Cistanche Glikozitlerin Ön Tedavisinin Renal İskemi-reperfüzyon Hasarı Üzerindeki Koruyucu Etkisinin Deneysel Çalışması

daha fazla bilgi için:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Cerrahi Departmanı, Baoshan Bölge Entegre Geleneksel Çin ve Batı Tıbbı Hastanesi, Şanghay 2019000)

【Soyut】Amaç Sıçanlarda hemorajik şokun resüsitasyon modelini oluşturmak ve koruyucu etkisini gözlemlemek.cistancherenal iskemi-reperfüzyon hasarında toplam glikozitler (CTG). Yöntemler SD sıçanlar rastgele 3 gruba ayrıldı: sahte operasyon grubu, deney grubu (şok resüsitasyon grubu), CTG tedavi grubu, her grupta 10 sıçan. Deney grubu ve CTG tedavi grubu, renal iskemi-reperfüzyon modelleri oluşturdu. Tedavi grubundaki ratlara intraperitoneal olarak 400 mg/kg CTG, deney grubu ve sham operasyon grubuna salin enjekte edildi. Böbrek fonksiyonunu belirlemek için her grubun kan miyokardiyal içeriği, üre nitrojen içeriği ve sistatin C saptandı, renal hücre apoptoz oranını saptamak için akış sitometrisi analizi kullanıldı; sıçanlarda X-kromozom bağlantısını saptamak için enzime bağlı immünoanaliz (ELISA) kullanıldı.böbrekapoptoz proteininin (XIAP) X'e bağlı inhibitörünün doku ekspresyonu. Sonuçlar CTG grubu ile deney grubu karşılaştırıldığında, kan Cr, BUN ve Sistatin C önemli ölçüde azaldı (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistanchesıçanlarda renal iskemi-reperfüzyon hasarı üzerinde XIAP ekspresyonunun teşviki ile ilgili olabilecek koruyucu bir etkiye sahiptir.

[Anahtar kelimeler] böbrek; iskemi-reperfüzyon hasarı; toplam cistanche glikozitleri; apoptoz proteininin kromozom bağlantılı inhibitörü; apoptoz; fare

[Çince Kütüphane Sınıflandırma Numarası] R692 [Belge İşaretleme Kodu] A [Makale Numarası] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Böbrek için Cistanche ÖZÜ TOZ için tıklayın

İskemi-reperfüzyon (I/R) hasarı hemorajik şok, şiddetli travma,böbrektransplantasyon veböbrektümör cerrahisi. Çalışmalar, apoptozun İ/R hasarının neden olduğu böbrek fonksiyon hasarının önemli bir parçası olduğunu göstermiştir (1). X'e bağlı apoptoz protein inhibitörü (XIAP), şimdiye kadar bulunan en güçlü endojen apoptoz inhibitörlerinden biridir (2). XIAP'nin I/R yaralanmasından sonra böbrek dokusunda anti-apoptotik etkisi üzerine az sayıda çalışma bulunmaktadır.cistanchetoplam glikozitler (CTG), bir feniletanoid toplam glikozit bileşiğidir.cistanche, çeşitli biyolojik fonksiyonlara sahiptir. İ/R yaralanmasından sonra böbrek korumasına ilişkin çok az çalışma vardır. . Bu çalışma, sıçanlarda bir hemorajik şok resüsitasyon modeli oluşturdu ve et fıtığı toplam glikozitlerinin vücut üzerindeki koruyucu etkisini araştırmak için bir sistemik İ/R hasarı modeli oluşturdu.böbrekI/R yaralanmasından kaçının ve olası mekanizmasını keşfedin.

1Malzemeler ve yöntemler

1.1 Hayvanlar ve gruplandırma

Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Deney Merkezi tarafından sağlanan, (320 ± 30) g ağırlığında 30 temiz ve sağlıklı erkek sıçan vardır. Rastgele 3 gruba ayrıldı: sahte operasyon grubu, deney grubu (şok resüsitasyon grubu), CTG grubu, her biri 10 ratlı.

1.2 Ana reaktifler ve aletler

Yapışkan pirincin toplam glikozitleri (parti numarası: 20081516), Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.'den satın alındı; sodyum pentobarbital, Hoechst 33258 ve propionil iyodür, Sigma, ABD'den satın alındı; fare X kromozomuna bağlı apoptoz inhibitörü Protein Test Kiti (XIAP) ve ELISA Kiti Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.'den satın alındı; mikroplaka okuyucu Thermo Company, ABD'den satın alındı; çok parametreli fizyolojik dedektör Nihon Kohden Company, Japonya'dan satın alındı; akış sitometresi BDFACSAria, Becton, ABD -Dickinson Company'den satın alındı; 24G trokar, Shandong Jierui Medical Devices Company'den satın alındı.

1.3 Deneysel yöntem

1.3.1 Hayvan modeli SD sıçanlarının hazırlanması deneyden 12 saat önce aç bırakıldı ve intraperitoneal sodyum pentobarbital enjeksiyonu (50 mg/kg) ile anestezi uygulandı.

Sıçan sırtüstü pozisyonda sabitlendi, sol alt karın bölgesinde 3 cm'lik bir kesi yapıldı, femoral arter ayrıldı, 24G'lik bir trokar yerleştirildi ve çok parametreli bir fizyolojik dedektör bağlandı. Sıçanın ortalama kan basıncı (113 ± 15) mmHg, 20 ml şırınga heparin olarak ölçüldü. Kan basıncı, kimyasal bağlantılı üç yollu bir cihaz ile 40 mmHg (1 mmHg=0.133 kPa) değerine düşürüldü. Şok başlamış kabul edildi ve kan basıncı 90 dakika korundu. Kan alma hacmi (13 ± 3) ml idi ve daha sonra şırıngadaki otolog kan Yavaş reinfüzyon yaklaşık 30 dakika sürer ve kan basıncı temel değerin yüzde 90'ından fazlasına döner ve resüsitasyon başarılı olarak kabul edilir (3) . Trokar dışarı çekildi, femoral arter bağlandı ve insizyon dikildi. Sıçanlar uyandıktan sonra gözlem için tekrar kafese alındı ​​ve yeme içme serbest bırakıldı. Resüsitasyondan 24 saat sonra anestezi için intraperitoneal sodyum pentobarbital (50 mg/kg) enjeksiyonu yapıldı, laparotomi yapıldı, vena kava inferiordan 5 ml kan alındı, sıçanlar hemen sakrifiye edildi ve sol ve sağ böbrekleri çıkarıldı. kullanmak.

1.3.2 İlaç Tedavi Yöntemleri CTG tedavi grubuna sıçanlara kan verilmeden 2 saat önce CTG verildi ve 400 mg/kg dozunda karın boşluğuna enjekte edildi. Deney grubuna, kan alma işleminden 2 saat önce 3 ml normal salin intraperitoneal olarak enjekte edildi; sahte operasyon grubuna sadece anestezi, laparotomi ve femoral arterin ayrılması, bir trokar yerleştirilmesi ve insizyonun sütürlenmesi uygulandı, ancak kanama veya resüsitasyon yapılmadı. Geri kalanlar deney grubuyla aynıydı.

1. 4 tespit göstergesi ve yöntemi

1.4.1 Kan BUN, Cr ve sistatin C içeriğinin belirlenmesi Sistatin C, glomerüler filtrasyon hızındaki değişikliklerin endojen bir belirtecidir. Böbrek fonksiyonu bozulduğunda, glomerüler filtrasyon hızı azalır, kandaki sistatin C konsantrasyonu 10 kat artabilir ve sistatin C'nin tanısal doğruluğu serum kas zehirlenmesinden önemli ölçüde daha iyidir. Kan BUN, Cr ve Cystatin C içerikleri tayin için hastanemiz laboratuvarına gönderildi.

1.4.2 Hücre apoptoz hızının belirlenmesi Böbrek hücrelerinin apoptoz hızını saptamak için akış sitometrisi kullanıldı. Böbreği alın ve bir bıçakla doğrayın, biraz PBS ekleyin ve bir test tüpüne aktarın. 37 P'lik bir su banyosunda sindirmek için yüzde 0,3 tripsin ekleyin, 20 dakika inkübe edin, test tüpündeki içerik bulanıklaştığında, sindirimi durdurmak için 2 kez PBS ekleyin, süzün. 300 ağ naylon ağ, yabancı maddeleri atın ve düşük sıcaklıktaki bir santrifüjde santrifüjleyin. Santrifüj yarıçapı 8 cm, 12,000 r/min, 5 dakika santrifüjleyin, süpernatantı atın, hücre konsantrasyonunu 1 ~ 1.5 x 106/ml'ye ayarlayın, yukarıdaki hücre süspansiyonundan 0.4 ml alın ve 1.2 ekleyin ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), koyu 37 t: bir su banyosunda inkübe edin, test tüpünü kapatın, 5 dakika sonra PBS ile durulayın, santrifüj yarıçapı 8 cm, 12 000 r/dak, 5 dakika santrifüjleyin , süpernatantı atın, Aynı şekilde tekrar durulayın. 5 dakika boyunca boyanmış 0.4 ml PI ekleyin ve böbrekteki normal, nekrotik ve apoptotik hücrelerin yüzdesini tespit edin. Çeşitli hücre tiplerine ait iki boyanın afinitesine göre, sadece PI renkli hücrelerin ölü hücreler olduğu, sadece Hoechst 33258 renkli hücrelerin apoptotik hücreler olduğu ve hiçbirinin de renkli normal canlı hücreler olmadığı bilinmektedir.

1.4.3 Sıçan böbrek dokularında XIAP ekspresyonunu saptamak için enzime bağlı immünolojik test (ELISA) Her böbrek grubunu alın ve taze böbrek dokularını doku lizatı ile tedavi edin. Düşük sıcaklıktaki bir santrifüjde 12 000 r/dk'da 5 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı alın ve XIAP ELISA Kit kitinin talimatlarına göre çalıştırın. Şanghay Jiaotong Üniversitesi Fenghe Technology Co., Ltd., testlerden sorumludur.

