Gomisin N, Melanositlerde PI3K/Akt ve MAPK/ERK Sinyal Yollarını Düzenleyerek Melanogenezi Engeller

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Soyut: Gomisin N, Schisandra Chinensis'te bulunan lignan bileşiklerinden birinin, çeşitli çalışmalarda anti-oksidatif, anti-tümörijenik ve anti-inflamatuar aktivitelere sahip olduğu gösterilmiştir. Burada ilk kez, memelilerde Gomisin N'nin anti-melanojenik etkinliğini rapor ediyoruz. Zebra balığı embriyolarında olduğu gibi hücrelerde de. Gomisin N, hücresel toksisite olmadan melanin içeriğini önemli ölçüde azalttı. Mantarın katalitik aktivitesini modüle etme yeteneğine sahip olmamasına rağmentirozinazlaboratuvar ortamında,Gomisin Nişlev gören anahtar proteinlerin ekspresyon seviyelerini aşağı regüle etti.melanogenez. Gomisin N aşağı regüle melanokortin 1 reseptörü (MC1R), adenilil siklaz 2, mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörü (MITF), tirozinaz,tirozinaz-ilgili protein-1(TRP-1) ve tirozinaz ile ilgili protein-2 (TRP-2). Ek olarak, Gomisin N ile tedavi edilen Melan-A hücreleri, artan p-Akt ve p-ERK seviyeleri sergiledi; bu, PI3K/Akt ve MAPK/ERK yollarının aktivasyonunun inhibe etme işlevi görebileceği anlamına gelir.melanogenez. Gomisin N'nin MITF ifadesini baskılayarak melanin üretimini azalttığını da doğruladık,tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2fare ve insan hücrelerinin yanı sıra zebra balığı embriyolarının geliştirilmesinde. Toplu olarak, şu sonuca varıyoruz:Gomisin Nmuhtemelen PI3K/Akt ve MAPK/ERK yollarını modüle ederek MITF ve melanojenik enzimlerin ekspresyonunu baskılayarak melanin sentezini inhibe eder.

Anahtar Kelimeler:Schisandra Chinensis;Gomisin N; lignan;melanogenez; cilt beyazlatmak

cistanche cilt beyazlatma işlevine sahiptir

1. Giriş

Melanin, deri, saç, gözler, iç kulak, kemikler, kalp ve beyin dahil olmak üzere çoğu hayvan organında bulunan bir pigmenttir [1,2].melanogenezçoklu sinyal yollarının dahil olduğu karmaşık bir süreçtir. Melanokortin 1 reseptörü (MC1R) önemli bir düzenleyicidir.melanogenezmelanosit uyarıcı hormon (MSH) ve adrenokortikotropik hormon (ACTH) gibi ligandları aracılığıyla sinyal verir [3]. Deri melanini epidermisteki melanositler tarafından biyosentezlenir ve daha sonra keratinositlere aktarılır, burada güneş ışığından gelen UV radyasyonunu emerek ve reaktif serbest radikalleri temizleyerek cildin korunmasında önemli rol oynarlar [4,5]. Deride ve saç foliküllerinde melanin sentezi ve transferi, öncüllerinin mevcudiyeti ile düzenlenir [6]. Melanojenik enzimlerin ana substratları olan L-tirozin ve L-dihidroksifenilalanin (L-DOPA), melanogenezde hormon benzeri düzenleyiciler olarak da işlev görür [7]. Öte yandan, melaninin aşırı üretimi, çil ve melazma gibi istenmeyen cilt sorunlarına neden olur [8,9]. Melanogenez, hücrelerin elastik özelliklerini modüle ederek normal ve malign melanositlerin davranışını etkileyebilir [10]. Kutanöz hücrelerde eksprese edilen serotonin ve melatonin reseptörleri hücresel homeostazın sağlanmasında anahtar rol oynamasına rağmen, kontrolsüz hormonal değişiklikler yoluyla aşırı melanin üretimi ciltte patolojik durumlara neden olabilir [11].

Bu nedenle, hiperpigmenter cilt bozukluklarının tedavisi için birincil adım olarak melanogenezi kontrol eden moleküler mekanizmaları aydınlatmak için yoğun çabalar olmuştur. Ayrıca, çeşitli türlerdecilt beyazlatmakMelanin sentezini inhibe eden ajanlar, bitki ve bitki dışı ekstraktlardan tanımlanmış ve ticari olarak kozmetiklerde kullanılmıştır [12,13]. En yaygın olarak kullanılan beyazlatma ajanları arasında hidrokinon, mequinol, arbutin, Kojik asit, askorbik asit ve retinoik asit bulunur [12,14]. Bununla birlikte, insanlarda hiperpigmentasyonun akut veya kronik semptomlarının tedavisinde kullanımlarının çeşitli sınırlamaları vardır. Örneğin, hidrokinon, 1960'lardan beri uzun süredir depigmentasyon için kullanılmasına rağmen, cilt tahrişine ve kontakt dermatite neden olabilir [15,16]. Ayrıca memeli hücrelerinde reaktif oksijen türlerinin üretimini ve eksojen okronoz gelişimini artırarak DNA hasarına yol açar [17,18]. Diğer tanınmıştirozinazKojik asit ve askorbik asit gibi inhibitörler sadece zayıf deri penetrasyonu, stabilitesi ve beyazlatma etkinliğine sahip olmakla kalmaz, aynı zamanda uzun süreli kullanımdan sitotoksisite, dermatit ve eriteme neden olabilir [19,20]. Bu bağlamda, insan derisi hiperpigmentasyonunu tedavi etmek için daha güvenli ve daha etkili beyazlatma maddelerinin geliştirilmesine yönelik artan bir ihtiyaç vardır. Geleneksel tıpta kullanılan doğal şifalı otlar, tedavideki temel adımları kontrol eden yeni beyazlatıcı ajanları tanımlamak için alternatif kaynaklar sağlayabilir.melanogenezdaha az veya hiç yan etkisi olmayan [21].

