Soyut

AmaçFerroptoz perspektifinden Parkinson hastalığının (PD) tedavisinde Bushen Zhichan Formülünün (BSZCF) potansiyel mekanizmasını araştırmak.YöntemlerYetmiş Sprague-Dawley (SD) sıçanı rastgele 7 gruba ayrıldı (grup başına n=10): kontrol grubu, model grubu, nükleer faktör eritroid 2 ile ilişkili faktör 2 (Nrf2) inhibitör grubu, levodopa-benserazid grubu ve düşük, orta ve yüksek doz BSZCF grupları. Kontrol grubu dışındaki diğer gruplardaki sıçanlara PD modeli oluşturmak amacıyla deri altından proteazom inhibitörü (PSI) enjekte edildi. Model oluşturulduktan iki hafta sonra, Nrf2 inhibitör grubundaki sıçanlara gün aşırı küçük moleküllü bileşik ML385 (50 mg/kg) intraperitoneal olarak 3 kez enjekte edilirken, diğer gruplardaki sıçanlara aynı zaman noktalarında intraperitoneal olarak normal salin (2 ml/kg) enjekte edildi. Model oluşturulduktan dört hafta sonra, düşük, orta ve yüksek dozlu BSZCF gruplarındaki sıçanlara sırasıyla 1,0, 1,5 ve 2,0 ml/(100 g·d) dozlarda sondayla BSZCF granül çözeltisi verildi; levodopa-benserazid grubundaki sıçanlara sondayla levodopa-benserazid tabletleri (200 mg/(100 g·d)) verildi; kontrol, model ve Nrf2 inhibitör gruplarındaki sıçanlara sondayla normal salin (2.0 ml/(100 g·d)) verildi. 3 haftalık sondayla beslenmenin ardından PD sıçanlarının motor fonksiyonunu değerlendirmek için davranış testleri (ızgara testi ve direk testi) yapıldı. Orta beynin substantia nigra'sındaki Nrf2 mRNA'nın ekspresyonunu tespit etmek için kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PCR) kullanıldı; Western Blot, Nrf2, çözünen taşıyıcı aile 7 üyesi 11 (SLC7A11) ve glutatyon peroksidaz 4'ün (GPX4) protein seviyelerini ölçmek için kullanıldı; glutatyon (GSH), malondialdehit (MDA), demir iyonları (Fe²⁺) ve GPX4 içeriğini belirlemek için enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA) kullanıldı; ve reaktif oksijen türlerinin (ROS) seviyesini tespit etmek için bir floresan mikroplaka okuyucu kullanıldı.SonuçlarKontrol grubuyla karşılaştırıldığında, model grubu, grid testinde gecikme süresinin ve kutup testindeki sürenin önemli ölçüde arttığını, substantia nigra'da GSH ve GPX4 içeriklerinin azaldığını, Fe²⁺ ve MDA içeriklerinin arttığını, Nrf2, SLC7A11 ve GPX4 protein seviyelerinin aşağı regüle edildiğini, yüksek ROS seviyesini ve Nrf2 mRNA ifadesinin azaldığını gösterdi (tümü P <0.05). Nrf2 inhibitörü grubu, yukarıdaki göstergelerde model grubuyla aynı değişiklik eğilimini sergiledi, ancak değişiklikler, hem model grubu hem de kontrol grubuyla karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı farklarla daha anlamlıydı (tümü P <0.05). Model grubuyla karşılaştırıldığında levodopa-benserazid grubu ve tüm BSZCF grupları (düşük, orta, yüksek doz) tüm göstergelerde anlamlı iyileşmeler gösterdi (tümü P < 0,05); bunlar arasında, yüksek doz BSZCF grubu ve levodopa-benserazid grubu, düşük ve orta doz BSZCF gruplarına göre daha anlamlı iyileşmeler gösterirken (tümü P <0.05), yüksek doz BSZCF grubu ile levodopa-benserazid grubu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark yoktu (tümü P > 0.05).ÇözümBushen Zhichan Formülü, orta beyin substantia nigra'da Nrf2 ekspresyonunu aktive ederek, SLC7A11/GSH/GPX4 sinyal yolunu düzenleyerek ve dolayısıyla lipit peroksidasyonunu ve ferroptozu inhibe ederek PD'yi tedavi edebilir.