1.5 İstatistiksel işleme

Her grubun deneysel verileri Yuan toprak s ve SPSS 17 ile temsil edilir. İstatistiksel analiz için 0 yazılımı kullanılır. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche cinsel işlevi iyileştirebilir

2 sonuç

Böbrek fonksiyon indeksleri Cr, BUN ve Sistatin C değerleri istatistiksel olarak anlamlıydı (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Tablo 1 Her gruptaki sıçanların böbrek fonksiyon indeksleri Cr, BUN ve Cystatin-C değerleri Tab. 1 Üç grupta böbrek fonksiyon indeksleri

Sahte operasyon grubuyla karşılaştırıldığında, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

İskemi-reperfüzyon böbrek hasarının mekanizması çok karmaşıktır. Kalsiyum iyonu aşırı yüklenmesi, lipid peroksidasyon hasarı, hücre apoptozu ve nekrozu gibi çeşitli faktörlerin etkisi altında birçok şekilde meydana gelen patolojik bir süreçtir ve bunların arasında kaspaz bağımlı hücre apoptozisi renal tübüler epitel hücresinin ana formlarından biridir. I/R böbrek hasarının neden olduğu hasar (4). Apoptoz proteini (IAP) ailesinin inhibitörü, şimdiye kadar memeli hücrelerinde bulunan tek endojen kaspaz inhibitörüdür ve hücre apoptozunun oluşumunu etkili bir şekilde önleyebilir. XIAP, IAP ailesindeki kaspaz üzerinde en güçlü inhibitör etkiye sahip üyedir. Çeşitli patolojik uyaranların neden olduğu hücre apoptozunu inhibe edebilir ve hasarlı organlar üzerinde koruyucu etki yapabilir (5).

Şu anda, renal I/R hasarının hayvan modellerini oluşturmaya yönelik yöntemlerin çoğu, böbrek transplantasyonunun durumunu simüle etmek için bir böbreği çıkarmak ve renal pedikülün veya renal arterin diğer tarafını klemplemektir. Bu çalışmada, klinik travmatik şokta meydana gelen sistemik iskemi-reperfüzyonun patofizyolojik sürecine daha yakın olan bir hemorajik şok/canlandırma modeli kullanılmıştır. Bu deneyde, SD sıçanlarının kan BUN, Cr ve sistatin C seviyeleri Önemli gelişme, ciddi şekilde bozulmuş böbrek fonksiyonu, I/R böbrek hasarını incelemek için ideal bir hayvan modelidir.

CTG, geleneksel Çin tıbbı et kızı ezmesinin önemli bir tıbbi bileşenidir. Doğası gereği ılık, tatlı ve tuzlu olan patlıcan ezmesi, böbrek ve kalın bağırsak meridyenlerine geri döner ve orijinal olarak Shennong'un Materia Medica'sında bulunur. "Ben Sutra": Ana beş iş ve yedi yaralanma, ortayı besler, beş iç organı besler, yin'i güçlendirir, özü ve qi'yi besler;cistancheiki bin yıldır ülkemde kullanılmaktadır. Geçmişte güç arttırıcı formüllerde 1 numara, ginseng'den sonra besleyici formüllerde 2 numara. Çalışmalar göstermiştir kicistancheYapabilmekcinsel işlevi geliştirmek, nöroendokrin düzenlemek, vebağışıklık fonksiyonunu iyileştirmek. , antioksidanlar, malzeme metabolizmasını teşvik edin, iskemik miyokard ve diğer işlevleri koruyun. Et ailesi püresinin ana tıbbi bileşeni olan CTG'nin birçok işlevi vardır. Serebral iskemi-reperfüzyon modelleri üzerine yapılan araştırmalar, CTG'nin iskemi-reperfüzyon sonrası beyin dokusundaki uyarıcı amino asitleri azaltabildiğini ve SD sıçanların beyin dokusunu koruyabildiğini bulmuştur (7). CTG'nin birantioksidan etkifare dokuları üzerinde ve farelerde akut serebral hipoksi ve farelerde kalp kası hasarı üzerinde belirli bir koruyucu etkiye sahiptir (9). CTG, nörodavranışı önemli ölçüde iyileştirebilir.Parkinsonfareleri modellemekte ve substantia nigra'daki dopamin nöronlarının sayısındaki azalmayı engellemektedir (9). CTG, serbest radikal süpürücü enzimlerin aktivitesini artırarak, lipid peroksidasyonunu önleyerek, beyinde B-amiloid peptit birikimini inhibe ederek ve beyin hücresi apoptozunu inhibe ederek, öğrenmeyi önemli ölçüde iyileştirir.Alzheimer hastalığıB-amiloid peptidin neden olduğu fareler Hafıza yeteneği w. Bu çalışma, CTG ön tedavisinin uygulanmasından sonra, sıçanların kan BUN, Cr ve sistatin C içeriklerinin önemli ölçüde azaldığını ve böbrek hasarının azaldığını göstermiştir. CTG, I/R hasarlı böbrek dokusunda apoptozu inhibe eden protein XIAP'yi arttırdı ve hücre apoptozunu bloke etti. Ölümün meydana gelmesi, böbrek hasarı üzerinde koruyucu bir etkiye sahiptir.