ELOVL2, Renal Hücreli Karsinomda Hücre Apoptozisini Engelleyerek Kanserin İlerlemesini Teşvik Ediyor
Mar 20, 2022
Soyut. böbrekhücreli karsinom (RCC), özellikle metastazlı hastalarda kötü prognozla ilişkilendirilen agresif bir genitoüriner malignitedir ve başlıca alt tipleri berrak hücreli RCC(ccRCC), papiller PCC(pRCC) ve kromofob RCC(chRCC)'dir. hücre içi lipid damlacıklarının (LD'ler) mevcudiyeti ccRCC'nin bir özelliği olarak kabul edilir. ccRCC'de değişen lipid metabolizmasının önemi geniş çapta kabul görmüştür. Çok uzun zincirli yağ asidinin (ELOVL) uzaması, yağ asitlerinin (FA'ler) uzamasını katalize ederek lipid bileşimini modüle eder ve normal vücut fonksiyonları için gereklidir. Bununla birlikte, uzamaların RCC'ye katılımı belirsizliğini koruyor. Bu çalışmada, ELOVL2'nin ccRCC'deki ifadesi incelendi; özellikle, birincil tümörlerde yüksek seviyelerde yedi ELOVLizozim gözlendi. Not olarak, ccRCC'de ve ayrıca pRCC ve chRCC'de yüksek ELOVL2 ekspresyon seviyeleri gözlemlendi. Ayrıca, daha yüksek bir ELOVL2 seviyesi, ccRCC ve pRCC'li hastalarda kötü prognoz insidansının artmasıyla önemli ölçüde ilişkiliydi. ELOVL2'nin CRISPR/Cas9-aracılı yıkılması, uzun zincirli çoklu doymamış FA'lerin uzamasının bastırılması ve LD üretiminin artmasıyla sonuçlandı.böbrekkanser hücreleri. Ayrıca, ELOVL2 ablasyonu, in vitro apoptoz indüksiyonu yoluyla hücresel proliferasyonun baskılanması ve in vivo olarak tümör büyümesinin zayıflaması ile sonuçlandı. Genel olarak, bu çalışma, lipit metabolizmasını içeren tümör proliferasyon mekanizmalarına yeni bir bakış açısı sağlar ve ELOVL2'nin RCC tedavisi için çekici bir yeni hedef olabileceğini öne sürer.
Anahtar Kelimeler:renal hücreli karsinom, lipid damlacığı, hücresel proliferasyon, böbrek, renal
giriiş
Renal hücreli karsinom (RCC), dünya çapında tüm kanser vakalarının ve buna bağlı ölümlerin ~ yüzde 2'sini oluşturan, yaygın olarak karşılaşılan ve ölümcül bir malignitedir(1), başlıca alt tipleri berrak hücreli RCC (ccRCC), papiller PCC (pRCC) ve kromofobdur. RCC (RCC). Tüm RCC alt tipleri arasında, ccRCC en yaygın histolojik tezahürdür ve patogenezi, von Hippel-Lindau (VHL) tümör baskılayıcı genindeki fonksiyon kaybı nedeniyle hipoksi ile indüklenebilir faktörlerin (HIF'ler) yapıcı aktivasyonu ile karakterize edilir. (1). Metastatik hastalık için vasküler endotelyal büyüme faktörüne (VEGF) veya rapamisin (mTOR) sinyalinin memeli hedefine ve immün kontrol noktası inhibitörlerine karşı çeşitli hedefli tedaviler geliştirilmiştir. Ancak hastaların çoğunda hastalığın ilerlemesi kaçınılmazdır (1,2).
CISTANCHE BÖBREK/BÖBREK DİYALİZİNİ İYİLEŞTİRECEK
ccRCC'nin ayırt edici özelliği, trigliseritler (TG'ler) ve kolesterol esterleri (CE'ler) içeren nötr bir lipit çekirdeğinden oluşan ve bir fosfolipid tek tabaka (3) ile çevrili hücre içi lipid damlacıklarının (LD'ler) bolluğudur. LD'ler, lipid alımından sorumlu dinamik organellerdir. ve depolama ve homeostazı sürdürmek, enerji üretimini kolaylaştırmak ve çeşitli stres türlerine karşı korumak veya çeşitli kanser türlerinde hızlı tümör hücresi büyümesi sırasında membran biyogenezini sürdürmek için kullanılır (4). Aslında, önceki çalışmalar LD'lerin ccRCC'ye katkıda bulunduğunu göstermiştir. ilerleme (5,6).
Lipidlerin ana bileşenini oluşturan yağ asitlerinin (FA'ler), enerji depolama, membran sentezi ve sinyal moleküllerinin üretimi için substratlar olarak hizmet ettiği rapor edilmiştir. Uzama ve desatürasyon, uzun zincirli FA'lerin (LC-FA'lar) Novo sentezinin merkezi adımlarıdır; doymamışlığın uzunluğu ve derecesi, FA fonksiyonunun ve metabolik kaderin belirleyicileridir (7). Yağ asil desatüraz ailesinin bir üyesi olan Stearoyl-CoA desatüraz 1(SCD1), ccRCC(6.8.9)'da kapsamlı bir şekilde incelenmiştir. Artan SCD1 ekspresyonunun canlılığı desteklediği, bir SCD1 küçük molekül inhibitörü (A939572) olduğu gösterilmiştir. ccRCC'de hücresel proliferasyonu baskıladığı gösterilmiştir (8.9). Dahası. Yang ve diğerleri (10), sterol düzenleyici eleman bağlayıcı protein 1'in (SREBP1), ccRCC'de hücresel proliferasyonun desteklenmesi için NF-xB sinyalinin aktivasyonundan önce FA asit desatüraz 1 (FADSI) yoluyla lipid desatürasyonunu desteklediğini gösterdi. Bununla birlikte, uzamaların RCC'deki herhangi bir potansiyel rolü belirsizliğini koruyor.