Kuzey ince aromalı dut olarak da bilinen Schisandra chinensis, doğal olarak kuzeydoğu Çin, uzak doğu Rusya, Japonya ve Kore'de bulunur [22]. Bu bitki uzun süredir geleneksel doğu tıbbında gece körlüğü, cilt yanığı, aseptik inflamasyon ve karaciğer hastalıklarının tedavisinde kullanılmaktadır [23,24]. S. chinensis meyve özü ve lignan bileşiklerinin murin hücre dizilerinde çeşitli farmakolojik etkilere sahip olduğu gösterilmiştir. Örneğin, Schisandra A ve C'nin anti-oksidatif etkileri varken, Schisandra B'nin anti-fibrotik, anti-inflamatuar, anti-oksidan ve anti-apoptotik aktiviteleri vardır [25]. Başka bir lignan bileşiğiGomisin N(Şekil 1A), H9c2 sıçan kardiyomiyositlerinde mitokondrilerden sitoplazmaya sitokrom C salınımını, kaspaz 3 ve PARP'ın bölünmesini ve Ca2 artı kaynaklı mitokondriyal geçirgenlik geçişini inhibe ederek oksidatif stres kaynaklı apoptozu baskıladığı bildirilmiştir [7,8]. İlginç bir şekilde, fare modellerini ve insan deri hücre dizilerini kullanan birkaç çalışma, S. chinensis'in deri bozukluklarını tedavi etmedeki terapötik potansiyelini ortaya çıkarmıştır. Lee ve ark. S. chinensis meyvesinin metanol özütünün, topikal olarak uygulandığında TNF- ve IFN- gibi proinflamatuar sitokinlerin üretimini azaltarak kontakt dermatit semptomlarını hafiflettiğini bildirmiştir [8,24]. Kang et al. Schisandra Fructus su ekstraktının IκB aktivasyonunu inhibe ettiğini, böylece insan mast hücre hattı HMC'de TNF-, IL-6 ve GM-CSF üretimini baskıladığını gösterdi-1 [26]. Bu bulgular bizi varsayımlara götürdü. S. chinensis lignans'ın cilt hücresi fonksiyonlarını daha geniş bir şekilde etkileyebileceğini söyledik.Gomisin N, düzenlemede S. Chinensis'teki başlıca lignan bileşiklerinden birimelanogenez, böylece akozmesötik ajan olarak potansiyel kullanımını değerlendirir. İşte bunu bildiriyoruzGomisin Ninsan ve fare hücrelerinin yanı sıra zebra balığı embriyolarında hücresel toksisite olmaksızın melanin biyosentezini inhibe eder.

2. Sonuçlar

2.1. Gomisin N'nin Melanin Oluşumu ve Hücre Canlılığı Üzerine Etkileri

Gomisin N'nin etkilerini doğrulamak içinmelanogenez, fare melanositlerini farklı konsantrasyonlarda tedavi ettik.Gomisin N72 saat boyunca ve ardından melanin içeriğindeki değişiklikleri değerlendirdi. Gomisin Ntreat, hem normal melanosit hücre dizisi Melan-A'da hem de B16F10melanom hücrelerinde melanin içeriğini, hücresel toksisite olmaksızın doza bağlı bir şekilde azalttı (Şekil 1B, C). Gomisin N'nin B16F10 hücrelerinde -MSH ile indüklenen melanin üretimini inhibe ettiğini gözlemledik, bu PTU tedavisi ile elde edilen sonuçlarla karşılaştırılabilir [27] (Şekil 1C). üzerine melanin azalmasının olup olmadığını değerlendirmek içinGomisin Ntedavi, tirozinaz aktivitesinin azalmasından kaynaklanıyorsa, normal insan epidermal melanosit (NHEM) hücrelerinde bir L-DOPA boyama deneyi gerçekleştirdik. Şekil 1E'de gösterildiği gibi, Gomisin N ile tedavi edilen NHEM hücreleri, tedavi edilmeyen hücrelere kıyasla düşük L-DOPA seviyeleri sergiledi. Ancak, Gomisin N'nin melanin üretimi üzerindeki inhibitör etkisi, insan melanom MNT-1 hücrelerinde önemli değildi (Şekil 1D) .

2.2. Gomisin N'nin Tirozinaz Aktivitesi Üzerindeki Etkileri

olup olmadığını incelemek içinGomisin Nengellemektirozinazin vitro aktivite, mantar tirozinaz ve B16 melanom hücre lizatları kullandık. İyi bilinen bir tirozinaz inhibitörü olan kojik asit, pozitif kontrol olarak kullanıldı. Mantar tirozinaz ile tedavi edildiğinde, Kojik asit enzimatik aktiviteyi önemli ölçüde azaltırken, Gomisin N, L-DOPA'nın dopakroma dönüşümünde herhangi bir değişikliği indüklemedi (Şekil 2A). Ancak, B16 melanom hücrelerine tedavi edildiğinde, Gomisin N bir düşüşe neden oldu. içindetirozinazhücre lizatının aktivitesi doza bağlı bir şekilde (Şekil 2B). Ayrıca, B16 hücrelerinde -MSH ile birlikte tedavi edildiğinde,Gomisin N-MSH tarafından uyarılan dopakrom oluşumundaki artışı tersine çevirmiştir (Şekil 3C). Özellikle Gomisin N, hücreseltirozinaz aktivitesi-MSH uyarısı üzerine B16 hücrelerinin sayısı. Bu bulgular, GomisinN'nin fare ve insan hücrelerinde gözlemlenen melanin üretimi üzerindeki inhibitör etkisinin (Şekil 1), işlevinden dolayı tirozinazın katalitik aktivitesini doğrudan inhibe etmediğini ima eder. Bununla birlikte, Gomisin N'nin tirozinazın veya önemli rol oynayan diğer proteinlerin ekspresyonunu düzenlemesi hala mümkündür.melanogenez.

2.3. Gomisin N'nin MC1R Sinyal Yolunun İnaktivasyonu Üzerindeki Etkileri

GomisinN'nin melanin üretimi üzerindeki inhibitör etkisinden sorumlu olan altta yatan mekanizmayı aydınlatmaya çalıştık. diye düşündükGomisin Ndahil olan sinyal proteinlerini düzenleyebilir.melanogenezve böylece melanin sentezini inhibe eder. Melanokortin 1 reseptörü (MC1R), melanin sentezinde anahtar düzenleyici olarak işlev gören amelanositik G protein-bağlı reseptördür. MC1R'nin ligandı -MSH veya adrenokortikotropik hormon (ACTH) tarafından aktivasyonu, adenilil siklazda bir artışa yol açar, bu da hücre içi cAMP seviyelerini yukarı regüle eder [2,3]. Sonuç olarak, MITF'nin transkripsiyonel seviyesi, Protein kinaz-C (PKA)/yanıt veren element bağlayıcı protein (CREB) yolu yoluyla arttırılır [2,28]. Gomisin N'nin MC1R sinyal yolu üzerindeki düzenleyici etkisini değerlendirmek için, Melan-A hücrelerini Gomisin N ile tedavi ettikten sonra MC1R'nin ve aşağı akış sinyal moleküllerinin ekspresyon seviyelerini kontrol ettik. Gomisin N'nin hem MC1R hem de adenilil siklaz 2'nin protein seviyelerini önemli ölçüde aşağı regüle ettiğini gözlemledik. doza bağlı bir şekilde (Şekil 3A–C).Beklendiği gibi,Gomisin N- tedavi edilen hücreler ayrıca azalmış MITF protein seviyeleri sergiledi ve onun bilinen hedefleri tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2 (Şekil 3A, D–G). Bu bulgular, Gomisin N'nin, MC1R sinyal yolu aracılığıyla MITF'yi inaktive ederek melanin üreten enzimleri inhibe ettiğini göstermektedir.

2.4. Gomisin N'nin Melan-A Hücrelerinde Akt ve ERK1/2'nin Fosforilasyonu Üzerine Etkileri

PI3K/Akt ve MAPK/ERK yolaklarının, MITF'yi transkripsiyonel veya post-transkripsiyonel olarak düzenleyen melanogenezde yer aldığı bilinmektedir [29,30]. GomisinN'nin bu sinyal yollarını etkileyip etkilemediğini değerlendirmek için, Western blot analizi ile Akt ve ERK1 / 2'nin fosforilasyon durumunu değerlendirdik. Şekil 3H–J'de gösterildiği gibi, yüksek doz tedavisi (30 µM)Gomisin Nhem Akt hem de ERK'nin fosforilasyonunu önemli ölçüde arttırdı. Bu veriler, Gomisin N'ninmelanogenezP13K/Akt ve MAPK/ERK yolları ile ilişkili olması muhtemeldir.

2.5. Gomisin N Zebra Balığı Embriyolarında Melanogenezi Engelledi

Daha sonra Gomisin N'nin inhibisyonda etkili olup olmadığını incelemeyi amaçladık.melanogenezcanlılarda. Bu amaçla, zebra balığı embriyolarına 1, 10, 20 ve 30 uM konsantrasyonlarda 72 saat boyunca Gomisin N ile muamele ettik ve ardından melanojenik proteinlerin ekspresyon seviyelerini ölçtük. Gomisin N tedavisinin gelişen zebra balığı embriyolarında melanin oluşumunu engellediğini gözlemledik.Gomisin N- tedavi edilen embriyolar, tedavi edilmeyen kontrol ile karşılaştırıldığında konsantrasyona bağlı bir şekilde melanin içeriğinde bir azalma gösterdi (Şekil 4). protein seviyelerinin de arttığını tespit ettik.tirozinaz, MITF, TRP-1 ve TRP-2 Gomisin N tedavisi ile azaldı (Şekil 5). Bu sonuçlar, Gomisin N'nin transkripsiyon faktörü MITF ve hedeflerini düzenleyerek in vivo olarak melanogenezi engellediğini göstermektedir.tirozinaz, TRP-1ve TRP-2.

2.6. Gomisin N, İnsan MNT'sinde Rapamisin kaynaklı Melanogenezi tersine çevirdi-1

Gomisin N önemli ölçüde inhibe etmesine rağmenmelanogenezMelan-A ve B16 hücrelerinin yanı sıra inzebra balığı embriyolarında, insan MNT-1 melanom hücreleri üzerindeki etkisini gözlemlemedik. Melanogenezin uygun bir uyaran tarafından düzenlendiği durumda, Gomisin N'nin etkisinin MNT-1 hücrelerinde saptanabilir olmasını bekliyorduk. Rapamisinin, tirozinaz aktivitesini ve MITF, tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2 [31] protein seviyelerini artırarak, kısmen otofajinin aktivasyonu yoluyla [32] melanogenezi indüklediği gösterilmiştir. seviyelerini takip ettik.tirozinazGomisin N andrapamisin ile birlikte tedaviden sonra Western blot analizi ile MNT-1 hücrelerinde , MITF,TRP-1 ve TRP-2. Rapamisin tedavisi MITF, TRP-1 ve TRP-2 düzeylerini önemli ölçüde indükledi, ancak üzerinde hiçbir etkisi olmadı.tirozinazdüzeyleri (Şekil 6). Ancak Gomisin N tedavisi, rapamisinin MITF, TRP-1 ve TRP-2 üzerindeki etkilerini konsantrasyona bağlı bir şekilde önemli ölçüde tersine çevirdi. ters etkisiGomisin Nrapamisine karşı 20 ve 30 µM konsantrasyonda 10 µM'den daha umut vericiydi. Bu sonuçlar Gomisin N'nin inhibe ettiğini göstermektedir.melanogenezinsan MNT-1 melanom hücrelerinde, transkripsiyon faktörü MITF'yi ve onun TRP-1 ve TRP-2 hedeflerini düzenleyerek.

3. Tartışma

Melaninin ana işlevi, cilt hücrelerini UV radyasyonuna karşı korumaktır [33–35]. Deride aşırı melanin üretiminin sonucu olan hiperpigmentasyon, istenmeyen kozmetik sorunlara neden olur ve dermatit ve cilt kanseri ile ilişkilidir. Birkaç rapor önerdimelanogenezmetastatik melanomun tedavisi için önemli bir hedef olarak [36,37]. Bu nedenle, hücresel toksisite olmaksızın melanogenezi düzenleyen anti-melanojenik ajanların geliştirilmesine yönelik artan bir ihtiyaç vardır [38]. Deri melanogenezinde yer alan birkaç yol vardır [39,40]. Ligand bağlanması üzerine, MC1R adenilil siklazın aktivitesini arttırır, bu da hücre içi cAMP seviyelerini arttırır [41,42]. PKA/CREB yolunun cAMP'ye bağlı aktivasyonunun, MITF'nin transkripsiyonel seviyelerini yukarı regüle ettiği ve böylece melanin sentezini arttırdığı yaygın olarak rapor edilmiştir [43]. MITF, omurgalılarda üç ana melanojenik enzim olan tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2'nin ana düzenleyicisi olarak işlev görür [3,21,44]. Bu enzimler, melanositlerin melanozomalmembranında bulunan transmembran proteinlerdir. Tirozinaz, hız sınırlayıcı basamağı düzenler.melanogenezL-tirozinazı L-DOPA'ya dönüştürerek [23]. TRP-1 ve TRP-2 de işlevleri tam olarak anlaşılmasa da melanin sentezinde önemli roller oynar.

