Apelin-13 Diyabetik Nefropatiyi Etkili Bir Şekilde Nasıl Hafifletiyor?

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Apelin-13, nitrik oksit üretimini artırarak ve böbrek dokusu fibrozunu baskılayarak diyabetik nefropatiyi hafifletir

ZHUO GAO, XIN ZHONG, YING-XIA TAN & DONG LIU

Soyut

Diyabet ciddi bir metabolik hastalıktır ve diyabetin neden olduğu böbrek hasarı da hastaların sağkalımını ciddi şekilde etkiler. Apelin, lipit metabolizmasında çok önemli bir rol oynayan bir moleküldür ve son çalışmalar göstermiştir ki,apelin-13Apelin'in bir alt türü olan apelin, kan şekeri seviyelerinin düzenlenmesinde önemli bir rol oynar. Ancak, rolüapelin-13içindediyabetik nefropatibelirsizliğini koruyor. Bu çalışmada, bir sıçan modelişeker hastasınefropatistreptozosin (STZ) enjeksiyonu ile yapılmıştır. Bu işlem sırasında, bu sıçanlara enjekte edildi.apelin-13. Kan şekeri, idrar proteini ve insülin seviyeleri haftalık olarak belirlendi. Daha sonra, western blot ile böbrek dokularında anjiyotensin domain tip 1 reseptör ilişkili protein (APJ), endotelyal nitrik oksit sentaz (eNOS), E-kadherin ve a-düz kas aktin (a-SMA) ekspresyonu belirlendi. Daha sonra, glomerüler damarların endotel hücreleri, yüksek glikoz ortamı ile kültürlendi. Bu hücreler tedavi edildi.apelin-1324 saat Son olarak, bu hücrelerin hücre canlılığı ve bu hücrelerde APJ, eNOS.E-cadherin ve -SMA ekspresyonu western blotlama ile belirlendi. Sonuç olarak, tedaviapelin-13daha düşük kan şekeri ve idrar proteini seviyelerine neden olur. Ek olarak, uygulamanınapelin-13insülin üretimini teşvik etti ve insülin direncini hafifletti. ile tedaviapelin-13APJ, eNOS ve E-cadherin ekspresyonunu desteklerken, sıçanların böbrek dokularında ve glomerüler damarların endotel hücrelerinde -SMA ekspresyonunu baskılamıştır. Ayrıca, uygulamanınapelin-13ayrıca bu hücrelerin hücre canlılığını da destekledi. Sonuç olarak,apelin-13rahatlamakşeker hastasınefropatinitrik oksit (NO) üretimini teşvik ederek ve böbrek dokularının fibrozunu hafifleterek.

giriiş

Diyabet metabolik bir hastalıktır ve glukoz metabolizması bozukluğu ana klinik bulgudur(1). Önceki çalışmalar, yüksek şekerli ve yüksek yağlı diyetlerin popülaritesi ve bireylerin sedanter yaşam tarzı nedeniyle diyabet insidansının önümüzdeki birkaç yıl içinde artmaya devam etmesinin beklendiğini göstermiştir(2,3). Diyabetin başlangıcına sıklıkla çeşitli organlarda hasar eşlik eder ve uzun süreli diyabetli hastalara sıklıkla ciddi böbrek yetmezliği teşhisi konur (4,5). Önceki bir çalışma, tip 1 diyabetli hastaların yüzde 30'unun ve tip 2 diyabetli hastaların yüzde 25'inin geliştiğini bildirdi.şeker hastasınefropati(6). Ayrıca, oluşumu ve gelişimişeker hastasınefropatidiyabetli hastaların ölümlerinde artışa neden olmuştur.Şeker hastasınefropatiindüklenen renal podosit ve kapiller hasar hastaların sağ kalımını etkileyen ana faktördür(7). Bu nedenle tedavi geliştirmekşeker hastasınefropatidiyabetli hastaların hayatta kalma oranlarını artırmak için çok önemlidir.

Apelin, Xq25-26.1 kromozomal bölgesinde bulunur ve APLN geni (8) tarafından kodlanır ve G protein-bağlı reseptör anjiyotensin alan tip 1 reseptör-ilişkili proteinin (APJ) endojen ligandıdır. genellikle beyaz yağ dokusu tarafından salgılanır ve üretilir (9). Apelin ve reseptörü APJ, serebellar endotel hücreleri, kalp ve kan damarları dahil olmak üzere çeşitli dokularda, özellikle kardiyovasküler sistemde yaygın olarak eksprese edilir(10). Apelin, yakın zamanda yapılan bir çalışmada, lipid metabolizması ile ilişkili bir adipokin olarak tanımlanmıştır(11). Ancak daha önce yapılan bir çalışma, apelinin vücudun enerji homeostazını, glikoz ve su metabolizmasını ve diğer biyolojik fonksiyonları düzenlemede çok önemli bir rol oynadığını göstermiştir(12). Apelin ekspresyonunun insülin direncini, aterosklerozu ve diyabetin neden olduğu vasküler hasarı iyileştirdiği daha önce ortaya konmuştu(13). Ancak farklı bir çalışma, apelin ekspresyonunun diyabetik retinopati oluşumunu ve gelişimini indüklediğini ortaya koymuştur(14). Bu nedenle diyabete bağlı komplikasyonların ortaya çıkmasında ve gelişmesinde apelinin rolü belirsizliğini korumaktadır.

Ayrıca apelin farklı alt tipler (apelin-36, apelin-17 ve apelin) olarak mevcuttur.apelin-13) vücutta endoplazmik retikulumun kesilmesi yoluyla. Apelin'in peptit zinciri ne kadar kısa olursa biyolojik aktivitesinin o kadar güçlü olduğu ortaya çıkmıştır(15). Daha önce yapılan bir çalışma, apelinin tip 2 diyabetli hastalarda kronik inflamasyonu azaltarak insülin duyarlılığını iyileştirdiğini ve kan şekeri düzeylerini düşürdüğünü, böylece glikoz ve lipid metabolizmasını artırdığını göstermiştir (16). Ancak apelinin etkisişeker hastasınefropatişu anda tartışmalıdır. Daha önce yapılan bir çalışmada, hastaların serumundaki apelin/APJ düzeylerininşeker hastasınefropatiyükseltilir, oluşumunu ve gelişimini teşvik eder.şeker hastasınefropati(17). Öte yandan, farklı bir araştırma şunu ortaya koydu:apelin-13yüksek glikoz ortamında renal tübüler epitel hücrelerinin morfolojik değişikliklerini inhibe edebilir, böylece glomerüler hücrelerde epitelyal-mezenkimal geçiş (EMT) sürecinin oluşumunu ve gelişimini inhibe edebilir ve sonuçta oluşumunu geciktirebilir.şeker hastasınefropati(18). Bu nedenle apelinin diyabetin neden olduğu böbrek komplikasyonları üzerindeki etkisi belirsizliğini koruyor.

Bu çalışmada, rolüapelin-13sürecindeşeker hastasınefropatisıçan modeli oluşturularak daha da araştırıldı.şeker hastasınefropati.

cistanchetübülozaengellerböbrekhastalık, numuneyi almak için buraya tıklayın

Malzemeler ve yöntemler

Hayvan tahlilleri. Beijing Vital River Laboratuvar Hayvan Teknolojisi Ltd.Şti'nden toplam 30 Sprague Dawley erkek sıçanı (6-8haftalık;200-230g) elde edildi. ve sıcaklık kontrollü (25 derece ) ve sabit nemli (yüzde 40-50) patojen içermeyen belirli bir odada 12-h aydınlık/karanlık döngüsünde barındırıldı ve 1 hafta boyunca ad libitum yiyecek ve su aldı . Bu sıçanlar daha sonra eşit olarak altı gruba ayrıldı (Kontrol, Model, Ap-E40, Ap-E400, Ap-L40 ve Ap-L400). Kontrol grubundaki sıçanlara hiçbir şey verilmedi. Diğer grupların sıçanları yüksek şekerli ve yüksek yağlı diyetle (Thermo Fisher Scientific, Inc.) beslendi ve her gün intravenöz streptozosin (STZ; 40 mg/kg; ürün no.S0130; Merck KGaA) enjeksiyonu yapıldı. hafta. 3 hafta sonra Ap-E40 ve Ap-E400 sıçanlarıapelin-13(sırasıyla 40 ve 400 pmol/kg; ürün no.A6469; Merck KGaA). STZ enjeksiyonundan toplam 6 hafta sonra Ap-L40 ve Ap-L400 gruplarındaki sıçanlarapelin-13(sırasıyla 40 ve 400 pmol/kg). Sekiz STZ enjeksiyonundan sonra, sıçanlara sodyum pentobarbital (160 mg/kg,ip) ile ötenazi yapıldı. Ötenaziden sonra serum ve organlar toplandı. Sıçanların ağırlıkları, STZ enjeksiyonundan 1 hafta öncesinden ötenaziye kadar her hafta elektronik teraziler kullanılarak tespit edildi. Kan şekeri seviyeleri her hafta bir kan şekeri ölçüm cihazı (Thermo Fisher Scientific, Inc.) kullanılarak tespit edildi. İdrar protein seviyeleri de her hafta bir BCA tahlil kiti (kat.no. P0012S; Beyotime Biyoteknoloji Enstitüsü) kullanılarak tespit edildi. Açlık serum insülini de üreticinin talimatlarına göre ticari bir kit (cat.no.RAB0904; Merck KGaA) kullanılarak her hafta tespit edildi. İnsülin direnci indeksi aşağıdaki formül kullanılarak hesaplandı:(Kandaki insülin seviyeleri x kan glikoz seviyeleri)/22.5. Tüm deneyler, Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nun 8. baskısına(19) göre yapıldı ve Hava Kuvvetleri Tıp Merkezi Etik Kurulu (Pekin, Çin) tarafından onaylandı (onay no.2020-79-PJO1) .

Kan üre nitrojeni (BUN) ve serum kreatinin(Ser) tespiti. Kandaki BUN(cat.no.ml076479) ve Scr (kat. no.ml059158) seviyeleri, sırasıyla 3 ve 8 haftalık STZ enjeksiyonundan sonra ticari kitler (Shanghai Enzyme-linked Biotechnology Co., Ltd.) kullanılarak belirlendi. . Bu tahlilin tüm adımları, üreticilerin talimatlarına göre yapıldı.

Nitrik oksit(NO), anjiyotensin II (Ang Il) ve endotelin-1(ET-1) tespiti. Serum ve nefrid dokularındaki NO, Ang II ve ET-1 seviyeleri, NO kiti (kat.no. S0021; Beyotime Biyoteknoloji Enstitüsü), Ang II kiti (ürün no. RAB0010; Merck KGaA) kullanılarak tespit edildi. ) ve ET-1 kiti (cat.no.E-EL-R1458c;Elabscience Biotechnology, Inc.). Tahlillerin tüm adımları üreticinin talimatlarına göre yapıldı.

Hematoksilen ve eozin(H&E) boyama. Ötenaziyi takiben böbrek dokuları toplandı ve önceden soğutulmuş fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile yıkandı. Böbrek daha sonra ayrıldı ve gece boyunca oda sıcaklığında yüzde 4 paraformaldehit ile sabitlendi. Parafine gömülmüş böbrek dokuları 5-um kesitler halinde kesildi. Daha sonra, bu bölümler, her biri 10 dakika boyunca yüzde 70 ve 90 etanol solüsyonunda dehidre edildi. Son olarak, patolojik değişiklikleri tespit etmek için oda sıcaklığında 3 dakika H&E boyaması yapıldı. Bu tahlilin tüm adımları, üreticinin H&E boyama kiti (kat.no.C0105S; Beyotime Biyoteknoloji Enstitüsü) talimatlarına göre yapıldı.

İmmünohistokimya. İmmünohistokimya, üreticinin talimatlarına göre standart peroksidaz/DAB yöntemi ve hematoksilen karşı boyama kullanılarak gerçekleştirildi. Oda sıcaklığında 20 dakika boyunca yüzde 5 bovin serum albümini (BSA; Beyotime Institute of Biotechnology) ile bloke edildikten sonra, kesitler anti-APJ birincil antikoru (cat.no.PA5-114830;Thermo Fisher Scientific, Inc.) ile inkübe edildi. PBS ile yıkandıktan sonra, kesitler keçi anti-tavşan yaban turpu peroksidaz-konjuge sekonder antikor (ürün kodu ab6721;1:1,000; Abcam) ile 4°C'de 50 dakika süreyle inkübe edildi, ardından PBS yıkama Daha sonra kesitler DAB solüsyonu ile muamele edildi ve oda sıcaklığında 5 dakika hematoksilen ile zıt boyandı Son olarak, bir ışık mikroskobu (Olympus Corporation) kullanılarak görüntüler elde edildi.

Hücre kültürü ve tedavisi. BioVector NTCC, Inc.'den bir insan renal glomerüler mikrovasküler endotel hücre çizgisi (hRGEC) elde edildi ve RPMI-1640 ortamında (Thermo Fisher Scientific, Inc., nemlendirilmiş yüzde 10 fetal sığır serumu (FBS) ile desteklendi) kültürlendi. Bu hücreler kontrol, model, Ap-L(Apelin-düşük) ve Ap-H(Apelin-yüksek) gruplarına ayrıldı.Model, Ap-L ve Ap-H grubu hücreler, yüksek glikozlu (25 mmol/l: Cytiva) RPMI-1640 ortamında kültürlendi ve kontrol grubu hücreleri, normal glikoz içerikli (5.5 mmol/l) RPMI-1640ortamında kültürlendi. Ap-Lgroup hücreleri, düşük seviyelerdeapelin-13（0.1 μmol/） ve Ap-Hgroup hücreleri, yüksek seviyelerdeapelin-13(1 umol/).

Tüp oluşturma deneyi. hRGEC hücrelerinde tüp oluşumu, ticari bir kit (ürün no.K905-50; AmyJet Scientific, Inc) kullanılarak belirlendi. Tüm görüntüler bir ışık mikroskobu (büyütme, x4; Olympus Corporation) kullanılarak elde edildi. Bu tahlilin tüm adımları, üreticinin talimatlarına göre yapıldı.

Hücre Sayım Kiti-8(CCK-8) tahlili. Çeşitli gruplardan hRGEChücreler, üç 96-kuyucuklu plakaya (2.5x104/oyuk) kaplandı. 37 derece .10 ul CCK-8 reaktifinde (Dojindo Molecular Technologies, Inc.) 24,48 ve 72 saatlik inkübasyondan sonra kültür ortamı ile seyreltildi ve 96-yuvalı plakalara ilave edildi. Daha sonra, bu hücreler 1 saat boyunca bir inkübatöre yerleştirildi. Nihayet. bu hücrelerin absorbansı, 450 nm dalga boyunda bir spektrofotometre (Thermo Fisher Scientific, Inc.) kullanılarak saptandı.

Western blotlama. Toplam proteinler, RIPA lizis tamponu (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) kullanılarak nefrid dokusu ve hRGEC hücrelerinden toplandı. Protein konsantrasyonu, bir BCA tahlil kiti kullanılarak belirlendi. Daha sonra, eşit miktarlarda protein (40 ug) yüzde 10 sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE)(Beyotime Biyoteknoloji Enstitüsü) ile ayrıldı ve bir poliviniliden florür (PVDF) membranına (EMD) aktarıldı. Milipor). yüzde 5 sığır serum albümini (BSA) (Beyotime Biyoteknoloji Enstitüsü) ile 37 derecede 1.5 saat bloke edildi. Zarlar daha sonra 4 derecede gece boyunca aşağıdaki birincil antikorlarla inkübe edildi: Ang II tip 1 reseptörü (AT1R:1:1,000; ürün kodu ab124734; Abcam), endotelyal NO sentazı(eNOS;1:1, 000; ürün kodu ab5589;Abcam), APJ(1:1,000;cat.no.PA5-114830; Thermo Fisher Scientific, Inc), dönüştürücü büyüme faktörü reseptörü (TGBR: 1:1.000;ürün kodu ab97459; Abcam), E-cadherin (1:1,000:ürün kodu ab212059; Abcam), -düz kas aktin( -SMA;1:1. 000: ürün no.19245; Cell Signaling Technology, Inc.) ve GAPDH(1:2,500;ürün kodu ab9485; Abcam). Birincil antikor inkübasyonunun ardından, membranlar PBS-Tween-20(yüzde 0.1) ile yıkandı ve 2 saat HRP-konjuge antikor(1:2,000; ürün kodu ab6721; Abcam) ile inkübe edildi. oda sıcaklığında(7)Son olarak, immünoreaktif sinyaller, üreticinin talimatlarına göre bir Pierce ECL Western Blotting Substrate kiti (Thermo Fisher Scientific, Inc.) kullanılarak değerlendirildi. İmmünoblotların nispi yoğunlukları, bir Versa Doc MP 5000 moleküler görüntüleyici ve Quantity One yazılımı (versiyon 4.6) (her ikisi de Bio-Rad Laboratories, Inc.'den) ile ölçüldü.

İstatistiksel analiz. İstatistiksel analiz, Graph Pad Prism 7.0(GraphPad Software, Inc.) kullanılarak yapıldı. Unpaired Student t testleri iki grubu karşılaştırmak için kullanıldı. Farklı gruplar arasındaki karşılaştırmalar, tek yönlü ANOVA ve ardından Tukey'nin posthoc testi kullanılarak değerlendirildi. Tüm veriler ortalama ± standart sapma (SD) olarak sunuldu ve tüm deneyler üç kez tekrarlandı. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Sonuçlar

Apelin-13kilo ve kan şekeri düzeylerini düşürür ve insülin düzeylerini artırırşeker hastasınefropati8 haftada sıçanlar. Sıçanların yetiştirilme sürecinde haftalık olarak ağırlıkları ve kan şekerleri ölçüldü. Sonuçlar (Şekil 1A ve B), Ap-E40 ve Ap-E400 gruplarındaki sıçanların ağırlık ve kan glukoz düzeylerinin enjeksiyondan sonra önemli ölçüde değişmediğini ortaya koydu.apelin-133 haftada. Ap-L40 ve Ap-L400 gruplarına ait ratlarda aynı parametreler, uygulama sonrasında azalmıştır.apelin-13enjeksiyon, 3 hafta ile karşılaştırıldığında 8 haftada. Kandaki insülin seviyeleri de tedaviden sonra düştü.apelin-13enjeksiyonu 3 haftaya kıyasla 8 haftada (Şekil 1C).

Apelin-13tedavi böbrek fonksiyonlarını iyileştirir.şeker hastasınefropatisıçanlar. Artan BUN ve Scr seviyeleri böbrek hasarının oluştuğunu ve geliştiğini göstermiştir(20).apelin-13enjeksiyonu 3 haftaya kıyasla 8 haftada enjeksiyon (Şekil 2A). Benzer şekilde, idrar protein içeriği ve böbrek dokularının patolojik hasarının boyutu da aynı eğilimleri ortaya çıkardı (Şekil 2B ve C).

Apelin-13hafifletirşeker hastasınefropatiNO, Angel ve ET-1 üretimini modüle ederek. APJ ekspresyonu tespit edildi ve sonuçlar (Şekil 3A), sıçanların renal dokularında APJ ekspresyonunun APJ ekspresyonundan sonra azaldığını ortaya koydu.apelin-13enjeksiyon, 3 hafta ile karşılaştırıldığında 8 haftada. HİÇBİR üretim rahatlatamazşeker hastasınefropatiböbrek dokusunda indüklenen vasküler hasar (21). Bu nedenle böbrek dokularında NO, Ang II ve ET-1 üretimi tespit edildi. Sonuçlar, enjeksiyondan sonra NO seviyelerinin azaldığını ortaya koydu.apelin-133 hafta ile karşılaştırıldığında 8 haftada. Ancak, enjeksiyondan sonra Ang II ve ET-1 seviyeleri arttı.apelin-133 hafta ile karşılaştırıldığında 8 haftada(Şekil 3B ve C). Daha sonra, western blotlama ile eNOS ve AT1R'nin ifadesi tespit edildi. Şekil 4A'da gösterildiği gibi, AT1R'nin ifadesi enjeksiyondan sonra bastırıldı.apelin-13sırasıyla model grubu ile karşılaştırıldığında 3 ve 8 haftada. Enjeksiyondan sonra eNOS seviyeleri arttı.apelin-13model grubu ile karşılaştırıldığında 3 ve 8 haftalarda.

Apelin-13hafifletirşeker hastasınefropatiAPJ yolunda ATIR, endotelyal nitrik eNOS ve renal fibroz ile ilişkili proteinlerin ekspresyonunu modüle ederek. enjeksiyonundan sonra APJ ekspresyonu artmış ve TGBR ekspresyonu azalmıştır.apelin-13model grubu ile karşılaştırıldığında 3 ve 8 haftalarda. Fibrozis ile ilgili proteinlerin, E-cadherin ve -SMA'nın ekspresyon seviyeleri tespit edildi ve sonuçlar, enjeksiyondan sonra E-cadherin ekspresyonunun arttığını ve a-SMA seviyelerinin düştüğünü ortaya koydu.apelin-13model grubu ile karşılaştırıldığında 3 ve 8 haftalarda (Şekil 4B).

Apelin-13proliferasyonu ve tüp oluşumunu destekler ve kısa süreli yüksek glukoz ile indüklenen renal vasküler endotelyal hücrelerde APJ yolundaki renal fibrozis ile ilgili proteinlerin ekspresyonunu modüle eder. hRGEC hücreleri, 24, 48 ve 72 saat boyunca yüksek glikoz ortamında kültürlendi. Daha sonra, hücre canlılığını saptamak için bir CCK-8tahlili yapıldı. Sonuçlar(Şekil 5A) ile tedavininapelin-13teşvik hücre canlılığı. Uygulamasıapelin-13ayrıca lümen oluşumunu destekledi (Şekil 5B). 24 saatapelin-13tedavi, model grubuna göre APJ, eNOS ve E-cadherin ekspresyon seviyelerinin arttığı ve TGBR, ATIR ve -SMA seviyelerinin düştüğü ortaya çıktı (Şekil 5C).

Apelin-13proliferasyonu ve tüp oluşumunu baskılar ve uzun süreli yüksek glukoz ile indüklenen renal vasküler endotelyal hücrelerde APJ yolundaki renal fibrozis ile ilgili proteinlerin ekspresyonunu modüle eder. Hücreler, 72 ve 96 saat boyunca yüksek glukozlu bir ortam ile işlendi veapelin-1372 saatten başladı. 24 saat sonra, CCK-8 tahlil sonuçları,apelin-13model grubu ile karşılaştırıldığında baskılanmış hücre canlılığı (Şekil 6A). ile tedaviyi takiben lümen oluşumu engellenmiştir.apelin-13(Şekil 6B). Ayrıca. ile tedaviapelin-13model grubuyla karşılaştırıldığında APJ, eNOS ve E-cadherin ekspresyonunu da destekledi. Uygulamasıapelin-13model grubu ile karşılaştırıldığında doza bağlı bir şekilde TGBR, AT1R ve a-SMA (Şekil 6C) ekspresyonunu da bastırdı.

Şekil 1. Apelin-13, sıçanların insülin direncini giderir.(A) Farelerin ağırlığı haftalık olarak tespit edildi. (B) Kan şekeri seviyeleri haftalık olarak tespit edildi. "P-<0.001 vs.the="" control="" group.=""><><0.01 and=""><0.001 vs.the="" model="" group.(c)levels="" of="" insulin="" were=""><0.05,"p-0.01><0.001 vs.the="" after="" intervention="" 3w="">

Şekil 2. Apelin tedavisi-13, sıçanlarda diyabetin neden olduğu böbrek hasarını hafifletir.(A)Kan üre nitrojen ve serum kreatinin seviyeleri tespit edildi.(B)İdrar protein içeriği haftalık olarak tespit edildi.(C)Hematoksilen ve eozin boyama ile böbrek dokularının yaralanması tespit edildi (büyütme.x200), P<0.01, and="" p-0.001="" ys.the="" after="" intervention="" 3w="" group.bun.blood="" urea="" nitrogen:="" scr,="" serum="">

Şekil 3. Apelin-13, APJ ifadesini aktive eder.(A) Böbrek dokularında APJ ekspresyonu immünohistokimyasal deneylerle (büyütme, x200) tespit edildi. (B) Ticari kitlerde NO üretimi tespit edildi. (C) Ang Il ve ET-I seviyeleri ticari kitlerle belirlendi."P<0.01><0.001 vs.="" the="" after="" intervention="" 3w="" group.apj,="" angiotensin="" domain="" type="" 1="" receptor-associated="" proteins;="" no,="" nitric="" oxide;="" ang="" i,="" angiotensin="" ii;="">

Şekil 4. Apelin-13 uygulaması, eNOS ifadesini destekler.(A) ATIR andeNOS ifadesi western blotlama ile tespit edildi. (B) Sıçanların böbrek dokularında APJ, TGBR, E-cadherin ve a-SMA seviyeleri western blotlama ile tespit edildi.'P<><0.01><0.001.enos, endothelial="" nitric="" oxide="" synthase;="" at1r,="" ang="" ii="" type="" i="" receptor;="" apj,="" angiotensin="" domain="" type="" 1="" receptor-associated="" proteins;="" tgbr,="" transforming="" growth="" factorβreceptor;="" α-sma,="" α-smooth="" muscle="">

Şekil 5.Apelin-13, glomerüler damarların endotel hücrelerinin yüksek glikoz kaynaklı hasarını hafifletir.(A)Hücre canlılığı, Hücre Sayım Kiti-8 testiyle tespit edildi. (B) hRGEC'ler, lümen oluşumu deneyleriyle (büyütme, x4) tespit edildi. (C) AT1R.eNOS, APJ, TGBR, E-cadherin ve a-SMA'nın bu hücrelerdeki ifadesi western blot ile belirlendi,' P-0.05."P<0.01><0.001. atir.="" ang,="" i="" type="" 1="" receptor:="" enos,="" endothelial="" nitric="" oxide="" synthase;="" apj,="" angiotensin="" domain="" type="" i="" receptor-associated="" proteins;="" tgbr,="" transforming="" growth="" factor="" βreceptor;a-sma,α-smooth="" muscle="">

Şekil 6. Apelin-13 fibrozu baskılayarak glomerüler damarların endotel hücrelerinin hasarını giderir.(A)Glomerüler damarların endotel hücrelerinin hücre canlılığı, CellCounting Kit-8assay ile belirlendi.(B) hRGEC'ler, lümen oluşumu deneyleriyle (büyütme, x4) tespit edildi. (C) Bu hücrelerdeki AT1R,eNOS, APJ, TGBR.E.-cadherin ve a-SMA seviyeleri western blotlama ile belirlendi."P-<><0.01><0.001.stir. ang="" iitype="" 1receptor;enos,="" endothelial="" nitric="" oxide="" synthase;="" apjangiotensin="" domain="" type="" 1="" receptor-associated="" proteins;="" tgbr,="" transforming="" growth="" factorβreceptor;α-sma,a-smooth="" muscle="">

Tartışma

Diyabet metabolik bir hastalıktır ve glukoz metabolizması bozukluğu ana klinik tezahürüdür. Son yıllarda bu hastalığın görülme sıklığı giderek artmaktadır(22). Diyabet, birçok organın hasar görmesine ve işlev bozukluğuna yol açar. Diyabete bağlı böbrek hasarı, diyabetli hastalarda en önemli ölüm nedenlerinden biridir(23). Başlıca klinik belirtilerişeker hastasınefropatiproteinüri ve böbrek fonksiyonunda kalıcı düşüş olduğu ortaya konmuştur (24). Ayrıca, oluşumu ve gelişimişeker hastasınefropatikardiyovasküler hastalık gelişimini teşvik ettiği ortaya konmuştur (25). Bu nedenle, neden olduğu hasarı bastırmak için yeni bir terapi geliştirme ihtiyacışeker hastasınefropatihastalarda acildir.

Apelin, yağ dokularında bir yağ faktörüdür. Yakın zamanda yapılan bir çalışma, apelinin kan şekerini düzenleyerek diyabetli hastaların klinik belirtilerini hafifletebileceğini bildirmiştir (26). Yakın zamanda yapılan bir başka çalışma, apelinin-36 yüksek konsantrasyonlu glikoz(16.7 mmol/) tarafından indüklenen insülin salgılanmasını engelleyebileceğini, ancak düşük konsantrasyonlu glikoz (2.8 mmol/)(27) tarafından uyarılan insülin salgısı üzerinde hiçbir etkisi olmadığını bildirdi. Obez ve insüline dirençli farelerin vücutlarında apelin, insülin direncini azaltabilir ve vücuttaki glikoz kullanımını eski haline getirebilir (28). Ancak alanındaşeker hastasınefropati, yakın tarihli bir çalışmada, apelin ve reseptörü APJ düzeylerinin hastaların serumundaşeker hastasınefropatiartmış ve daha yüksek apelin ve APJ seviyeleri kan damarı oluşumunu teşvik etmiş ve glomerüler kılcal damarların proliferasyonunu indüklemiş, böylece oluşumu ve gelişimini teşvik etmiştir.şeker hastasınefropati(29) Bununla birlikte, farklı bir çalışma da göstermiştir kiapelin-13yüksek glikozlu bir ortamda renal tübüler epitel hücrelerinin dönüşümünü inhibe edebilir, böylece glomerüler hücrelerde EMT sürecinin oluşumunu ve gelişimini inhibe edebilir, sonuçta oluşumunu geciktirebilir.şeker hastasınefropati(30).Bu çalışmada,apelin-13Bu sıçanlarda kan şekeri düzeylerini düşürmüş ve insülin direncini azaltmıştır. yanı sıra idrar protein içeriğini azalttı.Apelin-13tedavi aynı zamanda glomerüler damarların endotel hücrelerinde önemli ölçüde glukoz kaynaklı hasarı da hafifletti. Toplu olarak, bu sonuçlar göstermiştir ki,apelin-13tezahürlerini hafiflettişeker hastasınefropati.

Daha önceki bir çalışma, apelinin eNOS ekspresyonunu düzenleyerek ve Akt yolunu aktive ederek kan şekeri içeriğini azaltabileceğini ortaya koydu (31). Apelin ekspresyonu ayrıca APJ'yi aktive ederek NO üretebilir, bu nedenle klinik belirtileri hafifletebilir.şeker hastasınefropati(32) .APJ reseptörüapelin-13, veapelin-13APJ'ye bağlanarak biyolojik etkilerini gösterebilir (33). Bu çalışmada NO üretimi ve eNOS ve APJ ekspresyonu da tespit edilmiştir. ile tedaviyi takiben böbrek dokularında ve glomerüler damarların endotel hücrelerinde eNOS ve APJ ekspresyon seviyelerinin arttığı ortaya çıktı.apelin-13. ile tedaviyi takiben sıçanların böbrek dokularında NO üretimi de artmıştır.apelin-13. Bu sonuçlar göstermiştir kiapelin-13APJ'yi aktive ederek eNOS ifadesini destekledi. Bu nedenle, daha yüksek eNOS seviyeleri NO üretimini artırarak sonuçta vasküler geçirgenliği ve renal filtrasyonu teşvik eder.

Son çalışmalar böbrek fibrozunun bir karakteristik olduğunu göstermiştir.şeker hastasınefropati(34,35). Bu çalışmanın sonuçları, E-cadherin ekspresyonunun, E-cadherin ekspresyonunun, tedaviyi takiben hücrelerde ve böbrek dokularında arttığını ortaya koydu.apelin-13, a-SMA azalırken.Apelin-13tedavisinin de hafiflettiği ortaya çıktı.şeker hastasınefropatiböbrek dokularının ve glomerüler damarların endotel hücrelerinin fibrozunu baskılayarak.

Sonuç olarak, bu çalışma,apelin-13geliştirilmesi üzerineşeker hastasınefropati. Mevcut çalışmanın sonuçları ortaya koydu kiapelin-13hafifletilmişşeker hastasınefropatiNO üretimini teşvik ederek ve böbrek dokularında fibrozu gidererek. Ancak bu çalışmanın da bir sınırlılığı vardır. Oksidatif stres ve inflamasyonun gelişiminde önemli rol oynar.şeker hastasınefropati(36-40). İkisinden biriapelin-13gelişmişdiyabetik nefropatiinflamasyonu ve oksidatif stresi azaltarak, gelecekteki çalışmamızda araştırmayı garanti eder.

Referanslar

1. Yu SY, Dong B, Fang ZF, Hu XQ, Tang L ve Zhou SH: lncRNA AK139328'in yıkılması, miR-204-3p'yi modüle ederek ve otofajiyi inhibe ederek diyabetik farelerde miyokardiyal iskemi/reperfüzyon hasarını hafifletir. J Cell Mol Med 22:4886-4898."2018.

2. Rowley WR ve Bezold C: Kamu bilinci oluşturma: Eyalet 2025 diyabet tahminleri. Popul Health Manag 15: 194-200.2012,

3. Rowley WR. Bezold C.Arıkan Y, Byrne E ve Krohe S: Diyabet 2030: Dünden, bugünden ve gelecekteki trendlerden içgörüler. Halk Sağlığı Yönetimi 20; 6-12.2017.

4. Amerikan Diyabet Derneği: Diyabette tıbbi bakım standartları-2014.Diabetes Care 37(Ek 1): S5-S13.2014.

5. Ahlqvist E, van Zuydam NR, Groop LC ve McCarthy MI: Diyabetik komplikasyonların genetiği. Nat Rev Nephrol 11:277-287. 2015.

6. Navarro-Gonzalez JF, Jarque A, Muros M, Mora C ve Garcia J: Tümör nekroz faktörü-alfa için terapötik bir hedef olarakşeker hastasınefropati.Sitokin Büyüme Faktörü Rev 20; 165-173.2009.

7. Alvarez ML ve Distefano JK: Kodlayıcı olmayan RNA'larınşeker hastasınefropati: Hastalık gelişimi ve ilerlemesi için biyobelirteçler olarak potansiyel uygulamalar. Diyabet Tedavi Kliniği Uygulaması 99:1-11,2013.

8.Del Ry S,Cabiati M, Raucci S, Simioniuc A, Caselli C, Prescimone T ve Giannessi D: Sus Scrofa'da Apelin dizilimi ve kardiyak ekspresyonu. Pharmacol Res 60: 314-319,2009.

9, Fasshauer M ve Bluher M: Sağlık ve hastalıkta adipokinler. Trendler Pharmacol Sci 36: 461-470.2015.

10. Lv D, LiH ve Chen L: Apelin ve APJ, şimdi ateroskleroz için kritik bir faktör ve terapötik hedef. Acta Biochim Biophys Sin(Shanghai) 45 527-533.2013.

11. Wysocka MB. Pietraszek-Gremplewicz K ve Nowak D: apelinin kardiyovasküler hastalıklar, obezite ve kanserdeki rolü. Ön Physiol 9: 557.2018.

12.Sentinelli F, Capoccia D., Bertoccini L,Barchetta I,Incani M, Coccia F, Manconi E,Lenzi A,Cossu E.Leonetti F, et al:Yeniden sıralama ve ilişkilendirme yoluyla apelin genindeki genetik varyantı arayın Avrupa deneklerinde çalışma, Genet Test Mol Biomarkers 20;98 102,2016.

13. Onalan E, Yakar B, Barim AO ve Gürsu MF: Bozulmuş açlık glukozu, bozulmuş glukoz toleransı, tip 2 diyabet ve metabolik sendromu olan hastalarda serum apelin ve resistin düzeyleri. Endokrynol Pol 71:319-324,2020.

14. Adki KM ve Kulkarni YA: Diyabetik retinopatide potansiyel biyobelirteçler. Curr Diyabet Rev 16: 971-983.2020.

15. Wu R, Zhu Zand Zhou D: Retinopatili diyabetik hastalarda VEGF, apelin ve HO-1: Bir korelasyon analizi.BMC Oftalmol 20: 326.2020.

Not:yukarıdakiler tam bir referans listesi değildir