Memelilerde, başlangıç ve hız kontrollü FA yoğunlaşma reaksiyonlarının, çok uzun zincirli FA'lerin (ELOVL) uzaması olarak adlandırılan bir uzama enzimi ailesi tarafından katalize edildiği bildirilmiştir. Bugüne kadar, genellikle doymuş ve tekli doymamış FA'lar (ELOVL1, ELOVL3, ELOVL6 ve ELOVL7) veya çoklu doymamış FA'ler (PUFA'lar; ELOVL2, ELOVL4 ve ELOVL5) için spesifik olanlara bölünebilen yedi ELOVL üyesi tanımlanmıştır. Lucarelli ve arkadaşları (9) ccRCC'de önemli miktarda PUFA birikimini ve ELOVL2 ve ELOVL5 ekspresyonunun arttığını ortaya çıkardı. Not olarak, sistemik dokosaheksaenoik asidin (DHA) endojen olarak üretildiği ve de novo lipogenezi kontrol ederken, aynı zamanda ELOVL2 ablasyonu nedeniyle sterol düzenleyici element bağlayıcı transkripsiyon faktörü 1'den (SREBPF1) bağımsız bir şekilde lipid depolamasını düzenlediği gösterilmiştir. fareler(11). Ayrıca, ELOVL2 aşırı ekspresyonunun, hem preadiposit hücre çizgisi 3T3-LI hem de F442A hücrelerinde(12) arttırılmış bir FA alımı ile LD birikimini desteklediği gösterilmiştir. DHA ile kanser hücreleri için eksojen olarak uygulanan önceki in vitro çalışmalar. DHA'nın kanser hücreleri üzerinde anti-tümorijenik, anti-inflamatuar ve pro-apoptotik etkiler uyguladığını göstermiştir(13-15). Bununla birlikte, ELOVL2'nin, lipid metabolizmasının modülasyonu yoluyla ccRCC ilerlemesindeki herhangi bir potansiyel rolü, büyük ölçüde keşfedilmemiştir.
Bu çalışmada, ELOVL2inccRCCprogresyonunun rolleri, birincil ccRCC ve normal ccRCC'nin transkripsiyonel profili gerçekleştirilerek araştırıldı.böbrekELOVL2'nin ccRCC'de aşırı eksprese edildiğini ve ELOVL izozimleri arasında aşırı temsil edildiğini ortaya çıkaran örnekler. Not olarak, ELOVL2 ayrıca ccRCC'de ve ayrıca pRCC ve RCC'de aşırı eksprese edildi; bu, CCR CCR pRCC'li hastaların kötü prognozu ile önemli ölçüde ilişkiliydi. Ayrıca, ELOVL2 inhibisyonunun lipid metabolizmasını etkilediği ve en azından kısmen endoplazmik retikulum (ER) homeostazının bozulması yoluyla apoptozun teşvik edilmesi yoluyla hücresel proliferasyonu baskıladığı gösterilmiştir.böbrek kanserihücreler. Bu çalışmanın sonuçları, ELOVL2'nin RCC tedavisi için potansiyel yeni bir terapötik hedef olabileceğini öne sürdü.
CISTANCH BÖBREK/BÖBREK YETMEZLİĞİNİ İYİLEŞTİRECEK
Malzemeler ve yöntemler
Hücre hatları ve kültürler. 293T (RCB2202) ve OS‑RC‑2 (RCB0735) hücre hatları RIKEN BioResource Center'dan, 786‑O ve ACHN hücre hatları ATCC'den satın alındı; SK‑RC‑52 hücreleri, DrJ.G.Old'dan (Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi) nazik bir hediyeydi. İnsan epitel hücrelerinden elde edilen RPTEC hücre dizisiböbrekproksimal tübül, Lonza Group, Ltd.'den satın alındı (CC‑2553). ACHN, 786‑O, SK‑RC‑52 ve OS‑RC‑2 hücreleri, yüzde 5 nemlendirilmiş CO2 atmosferi ile 37°C'de yüzde 10 fetal sığır serumu (FBS) ile desteklenen RPMI-1640 ortamında kültürlendi. 293T hücreleri, yüzde 10 cenin sığır serumu (FBS) ile takviye edilmiş Dulbecco'nun modifiye Eagle ortamında, yüzde 5 nemlendirilmiş CO2 atmosferi ile 37°C'de kültürlendi. RPTEC hücreleri kültüre edildi.böbrekepitelyal büyüme ortamı (REGM™) Bulletkit™ (CC‑3190; Lonza Bioscience) 37˚C'de yüzde 5 nemlendirilmiş CO2 atmosferi ile.
Hastalar ve ccRCC örnekleri. RCC dokuları ve komşu normalböbrekradikal veya kısmi nefrektomi uygulanan 46 hastadan dokular, Tsukuba Üniversitesi Etik Kurulu tarafından onaylanan protokollere göre (onay no. H28‑104) 2006 ile 2015 yılları arasında Tsukuba Üniversitesi Hastanesinden alınmıştır. Tüm hastalar ameliyattan önce yazılı bilgilendirilmiş onam verdi. Tümör evreleri, Uluslararası Kanser Kontrol Birliği'nin TNM evrelemesine göre belirlendi (16). Patolojik dereceler, dört aşamalı Fuhrman derecelendirme sistemine göre sınıflandırıldı (17). Tüm hasta özellikleri Tablo SI RNA ekstraksiyonu ve cDNA sentezinde özetlenmiştir. Dondurulmuş dokulardan toplam RNA ekstrakte edildi veböbrekTRIzol® Reaktifi (Thermo Fisher Scientific, Inc.) kullanılarak kanser hücreleri. RNA saflaştırmasının ardından, RNA, üreticinin talimatlarına göre bir Yüksek Kapasiteli cDNA Ters Transkripsiyon kiti (kat. no. 4368814; Thermo Fisher Scientific, Inc.) kullanılarak cDNA'ya ters kopyalandı.
Ters transkripsiyon-kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR). Gen ekspresyon seviyeleri, Fast SYBR‑Green Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Inc.) ile 7500 Fast Real‑Time PCR makinesi kullanılarak ölçüldü. Döngü koşulları aşağıdaki gibidir: 95˚C'de 20 saniye, 40 döngü 95˚C'de 3 saniye ve 60˚C'de 30 saniye, ardından 95˚C ila 15 saniye arasında değişen bir erime eğrisi C 1 dakika. Hipoksantin fosforibosiltransferaz 1 (HPRT1) dahili kontrol olarak kullanıldı. Tüm primer dizileri Tablo SII'de listelenmiştir. Apoptoza bağlı genleri değerlendirmek için proapoptotik genlerin, Bcl‑2‑ilişkili X proteini (BAX), Bcl‑2 homolog antagonist/katil (BAK), phorbol‑12‑miristat‑13‑ nispi ekspresyon seviyeleri asetat ile indüklenen protein 1 (PMAIP1/NOXA) ve p53 yukarı regüle edilmiş apoptoz modülatörü (BBC3/PUMA) ve anti-apoptotik gen BCL2 ve indüklenmiş miyeloid lösemi hücre farklılaşması protein geni (MCL1) analiz edildi. Göreceli gen ekspresyon seviyeleri, 2‑ΔΔCq yöntemi (18) kullanılarak ölçülmüştür.