Bu çalışmada, S. chinensis'in bir lignan bileşiği olan Gomisin N, hücresel toksisite olmaksızın depigmentasyon aktivitesi göstermiştir. Gomisin N, kültürlenmiş memeli hücre hatlarında ve ayrıca zebra balığı embriyolarında melanin sentezini inhibe etti. Gomisin N, Melan-A hücrelerinde melanin üretimini inhibe eden pozitif kontrol PTU'dan daha etkili görünüyordu (Şekil 1B). Gomisin N, konsantrasyona bağlı bir şekilde melanin içeriğini azalttı. Tedavi edilmeyen kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, 10 µMGomisin Nhücresel toksisite olmaksızın melanin içeriğini yaklaşık yüzde 40 oranında azalttı. 10-uM Gomisin N'nin anti-melanojenik aktivitesi, Melan-A hücrelerinde 100-uM PTU'nunki ile karşılaştırılabilirdi. Benzer şekilde, Gomisin N'nin 5- ve10-µM Gomisin N'nin etkilerinin 10- ve {{12 ile karşılaştırılabilir olduğu -MSH ile aktive olan B16F10 hücrelerinde PTU'dan daha güçlü olduğu görüldü. }}uM PTU, sırasıyla (Şekil 1C). Gomisin N ile tedavi edilen NHEM hücreleri, düşük L-DOPA seviyeleri sergiledi, bu da GomisinN'nin inhibe ettiğini gösterir.tirozinazkültürlü hücrelerde aktivite (Şekil 1E). Bu bulgular, Gomisin N'nin melanogenezi inhibe ettiği altta yatan mekanizmayı daha fazla araştırmamıza neden oldu.

olup olmadığını inceledikGomisin Nkatalitik aktivitesini doğrudan modüle eder.tirozinazin vitro. Kojik asitten farklı olarak Gomisin N, mantar tirozinaz aktivitesi üzerinde inhibitör etkiler göstermedi(Şekil 2A). Bununla birlikte, B16 melanom hücre lizatlarındaki hücresel tirozinaz aktivitesi, hem -MSH tedavisi ile hem de onsuz Gomisin N tarafından önemli ölçüde aşağı regüle edildi (Şekil 2B,C). -MSH uyarısı üzerine Gomisin N'nin hücresel tirozinaz aktivitesinin inhibisyonunun, pozitif kontrol Kojik asitten daha önemli olduğu bulundu (Şekil 2C).

Gomisin N'nin anti-melanojenik fonksiyonunun, tirozinaz ve tirozinaz ile ilişkili proteinlerin (TRP'ler) transkripsiyonel veya transkripsiyon sonrası düzenlenmesi yoluyla meydana gelebileceğini varsaydık. Bunu doğrulamak için, MC1R yolundaki sinyal moleküllerinin ekspresyon seviyelerini ölçtük. melanositlerde melanin üretiminin miktar ve kalitesi. Beklendiği gibi, Gomisin N'nin Melan-A hücrelerinde MC1R ve adenilil siklaz 2 düzeylerini azalttığını gözlemledik(Şekil 3A–C). Üstelik,Gomisin NMITF ve tirozinaz, TRP-1 ve TRP-2 dahil olmak üzere hedef proteinlerinin ekspresyonunu aşağı regüle etti (Şekil 3A,D–G). Bu sonuçlar, Gomisin N tedavisi üzerine azaltılmış melanin içeriği seviyelerinin, MC1R yolunun devre dışı bırakılmasından kaynaklandığını göstermektedir.

Öte yandan, PI3K/Akt ve MAPK/ERK yolakları MITF'yi fosforile edebilir ve böylece aktivitesini transkripsiyon sonrası modüle edebilir [45]. Bununla birlikte, PI3K/Akt ve MAPK/ERK yolaklarının aktivasyonunun genel etkisimelanogeneztartışmalıdır. Hem PI3K/Akt hem de MAPK/ERK yolakları, insan melanomlarında birikmiş mutasyonlar nedeniyle yapısal olarak aktive edilir [46]. Mel-Ab hücrelerinde C2-seramid aracılı depigmentasyonun, p-Akt düzeylerinde bir azalma yoluyla meydana geldiği bilinmektedir [47]. B16 melanom hücrelerinde p-ERK seviyelerini yükselterek melanogenezi aktive eden birkaç doğal bileşik vardır [28]. Buna karşılık, yüksek p-ERK ve p-Akt düzeylerinin melanin sentezini engellediğine dair kanıtlar da vardır [28,48]. Melanogenezin karmaşıklık düzenlemesi, fosforilasyonun MITF'in transkripsiyonel aktivitesini arttırdığı, ancak aynı zamanda MITF'nin her yerde bulunma-proteozoma bağlı bozunmasını indüklediği gerçeğiyle kısmen açıklanabilir [26,49-51]. Verilerimiz, Gomisin N ile tedavi edilen Melan-A hücrelerinde hem p-Akt hem de p-ERK seviyelerinin yukarı doğru düzenlendiğini gösterdi (Şekil 3H–J). Bu, PI3K/Akt ve MAPK/ERKyollarının melanin üretiminin inhibisyonuna katkıda bulunabileceği anlamına gelir.

Zebra balığı in vivo modelinde Gomisin N'nin anti-melanojenik aktivitesini ayrıca doğruladık. Gomisin N ile tedavi edilen zebra balığı embriyoları, melanin pigmentasyonunda önemli bir azalma gösterdi(Şekil 4). Ek olarak, Gomisin N seviyelerini belirgin şekilde azalttı.tirozinaz, zebra balığı embriyolarının geliştirilmesinde MITF, TRP-1 ve TRP-2. Bu bulgular topluca şunu gösteriyor:Gomisin Nin vivo MITF ve melanojenik enzimlerin ekspresyonunu aşağı doğru düzenleyerek depigmentasyonu indükler. Gomisin N'nin anti-melanojenik aktivitesi, rapamisin tarafından uyarılan insan melanom MNT-1 hücrelerinde de doğrulandı. Gomisin N, MNT-1 hücrelerinde (Şekil 1D) melanin içeriğinde yalnızca küçük değişikliklerle sonuçlanmasına rağmen, MITF, TRP-1 ve TRP-2'nın rapamisin kaynaklı yukarı regülasyonunu tersine çevirmede etkiliydi. konsantrasyona bağlı bir şekilde (Şekil 6A,C–E). Birlikte ele alındığında, düzenleyici etkisiGomisin NMITF ve melanojenik enzimler üzerinde, fare ve insan hücrelerinin yanı sıra zebra balığı embriyolarında da tekrarlanabilir şekilde bulundu.

Özetlemek gerekirse, bu çalışma Gomisin N'nin bir roman olarak yüksek bir potansiyele sahip olabileceğini düşündürmektedir.cilt beyazlatmakajan. Gomisin N engelliyor gibi görünüyormelanogenezkatalitik aktivitesini doğrudan modüle etmek yerine, MC1R yolu yoluyla MITF ekspresyonunu baskılayaraktirozinazve TRP'ler. Ayrıntılı mekanizmalar açıklanmaya devam etse de, Gomisin N kaynaklı depigmentasyonun PI3K/Akt ve MAPK/ERK yollarının aktivasyonu ile ilişkili olması muhtemeldir (Şekil 7).

4. Malzemeler ve Yöntemler

4.1. Malzemeler

RPMI1640, Gibco-BRL'den (Gaithersburg, MD, ABD) satın alındı. Dulbecco'nun modifiye edilmiş Kartal ortamı (DMEM), fetal sığır serumu (FBS) ve penisilin-streptomisin (PS) Hyclone'dan (Carlsbad, CA, ABD) satın alındı. Melanosit büyütme ortamı PromoCell'den (Heidelberg, Almanya) satın alındı. Fenilmetilsülfonil florür (PMSF), 12-O-tetradekanoilforbol-13-asetat(TPA), Kojik asit, 1-fenil-2-tiyoüre (PTU), mantar tirozinaz, 3,{{ 9}}dihidroksi-1-fenilalanin(L-DOPA), -MSH, dimetil sülfoksit (DMSO) ve paraformaldehit SigmaChemical Co.'dan (St. Louis, MO, ABD) satın alındı.Gomisin Nbileşik Chul Young Kim (Hanyang Üniversitesi, Ansan, Kore) tarafından sağlandı. Rapamisin, Sigma-Aldrich'ten (St. Louis, MO, ABD) satın alındı.

4.2. Hücre kültürü

Fare melanom hücre çizgisi B16F10, Korean Cell Line Bank'tan (Seul, Kore) sağlandı. Murin melanosit Melan-A hücreleri [52], Dr. Byeong Gon Lee'den (SkinResearch Institute, Amore Pacific Co., Yongin) cömert bir hediyeydi. -si, Kore). İnsan MNT-1 melanom hücreleri, Aeyeong Lee (Dongguk Üniversitesi Tıp Fakültesi, Goyang-si, Kore) tarafından cömertçe sağlandı. Birincil normal insan epidermal melanositleri (NHEM), PromoCell'den (Heidelberg, Almanya) satın alındı. Melan-A hücreleri, yüzde 10 FBS, yüzde 1 PS ve 200 nM TPA ile desteklenen RPMI 1640 ortamında (Gibco, Carlsbad, CA, ABD) büyütüldü. Yüzde 10 FBS ve yüzde 1 PS ile desteklenmiş DMEM, Melan-A hücrelerini ve NHEM hücrelerini korumak için kullanıldı. Tüm hücreler yüzde 5 CO2 inkübatöründe 37 ◦C'de inkübe edildi.

4.3. Melanin İçeriğinin Ölçülmesi

Melan-A hücreleri, bir 24-kuyu plakasına (1 x 105 hücre/oyuk) ekildi,Gomisin N, ve ardından 72 saat süreyle inkübe edildi. 72 saat sonra, melanin içeriği daha önce tarif edildiği gibi ölçüldü [53]. Kısaca, kültür ortamının çıkarılmasından sonra hücreler üç kez PBS ile yıkandı. Daha sonra, melanini çözmek için her bir oyuğa sodyum hidroksit solüsyonu (1 mL, 1 N) ilave edildi. 405 nm'deki absorbans, bir mikroplaka okuyucu kullanılarak ölçüldü. Bu tahlil, aynı yöntem izlenerek B16F10 hücreleri (2 x 104 hücre/kuyu) ve MNT-1 hücreleri ile tekrarlandı.

4.4. Western Blot Analizi

Melan-A hücreleri 100 mm tabaklara (1 x 106 hücre/tabak) ekildi ve 1, 5 veya 10 uM ile işlendiGomisin N37 ◦C'de üç gün süreyle. Hücreler PBS ile yıkandı ve daha sonra bir kazıyıcı kullanılarak toplandı. Ayrılan hücreler 1 ml PBS içine konuldu ve 7500 rpm'de 5 dakika santrifüjlendi. Üst çözeltinin çıkarılmasından sonra, hücre topakları lizis tamponu (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, yüzde 0.1 SDS, 150 mM NaCl, yüzde 1 NP-40, Yüzde 0,02 sodyum azit, yüzde 0,5 sodyum deoksikolat, 100 µg/mL PMSF, 1 g/mL aprotinin) 24 saat 4 ◦C'de. Toplam proteinler, 4◦C'de 30 dakika boyunca 12,000 rpm'de bir ultrasantrifüj kullanılarak özümlendi. Protein içeriği Bradford tahlili kullanılarak ölçüldü. Proteinler (30 ug), yüzde 10 sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforez (SDS-PAGE) jeli kullanılarak ayrıldı ve anitroselüloz membrana aktarıldı. Membran, Tween-20 (TBST) içeren Tris-tamponlu tuzlu su içinde yüzde 5 yağsız süt ile 1 saat bloke edildi ve daha sonra -tubulini hedefleyen primer antikorlarla (Santa Cruz, CA, ABD) 12 saat boyunca 4 °C'de inkübe edildi. ), MITF (Hücre Sinyali, Danvers, MA, ABD), tirozinaz (Hücre Sinyali), ERK(Hücre Sinyali), fosfo-ERK (Hücre Sinyali), AKT (Hücre Sinyali), fosfo-AKT (Hücre Sinyali),MC1R ( Santa Cruz), adenilil siklaz 2 (Santa Cruz), TRP-1 (Santa Cruz) ve TRP-2 (Santa Cruz). Primer antikorlar çıkarıldıktan sonra membranlar üç kez TBST ile yıkandı ve sekonder ile inkübe edildi. 1 saat süreyle antikorlar (tavşan anti-keçi IgG-HRP; fare anti-tavşan HRP, Santa Cruz). Zarlar, ChemiDoc XRS plus görüntüleme sistemi (Bio-Rad, Hercules, CA, ABD) kullanılarak geliştirilmiş kemilüminesans reaktifi ile işlendi. Bantların dansitometrik analizi, Image MasterTM 2D Elite yazılımı (versiyon 3.1, GE Healthcare, Chicago, IL, ABD) kullanılarak yapıldı.

4.5. Tirozinaz Aktivite Deneyi

Gomisin N'nin mantar üzerindeki inhibitör etkisini tahmin etmektirozinazaktivite, tirozinaz 1, 5 veya 10 uM ile inkübe edildiGomisin Nveya pozitif kontrol Kojik asit. Her numune metanol içinde çözüldü. L-DOPA (8.3 mM) ve mantar tirozinaz (125 U), 80 mM fosfat tamponu (pH 6.8) içinde seyreltildi. Her numuneden 40 uL ve 120 uL L-DOPA bir 96-kuyucuklu plakada karıştırıldı, ardından 40 uL seyreltilmiş mantar tirozinaz ilave edildi. Plakalar daha sonra 15 dakika inkübe edildi ve absorbans, bir mikroplaka okuyucu kullanılarak 490 nm'de ölçüldü.

tirozinazB16 melanom hücre lizatlarındaki aktivite, daha önce Ohguchi ve diğerleri tarafından tarif edildiği gibi -MSH tedavisi ile veya onsuz ölçüldü. [54], küçük değişikliklerle. Hücre lizatı, Western Blot analizi bölümünde yukarıda tarif edildiği gibi hazırlandı. Süpernatandaki toplam proteinler, standart olarak Bovine Serum Albumin kullanılarak Bradford tahlili ile ölçülmüştür [55]. Eşit miktarda protein seyreltildi ve tirozinaz aktivite analizi için kullanıldı.

tirozinaz aktivitesini inhibe

4.6. NHEM Hücrelerinde L-DOPA Boyaması

NHEM hücreleri bir {{0}}kuyu plakasına ekildi ve 72 saat boyunca Gomisin N ile inkübe edildi. Hücreler 40 dakika boyunca yüzde 4 paraformaldehit ile sabitlendi, ardından yüzde 0.1 Triton X{ ile işleme tabi tutuldu. {6}} 2 dakika L-DOPA (yüzde 0.1) her kuyuya eklendi, ardından 2 saat inkübasyon yapıldı. Çözeltiyi çıkardıktan sonra hücreler iki kez PBS ile yıkandı. Görüntüler mikroskopla fotoğraflandı.

