Deney 4 Cistanche Deserticola Feniletanol Glikozidin Fare Perimenopozal Sendromu Depresyon Modeli Üzerindeki Etkisi Malzemeler ve Yöntemler 1 Deneysel Malzemeler

1.1 Deney hayvanları

SPF sınıfı fareler, Kunming cinsi, dişi, 18~22g, Shandong Lukang Pharmaceutical Co., Ltd. tarafından sağlanmıştır, bu fare grubu sertifika numarası: 0016003; laboratuvar sertifika numarası SYXK (Yu) 2010-001. 1.2 Deneysel ilaçlar

Cistanche feniletanol glikozitDeney 1'in yöntemine göre hazırlandı ve içerik %66,47'ye ulaştı. Gengnian'an Kapsülü, içindekiler: Rehmannia glutinosa, Rehmannia glutinosa, Alisma, Ophiopogon japonicus, Scrophulariaceae, şakayık kabuğu, Poria cocos, sedef, curculigo, Schisandra chinensis, manyetit, Polygonum multiflorum asma, Uncaria, yüzen buğday, polygonum multiflorum . Fonksiyonlar ve Endikasyonlar:Yin'i besleyin ve yang'ı bastırın, sorunları hafifletmekVezihni sakinleştir. Menopozal sıcak basması ve terleme, baş dönmesi, kulak çınlaması, sinirlilik ve uykusuzluk için kullanılır. Özellikler: Kapsül başına 0.3g. Kullanım Şekli ve Dozu: Oral, günde 3 defa, tek seferde 3 kapsül. Üretici: Shanxi Tianxing Pharmaceutical Co., Ltd. Üretim parti numarası: 121104. Onay numarası: Ulusal İlaç Onay No. Z14021848.

CISTANCHE'IN ÇALIŞMASI NE KADAR SÜRER?

Soya izoflavonları ve E vitamini yumuşak kapsülleri, içerik listesi: soya izoflavonları tozu, E vitamini, ayçiçek yağı, jelatin, gliserin, su, tartrazin, titanyum dioksit. İkonik bileşenler ve içerik: Her 100 gramı 55,2 mg soya izoflavonu (genistein olarak hesaplanır) ve 608,5 mg E vitamini içerir. Sağlık fonksiyonları: Kemik yoğunluğunu artırın. Talimatlar ve dozaj: Günde 2 kez 1 kapsül ılık su ile alın. Özellikler: 500mg×100 kapsül. Üretici: Weihai Ziguang Biyoteknoloji Geliştirme Co., Ltd. Üretim parti numarası: 13070302. Onay numarası: Guoshijianzi G20080032. 1.3 Deneysel reaktifler

Sodyum karboksimetil selüloz, Tianjin Hengxing Chemical Reagent Manufacturing Co., Ltd., parti numarası: 20120418; enjeksiyon için penisilin sodyum, North China Pharmaceutical Co., Ltd., spesifikasyon: 4 milyon adet, üretim parti numarası: c1206807; formaldehit çözeltisi (analitik sınıf), Yantai City Shuangshuang Chemical Co., Ltd., üretim parti numarası: 20130902; %0,9 sodyum klorür enjeksiyonu, Chenxin Pharmaceutical Co., Ltd.; spesifikasyon: 250ml, üretim parti numarası: 1301265303;

Kloral hidrat, Tianjin Guangfu İnce Kimyasal Araştırma Enstitüsü, parti numarası 20120827; fare E2 ELISA tespit kiti, Ar-Ge Şirketi, parti numarası: 20140101A; fare T ELISA tespit kiti, R&D Şirketi, parti numarası: 20140101A; fare LH ELISA saptama Kiti, R&D Şirketi, parti numarası: 20140101A; Fare FSH ELISA tespit kiti, Ar-Ge Şirketi, parti numarası: 20140101A;

Fare DA ELISA tespit kiti, Ar-Ge Şirketi, parti numarası: 20140101A; Fare 5-HT ELISA tespit kiti, Ar-Ge Şirketi, parti numarası: 20140101A. 1.4 Deneysel aletler

Elektronik terazi, Shanghai Minqiao Medical Instrument Co., Ltd., model: JY601; elektronik analitik terazi, Ohaus (Shanghai) Company, model: AR1140/C; yüksek hızlı masaüstü santrifüj, Şangay Anting Bilimsel Cihaz Fabrikası, model: TGL-168 ; Elektrikli termostatik su banyosu, Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd., model: HWS12; Fare otonom aktivite test cihazı, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., model: ZZ-6; Fare karanlıktan kaçınma ölçer, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., model: BA-200; kuyruk süspansiyonu test cihazı, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., model: TS-200; yüksek hızlı soğutmalı santrifüj, HKUST Innovation Co., Ltd.'nin Zhongjia Şubesi, model: KDC-160HR; ayarlanabilir pipetleme Aleti, Shanghai Leibo Analytical Instrument Co., Ltd.;

Mikroplaka okuyucu, American BIO-RAD Company, model: 680;

Elektrikli mikroskop, Japonya OLYMPUS Şirketi, model: BX61.

2 Deneysel yöntemler

2.1 Modelleme ve ilaç uygulaması

Vücut ağırlığı 23-25g olan 90 dişi Kunming faresi seçildi ve 10 tanesi rastgele boş grup olarak seçildi ve sahte ameliyata tabi tutuldu ve geri kalan fareler, oluşturmak için kullanıldı. Perimenopozal modeller. Tartıldıktan sonra farelere %10 kloral hidratın (0.03ml/10g) intraperitoneal enjeksiyonu yoluyla anestezi uygulandı ve karın pozisyonu sabitlendi. Daha sonra saçlar farenin arka kısmından son kaburganın altından, orta aksiller çizginin kesişim noktasından ve omurganın dışından yaklaşık 1 cm uzaklıktan kesildi ve dezenfekte edildikten sonra insizyon yapıldı. Deri ve sırt kasları yaklaşık 0,5-1cm genişliğindedir. Kesi alanında süt beyazı parlak bir yağ kitlesi görülür ve yumurtalık bunun içine gömülüdür. Küçük cımbız kullanarak yağ kütlesini nazikçe kavrayın ve kesiden dışarı çekin, yağ kütlesini ayırın; bir grup ince, düzensiz, sarı-kırmızı yumurtalık göreceksiniz. Keserken önce yumurtalıkların altındaki fallop tüplerini (yağ dahil) ince iplerle bağlayın ve ardından yumurtalıkları çıkarın. Ameliyat sonrasında rahim boynuzları tekrar karın boşluğuna yerleştirilir, kaslar ve deri dikilir ve her iki yumurtalık da aynı şekilde çıkarılır. Ameliyattan sonra hayvanlar dikkatlice kaldırıldı ve enfeksiyonu önlemek için art arda 3 gün boyunca günde bir kez penisilin 200,000 u/kg (her biri 0,1 mL) intramüsküler olarak enjekte edildi. Operasyondan 5 gün sonra, yumurtalıkların tamamen alınıp alınmadığını belirlemek için her fareye tek tek, birbirini takip eden 5 gün boyunca günde bir kez vajinal smear muayenesi yapıldı. Smearda kızgınlık reaksiyonu gösteren fareler atıldı ve 60 adet tamamen hadım edilmiş fare deneysel amaçlar için rastgele ve eşit bir şekilde 6 gruba ayrıldı; model grubu, Mengnianan grubu, soya izoflavon grubu, büyük, orta veDüşük doz Cistanche feniletanol glikozit grubu. Her gruptaki hayvanlara ameliyattan sonraki 10. günde ilgili ilaçlar verildi. 6 günlük uygulamadan sonra, boş gruptaki fareler, herhangi bir uyarı olmaksızın, normal yiyecek ve su ile kafes başına 5 adet olacak şekilde büyütüldü. 6 model grubunun tamamı kafes başına 1 fare olacak şekilde büyütüldü ve her gün rastgele farklı uyarılar verildi. 18 gün içinde rastgele olarak yedi stres faktörü uygulandı: nemli altlık (1g çöp/1ml su); buzlu suda yüzmek (4 derece, 5 dakika); ısı stresi (45 derece, 5 dk); gece aydınlatması (24 saat); kuyruk kelepçeleme (1 dakika); su yoksunluğu (24 saat); oruç (24 saat). Her gün rastgele bir uyarı verildi ve her bir uyarı 18 gün boyunca sürekli olarak ortaya çıkamadı.

Hazırlama yöntemi: 0.5% CMC Hazırlama yöntemi: 4g karboksimetil selüloz sodyumu tartın ve 800 ml elde etmek için damıtılmış suyla karıştırın.