Western blot analizi. Western blot analizi, daha önce tarif edildiği gibi yapıldı (19). Hücreler lizis tamponu (20 mM Tris‑HCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, yüzde 1 SDS ve proteaz inhibitörü) içinde lize edildi ve buz üzerinde sonikasyona tabi tutuldu. Lizatlar 1,{8}} xg'de 20 dakika 4˚C'de santrifüjlendi ve süpernatanlar numuneler olarak toplandı. Numunelerin protein miktar tayini, Quick Start Bradford Protein testi (kat. no. 5000202JA; Bio‑Rad Laboratories, Inc.) kullanılarak yapıldı. Numuneler yüzde 10 SDS‑PAGE'ye tabi tutuldu ve ayrılan ürünler daha sonra PVDF membranlarına aktarıldı.
CISTANCH BÖBREK/BÖBREK ENFEKSİYONUNU İYİLEŞTİRECEK
Zarlar, oda sıcaklığında 60 dakika boyunca ECL Prime bloke edici ajan (kat. no. RPN418V; Cytiva) ile bloke edildi. Zarlar daha sonra gece boyunca 4°C'de aşağıdaki antikorlarla inkübe edildi: Anti‑serin/treonin‑protein kinaz/endoribonükleaz inositol gerektiren enzim 1 (anti‑IRE1; 1:200; #3294, Cell Signaling Technology, Inc.), anti-fosforile IRE1 (anti-p-IRE1 ; 1:200; NB100‑2323, Novus Biologicals, LCC), anti‑C/EBP homolog protein (anti‑CHOP; 1:200; MA1‑250, Thermo Fisher Scientific, Inc .). Anti‑tavşan veya anti‑fare immünoglobulin G HRP bağlantılı, bütün eşek Ab (kat. no. NA934V, NA931VS; GE Healthcare; Cytiva) ikincil antikorlar olarak 1:10'da000 kullanıldı. Western blotlar, bir Fujifilm LAS‑4000 görüntüleyici ve LAS400IR (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) kullanılarak ImmunoStar® Zeta (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) ile görselleştirildi. -aktin dahili kontrol olarak kullanıldı (1:10,000, kat. no. A5316; Sigma‑Aldrich).
Gen ifadesinin biyoinformatik analizi. The Cancer Genome Atlas (TCGA) veritabanında RCC'li hastalardan toplanan primer tümörlerin klinik ve RNA-sekanslama (RNA-seq) verileri Genomic Data Commons (GDC) Veri Portalından (20) indirilmiştir. 530 hastalıklı ve 71 kontrol numunesi olmak üzere toplam 1.005 (880 hastalıklı ve 125 kontrol) numune incelenmiştir.böbrek böbrekberrak hücreli karsinom kohortu (KIRC; ccRCC), serviks için 286 hastalıklı ve 31 sağlıklı örnekböbrek böbrekpapiller hücreli karsinom kohortu (KIRP; pRCC) ve böbrek kromofob kohortu (KICH; chRCC) için 64 hastalıklı ve 23 sağlıklı örnek. Genitoüriner kanser örneklerinde ELOVL2 gen ekspresyonu, Normal ve Tümör dokularının (GENT2) Gen Expression veritabanı kullanılarak analiz edildi. Gen ifadesi verileri, U133 Plus 2 (GPL570) platformunun (//gent2.appex.kr/gent2/) (21) gen ifadesi omnibus (GEO) genel deposundan indirildi.
Plazmitler ve lentiviral transdüksiyon. Önceki çalışmalarda (22,23) karakterize edilen ELOVL2 için küçük firkete RNA'ları (shRNA'lar), lentiviral vektör pLKO.1'e (plazmit #8453; Addgene, Inc.) alt klonlandı. shRNA vektörünün yapımında kullanılan oligonükleotid dizileri Tablo SIII'de listelenmiştir. Lentivirüsler, lentiviral vektör (pLKO‑shControl veya pLKO‑shELOVL2), pMDLg/pRRE (plazmit #12251; Addgene, Inc.), pRSV‑Rev (plazmit #12253 dahil) transta dört plazmitin birlikte transfekte edilmesiyle 293T hücrelerinde üretildi ; Addgene, Inc.) ve pMD2.G (plazmit #12259; Addgene, Inc.), Lipofectamine 2000® transfeksiyon reaktifi (Thermo Fisher Scientific, Inc.) kullanılarak. Transfeksiyondan 48 saat sonra, virüs içeren süpernatanlar toplandı ve enfeksiyon için 0,45 µm'lik bir filtreden süzüldü. Viral transdüksiyonlar için, pLKO‑shControl veya pLKO‑shELOVL2 lentivirüsleri 786‑O, ACHN ve SK‑RC‑52 hücreleriyle 37°C'de nemlendirilmiş bir hücre kültürü inkübatöründe gece boyunca inkübe edildi. Hücreler enfeksiyondan 24 saat sonra puromisin varlığında seçildi. Alt klonları stabilize etmek için hücreler, 1 ay boyunca 37°C'de, nemlendirilmiş bir hücre kültürü inkübatöründe puromisin içeren ortamda kültürlendi ve hayatta kalan havuzlar, ekspresyon ve proliferasyon analizleri için kullanıldı.
Aşırı ekspresyon deneyleri için, OSRC‑2 hücreleri, pCMV6 boş vektörü (plazmit #PS100001; Origene Technologies, Inc.) veya pCMV6‑ELOVL2 (plazmit #RC209232;Origene Technologies, Inc.) ile nemlendirilmiş bir hücre kültüründe 37°C'de transfekte edildi. inkübatör, üreticinin talimatlarına göre Lipofectamine 3000® transfeksiyon reaktifi (Thermo Fisher Scientific, Inc.) kullanılarak. Hücreler, transfeksiyondan 48 saat sonra belirtilen tahliller için kullanıldı. CRISPR/Cas9 tasarımı ve klonlama. pX330‑U6‑Chimerik_BB‑CBh‑hSpCas9 (pX330) plazmiti, Feng Zhang'dan (Addgene, Inc.; plazmit #42230) (24) bir hediyeydi. ELOVL2 için CRISPR tek kılavuzlu (sg) dizileri, CRISPR Tasarım Aracı (GE Healthcare Dharmacon, Inc.;‑Discovery.com/gene‑editing/crispr‑cas9/crispr‑design‑tool/), pX330'a klonlamadan önce. Tek kılavuzlu kontrol (sgControl) için CRISPR kılavuz dizisi daha önce tasarlanmıştır (25). Tek kılavuzlu RNA'ların (sgRNA'lar) oligonükleotit dizileri Tablo SIII'de listelenmiştir.