4.7. Zebra Balığı Deneyleri

Zebra balığı embriyoları, Zebra Balığı Kaynak Bankasından (Daegu, Kore) elde edildi. Embriyolar 72 saat Gomisin N ile tedavi edildi. Depigmentasyon etkisiGomisin Nzebra balığı embriyoları üzerinde stereomikroskop altında gözlendi. Western blot analizi için, Gomisin N ile tedavi edilen embriyolar, yukarıda bahsedildiği gibi toplam proteinlerin hazırlandığı lizis tamponu kullanılarak parçalandı.

5. Sonuçlar

Elde ettiğimiz sonuç, Gomisin N'nin fonksiyonel gıda olarak kullanım potansiyelinin yüksek olduğu görüşünü desteklemektedir vecilt beyazlatmakajan.Gomisin NS. Chinensis'teki başlıca lignan bileşiklerinden biridir. Aslında. Chinensis, birçok insan hastalığının tedavisi için kullanılan bitkisel bir ilaçtır. Ancak Gomisin N'nin cilt üzerindeki güvenliğini kanıtlamak için daha ileri epidemiyolojik çalışmalara ihtiyaç vardır. Sonuç olarak, in vivo çalışmalar ve klinik denemeler, GomisinN'nin etkinliğini daha net bir şekilde gösterebilecektir. Sonuç olarak, bu çalışma şunu göstermektedir:Gomisin Npotansiyel bir hipo-pigmenter ajan olabilir ve doğalcilt beyazlatmakkozmetik sektörü adayı.

cistanche beyazlatmayı iyileştirir

Referanslar

1. Alaluf, S.; Atkins, D.; Barrett, K.; Blount, M.; Carter, N.; Heath, A. Epidermal melaninin insan ten renginin nesnel ölçümleri üzerindeki etkisi. Pigment Hücresi Araş. 2002, 15, 119-126. [CrossRef] [PubMed]

2. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, M.Ö.; Askarian-Amiri, Melanogenezde ME Sinyal Yolları. Int. J.Mol. bilim 2016, 17, 1144. [CrossRef] [PubMed]

3. Slominski, A.; Tobin, DJ; Şibahara, S.; Wortsman, memeli derisinde J. Melanin pigmentasyonu ve hormonal düzenlenmesi. Fizol. Rev. 2004, 84, 1155–1228. [CrossRef] [PubMed]

4. Herrling, T.; Jung, K.; Fuchs, J. Melaninin ciltte serbest radikallere karşı koruyucu rolü ve saçta serbest radikal göstergesi olarak rolü. Spectrochim Açta A Mol. biyomol. spektrosk. 2008, 69, 1429–1435. [CrossRef] [PubMed]

5. Brozyna, AA; Jozwicki, W.; Roszkowski, K.; Filipiak, J.; Slominski, AT Melanom metastazlarındaki melanin içeriği radyoterapinin sonucunu etkiler. Oncotarget 2016, 7, 17844-17853. [CrossRef] [PubMed]

6. Slominski, A.; Wortsman, J.; Plonka, PM; Schallreuter, KU; Duraklat, R.; Tobin, DJ Saç folikülü pigmentasyonu.J. Araştırın. Dermatol. 2005, 124, 13–21. [CrossRef] [PubMed]

7. Slominski, A.; Zmijewski, MA; Melanosit fonksiyonlarının hormon benzeri düzenleyicileri olarak Pawelek, J. L-tirozin ve L-dihidroksifenilalanin. Pigment Hücre Melanom Arş. 2012, 25, 14–27. [CrossRef] [PubMed]

8. Lee, AY Melazma patogenezinde son gelişmeler. Pigment Hücre Melanom Arş. 2015, 28, 648-660. [CrossRef][PubMed]9. Speeckaert, R.; van Gele, M.; Speeckaert, MM; Lambert, J.; van Geel, N. Hiperpigmentasyon sendromlarının biyolojisi. Pigment Hücre Melanom Arş. 2014, 27, 512–524. [CrossRef] [PubMed]

10. Slominski, RM; Zmijewski, MA; Slominski, AT Melanomda melanin pigmentinin rolü. Tecrübe. Dermatol.2015, 24, 258–259. [CrossRef] [PubMed]11. Slominski, A.; Wortsman, J.; Tobin, DJ Kutanöz serotonerjik/melatoninerjik sistem: Güneş altında güvenli bir yer. FASEB J. 2005, 19, 176–194. [CrossRef] [PubMed]

12. Sarkar, R.; Arora, P.; Garg, KV Hiperpigmentasyon için Kozmesötikler: Neler Mevcut? J. Kutanöz Estetik. cerrah. 2013, 6, 4–11. [CrossRef] [PubMed]

13. Miyamura, Y.; Coelho, SG; Wolber, R.; Miller, SA; Wakamatsu, K.; Zmudzka, BZ; İto, S.; Smuda, C.; Passeron, T.; Choi, W.; et al. İnsan derisi pigmentasyonunun düzenlenmesi ve ultraviyole radyasyona tepkiler.Pigment Cell Res. 2007, 20, 2-13. [CrossRef] [PubMed]

14. Davis, EC; Callender, VD Postinflamatuar hiperpigmentasyon: Renkli ciltte epidemiyoloji, klinik özellikler ve tedavi seçeneklerinin gözden geçirilmesi. J. Clin. Estet. Dermatol. 2010, 3, 20–31. [PubMed]

15. Satış-Campos, H.; Souza, Halkla İlişkiler; Peghini, M.Ö.; da Silva, JS; Cardoso, CR Oleik asidin sağlık ve hastalık üzerindeki modülatör etkilerine genel bir bakış. Mini. Rev. Med. Kimya 2013, 13, 201-210. [CrossRef] [PubMed]

