Mylabris Phalerata Pallas ve Mylabris Cichorii Linnaeus Arasındaki Ayrım için HPLC Parmak İzi ve Spektrum-antitümör Etkisi İlişkisi

İletişim: emily.li@wecistanche.com

Jian-Yong Zhang, Qi-Hong Chen, Xian Pei1, Rong Yan, Can-Can Duan, Yun Liu4, Xiao-Fei Li

1 Eczacılık Fakültesi, Zunyi Tıp Üniversitesi, Zunyi, Çin,

2 Eğitim Bakanlığı Temel Farmakoloji Ana Laboratuvarı ve Eğitim Bakanlığı Etno-Tıp Ortak Uluslararası Araştırma Laboratuvarı, Zunyi Tıp Üniversitesi, Zunyi, Guizhou, Çin.

3 Temel Tıp Bilimleri Okulu, Zunyi Tıp Üniversitesi, Zunyi, Çin, 4Guizhou Eyalet Koleji-tabanlı Key Lab for Tümör Önleme ve Ayırt Edici İlaçlarla Tedavi, Zunyi Tıp Üniversitesi, Zunyi, Çin.

Cistanche anti-tümör hakkında daha fazla bilgi almak için buraya tıklayın

Öne Çıkanlar

Bu çalışma, iki Mylabris türünü ayırt etmek için uygulanabilir, güvenilir ve daha verimli bir HPLC yöntemi sunmaktadır. Ve HPLC parmak izi ve spektrum-antitümör etkilerientegre edildi ve Mylabris'in yeni bir belirteci için üç önemli diferansiyel belirteç bulundu.

Soyut

Amaç: HPLC parmak izine ve spektruma dayalı iki Mylabris Türü arasındaki ayrımın değerlendirilmesiantitümör etkisiilişki. Yöntemler: Bu çalışmada, kemometrik analiz ve spektrum ile entegre basit ve verimli yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) yöntemi kullanılmıştır.antitümör etkisiMylabris'in iki türü arasında ayrım yapmak için ilişki geliştirilmiştir: Mylabris phalerata Pallas (MP) ve Mylabris cichorii Linnaeus (MC). Sonuçlar: Parmak izi analizinde, PCA ve OPLS-DA kullanılarak benzerlik ve örüntü tanıma analizi kullanılarak MP ve MC arasındaki farkları değerlendirmek için 14 karakteristik tepe noktası seçildi. Çin'in 10 bölgesinden alınan örneklerin HPLC kromatogramları, MP ve MC arasında farklılıklar gösterdi ve 7 karakteristik kimyasal belirteç bulundu. Spektrumda-antitümör etkisiilişki analizi, 4 aktivite belirteci IC50'yi düşürmede hayati bir rol oynadı ve gri ilişkisel analiz ve çok değişkenli doğrusal regresyon analizi ile Mylabris'in antitümör bileşenleri olabilir. Spektrum-etki ilişkisi sonuçlarıyla birlikte kemometrik analiz, 2 (sitozin), 4 (bilinmeyen) ve 14 (bilinmeyen) tepe noktalarının, iki Mylabris türünü ayırt etmek için önemli ayırıcı belirteçler olduğunu göstermiştir.

Sonuç: Yöntem uygulanabilir, güvenilir ve MP ve MC'yi ayırt etmede daha etkilidir ve böcek ilaçlarının kalite kontrolünü kolaylaştırmak için yeni bir yol sunacaktır.

Anahtar Kelimeler: HPLC, Parmak İzi, Spektrum-antitümör etkisi, Mylabris, Ayrımcılık

Arka fon

Çin'de ban mao olarak adlandırılan Mylabris, geleneksel Çin tıbbı (TCM) olarak kaynama, derin köklü ülserler, karın kitlesi tedavisinde kullanılmıştır ve önemli birantitümörajan. Ayrıca Avrupa'da halk hekimliği olarak yaygın olarak kullanılmaktadır [1]. Mylabris'in ana aktif bileşeni, etkili bir ilaç olan cantharidin'dir.anti-tümörbileşik [2]. Modern farmakolojik çalışmalar, Mylabris'in birden fazla aktiviteye sahip olduğunu ve ikili özelliği nedeniyle tümörlerin tedavisi için oldukça değerli olduğunu göstermiştir.kanser karşıtıözellikler ve lökosit sayısını artırma yeteneği [3-4]. Şu anda, Mylabris, Çin'de Aidi enjeksiyonu ve Bileşik ban mao kapsülü gibi bazı klinik anti-karsinom TCM reçetelerinde yaygın olarak kullanılmaktadır.