 

Cistanche Faydaları Listesi

 

 

Listeyi kontrol edin

Wecistanche Destek Hizmeti-İşbirliği hakkında daha fazla bilgi için
E-posta:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

 

Anahtar Kelimeler

Parkinson hastalığı;Ferroptoz; Bushen Zhichan Formülü; Lipid peroksidasyonu; Nükleer faktör eritroid 2 ile ilişkili faktör 2 (Nrf2); Çözünen taşıyıcı aile 7 üye 11 (SLC7A11); Glutatyon (GSH); Glutatyon peroksidaz 4 (GPX4)

Parkinson hastalığı (PD)dünya çapında en sık görülen ikinci nörodejeneratif hastalıktır ve Alzheimer hastalığından sonra ikinci sıradadır [1]. Şu anda en yaygın kullanılan klinik tedavi, hastalığın erken evresinde motor semptomları iyileştirebilen ancak PH'nin ilerlemesini durduramayan dopamin (DA) replasman tedavisidir. Demir birikimi, artan oksidatif stres ve lipid peroksidasyon hasarı da PH patofizyolojisinin öne çıkan özellikleridir [2]; Demire bağımlı lipit peroksidasyon ürünlerinin birikmesiyle tetiklenen bu hücre ölümü şekli ferroptoz olarak tanımlanır. PH hastalarında demir seviyelerini düşürmek için demir şelasyon tedavisi, erken PH'de motor semptomları hafifletebilir [3]. Ferroptoz, çoklu gen ekspresyon sinyalleri tarafından düzenlenir ve çözünen taşıyıcı aile 7 üyesi 11 (SLC7A11)/glutatyon (GSH)/glutatyon peroksidaz 4 (GPX4) sinyal yolu, redoks homeostazisini korumak ve ferroptozu önlemek için çok önemli olan birincil ferroptoz izleme sistemidir [4]. Nükleer faktör eritroid 2 ile ilişkili faktör 2 (Nrf2), antioksidan tepkinin anahtar düzenleyicisidir ve hücre içi redoks dengesizliğinin önlenmesinde ve düzeltilmesinde önemli bir rol oynar [5]. Çalışmalar [6-7], Nrf2'nin, Nrf2/SLC7A11/GPX4 sinyal yolunu aktive ederek ferroptozu düzenleyebildiğini ve nöronal hasara karşı koruyabildiğini göstermiştir. Hücrelerdeki önemli bir antioksidan yol olan SLC7A11/GSH/GPX4 yolu, GSH sentezini etkili bir şekilde destekleyebilir, reaktif oksijen türlerinin (ROS) birikimini azaltabilir ve ferroptozu inhibe edebilir [4, 8]. Bu nedenle, SLC7A11/GSH/GPX4 sinyal yolunun Nrf2 aracılı düzenlenmesi ferroptozda kritik bir rol oynar.

PH'de "karaciğer-böbrek eksikliği"nin TCM (Geleneksel Çin Tıbbı) patogenezini temel alan araştırma ekibimiz Bushen Zhichan Formülünü geliştirdi. Bu formül, karaciğeri ve böbreği yenileme, özü ve iliği besleme, qi'yi canlandırma ve kanı besleme, teminatları tarama ve titremeleri durdurmak için rüzgarı bastırma etkilerine sahiptir. Özellikle BSZCF'deki temel bitkilerden biriCistanche Deserticola(30 g), böbrek beslenmesi için 2000 yılı aşkın tıbbi kullanım geçmişine sahip, TCM'de iyi bilinen bir tonik bitkidir.Cistanche(gibi türler dahil)Cistanche DeserticolaVeCistanche tubulosa(Echinacoside ve verbascoside gibi temel aktif bileşenlerin en yüksek içeriğine sahip olan ikincisi) böbrekleri beslediği ve koruduğu, böbrek hücresi apoptozunu azalttığı ve BSZCF'nin karaciğer ve böbrek özünü yenileme hedefiyle uyumlu böbrek hücresi proliferasyonunu teşvik ettiği gösterilmiştir (https://www.xjcistanche.com/cistanche-extract-product/cistanche-for-nourishing-kidney.html). Önceki klinik çalışmalar [9] BSZCF'nin PH semptomlarının şiddetini azaltabildiğini, hastaların motor fonksiyonlarını iyileştirebildiğini ve Parkinson hastalığının hem motor hem de motor olmayan semptomlarını hafifletebildiğini doğrulamıştır. Deneysel çalışmalar [10] ayrıca BSZCF'nin Parkinson hastalığı sıçanlarının davranışsal performansını iyileştirdiğini ve doza bağımlı bir şekilde nöronal hasarı azalttığını, nöroprotektif etkiler gösterdiğini de bulmuştur. Bu nedenle, bu çalışma, BSZCF'nin PD tedavisindeki potansiyel mekanizmasını, SLC7A11 / GSH / GPX4 yolunun Nrf2 aracılı regülasyonu ve ferroptoz perspektifinden araştırmayı ve klinik uygulaması için bir temel oluşturmayı amaçladı. Bu çalışma, Guangxi Çin Tıbbı Üniversitesi Deneysel Hayvan Refahı ve Etik Komitesi tarafından onaylandı (Onay No.: DW20230909-01).

1 Malzemeler ve Yöntemler

1.1 Hayvanlar

3-4 aylık ve (250 ± 50) g ​​ağırlığındaki yetmiş SPF dereceli erkek SD sıçanı, Changsha Tianqin Bioteknoloji Co., Ltd.'den (Deneysel Hayvan Üretim Lisansı No.: SCXK (Xiang) 2019-0014) satın alındı. Sıçanlar, Guangxi Çin Tıbbı Üniversitesi Birinci Bağlı Hastanesinin Deneysel Hayvan Merkezinde %50-%70 bağıl nem, 23-25 ​​derece sıcaklık ve 12 saat ışık/12 saat karanlık döngüsü koşulları altında standart bir hayvan odasında barındırıldı. Sıçanlar düzenli yemle beslendi ve suya serbestçe erişebildiler.

 

1.2 İlaçlar

Bushen Zhichan Formülünün Bileşimi: Cornu Cervi Degelatinatum 10 gr, Colla Corii Asini 10 gr (erimiş), Carapax Testudinis 20 gr, Radix Codonopsis 15 gr, Fructus Lycii 30 gr, Radix Paeoniae Alba 30 gr, Radix Rehmanniae Recens 25 gr, Fructus Cannabis 15 gr, Radix Ophiopogonis 15 g, Radix Glycyrrhizae Preparata 6 g, Carapax Trionycis 15 g,Cistanche Deserticola30 g, Rhizoma Gastrodiae 15 g, Rhizoma Polygonati 10 g, Fructus Corni 10 g ve Ramulus Uncariae Cum Uncis 30 g. Daha önce de belirtildiği gibi,Cistanche DeserticolaBu formülde, geleneksel Çin tıbbında böbrekleri besleyen klasik bir bitki bulunur ve aktif bileşenleri (örneğin, ekinakozid, verbaskosid), formülün böbrek özünü yenilemedeki etkinliğine katkıda bulunur (https://www.xjcistanche.com/cistanche-extract-product/cistanche-for-nourishing-kidney.html). Formül, Jiangyin Tianjiang Pharmaceutical Co., Ltd. tarafından üretilen kaynatma içermeyen granüller halinde sağlandı ve 2.574 g/ml ham ilaç (Parti No.: 1206003) içeren bir çözelti halinde hazırlandı. Levodopa-benserazid tabletleri (Ulusal İlaç Onay No.: SH10930198, Parti No.: YT2725, Spesifikasyon: 250 mg/tablet), Shanghai Roche Pharmaceuticals Co., Ltd.'den satın alınmıştır.