16. Pervez, S.; Kang, M.; Chung, HS; Cho, C.; Hong, MC; Shin, MK; Bae, H. Ciltte pigmentasyon ve renk açıcı ajanların araştırması ve mekanizması. Fitoster. Araş. 2006, 20, 921-934. [CrossRef] [PubMed]

17. Luo, L.; Jiang, L.; Geng, C.; Cao, J.; HepG2 hücrelerinde Zhong, L. Hidrokinon kaynaklı genotoksisite ve oksidatif DNA hasarı. Kimya Biol. Etkileşime girmek. 2008, 173, 1-8. [CrossRef] [PubMed]

18. Enguita, FJ; Leitao, AL Hydroquinone: Çevre kirliliği, toksisite ve mikrobiyal cevaplar.BioMed Res. Int. 2013, 2013, 542168. [CrossRef] [PubMed]

19. Draelos, ZD Cilt aydınlatma müstahzarları ve hidrokinon tartışması. Dermatol. orada. 2007, 20.308–313. [CrossRef] [PubMed]

20. Koo, JH; Lee, İ.; Yun, SK; Kim, HÜ; Park, BH; Park, JW Sabunlaştırılmış çuha çiçeği yağı, B16 melanom hücrelerinde melanogenezi azaltır ve insanlarda UV kaynaklı cilt pigmentasyonunu azaltır. Lipitler 2010,45, 401-407. [CrossRef] [PubMed]

21. Cordell, GA; Colvard, MD Doğal ürünler ve geleneksel tıp: Bir paradigmayı açmak. J. Nat. Prod.2012, 75, 514–525. [CrossRef] [PubMed]

22. Panosyan, A.; Wikman, G. Schisandra Chinensis Kefaletinin Farmakolojisi: Rus araştırmalarına ve tıpta kullanımlarına genel bir bakış. J. Etnofarmakol. 2008, 118, 183–212. [CrossRef] [PubMed]

23. Chen, P.; Pang, S.; Yang, N.; Meng, H.; Liu, J.; Zhou, N.; Zhang, M.; Xu, Z.; Gao, W.; Chen, B.; et al. Miyokard enfarktüsünün fare modelinde Schisandrin B'nin kardiyak fonksiyon üzerindeki faydalı etkileri. PLoS BİR 2013, 8,e79418. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, HJ; Jo, S.; Ryu, J.; Jeong, HS; Lee, G.; Ryu, MH; Jung, MH; Kim, H.; Kim, BJ SchisandraChinensis Turcz'un Etkileri. farelerde dinitroflorobenzen tarafından indüklenen kontakt dermatit üzerine meyve. Mol. Med. Rapor 2015,12, 2135-2139. [CrossRef] [PubMed]

25. Chun, JN; Ço, M.; Yani ben.; Jeon, JH Schisandra Chinensis meyve özü ve lignanlarının kardiyovasküler hastalıklara karşı koruyucu etkileri: Moleküler mekanizmaların gözden geçirilmesi. Fitoterapia 2014, 97, 224–233.[CrossRef] [PubMed]

26. Kang, OH; Chae, HS; Choi, JH; Choi, HJ; Park, PS; Cho, SH; Lee, GH; Yani, HY; Choo, YK;Kweon, OH; et al. Schisandra Fructus su ekstraktının bir humanmast hücre hattından sitokin salınımı üzerindeki etkileri. J. Med. Gıda 2006, 9, 480–486. [CrossRef] [PubMed]

27. Poma, A.; Bianchini, S.; Miranda, M. İnsan melanom hücrelerinde feniltiyoüre ile L-tirozin kaynaklı mikronükleus üretiminin inhibisyonu. Mutat. Araş. 1999, 446, 143–148. [Çapraz Referans]

28. Kim, HJ; Kim, İŞ; Dong, Y.; Lee, IS; Kim, JS; Kim, JS; Woo, JT; Cha, BY Mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörü ve tirozinaz ekspresyonundaki artışlar yoluyla sirsimaritin'in melanogenezi indükleyici etkisi. Int. J. Mol. bilim 2015, 16, 8772-8788. [CrossRef] [PubMed]

29. Busca, R.; Abbe, P.; Mantoux, F.; Aberdam, E.; Peyssonnaux, C.; Eychene, A.; Ortonne, JP; Ballotti, R. Ras, melanositlerde hücre dışı sinyalle düzenlenen kinazların (ERK'ler) cAMP'ye bağlı aktivasyonuna aracılık eder.EMBO J. 2000, 19, 2900–2910. [CrossRef] [PubMed]

30. Busca, R.; Ballotti, R. Cyclic AMP, cilt pigmentasyonunun düzenlenmesinde önemli bir haberci. Pigment Hücre Res.2000, 13, 60–69. [CrossRef] [PubMed]

31. Hah, YS; Cho, HY; Lim, TY; Park, DH; Kim, HM; Yoon, J.; Kim, JG; Kim, CY; Yoon, TJ insan MNT-1 melanom hücrelerinde rapamisin ile melanogenezin uyarılması. Anne. Dermatol. 2012, 24, 151–157. [CrossRef][PubMed]

32. Yun, WJ; Kim, EY; Park, JE; Jo, SY; Bang, SH; Chang, EJ; Chang, SE Mikrotübül ile ilişkili protein hafif zincir 3, melanositlerde MITF ekspresyonunun düzenlenmesi yoluyla melanogenezde yer alır. bilim Report.2016, 6, 19914. [CrossRef] [PubMed]

33. Spritz, RA; İşitme, VJ, Jr. Genetik pigmentasyon bozuklukları. Reklam Hımm. Genet. 1994, 22, 1-45. [PubMed]

34. Kadekaro, AL; Chen, J.; Yang, J.; Chen, S.; Jameson, J.; Kaydırmak, VB; Cheng, T.; Kadakia, M.; Abdel-Malek, Z. -melanosit uyarıcı hormon, insan melanositlerindeki ap53-aracılı sinyal yolu aracılığıyla oksidatif stresi bastırır. Mol. Kanser Araş. 2012, 10, 778–786. [CrossRef] [PubMed]

35. Wasmeier, C.; Hume, AN; Bolasco, G.; Seabra, Bir bakışta MC Melanozomlar. J. Hücre Bilimi. 2008, 121,3995–3999. [CrossRef] [PubMed]

36. Brozyna, AA; Jozwicki, W.; Carlson, JA; Slominski, AT Melanogenesis, evre III ve IV melanomlu hastalarda genel ve hastalıksız sağkalımı etkiler. Hımm. Patol. 2013, 44, 2071–2074. [CrossRef] [PubMed]

37. Slominski, A.; Kim, TK; Brozyna, AA; Janjetovic, Z.; Brooks, DL; Schwab, LP; Skobowiat, C.; Jozwicki, W.;Seagroves, TN Melanogenezin melanom davranışının düzenlenmesindeki rolü: Melanogenez, HIF-1 ifadesinin ve HIF'ye bağlı görevli yolların uyarılmasına yol açar. Kemer Biyokimya. Biyofiz. 2014, 563,79-93. [CrossRef] [PubMed]

38. Kim, HJ; Lee, JH; Shin, MK; Hyun Leem, K.; Kim, YJ; Lee, MH HM3KO melanom hücrelerinde Gastrodia elata özütünün melanogenez üzerindeki inhibitör etkisi. J. Kozmet. bilim 2013, 64, 89-98. [PubMed]

39. Hemesath, TJ; Fiyat, Acil Durum; Takemoto, C.; Badalyan, T.; Fisher, DE MAP kinazı, transkripsiyon faktörü Mikroftalmi'yi melanositlerdeki c-Kit sinyalleşmesine bağlar. Doğa 1998, 391, 298–301. [PubMed]

40. Fiyat, Acil Durum; Ding, HF; Badalyan, T.; Bhattacharya, S.; Takemoto, C.; Yao, TP; Hemesath, TJ; Fisher, DELineage-spesifik melanositlerde sinyalleşme. C-kit stimülasyonu, p300/CBP'yi mikroftalmiye yönlendirir. Biol. Kimya 1998, 273, 17983-17986. [CrossRef] [PubMed]

41. Bertolotto, C.; Abbe, P.; Hemesath, TJ; Bile, K.; Fischer, DE; Ortonne, JP; Ballotti, R. Microphthalmiagene ürünü, melanositlerin cAMP kaynaklı farklılaşmasında bir sinyal dönüştürücü olarak. J. Hücre Biol. 1998, 142.827-835. [CrossRef] [PubMed]

42. Pogenberg, V.; Ogmundsdottir, MH; Bergsteinsdottir, K.; Schepsky, A.; Phung, B.; Deineko, V.; Milewski, M.; Steingrimsson, E.; Wilmanns, M. Sınırlı lösin fermuar dimerizasyonu ve melanosit ana düzenleyici MITF'nin DNA tanıma özgüllüğü. Genler Dev. 2012, 26, 2647-2658. [CrossRef] [PubMed]

43. Flaherty, KT; Hodi, FS; Fisher, DE Genlerden ilaçlara: Melanom için hedeflenen stratejiler. Nat. Rev. Cancer2012, 12, 349–361. [CrossRef] [PubMed]

44. Lee, TH; Seo, JO; Baek, SH; Kim, SY Gine domuzu derisinde ultraviyoleB kaynaklı pigmentasyonda resveratrolün melanin sentezi üzerindeki inhibitör etkileri. biyomol. orada. 2014, 22, 35-40. [CrossRef] [PubMed]

45. Su, TR; Lin, JJ; Tsai, CC; Huang, TK; Yang, ZY; Wu, MO; Zheng, YQ; Su, CC; Wu, YJ Gallik asit tarafından melanogenezin inhibisyonu: B16F10 hücrelerinde PI3K/Akt, MEK/ERK ve Wnt/-katenin sinyal yollarının olası katılımı. Int. J. Mol. bilim 2013, 14, 20443-20458. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Yajima, İ.; Kumasaka, MY; Thang, ND; Git, Y.; Takeda, K.; Yamashita, Ö.; İda, M.; Ohgami, N.;Tamura, H.; Kawamoto, Y.; et al. MalignMelanom Progresyonu ve Tedavisinde RAS/RAF/MEK/ERK ve PI3K/PTEN/AKT Sinyali. Dermatol. Araş. Pratik yapın. 2012, 2012, 354191. [CrossRef] [PubMed]

47. Kim, DS; Kim, SY; Ay, SJ; Chung, JH; Kim, KH; Cho, KH; Park, KC Ceramide, AKT/PKB inaktivasyonu yoluyla hücre proliferasyonunu inhibe eder ve Mel-Ab hücrelerinde melanin sentezini azaltır. Pigment Cell Res. 2001, 14, 110-115. [CrossRef] [PubMed]

48. Kim, JH; Baek, SH; Kim, DH; Choi, TY; Yoon, TJ; Hwang, JS; Kim, MR; Kwon, HJ; Lee, CHD, A'ya sahip olarak melanin sentezinin düzenlenmesi ve bunun in vivo yıldırım modeline uygulanması. J.Araştırma. Dermatol. 2008, 128, 1227–1235. [CrossRef] [PubMed]

49. Hartman, ML; Czyz, M. MITF melanomda: İfadesi ve aktivitesinin arkasındaki mekanizmalar. Hücre Mol.Life Sci. 2015, 72, 1249-1260. [CrossRef] [PubMed]

50. Kim, DS; Hwang, ES; Lee, JE; Kim, SY; Kwon, SB; Park, KC Sfingosin-1-fosfat, sürekli ERK aktivasyonu ve ardından MITF bozulması yoluyla melanin sentezini azaltır. J. Hücre Bilimi. 2003, 116,1699-1706. [CrossRef] [PubMed]

51. Xu, W.; Gong, L.; Haddad, MM; Bischof, Ö.; Campisi, J.; evet, ET; Medrano, EE Mikroftalmi ile ilişkili transkripsiyon faktörü MITF protein seviyelerinin ubikuitin-konjuge edici enzim hUBC9 ile ilişkilendirme yoluyla düzenlenmesi. Tecrübe. Hücre Araş. 2000, 255, 135-143. [CrossRef] [PubMed]

52. Bennett, DC; Cooper, PJ; Hart, IR B16 melanomu ile eş genli olan ve büyüme için bir tümör promotörü gerektiren, tümörijenik olmayan fare melanositleri dizisi. Int. J. Cancer 1987, 39, 414-418. [CrossRef][PubMed]

53. Meira, WV; Heinrich, TA; Cadena, SM; Martinez, GR Melanogenesis, B16-F10melanom hücrelerinde solunumu engellerken mitokondriyal hücre içeriğini arttırır. Tecrübe. Hücre Araş. 2017, 350, 62-72. [CrossRef][PubMed]

54. Ohguchi, K.; Tanaka, T.; İlya, İ.; İto, T.; Iinuma, M.; Matsumoto, K.; Akao, Y.; Nozawa, Y. Gnetol, Gnetum cinsinden bir potenttirozinaz inhibitörü olarak. Biosci. Biyoteknoloji. Biyokimya. 2003, 67, 663-665. [CrossRef] [PubMed]

55. Uçida, R.; Ishikawa, S.; Tomoda, H. tirozinaz aktivitesinin inhibisyonu ve melanin pigmentasyonu 2-hidroksitirosol tarafından. Acta Ecz. Çini B 2014, 4, 141–145. [CrossRef] [PubMed]