ACHN hücreleri daha sonra 6 oyuklu plakalara (1.4x105 hücre/kuyu) ekildi ve 2 saat sonra 2 µg pX330 ile ifade edilen sgRNA'lar ve 0,2 µg pCI‑neo vektörü ile birlikte transfekte edildi (Promega Corporation; kat. no. E1841), FuGENE HD (Promega Corporation; kat. no. E2312) kullanılarak nemlendirilmiş bir hücre kültürü inkübatöründe 37°C'de. Transfeksiyondan 24 saat sonra, 7 ila 10 gün boyunca 400 ug/ml G418 uygulandı ve hücrelerin 2 veya 3 gün iyileşmesine izin verildi. Hücreler birleşme noktasına yaklaştığında, 10 cm'lik tabaklarda seyrek olarak yeniden tohumlandılar. 2 veya 3 hafta sonra, klonlama diskleri (MilliporeSigma; kat. no. Z374431‑100EA) kullanılarak ayırt edilebilir koloniler izole edildi. Bireysel klonlar genişletildi ve hedef alan için Sanger dizilimi ile nakavt durumu için değerlendirildi.
CISTANCH BÖBREK/BÖBREK AĞRILARINI İYİLEŞTİRECEK
Hücresel çoğalma deneyleri. Hücresel proliferasyon, üreticinin talimatlarına göre bir Cell Counting Kit-8 (CCK-8; Dojindo Molecular Technologies, Inc.) ile MTT testi kullanılarak değerlendirildi. Kısaca, hücreler 96 kuyulu plakalara ekildi ve 72 saat sonra 10 µl WST‑8 eklendi. OD460 37°C'de 1 saatlik inkübasyonun ardından ölçüldü. Deri altı ksenogreftleme. BALB/c çıplak (nu/nu) dişi fareler (n=12; 6-8 haftalık), Charles River Laboratories, Inc.'den satın alınmıştır. Fareler, 12‑ h ışık/karanlık döngüsü, yiyecek ve suya sınırsız erişim. Subkutan kseno-greft deneyleri için, 100 ul PBS içinde süspanse edilen 1x107 hücre, bir 24G iğne kullanılarak deri altından sağ yanağa enjekte edildi ve tümör hacimleri haftada bir ölçüldü. Tümör hacmi şu formülle hesaplandı: mm3=uzunluk x genişlik x yükseklik x 0,52 (26). 90 gün sonra tüm hayvanlar kurban edildi ve ksenograft tümörleri çıkarıldı. Hayvanlar, servikal dislokasyonla ötenazi edilmeden önce yüzde 2 izofluran ile anesteziye tabi tutuldu.
Ksenograft tümörlerinin formalinle sabitlenmiş ve parafine gömülmüş (FFPE) örnekleri, deparafinizasyon ve rehidrasyon öncesinde 4‑µm kalınlığında kesitler halinde kesildi. Antijen alımı için, kesitler bir sitrik asit tamponunda 21 dakika mikrodalga ile ön işleme tabi tutuldu. Antijen alma prosedüründen sonra, endojen peroksidaz aktivitesi 25 dakika süreyle yüzde 3 H2O2 ile bloke edildi ve slaytlar Ki‑67 antikoru (1:200; Dako; Agilent Technologies, Inc.; M7240) ile 4°C'de gece boyunca inkübe edildi. İmmünohistokimyasal reaksiyon, kromojen olarak diaminobenzidin kullanılarak ikincil antikor Histofine Simple Stain MAX PO® (Nichirei Biosciences, Inc,; kat. no. 424151) kullanılarak görselleştirildi. Tüm hayvan çalışmaları, Tsukuba Üniversitesi Hayvan Deneyleri Komitesi tarafından onaylandı ve tüm deneyler, Tsukuba Üniversitesi'nin Hayvan Deneyleri Yönetmeliği (onay no. 20‑370) yönergelerine uygun olarak yapıldı. Apoptoz tahlilleri. Apoptoz, Caspase‑Glo® 3/7 Test Sistemi (Promega Corporation; kat. no. G8090), Annexin‑V‑FLUOS boyama kiti (Roche Diagnostics; kat. no. 11858777001) ve JC‑1 Mitokondriyal Membran Potansiyeli kullanılarak değerlendirildi. Test kiti (Cayman Chemical Company; kat. no. 10009172), üreticinin talimatlarına göre.
LD'lerin boyanması. Hücreler, 60mm tabaklarda cam lamellere ekildi ve gece boyunca yüzde 5 CO2 inkübatöründe 37°C'de oleik asit (200 µM) içeren ortam ile kültürlendi. Ortam daha sonra aspire edildi ve hücreler, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca yüzde 4 formaldehit (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) ile sabitlenmeden önce iki kez PBS ile yıkandı. Hücreler daha sonra iki kez PBS ile yıkandı ve 30 dakika boyunca karanlıkta 37°C'de 0.5 uM Lipi‑Green (Dojindo Molecular Technologies, Inc.) ile inkübe edildi. Daha sonra hücreler iki kez PBS ile yıkandı ve lameller VECTASHIELD® Antifade Mounting Medium with DAPI (Vector Laboratories, Inc.; kat. no. H‑1200) kullanılarak cam slaytlara monte edildi. Boyanmış hücrelerin görüntüleri bir BZ‑X710 floresan mikroskobu (Keyence Corporation) ile elde edildi. Canlı hücreler, HBSS'de iki kez yıkanmadan önce 30 dakika boyunca Hanks'in Dengeli Tuz Solüsyonu (HBSS) içinde 0,5 uM Lipi‑Green ile inkübe edildi, yüzde 0,5 BSA ile 1 mM EDTA/PBS (pH 8.0) içinde yeniden süspanse edildi ve bir hücre süzgecinden geçirildi . Hücreler bir Gallios akış sitometresinde (Beckman‑Coulter, Inc.) analiz edildi ve veriler FlowJo v10 yazılımı (FlowJo LLC) kullanılarak analiz edildi.
ER izleyici boyama. ACHN hücreleri (ACHN/sgControl, ACHN/sgELOVL2‑1 ve ACHN/sgELOVL2‑2) 6{{20}}‑mm kaplarda cam lamellere ekildi ve 37°C'de 48 saat süreyle kültürlendi. yüzde 5 CO2 inkübatörü. Ortam daha sonra aspire edildi ve hücreler, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca yüzde 4 formaldehit (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation) ile fiksasyondan önce HBSS ile iki kez yıkandı. Hücreler daha sonra iki kez HBSS ile yıkandı ve 2 saat boyunca karanlıkta 37°C'de 500 nM ER Tracker Red (Thermo Fisher Scientific, Inc.; kat. no. E34250) ile inkübe edildi. Daha sonra hücreler iki kez PBS ile yıkandı ve lameller cam slaytlar üzerine yerleştirildi. Boyanmış hücrelerin görüntüleri bir BZ‑X710 floresan mikroskobu (Keyence Corporation) ile elde edildi. Canlı hücreler, HBSS'de iki kez yıkanmadan önce 30 dakika boyunca HBSS'de 500 nM ER Tracker ile inkübe edildi, yüzde 0,5 BSA ile 1 mM EDTA/PBS (pH 8.0) içinde yeniden süspanse edildi ve bir hücre süzgecinden geçirildi. Hücreler bir Gallios akış sitometresinde analiz edildi ve veriler FlowJo v10 yazılımı kullanılarak analiz edildi.
Gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi (GC-MS). Hücre peletlerinden toplam lipidlerin ekstraksiyonu daha önce tarif edildiği gibi yapıldı (27). Ekstraktların FA metil esterlerine (FAME'ler) hidrolizi ve türevlendirilmesi gerçekleştirilmiştir. Konjuge FA'ların dahili standartları için, C20:4 (ω‑6), C20:5 (ω‑3), C22:5 (ω‑6), C22:5 (ω‑3) ve C22 :6 (ω‑3) FAME'ler, MilliporeSigma veya Cayman Chemical Company'den satın alındı. GC‑MS analizi, bir Omegawax® Kapiler GC Sütunu (MilliporeSigma; kat. no. 24136) ile bir GCMS‑TQ8040 (Shimadzu Corporation) kullanılarak yapıldı. Sıcaklık gradyanı başlangıçta dakikada 20˚C oranında 70'den 150˚C'ye ve dakikada 8˚C oranında 150'den 280˚C'ye yükseltildi, ardından 280'den 200˚C'ye 15 oranında düşürüldü. ˚C/dk. Örnek enjeksiyonu, 1.0 µl örnek enjekte edilerek bölünmez modda gerçekleştirilmiştir. MS analizi için iyon kaynağı ve ara yüzey sıcaklığı sırasıyla 200°C ve 270°C olarak ayarlandı. Veriler, 70 eV iyonizasyon voltajı altında tam tarama modunda (30‑600 m/z) elde edilmiştir. FAME'ler, alıkonma süresine ve referans FAME standartlarıyla eşleşen elektron iyonizasyon‑MS (EI‑MS) spektrumuna göre tanımlandı. Göreceli FAME miktarı, numune kütlesi başına ortalama tepe alanı karşılaştırılarak hesaplandı. Her numune bağımsız olarak üç kez ölçüldü.
İstatistiksel analiz. Veriler ortalama ± SD olarak ifade edilir. Tüm istatistiksel analizler JMP 10 yazılımı (SAS Institute, Inc.), GraphPad Prism8 (GraphPad Software, Inc.) veya R paketi (sürüm 4.0.2; RStudio, Inc.) kullanılarak yapıldı. İki grup arasındaki farkların önemi, eşleştirilmemiş Student t-testi veya Mann-Whitney testi kullanılarak değerlendirildi. Üç veya daha fazla grup arasındaki farkların önemi, Dunnett testi veya Kruskal‑Wallis testi kullanılarak tek yönlü ANOVA ve ardından Bonferroni düzeltmeli bir Dunn's post hoc testi kullanılarak değerlendirildi. Hayatta kalma eğrileri Kaplan‑Meier yöntemi kullanılarak oluşturuldu ve eğriler arasındaki fark log-rank testi kullanılarak değerlendirildi. Hastalar, medyan ekspresyon değerlerinin eşik değeri kullanılarak düşük ekspresyon veya yüksek ekspresyon grubu olmak üzere iki gruba ayrıldı. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Sonuçlar
ELOVL2, RCC'de yüksek oranda aşırı eksprese edilir. Karşılık gelen normal ve tümör dokularında yedi ELOVL izoziminin bolluğu ilk olarak mevcut kohortta incelendi ve ELOVL1, ELOVL2, ELOVL5 ve ELOVL7 ekspresyon seviyelerinin ccRCC dokularında yükseldiğini ortaya koydu (Şekil 1A). Bu sonuçları doğrulamak için, karşılık gelen normal ve tümör dokularında ELOVL izozim gen ekspresyonu, TCGA veri tabanı (KIRC kohortu) kullanılarak incelendi. ELOVL2 mRNA ekspresyonunun ccRCC dokularında en yüksek düzeyde ve önemli ölçüde yükseldiği doğrulandı (Şekil 1B; P<0.0001). subsequently,="" elovl2="" mrna="" expression="" was="" investigated="" further="" among="" three="" major="" histological="" subtypes="" of="" rcc="" using="" tcga="" database="" (kirc,="" kirp="" and="" kich="" cohorts).="" this="" revealed="" that="" elovl2="" was="" overexpressed="" in="" the="" prcc="" and="" chrcc="" tissues;="" however,="" its="" expression="" in="" ccrcc="" tissues="" was="" the="" highest="" among="" the="" histological="" subtypes="" (fig.="" 1c).="" moreover,="" the="" elovl2="">
OS‑RC‑2 hücre hattındaki mRNA ekspresyon seviyeleri RPTEC hücre hattındakilerle karşılaştırıldığında daha düşük olmasına rağmen, ACHN, 786‑O ve SK‑RC‑52 hücre dizilerinde ekspresyon seviyeleri belirgin şekilde yükselmiştir (Şekil 1D) . Daha sonra, çeşitli kanser türlerinde ELOVL2 gen ekspresyonunun kansere bağlı değişimi, GENT2 veri tabanı kullanılarak araştırıldı (Şekil 1E). Normal dokularla karşılaştırıldığında, ELOVL2 ekspresyonunun erkeklerde anlamlı olarak daha yüksek olduğu bulundu.böbrek, prostat, akciğer ve kolon kanserlerinde ELOVL2 ekspresyonu mesane veya meme kanserlerinde benzerdi. Bu sonuçlar, ELOVL izozimlerinin rollerinin kanser tipine göre farklılık gösterdiğini ve ELOVL2 aşırı ekspresyonunun, RCC'nin, özellikle ccRCC'nin karsinojenezi veya hastalık ilerlemesi ile ilişkili olabileceğini öne sürdü.
ELOVL2 aşırı ekspresyonu, RCC'nin ilerlemesi ile ilişkilidir. ELOVL2'nin gen ekspresyonu ile KIRC kohortundaki tümör düğümü metastazı (TNM) aşamaları arasındaki ilişki, ccRCC'de ELOVL2'nin klinik önemini açıklığa kavuşturmak için incelenmiştir. ELOVL2 ekspresyonu, lokal olarak ilerlemiş ve metastatik hastalıkta daha yüksekti, ancak ekspresyonu lenf nodu metastazı durumu ile ilişkili değildi (Şekil 2A‑C). Toplu olarak, ELOVL2 ekspresyonu klinik evreye göre arttırıldı (Şekil 2D). Daha sonra, ccRCC'nin klinik etkisini aydınlatmak için ELOVL2 ekspresyonu ile RCC'li hastaların prognozu arasındaki ilişki değerlendirildi. Kaplan‑Meier analizine göre, ELOVL2'nin yüksek ifadesinin mevcut kohortta kötü prognoz ile önemli ölçüde ilişkili olduğu ortaya çıktı (P=0.0015, Şekil 2E). Bu sonuçları doğrulamak için, ELOVL2 ekspresyonu ile ccRCC hastalarının prognozu arasındaki ilişki KIRC kohortunda daha ayrıntılı olarak incelendi ve benzer şekilde, yüksek ELOVL2 ekspresyonunun kötü prognoz ile önemli ölçüde ilişkili olduğu gösterildi (P<0,01, fig.="" 2f).="" moreover,="" a="" high="" expression="" of="" elovl2="" was="" significantly="" associated="" with="" a="" poor="" prognosis="" of="" patients="" with="" prcc=""><0.0001, fig.="" 2g).="" however,="" this="" was="" not="" observed="" in="" patients="" with="" chrcc="" (fig.="" 2h).="" in="" total,="" the="" aforementioned="" results="" indicated="" that="" elovl2="" may="" mediate="" ccrcc="" and="" prcc="" disease="" progression,="" at="" least="">
ELOVL2, böbrek kanseri hücrelerinin çoğalmasını destekler. ELOVL2'nin RCC hücrelerinin çoğalmasındaki işlevini değerlendirmek için 786‑O, ACHN ve SK‑RC‑52 hücrelerinde ELOVL2'nin shRNA yıkımı gerçekleştirilmiştir. Her shRNA'nın etkileri RT‑qPCR kullanılarak değerlendirildi ve ELOVL2 ifadesinde önemli bir düşüş doğrulandı (Şekil 3A). Daha sonra ELOVL2 yıkımının hücresel proliferasyon üzerindeki etkilerini incelemek için MTT deneyleri yapıldı. ELOVL2'nin yıkılmasının, kontrol shRNA ile transfekte edilmiş hücrelere kıyasla tüm hücrelerin proliferasyonunu inhibe ettiği gözlendi (Şekil 3B).
Buna karşılık, ELOVL2'nin daha düşük bazal ekspresyonuna sahip bir hücre çizgisi olan OS-RC‑2 hücrelerinde ELOVL2 aşırı ekspresyonu indüklendi. Transfeksiyon etkinliği RT‑qPCR kullanılarak değerlendirildi ve önemli ölçüde artan ELOVL2 ekspresyonu doğrulandı (Şekil 3C). MTT tahlilleri, ELOVL2'yi aşırı eksprese eden hücrelerin proliferasyonunun, kontrol grubuyla (Şekil 3D) karşılaştırıldığında önemli ölçüde teşvik edildiğini ortaya koydu;böbrekkanser hücreleri.
ELOVL2 ablasyonu, in vivo tümör büyümesini, PUFA'ların sentezini ve LD'lerin üretimini baskılar.böbrekkanser hücreleri. ELOVL2'nin RCC ilerlemesindeki rollerini daha da netleştirmek için, bir CRISPR/Cas9 sistemi (sgELOVL2‑1 ve sgELOVL2‑2) (Şekil S1) kullanılarak bir ELOVL2‑nakavt ACHN hücre hattı oluşturulmuştur. In vitro, hücresel proliferasyon, ACHN hücrelerinde ELVOVL2 ablasyonu ile önemli ölçüde azaldı (Şekil S1). Daha da önemlisi, hücreler farelere deri altından implante edildiğinde, ELOVL2'nin CRISPR/Cas9 aracılı ablasyonu tümör büyümesini baskıladı (Şekil 4A). ACHN/kontrol ve ACHN/sgELOVL2‑2'deki subkutan ksenogreft tümörlerinin maksimum hacimleri kurban gününde sırasıyla 241 ve 109 mm3 idi. ACHN/sgELOVL2‑1 grubundaki tüm ksenograft tümörlerinin transplantasyonu takiben 14 günde kendiliğinden gerilediği ve ekstirpasyon sırasında tespit edilmediğine dikkat edilmelidir. Ki‑67 indeksi, kontrol veya sgELOVL2 ile transfekte edilmiş ksenograft tümörlerinde de incelendi ve ACHN/sgELOVL2‑2 hücrelerinin, ACHN/kontrol hücrelerinden önemli ölçüde daha düşük Ki‑67 indeksi sergilediği gözlendi (Şekil 4B ve C) . Bu sonuçlar ayrıca ELOVL2'nin in vivo olarak tümör büyümesini artırma olasılığını destekledi. ELOVL2 kromozom 6p24.2 üzerinde yer aldığından ve C20–C24 PUFA'ların uzamasını kontrol eden bir endoplazmik retikulum transmembran proteinini kodladığından (7), toplam FA seviyeleri daha sonra ACHN/sgControl ve ACHN/sgELOVL2 hücrelerinde GC‑MS analizi kullanılarak değerlendirildi. (Şekil S2). LC‑PUFA seviyelerinin değişimi Şekil 4D'de gösterilmektedir. ELOVL2, endojen dokosaheksaenoik asit (DHA, C22:6 n‑3) (28,29) üretiminde temel bir enzimdir ve beklendiği gibi, DHA seviyeleri,böbrekkanser hücreleri. Ayrıca,
araşidonik asit (AA, C20:4 n‑6), eikosapentaenoik asit (EPA) ve dokosapentaenoik asit (DPA) dahil olmak üzere diğer LC‑PUFA türlerinin miktarları da önemli ölçüde azaldı. Öte yandan, DPA üretimi, ACHN/sgELOVL2 hücrelerinde tutarlı bir şekilde değişmedi. ACHN hücrelerindeki DPA miktarı çok düşüktü ve birkaç numunede tespit edilmedi (Şekil S2). Önceki çalışmalar, ELOVL2'nin DHA üretimi yoluyla LD'lerin birikimini desteklediğini gösterdiğinden (11,12), LD'lerin depolanması, nötr lipid boyama kullanılarak ayrıca değerlendirildi. ACHN/sgELOVL2 hücrelerindeki LD'lerin bolluğu, ACHN/sgControl hücreleri ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde azalmıştır (Şekil 4E‑4G), bu da lipid metabolizmasının ELOVL2 aşırı ekspresyonu ile değiştirilmesinin RCC hücre proliferasyonunu etkileyebileceğini düşündürmektedir.
ELOVL2 ablasyonu, apoptozu indüklerböbrekkanser hücreleri. Önceki çalışmalar, hücre içi LD'lerin üretiminin stresli tümör mikroçevrelerinde apoptozu desteklediğini ortaya koymuştur (4). Bu nedenle, bu çalışmada, ACHN/sgControl veya ACHN/sgELOVL2 hücrelerinde apoptoz değerlendirildi ve ACHN/sgELOVL2 hücrelerinde önemli ölçüde yüksek bir kaspaz 3/7 aktivitesi saptandı (Şekil 5A). Benzer şekilde, ACHN/sgControl hücreleri ile karşılaştırıldığında daha fazla sayıda apoptotik ACHN/sgELOVL2 hücresi, Annexin V/PI boyama ile kanıtlandığı gibi tanımlandı (Şekil 5B). Hücresel strese bağlı olarak, içsel apoptoz (30) mitokondriyal membran potansiyelinin kaybına yol açar; bu nedenle bu çalışma, floresan JC‑1 kullanarak ACHN/sgControl veya ACHN/sgELOVL2 hücrelerinin mitokondriyal transmembran elektrik potansiyelini daha da değerlendirdi. ACHN/sgELOVL2 hücrelerinde agrega/monomer oranı önemli ölçüde azalmıştır (Şekil 5C), bu da mitokondriyal transmembran polarizasyonunun teşvik edildiğini ve ELOVL2 ablasyonu ile içsel apoptotik yolun aktivasyonunu gösterir. Daha doğrusu, proapoptotik gen (BAX, BAK, PUMA ve NOXA) ekspresyon seviyeleri önemli ölçüde artarken, anti-apoptotik gen (BCL2 ve MCL1) ekspresyon seviyeleri ELOVL2 ablasyonu nedeniyle önemli ölçüde azaldı (Şekil 5D). Bu sonuçlar, ELOVL2'nin böbrek kanseri hücrelerinin apoptozunun inhibisyonu yoluyla hücresel sağkalıma katkıda bulunduğunu göstermiştir.
LD formundaki lipid depolama kapasitesinin bozulması, katlanmamış protein tepkisini (UPR) ve hücresel apoptozu tetikleyerek ER homeostazının çökmesine neden olabilir (4,5). Bu nedenle, ELOVL2 ekspresyonunun ER homeostazına dahil olduğu hipotezini desteklemek için, ACHN/sgControl veya ACHN/sgELOVL2 hücrelerinde ER izleyici boyaması yapıldı. Sonraki ER görüntüleme (Şekil 5E) ve akış sitometrisi kullanılarak niceleme (Şekil 5F ve G), ER stresi nedeniyle ACHN/sgELOVL2 hücrelerinde ER genişlemesini gösterdi. Ek olarak, ELOVL2 ablasyonu, UPR sensörlerinin bir aktivatörü olan IRE1'in fosforilasyonunu destekledi (Şekil 5H), ifadesi iseER stresinin neden olduğu apoptozda ana rol oynayan CHOP, ELOVL2 ablasyonu ile yukarı regüle edildi (Şekil 5H). Toplu olarak, bu sonuçlar ELOVL2 aracılı lipid metabolizmasının hücre apoptozunu baskıladığını göstermiştir.böbrekkanser hücreleri ve ER homeostazının bozulmasının potansiyel bir indüksiyon mekanizması olabileceğini öne sürdü.
Tartışma
Bu çalışma, ELVOL2'nin lipid metabolizmasını değiştirebileceğini ve böbrek kanseri hücrelerinin apoptozunun inhibisyonu yoluyla tümör büyümesini destekleyebileceğini göstermiştir. Ayrıca, RCC dokularında ELOVL2 ekspresyonunun yükseldiği ve
ELOVL2'nin daha yüksek ekspresyonu, RCC'li hastaların kötü prognozu ile önemli ölçüde ilişkiliydi. ELOVL2'nin kanser ilerlemesindeki rolleri hakkında sınırlı sayıda çalışma mevcuttur (22,31,32) ve sonuçları tartışmalıdır. Simple ve arkadaşları (22) ELOVL2'nin LC‑PUFA sentezini desteklediğini, verimli EGFR sinyalini ve glioblastoma kök hücrelerinin çoğalmasını desteklediğini gösterdi. Buna karşılık Kang ve arkadaşları (31) ELOVL2 ablasyonunun meme kanseri hücrelerinin hücre göçünü ve koloni oluşumunu destekleyebileceğini bildirmiş ve azalmış bir ELOVL2 ekspresyonunun meme kanserli hastaların daha kötü prognozu ile ilişkili olduğunu ortaya çıkarmıştır. Ayrıca, Ding ve arkadaşları (32) ELOVL2'nin nöroblastom hücrelerinin proliferasyonunu baskıladığını ve uygun hayatta kalma oranları ile ilişkili olduğunu bildirmiştir. Önceki çalışmalarda bildirilen çelişkili bulgulara göre, ELOVL2'nin kanser progresyonunda kanser türüne göre açıkça değişen çok rollü bir işlevi gösterilmiştir.