Çin Halk Cumhuriyeti Farmakopesi'ne (2015 versiyonu) göre, Mylabris, botanik özellikleri, popülasyon dinamikleri ve ekolojileri bakımından farklılık gösteren Mylabris phalerata Pallas (MP) ve Mylabris cichorii Linnaeus'un (MC) kurutulmuş bir gövdesi olarak tanımlanır. 5-6]. Mylabris ayrıca oldukça toksik bir ilaçtır. Çin'de bulunan ilaçlar genellikle MP ve MC'nin bir karışımı olduğundan, iki tür arasındaki kimyasal ve aktivite farklılıklarını belirlemek gerekir.

TCM'ler çok sayıda bilinen ve bilinmeyen içerik içerdiğinden, kimyasal bileşenlerinin kantitatif profil analizi önemli bir zorluk teşkil etmektedir. Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) parmak izi, karmaşık bir sistemdeki çoğu bileşiğin genel profil özelliklerinden dolayı TCM'nin kalite kontrolünde (QC) önemli bir rol oynar. Ayrıca, TCM'lerin parmak izi analizi, tür kimlik doğrulaması ve kalite değerlendirmesi için iyi bir tekrarlanabilirliğe ve kararlılığa sahiptir ve Dünya Sağlık Örgütü, Çin Devlet Gıda ve İlaç İdaresi (SFDA) ve Avrupa İlaç Değerlendirme Ajansı (EMEA) tarafından kabul edilmektedir. Son zamanlarda, kalite kontrol ve farklı karmaşık doğal kaynakları ayırt etmek için HPLC parmak izini birleştiren bir kemometrik analiz geliştirilmiştir [7]. Ancak, klinik kullanım için daha önemli olan aktif bileşen farklılıklarını yansıtamadığı için TCM'lerdeki farklılıkları ayırt etmek etkisizdir. Şimdiye kadar, spektrum-antitümör EfektTCM'lerin biyoaktif bileşenlerini başarılı bir şekilde tanımlamak için ilişki yaklaşımları kullanılmıştır [8]. Kemometrik analiz ve spektrum-antitümör etki ilişkisi ile birleştirilmiş HPLC parmak izi, çoklu TCM kaynaklarının farkını daha iyi açıklayacaktır.

Son zamanlarda, Mylabris'in kalitesini belirlemek için kullanılabilecek kantharidin içeriğini belirlemek için bazı yöntemler bildirilmiştir [9]. QC [10-11] için bazı kromatografik parmak baskıları da uygulandı. Yalnızca bir çalışmada, HPLC'ye dayalı Mylabris'in suda çözünür bileşiklerinin gradyan elüsyonunu içeren bir yöntem kullanıldı. Bu arada, sadece on numune kullanıldı ve MC numunesi yok [12]. Bildiğimiz kadarıyla, kimyasal bileşim ve aktiviteye dayalı olarak MP ve MC'yi ayırt etmek daha önce çalışılmamıştır.

Bu çalışma, HPLC parmak izi ile kemometrik analiz ve spektrum-antitümörEfektMylabris'in QC'si için bir temel sağlayacak olan ilişki. Bu yöntem, diğer TCM'lerin QC işaretçisini belirlemek için de uygulanabilir.

Malzemeler ve yöntemler

Toplamda 20 parti Mylabris phalerata Pallas (MP) ve Mylabris cichorii Linnaeus (MC) Çin'in farklı illerinden toplandı (Tablo 1) ve profesörümüz Xiao-Fei Li tarafından tanımlandı. Kupon örnekleri laboratuvarlarımızda saklandı.

Referans standart sitozin, üridin, guanozin ve adenosin, ChengduPush Biotechnology Co., Ltd.'den (Chengdu, Çin) satın alındı. HPLC dereceli asetonitril ve metanol Thermofisher Scientific'ten (Fairlawn, NJ, ABD) satın alındı. Çalışma boyunca Watson'ın saf suyu kullanıldı. Diğer kimyasallar ve çözücüler analitik kalitedeydi ve Aladdin Reaktifi (Şangay, Çin), Chengdu Kelong Reaktifi (Chengdu, Çin) ve Sinopharm Chemical Reaktifi (Pekin, Çin)'den elde edildi.

Cihaz ve kromatografik koşullar

HPLC analizi, parmak izi için Phenomenex Synergy Polar-RP80 (4.6 mm × 250 mm, 5 um) üzerinde 30 derecede Agilent 1260 Infinity HPLC sistemi kullanılarak gerçekleştirildi. Ayırıcılar A (su/glasiyal asetik asit, 100:1, v/v) ve B (metanol) ile lineer gradyan elüsyonu ayırma için kullanıldı. Gradyan programı şu şekilde geliştirilmiştir: 0-1 dak, 3.0-4 yüzde 0,6 B; 1-9 dk, 4.6-6.8 yüzde B; 9-25 dk, 6.8-51.0 yüzde B; 25-30 dak, 51.0-100 yüzde . Mobil fazın akış hızı 1.0 mL/dk idi. Kromatogram 254 nm'de izlendi. 15 dakikalık bir dengeleme periyodundan sonra, enjeksiyon için 10 μL numune kullanıldı.

örnek hazırlama

Kurutulmuş numuneler toz halinde ezildi ve her bir toz haline getirilmiş numunenin 2.5 g'ı, her seferinde 1.5 saat boyunca geri akış yoluyla 50 mL yüzde 75 etanol ile iki kez özümlendi. Ekstrakte edilen numune karıştırıldı ve azaltılmış basınç altında 20 mL'ye konsantre edildi. Karışım daha sonra 80 mL su ile 4 derece altında 24 saat çöktürüldü. Daha sonra ekstrakt, süpernatantı ayırmak için 3000 g min-1 10 dakika santrifüjlendi. Süpernatan, azaltılmış basınç altında 25 mL'ye konsantre edildi. Son olarak, süpernatan, HPLC analizinden önce 0.22 um'lik bir Millipore filminden süzüldü.

Metodoloji doğrulama

HPLC yöntemi kesinlik, tekrarlanabilirlik ve stabilite (0 sa, 2 sa, 4 sa, 8 sa, 12 sa, 24 sa) için doğrulandı. Doğrulama, tutma süresine (RT) ve tepe alanına (PA) dayalı olarak tahmin edilmiştir. Son olarak, birden fazla bileşiğin entegre kimyasal özelliklerini tanımlamak için 20 parti Mylabris'in kimyasal parmak izleri oluşturuldu. Analiz için kimyasal parmak izi üzerinde bazı kemometrik teknikler tanıtıldı.

Örüntü tanıma analizi

Pik alanlarının iki türü arasındaki farklar, eşleştirilmemiş Student t-testi kullanılarak istatistiksel anlamlılık açısından değerlendirildi. 0'dan küçük bir p değeri.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. Klasik bir denetimsiz yöntem olarak, temel bileşen analizi (PCA), istatistiksel veri analizi için yaygın olarak uygulanır. Birçok değişken kullanmak yerine, PCA çok fazla bilgi kaybetmeden az sayıda PC alır ve daha sonra gözlemlerin serbest ayrılması için puan grafikleri görselleştirilir. Bu çalışmada, iki Mylabris türü arasındaki ayrımı bulmak için SIMCA-P plus 14.0 yazılımı (Umetrics, Umea, İsveç) kullanılarak HPLC parmak izlerindeki her bileşenin normalleştirilmiş tepe alanlarında PCA gerçekleştirilmiştir.

İki Mylabris türü arasında daha fazla tercih edilen ayrım için, HPLC parmak izlerinde her bir bileşenin normalleştirilmiş pik alanlarındaki farklılıkları analiz etmek için denetimli bir ortogonal kısmi en küçük kareler diskriminant analizi (OPLS-DA) yöntemi uygulandı. VIP değeri, her X değişkeninin modele göreli katkısını yansıtan OPLS ağırlıklarının karelerinin ağırlıklı toplamıdır. OPLS-DA analizinden elde edilen puan grafiklerinde örneklerin ayrılmasında S-plot ile birlikte VIP > 1 olan değişkenlerin etkili olduğu düşünülmüştür. Daha sonra ayrım için karakteristik kimyasal belirteçler elde edildi.

Spektrum-antitümör etki ilişkisi analizi

keşfetmek içinanti-tümörParmak izi verileriyle entegre edilen Mylabris örnekleri için tepe alanını etkiler ve iki tür arasındaki farkları, parmak izi tepe noktası ve parmak izi tepe noktası arasındaki korelasyonu karşılaştırır.anti-tümöretkileri araştırıldı. Gri ilişkisel analizi ve çok değişkenli doğrusal regresyon analizini (MLRA) birleştiren iki yöntem SPSS19.0 (IBM, ABD) ve GM6.0 soft (Grey Systems Theory Institution, NUAA, Çin) tarafından uygulandı. buanti-tümörtest yayınlanmış yöntemlerimiz ile gerçekleştirilmiştir [12], insan hepatoselüler karsinoma hücre hattı HepG2 hücreleri, yüzde 10 fetal sığır serumu ile takviye edilmiş RPMI1640 ortamında tutulmuştur. Hücreler, 37°C'de yüzde 5 CO2 içeren nemli bir atmosferde büyütüldü. proliferasyonunu değerlendirmek için SRB yöntemi kullanıldı.anti-tümörfaaliyetlersonra HepG2 hücrelerinin IC50'si hesaplandı, son olarak IC50 ve normalize edilmiş tepe alanları kemometrik analiz için kullanıldı. Daha sonra Mylabris'in karakteristik aktivite belirteçleri elde edildi.

Sonuçlar ve tartışma

Ekstraksiyon koşullarının optimizasyonu

Mylabris'ten suda çözünen bileşiklerin yeterli ekstraksiyonu için ekstraksiyon sistemi optimize edildi. Ultrasonik ve geri akış, bu bileşiklerin geri akışla optimal olarak ekstrakte edilebileceğini gösterdi.

HPLC yönteminin optimizasyonu

Bitkinin genel özelliğini tanımlamak için maksimum kromatografik tepe noktaları elde etmek için kromatografik kolonun bileşimi, mobil faz ve algılama dalga boyları (200, 254, 265 ve 278 nm) araştırıldı. Sonuçlar Phenimenex Synergy Polar-RP80 kolonu, su (yüzde 1 buzlu asetik asit içeren) ve metanol ve 254 nm'nin Mylabris HPLC analizi için en iyi koşullar olduğunu gösterdi (Şekil 1), 4 standart maddenin yapısı Şekil 2'de gösterilmektedir. .

Yöntem geçerliliği

Bu çalışmada, 14 tepe noktası iyi bir şekilde ayrılmış ve "ortak tepe noktaları" olarak kullanılmıştır. Kesinlik, tekrarlanabilirlik ve stabilite, alıkonma süresine (RT) ve tepe alanına (PA) dayanmaktadır. Kesinlik (n=6) için RT ve PA'nın RSD değerleri sırasıyla yüzde 0.2 ve yüzde 4'ü geçmedi; Tekrarlanabilirlik (n=6) için RA ve PA'nın RSD değerleri sırasıyla 0,2 ve yüzde 4'ün altındaydı ve kararlılık için RSD değerleri (0-24 h) {'den düşüktü. {10}}, sırasıyla yüzde 4 ve yüzde 5, bu da örneklerin 24 saat içinde stabil olduğunu gösterdi. Bu sonuçlar, çalışılan numunelerin ve HPLC yönteminin kalitesinin stabil ve iyi kontrollü olduğunu göstermiştir.

Parmak izi benzerlik değerlendirmesi

The fingerprint similarity analysis was used to evaluate the similarity of HPLC peaks. The similarities of MP and MC were calculated by the reference HPLC fingerprint, respectively. As shown in Table 1, except for two MP samples (from Guizhou2 and Guizhou5) with lower similarities (0.880 and 0.920, respectively), other samples of MP were >0.930. The similarities of MC samples were >Benzerlikleri sırasıyla 0.888 ve 0.887 olan MC örnekleri (Guizhou2 ve Guizhou4'ten) hariç {{0}}.921. Bu veriler, bir tür içinde Mylabris'in kalitesinin sabit olduğunu göstermiştir. Ancak, referans HPLC parmak izi ile karşılaştırıldığında yalnızca üç MP örneğinin benzerlikleri > 0.930; ve referans HPLC parmak izi ile karşılaştırıldığında sadece iki MC örneğinin benzerlikleri > 0.921 idi. Bu sonuçlar, iki Mylabris türünün bazı pik alanlarında önemli farklılıklar olduğunu göstermiştir.

Örüntü tanıma analizi ile MP ve MC'nin ayrımı

For global analysis of the difference, PCA was used to find the quality variation of the samples from the two species of Mylabris. Figure 3 shows that the two-dimensional PCA model was constructed by the first two PCs, which included approximately 61.8% of the original data. The score plot showed that the MP and MC samples could not be separated by PCA. To understand the differences between MP and MC, an OPLS-DA model was established. As shown in Figure 4, the Mylabris samples could be classified into two groups with R2X=0.502, R2Y=0.492, and Q2=0.0769 as compared to the PCA model. These results showed that the OPLS-DA model was more suitable than the PCA model for distinct separation of the test samples based on their different components. From the S-plot of OPLS-DA, peak markers including peaks 1, 2, 4, 7, 9, 12, and 14 between MP and MC could be found (Figure 5). Based on VIP>1, pikler 1, 2, 4, 7, 9, 12 ve 14, iki türü ayırt etmede en önemli değişkenler olabilir (Şekil 6). Pik grubu (1, 2, 4, 7, 9, 12 ve 14), karakteristik kimyasal belirteçler olarak MP ve MC'yi ayırt etmede hayati bir rol oynayabilir.

Gri ilişkisel analizle spektrum-etki ilişkisi

To further evaluate the relationship between the variations of normalized peak area and IC50, grey relational analysis (GRA) was performed. The influence rank by normalized peak area was P13>P14>P3>P2>P12>P4>P9>P1>P10>P7>P6>P8>P5> P11 as shown in Table 2. The results indicated that the top-6 peak including peaks 13, 14, 12, 2, 3, and 4 were the main influencing factors for the antitumor effect based on the standard of Relative Grey correlative degree (RGCE) >0.75.

MLRA ile spektrum-etki ilişkisi

MLRA modeli, iki veya daha fazla değişken arasındaki ilişki karmaşıklığını ve aşağıdaki formülle oluşturulan bir yanıtın çıkarılması için en yaygın modelleme yöntemidir.

Y, tahmini değerdir ve yanıtı temsil eder; Xn bağımsız bir değişkendir, b{{0}} kesişme noktasıdır ve bn, Xn için regresyon katsayısıdır. Bu çalışmada, HPLC parmak izlerindeki tepe alanlarının değerleri ile anti-HepG2'nin IC50'si arasındaki parmak izi-etkililik ilişkisini kurmak ve ardından olası antitümör bileşenlerini bulmak için MLRA uygulandı. Verilerin sıralanması, Y (IC50) ve X (PA) arasındaki korelasyonu araştırmak için uygun olmayan ortak bir MLRA modeli tarafından bulundu. Parmak izi-etki ilişkisini incelemek için bir PCA MLRA modeli kullanıldı ve kümülatif varyans katkı oranına sahip ilk altı PC: analiz için yüzde 91.068 seçildi. Son olarak, SPSS çıktısına ve PC'lere göre aşağıdaki denklem kuruldu: IC50=1.115864 artı （ 1.87268PA1- 699.722PA2 artı 25.7138PA3 - 24.1528PA4 artı 7.22878PA{{ 23}}.2114PA6 artı 2.95283PA7- 15.5305PA8 artı 13.0297PA9 artı 22.5683PA10 - 10.3462PA11 artı 123.762PA12 artı 31.0428PA13 - 10.702PA14) ×10-6. (R 0.682, P < 0.05="">

İki Mylabris Türünün Entegre Analizi

Deney, HPLC parmak izinin Mylabris'in kimyasal özelliklerini yansıtmak için kullanılabileceğini gösterdi. MC ve MP arasındaki farkı bulmak için benzerlik algoritmaları, PCA ve OPLS-DA uygulandı. Pik grubu (1, 2, 4, 7, 9, 12 ve 14), karakteristik kimyasal belirteçler olarak tanımlandı.

Ek olarak, hem GRA hem de MLRA, daha fazla ayrım yapmak için tatmin edici bir yöntem olduğunu kanıtladı. Mylabris'in aktivite belirteçleri olarak GRA ve MLRA analiz sonuçları, tepe noktaları 2, 4 ve 14'ün entegre edilmesi, Mylabris'in farmakodinamik materyal temeli olabilecek anti-tümör etkisinden sorumlu olmalıdır.

Önemli diferansiyel belirteçler, karakteristik kimyasal ve aktivite belirteci özelliklerine sahip pik için tanımlandı. Bu nedenle, spektrum-etki ilişkisi analizinden sonra HPLC parmak izlerinde MC ve MP arasında, 2 (sitozin), 4 (bilinmeyen) ve 14 (bilinmeyen) tepe noktaları, Şekil 7'de gösterildiği gibi MP ve MC arasındaki farklar için önemli diferansiyel belirteçlerdi.

Çözüm

Sonuç olarak, bu araştırmada, MP ve MC'nin kimyasal parmak izi için bir HPLC yöntemi önerilmiştir. HPLC parmak izi, PCA ve GAS ve MLRA gibi spektrum-etki ilişkisi analizini birleştirerek, iki yakın Mylabris türünün kimyasal ve farmakolojik özellikleri ayırt edilebilir. Bu, önemli diferansiyel belirteçler olarak 2(sitozin), 4 (bilinmiyor) ve 14 (bilinmiyor) piklerinden gelen bileşiklerin MP ve MC'yi ayırt etmede baskın roller oynadığını gösterdi. Pik 4 ve 14'ün yapısı diğer teknoloji ile tanımlanmalıdır. İstatistiksel, kemometrik analiz ve spektrum-etki ilişkisi analizi ile birleştirilmiş HPLC parmak izi yönteminin, belirteç bileşenlerini keşfetmede veya QC'nin desteklenmesinde etkili olduğu gösterildi.bitkisel ilaçlar.

Referanslar

1 Wang GS. Mylabris'in antik Çin'deki tıbbi kullanımları ve son çalışmalar. J Ethnopharmacol 1989, 26(2): 147-162.

2. Lin YS, Lia YH, Peng ZP, et al. Cantharidin içeriğinin belirlenmesi ve insan hepatoma HepG2 hücreleri üzerindeki inhibitör etkisi. Biomed Res-India 2016, 27(2): 533-536.

3. Xu MZ, Lee WS, Kim MJ, et al. Asil-CoA: Mylabris phalerate Pallas'tan izole edilen yağ asidi amidlerinin kolesterol asiltransferaz inhibitör aktiviteleri. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14(16): 4277-4280.

4. Gün RM, Harbord M, Forbes A, et al. Cantharidin kabarcıkları: İnsanlarda iltihaplanma bölgelerinde lökosit kaçakçılığı ve sitokin üretimini araştırmak için bir teknik. J Immunol Methods 2001, 257(1-2): 213-220.

5. Mo RY, Sun NX, Peng R. Farklı coğrafi popülasyonlarda yetişkin Mylabris phalerata'nın tercih edilen yiyecekleri üzerine çalışma. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2014, 39(22): 4293-4296.

6. Wang XM, Cheng XS, Li XF. Meloidae'nin Biyolojik Özellikleri ve Yapay Beslenmesi. Guizhou Tarım Bilimleri (Çin) 2007, 35(2): 140-142.

7. Yang Y, Zhang J, Jin H, et al. UHPLC-UV-MS Kullanarak Altı Yabani Paris Türünü Değerlendirmek için Uygulanan Parmak İzi Teknolojisi ve Kemometrik Analiz ile Kombine Kantitatif Analiz. J Anal Yöntemler Kimya 2016: e3182796.

8. Liu Y, Liu Z, Sun G, et al. Bileşik Bizmut Alüminat tabletlerinin kalite tutarlılığının, beş bileşiğin eşzamanlı tespiti ile birleştirilen basit bir nicel oranlı parmak izi yöntemiyle izlenmesi ve değerlendirilmesi ve antioksidan aktivitelerle ilişkilendirilmesi. Plos Bir 2015; 10: e0118223.

9. Mehdinia A, Asiabi M, Cabbari A, et al. Sahte kabarcıklı böceklerde (Coleoptera: Oedemeridae) üst boşluk katı faz mikro ekstraksiyonu ve gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi ile cantharidin analizi. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2011, 879(27): 2897-2901.

10. Li XM, Xiao JS. Mylabris phalerata'nın GC parmak izleri üzerinde çalışma. Çin Hastane Eczacılığı Dergisi (Çin) 2010; 30(2): 116-119.

11. Luo CX, Sun, GX ve Shi XF. HPCE tarafından Mylabris'in dijitalleştirilmiş parmak izleri. Orta Güney Eczanesi (Çin) 2008; 6(2): 230-235.

12. Sun GX, Luo CX ve Wang, Z. Mylabris'in Sayısallaştırılmış HPLC parmak izleri üzerinde çalışma. Çin Farmasötik Analiz Dergisi (Çin) 2008;28(7): 1031-1036.

13. Guo K, Li XF, