Vitex Leucoxylon'un Sulu Yaprak Ekstraktından Sentezlenen Demir Nanopartiküllerinin Yeşil Sentezi ve Karakterizasyonu Ve Biyomedikal Uygulamaları

Soyut:Sulu ekstrakt elde etmek için soğuk ekstraksiyon yöntemi kullanıldı.Vitex lökoksilon1:10 oranında bırakır. Demir nanopartiküller (FeNP'ler), sulu yaprak özü kullanılarak sentezlendi.V. lökoksilonbir indirgeyici ajan olarak. Bitki tıbbı yaklaşımı, 1 mL bitki ekstraktını 1 mM ferrik sülfatla karıştırarak FeNP'leri yapmak için kullanıldı. Sentezlenen FeNP'leri incelemek için taramalı elektron mikroskobu (SEM), Fourier dönüşümü kızılötesi spektroskopisi (FTIR), Ultraviyole görünür spektroskopisi (UV-Vis) ve enerji dağıtıcı X-ışını spektroskopisi kullanıldı. İndirgeme reaksiyonu, çözeltinin rengindeki bir değişiklikle gösterildi ve siyah rengin oluşumu, FeNP'lerin oluştuğunu doğruladı. En büyük absorpsiyon zirvesi (maks), UV-Vis spektral analizinde 395 nm'de bulundu. FTIR spektrumlarıV. lökoksilonsulu yaprak özü, bazı zirvelerde, yani 923.96 cm-1'de kaymalar gösterdi.−1 ve 1709,89 cm−1, FeNP'lerin FTIR spektrumlarında eksik olan ve FeNP'lerin oluşumundan sorumlu olan fonksiyonel gruplar karboksilik asitler, doymamış aldehitler ve ketonlar ile. SEM görüntülerinde çapları 45 ile 100 nm arasında olan FeNP'ler gözlendi. FeNP'lerin oluşumu, metalik demir bölgesinde 6-8 Kev'de güçlü bir sinyal gösteren EDX tarafından doğrulandı. XRD, kristal bir doğa ve 136.43 nm'lik bir ortalama çap ortaya çıkardı.antioksidan,antienflamatuvar, sitotoksik veyara iyileşmesiin vitro testler, FeNP'lerin önemli aktivitesini bildirdi. Bu çalışmanın kümülatif bulguları, FeNP'lerin yeşil sentezininbiyolojik aktivitesini artırırve olarak hizmet edebilirolası bir dermal yara iyileştirici ajanVekansere karşı sitotoksik ajan. FeNP'lerin sentezinde yer alan mekanizmaların tanımlanması konusunda gelecekteki çalışmalara ihtiyaç vardır.V. lökoksilonve biyomedikal uygulamaları.

anahtar kelimeler:Vitex lökoksilon; demir nanopartiküller; SEM; yara iyileşmesi; sitotoksik