Değişmiş bir lipid metabolizması, kanserin ilerlemesini büyük ölçüde etkiler, bu çalışmanın sonuçlarında gözlemlenen bir etki, ELOVL2'nin LC‑PUFA'ların uzama sürecinin birincil kontrolörü ve DHA biyosentezinde kritik bir enzim olarak rolünü gösteren araştırmalarla uyumludur ( 7). Bu çalışmada endojen LC‑PUFA'ların,
AA ve DHA dahil olmak üzere böbrek kanseri hücrelerinde ELOVL2 ablasyonu nedeniyle azalmıştır. Bununla ilgili olarak, AA yolunun lipoksijenaz (LOX) inhibitörleri tarafından inhibisyonunun apoptozu indüklediği ve canlılığını azalttığı daha önce bildirilmişti.böbrekin vitro kanser hücreleri (33,34). Bu çalışmanın ELOVL2 aşırı ekspresyon sonuçları bu mekanik bulgularla uyumlu olmasına rağmen, daha önce ancak DHA uygulamasının renal kanser hücrelerinin in vitro proliferasyonunu ve invazyonunu engelleyebileceği bildirilmiştir (35,36). Ancak, LC‑PUFA'ların kanser ilerlemesi üzerinde farklı ve zıt etkileri olduğu bilinmektedir. Bu nedenle, ELOVL2'nin inhibisyonu nedeniyle çeşitli LC‑PUFA'lar arasındaki hassas dengenin değişmesi, çeşitli kanser türlerinde gözlenen farklı fenotiplerle ilişkili olabilir. Önceki çalışmalar, farelerde ELOVL2 tarafından endojen DHA üretimi yoluyla LD'lerin arttığını göstermiştir (11,12). Benzer şekilde, ELOVL2 ablasyonunun böbrek kanseri hücrelerinde DHA ve LD'lerin üretimini baskılayabildiği ortaya çıktı, bu da ELOVL2 aşırı ekspresyonunun RCC'de endojen DHA üretimi yoluyla LD üretimini destekleyebileceğini düşündürdü. Kanser hücreleri genellikle hipoksi ve besin yoksunluğu dahil olmak üzere daha sert çevresel (makro ve mikro) koşullarda bulunur, ancak yine de bu tür şiddetli stres faktörleri altında hızla büyür. Enerji ve redoks homeostazının sürdürülmesi, otofajinin düzenlenmesi, ER homeostazının sürdürülmesi ve lipotoksisiteye karşı koruma gibi hücresel stres koşulları altında LD'lerin işlevleri gösterilmiştir (4).
Ackerman ve diğerleri (6), LD'lerin, ccRCC'de TG'de yerleşik doymamış FA'lerin değişimi yoluyla hücresel lipid doygunluğunu tamponlayarak hipoksi sırasında toksik, doymuş lipidlerin birikmesini önlediğini ortaya koydu. Palmitat (C16:0) dahil doymuş yağ asitlerine (SFA) bağlı hücresel lipotoksisite, kanser hücresi ölümüne yol açan apoptoza neden olabilir (37,38). Son zamanlarda, ELOVL2, glukolipotoksisitenin neden olduğu ‑hücre apoptozunun önlenmesine yardımcı olan kritik bir hayatta kalma yanlısı enzim olarak belirlenmiştir (39). ELOVL2/DHA ekseni modifiyeli lipid bölümleme, CPT1'e bağlı bir mekanizma yoluyla FA oksidasyonu (FAO) için mitokondriye taşınmasını destekleyerek SFA palmitatının toksik olmayan bir şekilde kullanılmasıyla sonuçlanır. Ek olarak Balaban ve arkadaşları, C4‑2B prostat kanseri hücrelerinin ve MCF‑7 meme kanseri hücrelerinin mitokondriyal FAO tarafından palmitat kaynaklı apoptozdan korunduğunu göstermiştir (37,38). Palmitat ile indüklenen lipotoksisite sırasında, BCL‑2 veya MCL‑1 dahil olmak üzere anti-apoptotik proteinlerin hücresel seviyelerinin azaldığı (40,41) ve PUMA veya NOXA dahil olmak üzere proapoptotik proteinlerin seviyelerinin rapor edildiği bildirilmiştir. artırılacak (42,43). Bu çalışmada ELOVL2 ablasyonunun teşvik edebileceği ortaya çıktı.böbrekpro- ve anti-apoptotik genlerin benzer şekilde değiştirilmesi yoluyla kanser hücresi apoptozisi. Bu bulgular, ELOVL2'nin, RCC'de tümör büyümesini teşvik etmek için hücreleri lipotoksisiteye bağlı apoptoza karşı koruyabileceğini düşündürmektedir.
Ek olarak, RCC'de ELOVL2 ablasyonunun, mitokondriye bağımlı bir yol yoluyla BAK ve BAX'ı yukarı regüle ederken BCL‑2 ve MCL‑1'i aşağı regüle ederek ER stresi ve CHOP yukarı regülasyonunu destekleyebildiği gösterilmiştir (44). Gerçekten de, bu çalışmanın sonuçları pro- ve anti-apoptotik genlerin ELOVL2 ablasyonu ile benzer şekilde değiştirildiğini göstermiştir. HIF2 /PLIN2'ye bağlı LD'lerin ccRCC'de ER stresine karşı direnci ve hücre sağkalımını desteklediğini bildiren Qui ve arkadaşlarının (5) çalışmasındaki bulgulara uygun olarak, bu toplu bulgular ELOVL2 tarafından hücresel apoptozu teşvik eden ER stresini desteklemektedir. ablasyonböbrekkanser hücreleri, LD'leri azaltmak ve toksik lipidlere karşı hücresel tamponu çıkarmak.
Sonuç olarak, bu çalışma, bildiğimiz kadarıyla, ilk kez, ELOVL2'nin, PUFA'ların uzaması yoluyla apoptozun inhibisyonu yoluyla, en azından kısmen ER homeostazını koruyarak tümör büyümesini desteklediğini göstermiştir.böbrekkanser hücreleri. Birlikte ele alındığında, ELOVL2'nin neden olduğu LD'lerin, RCC'deki hücresel strese karşı çoklu koruyucu etkiler nedeniyle kanserin ilerlemesine katkıda bulunabileceği öne sürülmüştür. Ayrıca, ELOVL2'nin RCC'li hastalar için çekici bir potansiyel terapötik hedef olabileceği öne sürülmüştür.