Cistanche feniletanol glikozit grubunun büyük, orta ve küçük dozlarının dozajları 200mg/kg, 10{{20}}mg/kg ve sırasıyla 50mg/kg (uygulama hacmi 0,1 ml/10g). Hazırlama yöntemi: Sırasıyla 2000 mg, 1000 mg ve 500 mg Cistanche feniletanoid glikozidi tartın, bunları az miktarda %0,5 CMC ile çözün, ardından hacmi 100 ml'ye ayarlayın, iyice karıştırın, hepsi bu. Gengniangan Kapsülleri (675 mg/kg, damıtılmış su ile 67,5 mg/ml, 0,1 ml/10 g'ye kadar karıştırılmış, klinik dozajın 15 katına eşdeğer); Hazırlama yöntemi: 9 Gengniangan Kapsülünü alın, önce az miktarda %0,5 CMC Çözündürün, ardından hacmi 40 ml'ye ayarlayın ve Gengnianan Kapsül Süspansiyonu (675 mg/kg) dozunu elde etmek için iyice karıştırın. Soya Fasulyesi İzoflavon E Vitamini Yumuşak Kapsülü (250mg/kg, 25mg/ml, 0.1ml/10g elde etmek için damıtılmış su kullanın, klinik dozajın 15 katına eşdeğer); Hazırlama yöntemi: 2 Soya Fasulyesi İzoflavon E Vitamini Yumuşak Kapsülünü alın, önce kullanın Az miktarda %0,5 CMC'yi çözün, ardından hacmi 40 ml'ye ayarlayın ve soya izoflavon E vitamini yumuşak kapsül süspansiyonu dozunu (250 mg/kg) elde etmek için iyice karıştırın. ). Depolama yöntemi: buzdolabında saklayın, kullanım sırasında sıcak tutun.

Uygulama yöntemi: Her gruptaki hayvanlara, ameliyattan sonraki 10. günde ilgili ilaçlar verildi. Gengnian'an grubuna ağızdan 675 mg·kg-1 Gengnian'an kapsül süspansiyonu uygulandı, soya izoflavon grubuna ağızdan 250 mg·kg-1 soya izoflavon E vitamini yumuşak kapsül süspansiyonu uygulandı ve büyük, orta veküçük dozlarda Cistanchefeniletanol. Glikozit grubuna oral olarak büyük, orta ve küçük dozlarda Cistanche feniletanol glikozit 200mg·kg-1, 10mg·kg-1, 50mg·kg{{ uygulandı. 5}}, sırasıyla 0,1 ml/10g. Boş gruba ve model grubuna art arda 30 gün boyunca günde bir kez aynı hacimde %0,5 CMC çözeltisi uygulandı.

2.2 Gözlem öğeleri ve tespit yöntemleri

Zorunlu yüzme: Kronik stres stimülasyonunun bitiminden sonraki ilk gün, her gruptaki farelerin 6 dakika içindeki hareketsizlik süresi 2-6 dakika boyunca ölçüldü. (Her gruptaki fareleri 2000 mL'lik bir behere koyun. Su sıcaklığı 25 derecedir. Yüzmeyi sürdürmek için gereken minimum harekete ek olarak, hayvanların uzuvları hareket etmeyi bırakır ve hareketsiz olarak kaydedilir. Toplam hareketsizlik süresini 2'den itibaren kaydedin. ) Gönüllü aktivite testi: Kronik stres stimülasyonunun bitiminden sonraki ikinci günde, her gruptaki farelerin 5 dakika içindeki spontan aktivitelerinin sayısı ölçüldü.

Karanlıktan kaçınma yöntemi: Kronik stres stimülasyonunun bitiminden sonraki 3. günde, farenin kuyruğunu karanlık odaya açılan küçük açıklığa bakan ölçüm kutusuna koyun ve eğitim yapın. 24 saat sonra, farenin karanlık odaya ilk kez girme gecikmesini ve 5 dakika içinde karanlık odaya girme süresini yeniden ölçün. Elektrik çarpması sayısı.

Kuyruk süspansiyon testi: Kronik stres stimülasyonunun bitiminden sonraki 5. günde, her gruptaki farelerin 6 dakika içindeki hareketsizlik süresi 2-6 dakika boyunca ölçüldü.

Son dozdan 2 saat sonra (yiyecek ve su olmadan 12 saat), fareler tartıldı, gözbebekleri çıkarıldı, kan toplandı, serum ayrıldı ve serumdaki E2, T, LH ve FSH içerikleri ölçüldü. ölçülen; fareler daha sonra servikal omurların yerinden çıkmasıyla öldürüldü ve fareler parçalara ayrıldı. , timüs, dalak ve rahim dokusunu çıkarın, ıslak ağırlıklarını tartın ve organ indeksini hesaplayın (organ indeksi=organ ıslak ağırlığı mg/fare ağırlığı g), ardından beyni çıkarın, yarısını kesin ve beyni hazırlayın doku homojenatı. Beyin dokusu homojenatındaki monoamin nörotransmiterleri 5-HT ve DA'nın içeriğini belirlemek için enzim immünolojik testi kullanıldı. Timus, dalak, rahim ve beyin dokuları %10 formaldehit solüsyonunda tespit edildi, parafine gömüldü, kesitler alındı ​​ve HE ile boyandı. Her grubun morfolojik değişiklikleri ışık mikroskobu altında gözlemlendi. 2.3 Kit belirleme yöntemi

Serum örnekleri alın: Pirojen ve endotoksin içermeyen test tüpleri kullanın. Operasyon sırasında herhangi bir hücre uyarımından kaçının. Kanı topladıktan sonra, serumu ve kırmızı kan hücrelerini hızlı ve dikkatli bir şekilde ayırmak için 3000 rpm'de 10 dakika santrifüj edin. Doku homojenat örnekleri elde edin: Dokuya uygun miktarda fizyolojik salin ekleyin ve ezin. 3000 rpm'de 10 dakika santrifüj edin ve süpernatantı alın.

Fare (Fare) estradiol (E2) ELISA kitinin belirleme yöntemi Deney 2 ile aynıdır. Standart ürünlerin (S0-55) konsantrasyonları şunlardır: 0, 4, 8, 16, 32 ve 64 pmol/L.

Fare Testosteron (T) ELISA kitinin belirleme yöntemi Estradiol (E2) ile aynıdır. Standart ürünlerin (S0-55) konsantrasyonları şöyledir: 0, 50, 100, 200, 400, 800pg/mL.

Fare folikül uyarıcı hormon (FSH) ELISA kitinin tespit yöntemi estradiol (E2) ile aynıdır. Standart ürünlerin (S0-55) konsantrasyonları şunlardır: 0, 5, 10, 20, 40 ve 8{{30} }mIU/mL. Fare (Fare) luteinize edici hormon (LH) ELISA kitinin belirleme yöntemi estradiol (E2) ile aynıdır. Standardın (S0-55) konsantrasyonları şöyledir: 0, 0,5, 1, 2, 4 ve 8mIU/mL. Fare 5-hidroksitriptamin (5-HT) ELISA kitinin belirleme yöntemi, estradiol (E2) ile aynıdır. Standart ürünlerin (S0-55) konsantrasyonları şöyledir: 0, 15, 30, 60, 120, 240ng/ml. Fare (Fare) dopamin (DA) ELISA tespit kitinin tespit yöntemi estradiol (E2) ile aynıdır. Standart ürünlerin (S0-55) konsantrasyonları şöyledir: 0, 7,5, 15, 30, 60 ve 120pg/ml.

Tablo 21 ve Şekil 25'ten, zorla yüzme ve kuyruk süspansiyonu deneylerinde boş grupla karşılaştırıldığında model gruptaki farelerin hareketsizlik süresinin önemli ölçüde arttığı görülmektedir (P<0.01), indicating that perimenopausal model mice with depression Increased levels of despair about adverse circumstances. Compared with the model group, the forced swimming immobility time and tail suspension immobility time of mice in each drug group were significantly reduced (P<0.01).

2 Perimenopozal depresyon modeli farelerde otonom aktiviteler üzerindeki etkiler

Her deney grubundaki farelerin otonom aktivite testinin sonuçları Tablo 22 ve Şekil 26'da gösterilmektedir.

Tablo 23 ve Şekil 27 ve 28'den boş grupla karşılaştırıldığında model gruptaki farelerin gecikme süresinin önemli ölçüde azaldığı ve elektrik şoku sayısının önemli ölçüde arttığı görülmektedir (P<0.01), reflecting the decline in memory of the perimenopausal depression model mice. . Compared with the model group, the number of electric shocks received by mice in each administration group was significantly reduced (P<0.01), and the latency of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Mengnianan group, and soybean isoflavones group was significantly reduced (P<0.01). extension (P<0.01). The latent period of mice in the medium and small doses of Cistanche phenylethanoid glycoside group was significantly prolonged (P<0.05).

4 Perimenopozal depresyon modeli farelerde organ indeksi üzerindeki etkiler

Tablo 24 ve Şekil 29'da boş grupla karşılaştırıldığında model grubunun timus indeksi, dalak indeksi ve uterus indeksinin önemli ölçüde azaldığı görülmektedir (P<0.01), indicating that the perimenopausal depression mouse model had thymus, spleen, and uterus index. Shrinkage of the organization. Compared with the model group, the thymus index, spleen index, and uterine index of mice in the high-dose Cistanche phenylethanol glycoside group, Gengnianan group, and soybean isoflavone group could be significantly increased (P<0.01). The medium-dose Cistanche feniletanol glikozitgrup Farelerin timus indeksi ve uterus indeksi önemli ölçüde artırılabilir (P<0.01), and the spleen index can be significantly increased (P<0.05).