CİSTANCHE FAYDALARIANTİOKSİDAN,ANTİENFLAMATUVAR, SİTOTOKSİK VEYARA İYİLEŞMESİ

1. Giriş

Nanoteknolojinin bilim ve teknolojide nano ölçekte yeni malzemeler üretmek için uygulanması hızla büyüyen bir alandır [1]. Nanoteknoloji, tercih edilen uygulamalar için manipüle edilebilecek ayırt edici özellikler elde etmek için atomik seviyede üretim malzemeleri ile ilgilenir. Bu alan, nano ölçekte yeni malzemeler üretmek için bilim ve teknolojideki uygulamalarıyla hızla büyümektedir [2]. Elektronik depolama sistemleri [3], biyoteknoloji [4], hedef analitlerin manyetik olarak ayrılması ve zenginleştirilmesi, hedeflenen ilaç dağıtımı [5] ve gen ve ilaç için araçlar alanlarındaki uygulamaları nedeniyle çeşitli endüstriyel sektörler son yıllarda nanoteknolojiyi benimsemiştir. teslimat [3,5,6]. Sonuç olarak, bu parçacıklar, kullanılabilecekleri geniş uygulama yelpazesinin bir sonucu olarak toplum üzerinde önemli bir etki yapma potansiyeline sahiptir. Nanoparçacıklar (NP'ler), yüz nanometreden daha küçük boyutlara sahip olan ve nanoteknoloji alanında kilit yapısal kütleler olarak kabul edilen parçacık kütleleridir. NP'lerin daha yüksek aktivitesi, hem tanımlayıcı özellikleri hem de en dikkate değer oldukları kalitedir [7]. Organik ve inorganik NP'ler, nanoparçacıklara uygulanabilecek iki ana sınıflandırmadır. İnorganik nanoparçacıklar, manyetik NP'leri, soy metal NP'leri (altın ve gümüş gibi) ve yarı iletken NP'leri (titanyum dioksit ve çinko oksit gibi) içerebilir. Organik nanopartiküller, karbon NP'leri içerebilir. İnorganik nanoparçacıklar, işlevsel çok yönlülük ile birlikte üstün malzeme özellikleri sundukları için büyük ilgi görüyor. Sahip oldukları boyut özelliklerinden dolayı tıbbi görüntüleme ve hastalıkların tedavisi için olası araçlar olarak araştırılmıştır [8]. NP'lerin çeşitli kimyasal, fiziksel ve biyolojik özellikleri, normalde nanoparçacıkların sentezi sırasında belirlenen yüzey kaplamasının yanı sıra nanoparçacık boyutu ve morfolojisi dahil olmak üzere çeşitli parametrelerden büyük ölçüde etkilenir. Amaçlanan biyolojik aktivitenin kaybı, koloidal stabilitedeki bir azalmadan kaynaklanır. İlgili koşullar altında AgNP'lerle etkileşime giren pH, iyonik güç ve bir dizi proteinin tümü, koloidal stabilite üzerinde bir etkiye sahiptir. Sonuç olarak, belirli uygulamalar için istenen partikül özelliklerini elde etmek için uygun sentez tekniği seçimi kritik öneme sahiptir [9].

Şu anda, çeşitli fiziksel, kimyasal, biyolojik ve hibrit işlemler kullanılarak sentezlenebilen çok çeşitli NP'ler bulunmaktadır. Çok sayıda araştırma çalışmasının bulgularına göre, nanoparçacıkların üretilmesi için fiziksel ve kimyasal süreçler, organik çözücülerin, tehlikeli bileşiklerin, önemli miktarda enerjinin ve biyolojik olarak parçalanamayan dengeleyici maddelerin kullanımını içerir [10]. Bu nedenle, yeşil nanoteknoloji alanında, bitki ekstraktları, çeşitli mikroorganizmalar, bunların metabolitleri ve birkaç doğal hümik madde [11,12] gibi doğal olarak bulunan malzemeleri indirgeme ve kapatma ajanları olarak kullanarak NP'lerin sentezi giderek daha popüler hale gelmektedir. Gümüş, altın, demir, bakır ve çinko dahil olmak üzere çok çeşitli metalik nanopartiküller üretmek için çevreye dost sentez yöntemleri kullanılmıştır. NP'lerin sentezi için kolay ve çevresel olarak kabul edilebilir yöntemlerin geliştirilmesi, nanoteknolojinin temel odak noktalarından biridir. Mikroorganizmalar ve bitki özleri gibi biyomalzemeler, çok çeşitli NP'lerin hazırlanması sürecinde kullanılabilir [13,14]. Bununla birlikte, bazı organizmalar patojen olduğundan, bunlarla uğraşmak tehlikelidir. Gelişmek için mikroorganizmaların kültürde muhafaza edilmesi ve sıcaklık, pH ve diğer parametreler dahil olmak üzere dikkatle kontrol edilen koşullara tabi tutulması gerekir. Mikrobiyal kültürü sürdürme zahmetli sürecini ortadan kaldırdığı için, bitki parçaları kullanılarak NP'lerin sentezi bazen diğer biyolojik işlemlerden daha avantajlı olabilir [15]. Sonuç olarak, doğal kaynakların kullanımı, hız, çevre dostu olma ve iyi huylu olma gibi doğal özellikleri nedeniyle çok dikkat çekmiştir. Bu çekici özellikler, tıbbi uygulamalarda kullanım için kesinlikle gereklidir. Yeşil sentezle üretilen nanopartiküller, iyi tanımlanmış ve kontrol altında bir boyuta sahiptir, kirletici içermezler ve yöntemin ölçeklendirilmesi kolaydır. Bunlar, yeşil sentezin ek faydalarından bazılarıdır [16]. Sentezlenen nanoparçacıkların biyolojik aktivitesi, metal iyonlarının kararlılığı ve indirgenmesi için kullanılan yeşil malzemeler tarafından büyük ölçüde belirlenir ve ince ayar yapılır. NP'lerin ideal özelliklerinden biri, potansiyel hedefler (patojenler) ve memeli (konakçı) hücreler arasında ayrım yapmak için olağanüstü bir kapasiteye sahip olması gerektiğidir [17].

Bu nedenle, mevcut araştırmada V. leucoxylon yapraklarının sulu ekstraktının demir nanoparçacıklarının (FeNP'ler) oluşumunu kolaylaştırma potansiyeli araştırıldı. Demir, Dünya'da en bol bulunan elementlerden biridir. Son zamanlarda, yüksek zorlayıcılık ve süperparamanyetizma dahil olmak üzere çeşitli benzersiz özelliklere sahip olması nedeniyle önemli NP'lerin yeni bir sınıfı olarak tanınmaya başlandı. Katalizör, elektronik cihazlar, bilgi depolama, sensörler, ilaç dağıtım teknolojisi, biyotıp, manyetik kayıt cihazları ve çevre temizliği, FeNP'leri kullanan ilgi çekici birçok uygulamadan sadece birkaçıdır [18]. Ayrıca, bir dizi araştırmaya göre, çeşitli bitki özlerinden FeNP'ler oluşturulabilir. Bu bitki özleri arasında Okaliptüs globulus yaprağı [19], nar yaprağı [20] ve muz kabuğu külü [21] bulunur. Bu çalışmada kullanılan bitki V. leucoxylon, Verbenaceae familyasının bir üyesidir. Beş yapraklı iffetli ağaç (Kannada dilinde: Sengeni, Holenekki, Hollalakki) olarak da bilinir ve bölgede nehir kıyılarında yaprak dökmeyen ve yarı yaprak dökmeyen ormanlarda ve akarsular boyunca nemli yaprak döken ormanlarda bulunabilir. 20 m yüksekliğe kadar ulaşabilir ve orta ila büyük yaprak döken ağaç olarak sınıflandırılır. Hindistan'ın Batı Ghats ormanları boyunca çok sayıda bulunabilir. V. lökoksilon yaprak ekstresi infüzyonunun, anti-enflamatuar, antioksidan, antipsikotik, antidepresan, antiparkinson ve antihiperlipidemik aktiviteler gibi çok çeşitli farmakolojik aktivitelere sahip olduğu bildirilmiştir [22]. Doğal ürünler tarih boyunca ve özellikle halk hekimliğinde çok çeşitli hastalık ve rahatsızlıkların tedavisinde kullanılmıştır. Bu uygulama çok eski zamanlara dayanmaktadır. Uzun süredir var olan doğal ürün kimyası yöntemleri, karasal ve denizel kaynaklardan gelen çok çeşitli biyoaktif ikincil metabolitlerin bulunmasını mümkün kılmıştır. Bu doğal olarak oluşan maddelerin önemli bir kısmının artık potansiyel farmasötikler olarak kullanılması düşünülmektedir [23].

İnsanlık için yararlı olan ve henüz keşfedilmemiş çok sayıda doğal olarak oluşan kimyasallar ve besinler vardır. Bunun bir sonucu olarak, terapötik müdahalelerde başarıyla kullanılabilecek ve minimum miktarda yan etki yaratacak yenilikçi terapötik seçeneklerin araştırılması ve geliştirilmesi için acil bir talep vardır.

FeNP'ler için şu anda önerilen yeşil sentez işlemi farklı ve uygun maliyetlidir. Mevcut çalışmada, herhangi bir kimyasal veya fiziksel teknik kullanılmadan oda sıcaklığında nanopartiküller oluşturmak için bir girişimde bulunuldu. Vitex lökoksilon bitkisi, demir nanoparçacıklarını sentezleme çabasıyla seçilmiş ve demir nanoparçacıklarının gücünü değerlendirmek için kapsamlı sistematik in vitro modeller gerçekleştirilmiştir. Bu bitki üzerine nanopartikül kavramı ve biyomedikal uygulamaları üzerine sadece sınırlı sayıda araştırma çalışması yayınlanmıştır. Sonuç olarak, bu araştırmayı aşağıdaki hedefleri göz önünde bulundurarak gerçekleştirmenin faydalı olacağına karar verdik: fitokimyasalların taranması ve V. leucoxylon'daki ikincil metabolitlerin sayısının ölçülmesi; V. leucoxylon'dan FeNP'lerin yeşil sentezi ve karakterizasyonu; V. leucoxylon ve FeNP'lerinin in vitro antioksidan ve anti enflamatuar etkilerinin karşılaştırmalı çalışması; V. leucoxylon'un sulu yaprak ekstraktının ve bunun FeNP'lerinin cilt kanseri, akciğer kanseri ve ağız kanserine karşı in vitro sitotoksik aktivitesi; V. leucoxylon'un sulu yaprak ekstraktının ve sentetik FeNP'lerinin in vitro yara iyileştirici aktivitesi, sıfırdan tahlili ile.

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1. Bitki Materyalinin Toplanması

2022 Mart ayında, Hindistan'ın Karnataka eyaletinin Uttar Kannada Bölgesi'ndeki Batı Ghats'ın Anshi ormanlık alanından taze V. leucoxylon yaprakları toplandı. Yapraklar, Dr. Kotresha K., Taksonomist, Botanik Bölümü, Karnataka Bilim Koleji, Dharwad; Karnataka, Karnataka Science College, Dharwad, Karnataka, Botanik Bölümünde saklanan belge örneğine atıfta bulunarak. Toplandıktan sonra, taze bitki yaprağı malzemesi akan musluk suyu altında yıkandı, güneşte kurutuldu ve daha sonra mekanik bir öğütücü kullanılarak kaba bir toz haline getirildi. Toz, daha sonra ham çözücü özütleme işleminde kullanılabilmesi için oda sıcaklığında kapatılmış kaplarda tutuldu.

2.2. Bitki Ekstraktının Hazırlanması

Soxhlet cihazı kullanılarak 25 g toz yaprak 250 mL distile su ile 48 saat ekstrakte edildi. Sulu öz, bir roto-evaporatör kullanılarak daha da konsantre edildi ve daha sonra, kullanıma kadar 4 °C'de kapalı bir şişede tutulmadan önce desikatörlerde kurutuldu. FeNP'lerin sentezi için sulu ekstrakt, indirgeyici ve stabilize edici bir madde olarak kullanıldı.

2.3. Çözücüler ve Reaktifler

Kullanılan tüm kimyasallar ve solventler analitik kalitedeydi ve Hi-media'dan (Hubli, Hindistan) satın alındı.

2.4. Fitokimyasal Analiz

Deepti ve ark. (2012), ham sulu yaprak ekstresi V. leucoxylon, flavonoidler, alkaloidler, fenoller, glikozitler, steroller, ligninler, saponinler, antrakinonlar, tanenler ve indirgeyici şekerler gibi çeşitli fitokimyasal bileşenlerin varlığı açısından niteliksel olarak test edilmiştir [24].

2.5. Demir Nanopartiküllerinin Sentezi

İlk olarak, 10 mL 0.05 mM FeS04 sulu çözeltisine 1 mL V. leucoxylon sulu yaprak özütü ilave edildi ve karışım çalkalandı. Oda sıcaklığında ve karanlık bir ortamda, reaksiyon karışım işleminin tamamı gerçekleştirildi. Oksidasyon/indirgenme reaksiyonu, renksiz reaksiyon karışımı inkübe edildikten ve gerekli süre boyunca reaksiyona sokulduktan sonra açıkça görüldü [25]. İstenilen reaksiyon süresi boyunca 10,{7}} rpm'de on 10 dakika santrifüjlendikten sonra toz halinde kurumaya bırakılan taze sentezlenmiş FeNP'lerden herhangi bir sulu ekstrakt izini gidermek için, FeNP'leri içeren sulu karışım santrifüjlendi. ikinci kez ve çift damıtılmış suda yeniden dağıtıldı ve kurutuldu [26].

2.6. FeNP'lerin karakterizasyonu

Ultraviyole görünür spektroskopi (UV-Vis), Fourier dönüşümü kızılötesi spektroskopi (FTIR), taramalı elektron mikroskobu ve enerji dağılımlı X-ışını spektroskopisi, X-ışını Kırınımı (XRD), parçacık boyutu analizörü ve zeta gibi çeşitli yöntemler potansiyel, FeNP'leri karakterize etmek için kullanıldı.

2.6.1. UV–Görünür Spektroskopi Tabanlı Analiz

İlk olarak, kuvars küvetlerdeki koloidal FeNP solüsyonunun 1 mL'lik kısmı, referans olarak damıtılmış su ve 0,05 mM FeSO4 kullanılarak UV-görünür spektroskopi (U-3310, Hitachi, Tokyo, Japonya) kullanılarak değerlendirildi. koloidal çözeltideki ferrik iyonların indirgenmesini doğrulamak için bir kör olarak [27].

2.6.2. FTIR Tabanlı Analiz

Demir yüzeyine bağlanan ve FeNP'lerin sentezinde yer alan fonksiyon grupları (gruplar), FTIR spektroskopisi (S700, Nicolet, MA, ABD) [28] kullanılarak tanımlandı. 72 saatlik inkübasyonun ardından, reaksiyon karışımlarının 10,000 rpm'de 15 dakika süreyle tekrarlanan santrifüjlenmesiyle (3-4 kez) FeNP'ler izole edildi. Süpernatan, deiyonize su ile değiştirildi ve pelet, toz olarak saklandı. Kurutulduktan sonra FeNP'ler, 1:100 oranında potasyum bromür peletleme işlemi kullanılarak bir FTIR analizine tabi tutuldu.

2.6.3. Tarama-Elektron-Mikroskopi Tabanlı Analiz

Nanopartikülleri incelemek ve yüzey şekillerini belirlemek için taramalı elektron mikroskobu (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, ABD) kullanıldı. Substratlar, 100 mm çaplı bir gofretten ayrılan temiz bir 5 mm x 5 mm Si substrat üzerinde hazırlandı. Substratın 2 saat ila 6 saat reaksiyona girmesi sağlandı ve numune, bir koloidal solüsyonun 10,000 rpm'de 5 dakika santrifüjlenmesiyle hazırlandı. Pelet birçok kez yeniden santrifüjlendikten sonra kurutuldu, ardından deiyonize su içinde yeniden dağıtıldı ve prosedür tekrarlandı. Son olarak, Ulusal Standartlar ve Teknoloji Enstitüsü, NIST-2007 [29] tarafından açıklanan prosedüre göre SEM analiziyle yapısal karakterizasyona tabi tutulan kuru pelet elde edildi.

2.6.4. Enerji Dağıtıcı X-ışını

Karbon kaplı bir bakır ızgara üzerinde kurutmanın ardından, indirgenmiş FeNP'ler, element bileşiminin belirlenmesine de izin veren EDX (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, ABD) kullanılarak analiz edildi.

2.6.5. Zeta Potansiyeli

NP'lerin Gözlemleri Zeta potansiyeli, koloidal NP'lerin kararlılığı hakkında ek içgörüler elde etmek için yararlı bir araçtır. Zeta potansiyelinin genliği, kolloidin olası stabilitesi hakkında bir ipucu sağlar. Meléndrez ve arkadaşlarına göre. (2010), zeta potansiyel değerleri artı 30 mV'den daha pozitif veya 30 mV'den daha negatifse parçacıkların kararlı olduğu kabul edilir [30]. Bu gerçek dikkate alınmalıdır. Yüzey zeta potansiyellerinin okumalarını elde etmek için lazer zeta ölçer kullanıldı (Malvern zeta seizer 2000, Malvern, BK). Toplam 5 mililitre olan nanoparçacıkların sıvı numuneleri, 50 mililitre çift damıtılmış su ile seyreltildi ve süspansiyon elektrolit çözeltisi olarak metrekare başına 2 mm sodyum klorür kullanıldı. Daha sonra pH istenilen seviyeye gelinceye kadar modifiye edilmiştir. Numuneler toplam 30 dakika çalkalandı. Kap çalkalandıktan sonra dengedeki pH not edildi ve metalik parçacıkların zeta potansiyeli belirlendi. FeNP'lerin yüzey potansiyelini belirlemek amacıyla zeta potansiyelinden yararlanılmıştır. Her durumda, belirtilen değer, üç ayrı ölçümün sonuçlarının ortalamasıydı. Zeta potansiyeli değerleri artı 30 mV'den yüksek ile 30 mV'den düşük arasında değiştiğinde, NP'lerin kararlılığı için kriterler belirlendi [31].

2.6.6. Parçacık Boyutu Analiz Cihazı

Numunenin parçacık büyüklüğünü belirlemek için, liyofilize edildikten ve ardından bir ultrasonikatör (SZ-100, Horiba, Kyoto, Japonya) kullanılarak dağıtıldıktan sonra üzerinde PSA testi yapıldı.

2.6.7. X-ışını Kırınım Analizi (XRD) Analizi

V. leucoxylon'un sulu yaprak ekstraktından sentezlenen demir nanopartiküller, nanopartiküllerin doğasını ve ortalama boyutunu belirlemek için XRD analizine (Smart Lab SE, Rigaku, Tokyo, Japonya) tabi tutuldu.

2.7. Antioksidan Aktivitenin İn Vitro Yöntemlerle Tayini

2.7.1. Ferrik İyon İndirgeyici Antioksidan Güç Testi (FRAP)

Oyaizu'ya (1986) göre küçük bir modifikasyonla ferrik iyonların indirgeme gücü değerlendirilmiştir [32]. 50 ◦C'de 30 dakika boyunca, 2,5 mL 20 mM fosfat tamponu ve 2,5 mL yüzde 1 potasyum ferrisiyanid, 2,5 mL V. leucoxylon yaprak ekstraktına ve bunun sentezlenmiş FeNP'leri ile harmanlanmıştır. kombinasyon. İnkübasyon periyodunun ardından, karışıma 2,5 mL yüzde 10 w/v trikloroasetik asit ve 0,5 mL yüzde 0,1 w/w ferrik klorür ilave edilerek 10 dakika daha inkübe edildi. Son olarak, 700 nm'de absorbansı saptamak için bir UV-V spektrofotometre kullanıldı. Standart olarak askorbik asit kullanılmıştır. Her numune üç kez test edildi.

2.7.2. Hidrojen Peroksit Atma Deneyi

V. leucoxylon sulu yaprak ekstraktının ve bunun sentetik FeNP'lerinin hidrojen peroksidi temizleme kabiliyetine dayanarak, bu bileşiklerin antioksidan aktivitesi değerlendirildi. İlk olarak, 4 mM H2O2 içeren {{0}},6 mL fosfat tamponu (pH—7,4), bilinen bir konsantrasyonda 0,5 mL standart askorbik aside ve ayrıca çeşitli konsantrasyonlarda bitki özleri içeren tüplere eklendi. 100 µL ile 500 µL (pH—7,4) arasında değişir. Fosfat tamponu ve hidrojen peroksit içermeyen boş çözelti kullanarak, çözeltinin absorbansını 10 dakika sonra 230 nm'de değerlendirdik. Kontrol oluşturmak için numune veya standart yerine fosfat tamponu kullanıldı [33]. Her numune üç kez test edildi. İnhibisyon yüzdesini hesaplamak için formül yaklaşımı kullanıldı.

2.7.3. DPPH Serbest Radikal Temizleme

Tahlil V. lökoksilon yaprağı ekstresi ve sentezlenen FeNP'ler, reaktif olarak DPPH radikalini kullanarak serbest radikalleri süpürme yetenekleri açısından test edildi [34]. Numuneler, farklı konsantrasyonlarda (w/v) etanol (100 uL) içindeki DPPH radikal solüsyonu (60 M) ile birleştirildi. Oda sıcaklığında karanlıkta 30 dakika inkübasyondan sonra 517 nm'de karışımın absorbansını ölçmek için bir UV-Vis spektrofotometre kullanıldı. Deney için standart olarak askorbik asit kullanıldı. Her numunenin DPPH süpürme aktivitesini belirlemek için aşağıdaki denklem kullanıldı:

Ac, 100 L etanolün 100 L DPPH çözeltisi ile karıştırılmasıyla gerçekleştirilen kontrol reaksiyonunun absorbansını temsil eder ve At, test numunesinin absorbansını temsil eder. Deneyler üçüzler halinde gerçekleştirildi. IC50 değeri her örnek için hesaplandı. Daha yüksek bir serbest radikal aktivitesi seviyesi, daha düşük bir absorbansa sahip olan reaksiyon karışımı ile belirtilmiştir.

2.7.4. Fosfomolibden (PM) Testi

Toplam antioksidan aktivite, Prieto ve diğerleri, 1999, standart teknik kullanılarak belirlendi. 3 mL damıtılmış su ve 1 mL molibdat reaktif solüsyonu içeren her test tüpüne, 100 µL ila 500 µL arasında değişen çeşitli konsantrasyonlarda V. leucoxylon ve onun FeNP'lerinin sulu yaprak ekstresi verildi. Bu tüpler 90 dakika 95 ◦C'de inkübe edildi. Reaksiyon karışımının absorbansı, bu tüpler inkübasyondan sonra 20-30 dakika oda sıcaklığına ayarlandıktan sonra 695 nm'de ölçülmüştür. Referans standardı askorbik asitti [35].

2.8. In Vitro Anti-Enflamatuvar Aktivitenin Değerlendirilmesi

V. leucoxylon sulu yaprak ekstraktının ve bunun ürettiği FeNP'lerin anti-enflamatuar etkisi, Elias ve diğerleri, 1988 tarafından özetlenen protein denatürasyon yöntemi kullanılarak hafif modifikasyonlarla değerlendirildi [36]. Standart ilaç olarak diklofenak sodyum kullanıldı. 2 mL bilinen konsantrasyonda üretilmiş FeNP'leri (100 g/mL) standart diklofenak sodyum (100 g/mL) ve 2,8 mL fosfat tamponlu salin (pH 6,4) içeren bir reaksiyon karışımı, 2 mL taze tavuk yumurtası ile karıştırılmıştır. albümin (1 mM) ve 27 ± 1 ◦C'de 15 dakika inkübe edildi. Reaksiyon karışımı 70 ◦C'deki su banyosunda 10 dakika bekletilerek denatürasyon sağlandı. Soğutulduktan sonra, kör olarak çift damıtılmış su kullanılarak 660 nm'de absorbans ölçüldü. Her test üç kez gerçekleştirildi. Protein denatürasyonunun yüzde inhibisyonunu hesaplamak için aşağıdaki formül kullanıldı:

burada, Test örneğinin=absorbansında; Ac=kontrolün absorbansı.

2.9. MTT Testi Kullanılarak Demir Nanopartiküllerin Sitotoksik ve Antikanser Aktivitesinin Belirlenmesi

V. leucoxylon ve sentezlenmiş FeNP'lerinin kanserli olmayan fibroblast hücreleri L292'nin canlılığı ve bunun cilt kanseri (A375), akciğer kanseri (A549) ve ağız kanseri (KB-3-1) üzerindeki antikanser aktivitesi üzerindeki etkisi değerlendirildi. Carmichael ve diğerleri, (1987) [37]'ye göre standart MTT testi kullanılarak. Tüm hücre hatları, Ulusal Hücre Bilimi Merkezi'nden (NCCS), Pune, Hindistan'dan elde edildi. Hücre büyümesinin yüzde inhibisyonu (IC50) değerleri, her hücre hattı için doz-tepki eğrileri kullanılarak elde edildi ve büyüme inhibisyonu yüzdesini hesaplamak için aşağıdaki formül kullanıldı. MTT'nin sağlıklı hücrelerin mitokondriyal dehidrojenazı tarafından mor bir formazan ürününe dönüştürülmesi bu deneyin temelidir [38].

2.10. Scratch Assay Testi Kullanılarak İn Vitro Yara İyileştirme Çalışması

Bilinen konsantrasyonlarda bitki özü ve demir nanoparçacıkları içeren numunelerin neden olduğu L292 hücre hattı hücrelerinin yayılma ve göç etme yetenekleri, mevcut araştırmada incelenmiştir [39]. Hücre kültürü sürecini başlatmak için yüzde 1 FBS ve yüzde 2 Pen-Strep antibiyotik (Darmstadt, Almanya) ile desteklenmiş DMEM ortamına sahip hayvan hücre kültürü plakaları kullanıldı. Steril bir plastik pipet ucu, hücreler kabaca mL başına 50,000 hücreye ulaştıktan sonra tek tabakalı konfluansı çizmek için kullanıldı. İstenmeyen hücre kalıntılarını gidermek için PBS çözeltisi kullanıldı. Negatif kontrol olarak, işlenmemiş hücreler kullanılırken, bilinen konsantrasyondaki polimer numuneleri için pozitif kontrol olarak standart askorbik asit kullanıldı. Sonraki 24 saat boyunca hücreler yüzde 5 CO2 ile 37 ◦C'de tutuldu. Bağıl hücre migrasyonu ve yara kapanmasının incelenmesi için, çizilmiş hücre katmanları inkübe edildi ve 0 saat ila 6 saat ila 12 saat ve 24 saat arasında değişen aralıklarla görüntülendi. Boşluk mesafesini ölçmek için MagVision Software'in 4x çözünürlükteki ölçümü (X64, 2016, Magnus, Yeni Delhi, Hindistan) kalibrasyonu kullanıldı. Yara kapanması ve migrasyon hızını belirlemek için aşağıdaki formül kullanıldı:

aşağıdakilerle ilgili olarak: A0h=yara alanı kaşındıktan hemen sonra ölçüldü; ATh=saat sonra ölçülen yara alanı; Rm=taşıma hızı (µm/h); Wf=ilk yara genişliği (µm); ve T=taşıma süresi (saat).

2.11. İstatistiksel analiz

Veriler, ortalama standart sapma ve standart hata olarak sunuldu ve her deney üç kez gerçekleştirildi. Gruplar arasında var olan ortalama puan farklılıkları üzerinde tek yönlü bir varyans analizi (ANOVA) yapmak için SPSS yazılımı sürüm 20 kullanıldı.

Daha fazlasını iste:

E-posta:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: artı 86 15292862950

MAĞAZA:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop