimi, 2020, 530(4): 706-712.[12] Li L, Zhou G, Fu R, ve diğerleri. Balanophora polyandra Griff'ten (BPP) ekstrakte edilen polisakkaritler, Hedgehog yolunu [J] inhibe ederek renal fibrozisi ve EMT'yi iyileştirir. Hücresel ve Moleküler Tıp Dergisi, 2021, 25(6): 2828-2840.[13] Rana NK, Singh P, Koch B. CoCl₂ ile simüle edilmiş hipoksi, hücre proliferasyonunu indükler ve anjiyogenez ve apoptozda yer alan hipoksi ile ilişkili genlerin ekspresyon modelini değiştirir[J]. Biyolojik Araştırma, 2019, 52(1): 12.[14] Wang Z, Yu J, Hao D ve diğerleri. Hiperglisemik insan böbrek proksimal epitelyal tübüler hücrelerinde[J] PKM2 aktivatörüne TEPP-46 yanıt veren transkriptomik imzalar. Endokrinolojide Sınırlar, 2022, 13: 965379.[15] Chengdu WeCistanche Bio-Tech., Co Ltd. Böbreği beslemek için Cistanche[EB/OL]. https://www.xjcistanche.com/cistanche-extract-product/cistanche-for-nourishing-kidney.html, 2022-08-01.