 

1.3 Ana Reaktifler ve Cihazlar

Proteazom inhibitörü (PSI, ApexBio Co., Ltd., Seri No.: A190011337769); ML385 (Selleck Co., Ltd., Seri No.: S8790); Kloral hidrat (Tianjin Damao Kimyasal Reaktif Fabrikası, Parti No.: ky-my); %4 paraformaldehit (Seri No.: IP9020), GAPDH birincil antikoru (Seri No.: BL006B), ECL kemilüminesan substrat (Seri No.: BL520A) (tümü Biosharp Co., Ltd.'den); Nrf2, SLC7A11 ve GPX4 antikorları (Affinity Co., Ltd., Parti No.: AF0639, DF12509, DF6701 sırasıyla); GPX4 ELISA kiti (Wuhan Bayinlai Bioteknoloji Co., Ltd., Parti No.: RA21465); MDA ELISA kiti (Seri No.: BC0025), GSH ELISA kiti (Seri No.: BC1175), demir iyonu tespit kiti (Seri No.: BC5415), BCA protein konsantrasyonu tahlil kiti (Geri No.: PC0020), toplam RNA ekstraksiyon reaktifi (Grup No.: R1100) (hepsi Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.'den); Doku ROS tespit kiti (Beibo Bioteknoloji Co., Ltd., Parti No.: BB470357); HRP etiketli keçi anti-tavşan ikincil antikoru (Servicebio Co., Ltd., Seri No.: GB23303).

Mikroplaka okuyucu (Detie Bioteknoloji Co., Ltd., Model HBS1096A); Floresan mikroplaka okuyucusu (Perkin Elmer Co., Ltd., Model VICTOR Nivo); Yüksek hızlı, düşük sıcaklıkta doku öğütücü (Servicebio Co., Ltd., Model KZ-Ⅲ-F); Düşük sıcaklıklı santrifüj (Eppendorf Co., Ltd., Model 5418R); Protein transfer modülü (Bio-Rad Co., Ltd., Model Mini Trans-Blot Hücresi); Elektroforez aparatı (Bio-Rad Co., Ltd., Model PowerPac Basic); Çok fonksiyonlu mikroplaka okuyucu (TECAN Co., Ltd., Model INFINITE 200PRO); Kantitatif gerçek zamanlı PCR cihazı (ABI Co., Ltd., Model 7500); Stereomikroskop (MOTIC Co., Ltd., Model Stellar 1 Pro-B); Mikroskobik beyin küreti (Shanghai Medical Device Co., Ltd., Model M-N-0209).

1.4 Hayvan Gruplaması ve Model Oluşturma

70 sıçan, bir rastgele sayı tablosu kullanılarak rastgele 7 gruba ayrıldı: kontrol grubu, model grubu, Nrf2 inhibitör grubu, levodopa-benserazid grubu ve düşük, orta ve yüksek doz BSZCF grupları (grup başına n=10). Kontrol grubu dışındaki diğer gruplardaki sıçanlara, bir PD modeli oluşturmak için deri altından PSI enjekte edildi [11]: 75 ul/100 g PSI çözeltisi, birbirini takip eden 2 hafta boyunca Pazartesi, Çarşamba ve Cuma günleri her bir sıçanın sırtına deri altından enjekte edildi. Fareler PD benzeri semptomlar (örneğin, bradikinezi, kas sertliği, uzuv titremeleri) sergilediğinde ve grid testi ve kutup testinde artan puanlar gösterdiğinde PD modeli başarılı kabul edildi [11-12]. Bu süreçte, eğer fareler ölürse ya da model başarısız olursa, bunlar hariç tutuldu ve aynı gruptan fareler ile değiştirildi ve bunlar başarılı oluncaya kadar yeniden modellendi. Kontrol grubundaki sıçanlara 2 hafta boyunca aynı zaman noktalarında sırtlarına normal salin (2 ml/kg) deri altından enjekte edildi.

 

1.5 Yönetim Yöntemi

Model oluşturulduktan iki hafta sonra, Nrf2 inhibitör grubundaki sıçanlara Pazartesi, Çarşamba ve Cuma günleri 3 kez intraperitoneal olarak ML385 (50 mg/kg) enjekte edildi; diğer gruplardaki sıçanlara aynı zaman noktalarında intraperitoneal olarak normal salin (2 ml/kg) enjekte edildi ve ardından 1 haftalık bir gözlem süresi uygulandı. Model oluşturulduktan dört hafta sonra, ilaç dozlarını insanlar ve sıçanlar arasında dönüştürme yöntemine göre [13], düşük, orta ve yüksek dozlu BSZCF gruplarındaki sıçanlara, sondayla 1,0, 1,5 ve 2,0 ml/(100 g·d) oranında BSZCF granül çözeltisi verildi (yüksek doz, klinik eşdeğer dozdu); levodopa-benserazid grubundaki sıçanlara sondayla levodopa-benserazid tabletleri (200 mg/(100 g·d)) verildi; kontrol, model ve Nrf2 inhibitör gruplarındaki sıçanlara sondayla normal salin (2.0 ml/(100 g·d)) verildi. Tüm gruplara 3 hafta boyunca sürekli sondayla besleme uygulandı.

 

1.6 Gözlem Göstergeleri ve Yöntemleri

1.6.1 Sıçanların Genel Durumu ve Davranışlarının Gözlemlenmesi

Deney sırasında, her gruptaki sıçanların saç durumu, uzuv titremeleri, ayakta durma sıklığı ve sertlik dahil olmak üzere davranışsal performansları günlük olarak gözlemlendi ve kaydedildi. 3 haftalık gavajdan sonra, sıçanların motor koordinasyonunu değerlendirmek için ızgara testi ve kutup testi yapıldı [14].

Izgara testi: Kendi yaptığım metal ızgara (60 cm uzunluğunda, 40 cm genişliğinde, 1 cm² ızgaralı) yere dikey olarak yerleştirildi. Her bir sıçan, ızgaranın ortasına baş aşağı yerleştirildi ve sıçanın ızgarayı dört uzvunun tamamıyla sıkıca kavradığı andan bir uzuvun hareket etmeye başladığı ana kadar ("hareket gecikmesi" olarak tanımlanan) geçen süre kaydedildi. Her sıçan bir sonraki testten önce 10 dakika dinlendirildi ve test 3 kez tekrarlandı. Daha uzun bir hareket gecikmesi, daha şiddetli uzuv sertliğini gösterdi.

Kutup testi: Ahşap bir direk (50 cm uzunluğunda, 2 cm çapında) masaya 45 derecelik açıyla sabitlendi. Her bir sıçan direğin tepesine, yüzü direğin alt kısmına bakacak şekilde yerleştirildi ve sıçanın direğin tepesinden masa üstüne ulaşma süresi kaydedildi. Test, tekrarlar arasında 1 dakika ara verilerek 3 kez tekrarlandı ve ortalama değer hesaplandı. Artan titreme sıklığı, anormal yürüyüş, azalan gıda alımı ve daha uzun direğe tırmanma süresi, PH semptomlarının ağırlaştığını gösterdi.

 

1.6.2 Orta Beyin Substantia Nigra'daki Fe²⁺, GSH, GPX4 ve MDA İçeriklerinin ELISA ile Tespiti

Son kutup testinden iki saat sonra sıçanlara intraperitoneal olarak kloral hidrat (400 mg/kg) enjekte edildi. Kornea refleksinin kaybolması ve nefes alma/kalp atımının durması (ölümün doğrulanması) sonrasında beyin çıkarıldı. Orta beyin, diensefalon ve orta beyin kavşağında ve orta beyin ile pons kavşağında kesilerek izole edildi. Bir stereomikroskop altında, substantia nigra dokusu, mikroskobik bir beyin küreti kullanılarak yavaşça soyuldu ve her bir sıçandan yaklaşık 100 mg substantia nigra dokusu toplandı. Üreticinin talimatlarını harfiyen takip ederek, ELISA kitleri kullanılarak Fe²⁺, GSH, GPX4 ve MDA içeriklerini belirlemek için her gruptan rastgele seçilen 6 sıçandan alınan Substantia nigra dokusu (rastgele sayı tablosu aracılığıyla seçilmiş) kullanıldı.

 

1.6.3 Orta Beyin Substantia Nigra'da Nrf2, SLC7A11, GPX4 ve GSH Protein Düzeylerinin Western Blot ile Tespiti

Her grupta rastgele seçilen 6 sıçandan alınan yaklaşık 20 mg substantia nigra dokusu bir EP tüpüne aktarıldı, homojenleştirildi ve 12.000 devir/dakikada (santrifüj yarıçapı: 10 cm) 4 derecede 5 dakika süreyle santrifüj edildi. Protein konsantrasyonunu belirlemek için süpernatan toplandı, daha sonra standardize edilmiş . 5x protein yükleme tamponu ilave edildi ve karışım, 100 derecede 10 dakika boyunca denatüre edildi. Elektroforez, yaklaşık 20 dakika boyunca 90 V sabit voltajda gerçekleştirildi; ayırıcı jele girdikten sonra voltaj 1,0-1,5 saat süreyle 120 V'a ayarlandı. Protein transferi 300 mA sabit akımda gerçekleştirildi ve ardından bloke edildi. Primer antikorlar (GAPDH, Nrf2, SLC7A11, GPX4) 1:3000 oranında seyreltildi ve membran 4 derecede 12 saat inkübe edildi. İnkübasyondan sonra membran sekonder antikora (1:4000 oranında seyreltilmiş) aktarıldı ve 37 derecede 1 saat inkübe edildi. Membran yıkandıktan sonra, hedef protein-antikor kompleksinin ışıldayan reaksiyonunu tetiklemek için ECL kemilüminesan substrat kullanıldı. Lüminesans reaksiyonu stabilize edildikten sonra, membran bir jel görüntüleme sistemine aktarıldı ve hedef proteinin ve dahili referans protein bantlarının ışıldayan görüntülerini elde etmek için uygun maruz kalma parametreleri ayarlanarak görüntüler toplandı. Protein bantlarının gri değerleri Image J yazılımı (Sürüm 1.52) kullanılarak analiz edildi.

 

1.6.4 Orta Beyin Substantia Nigra'da Nrf2 mRNA İfadesinin qRT-PCR ile Tespiti

Her grupta rastgele seçilen 6 sıçandan alınan yaklaşık 20 mg substantia nigra dokusu küçük parçalar halinde kesildi, 3 mm'lik çelik boncuklarla tamamen öğütüldü ve 0,1 ml kloroform ikamesi ilave edildi. Karışım 15 saniye boyunca çalkalandı, 2 dakika boyunca oda sıcaklığında beklemeye bırakıldı ve 0,5 ml süpernatan, santrifüjleme için yeni bir 1,5 ml'lik EP tüpüne aktarıldı. Daha sonraki santrifüjleme için 0,5 ml daha izopropanol ilave edildi ve çökelti toplandı. 1 ul RNA örneği, çok işlevli bir mikroplaka okuyucu kullanılarak RNA konsantrasyonunu belirlemek için kullanıldı ve A260/A280 oranı (RNA saflığını gösterir) doğrudan ölçüldü (1,8-2,0 oranı yüksek RNA saflığını gösterdi). Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) amplifikasyonu aşağıdaki koşullar altında gerçekleştirildi: 95 derecede 30 saniye boyunca ön denatürasyon; 40 PCR döngüsü (95 derecede 10 saniye boyunca denatürasyon, bağlanma ve 60 derecede 30 saniye boyunca uzatma). Her örnekteki her hedef genin döngü eşiği (Ct) değeri kaydedildi ve her örnekteki hedef genin bağıl ekspresyon düzeyi, 2⁻ˣˣᶜᵗ yöntemi kullanılarak hesaplandı. Primerler Nanning Geness Bio-Technology Co., Ltd. tarafından sentezlendi:

Nrf2: İleri primer 5'-GGTTGCCCACATTCCCAAAC-3', Geri primer 5'-TCAGGGGTGGTGAAGACTGA-3' (ürün uzunluğu: 168 bp);

GAPDH: İleri primer 5'-TCTCTGCTCCTCCCTGTTCT-3', Ters primer 5'-ATCCGTTCACACCGACCTTC-3' (ürün uzunluğu: 95 bp).

 

1.6.5 Orta Beyin Substantia Nigra'da Hücre İçi ROS Düzeyinin Floresan Mikroplak Okuyucu ile Tespiti

Her grupta rastgele seçilen 6 sıçandan alınan yaklaşık 40 mg substantia nigra dokusu tampona eklendi, iyice çalkalandı ve 1500 devir/dakikada (santrifüj yarıçapı: 10 cm) 4 derecede 3 dakika santrifüj edildi. Çökelti atıldı ve süpernatan toplandı. 96 kuyucuklu bir plakaya 190 ul homojenleştirilmiş süpernatan ve 10 ul DCFH-DA probu ilave edildi, bir pipet kullanılarak iyice karıştırıldı ve 37 derecede karanlıkta 30 dakika süreyle inkübe edildi. Plaka bir mikroplaka okuyucuya yerleştirildi ve 488 nm'lik bir uyarılma dalga boyunda ve 530 nm'lik bir emisyon dalga boyunda floresans yoğunluğu tespit edildi. Protein miktarının belirlenmesi için yaklaşık 50 ul süpernatan homojenat, PBS ile 30 kat seyreltildi ve seyreltilmiş çözeltinin 100 ul'si, BCA protein konsantrasyonu tahlil kiti talimatlarına göre protein gradyan konsantrasyonları (her konsantrasyon için 3 kopya kuyucukla) hazırlamak için kullanıldı. Dokulardaki ROS yoğunluğu, miligram protein başına floresan yoğunluğu olarak ifade edildi.

 

1.7 İstatistiksel Yöntemler

Verilerin analizinde SPSS 26.0 istatistik yazılımı kullanıldı. Ölçüm verileri normal olarak dağıldı ve ortalama ± standart sapma (x̄ ± s) olarak ifade edildi. Birden fazla grup arasında karşılaştırma yapmak için tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanıldı; gruplar arasındaki ikili karşılaştırmalar, LSD testi (varyanslar homojen ise) veya Dunnett T3 testi (varyanslar heterojen ise) kullanılarak yapıldı. Anlamlılık düzeyi olarak iki kuyruklu bir=0.05 belirlendi ve < 0,05 olan bir P değeri istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

 

Referanslar

[1] Dorsey ER, Sherer T, Okun MS, ve ark. Parkinson salgınının ortaya çıkan kanıtı [J]. J Parkinsons Dis, 2018, 8(S1): S3–S8.

[2] Mahoney-Sánchez L, Bouchaoui H, Ayton S, ve diğerleri. Ferroptoz ve Parkinson hastalığının fizyopatolojisindeki potansiyel rolü [J]. Prog Neurobiol, 2021, 196: 101890. doi: 10.1016/j.pneurobio.2020.101890.

[3] Devos D, Moreau C, Devedjian JC, ve diğerleri. Parkinson hastalığında terapötik bir yöntem olarak şelatlanabilir demirin hedeflenmesi [J]. Antioksid Redoks Sinyali, 2014, 21(2): 195–210.

[4] Nishida Xavier da Silva T, Friedmann Angeli JP, Ingold I. GPX4: eski dersler, yeni özellikler [J]. Biochem Soc Trans, 2022, 50(3): 1205–1213.

[5] Dodson M, De La Vega MR, Cholanians AB, ve diğerleri. Hastalıkta NRF2'nin modülasyonu: zamanlama her şeydir [J]. Annu Rev Pharmacol Toxicol, 2019, 59: 555–575. doi: 10.1146/annurev-pharmtox-010818-021856.

[6] Wang ZY, Wang KH, Lai SJ, ve diğerleri. Nrf2-SLC7A11-GPX4 yolu [J] yoluyla ferroptozu düzenleyerek nöronları OGD/R hasarına karşı korumada Zhuangtong Yin mekanizması. J Chin Med Mater, 2024, 47(6): 1531–1535. (Çince)

[7] Xie L, Zhou C, Wu Y, ve diğerleri. Wenqingyin, Nrf2 aracılı sinyal yolunu [J] aktive ederek sepsis kaynaklı karaciğer hasarının patogenezinde ferroptozu baskılar. Phytomedicine, 2023, 114: 154748. doi: 10.1016/j.phymed.2023.154748.

[8] Chen LL, Wang WJ. p53, kanserde lipit metabolizmasını düzenler [J]. Int J Biol Macromol, 2021, 192: 45–54. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2021.09.188.

[9] Hu YY, Hu YQ, Chen W, ve diğerleri. Bushen Zhichan Formülünün etkinliği, Parkinson hastalığının tedavisinde akupunkturun eklenmesiyle birleştirildi [J]. Chin J Gerontol, 2014, 34(12): 3249–3251. (Çince)[10] Hu YY, Luo RQ, Liu YH, ve diğerleri. Bushen Zhichan Formülünün, Parkinson hastalığı olan sıçanlarda nöronal hücrelerin piroptozunu inhibe etme mekanizması [J]. Çin J Tradit Chin Med Pharm, 2022, 37(12): 7039–7044. (Çince)

[11] Liu YQ, Zhang WD, Li YY. Parkinson hastalığının yeni bir hayvan modeli [J]. Acta Lab Anim Sci Sin, 2007, 15(2): 159–160. (Çince)

[12] McNaught KS, Perl DP, Brownell AL, ve diğerleri. Proteazom inhibitörlerine sistemik maruz kalma, Parkinson hastalığının ilerleyici bir modeline neden olur [J]. Ann Neurol, 2004, 56(1): 149–162.

[13] Chen Q. Geleneksel Çin Tıbbına İlişkin Farmakolojik Araştırma Metodolojisi [M]. Pekin: Halkın Tıp Yayınevi, 1993: 1103. (Çince)

[14] Zhang QS, Heng Y, Mou Z, ve diğerleri. Subakut MPTP ile tedavi edilen farelerin Parkinson hastalığının hayvan modeli olarak yeniden değerlendirilmesi [J]. Acta Pharmacol Sin, 2017, 38(10): 1317–1328.

[15] Su Y, Jiao Y, Cai S, ve diğerleri. Ferroptozun moleküler mekanizması ve Parkinson hastalığı ile ilişkisi [J]. Brain Res Bull, 2024, 213: 110991. doi: 10.1016/j.brainresbull.2024.110991.

[16] Griffiths PD, Dobson BR, Jones GR, ve diğerleri. Parkinson hastalığında bazal ganglionlarda demir. Genişletilmiş X-ışını soğurma ince yapısı ve kriyo-elektron mikroskobu [J] kullanılarak yapılan in vitro bir çalışma. Brain, 1999, 122(Bölüm 4): 667–673.

[17] Shi L, Huang C, Luo Q, ve diğerleri. Clioquinol, Parkinson hastalığının MPTP ile indüklenen maymun modelinde AKT/mTOR yolu [J] yoluyla motor ve motor olmayan eksiklikleri iyileştirir. Yaşlanma (Albany NY), 2020, 12(10): 9515–9533.[18] Ko CJ, Gao SL, Lin TK ve diğerleri. Parkinson hastalığında nöroinflamasyon için önemli bir faktör ve terapötik hedef olarak ferroptoz [J]. Biyotıplar, 2021, 9(11): 1679.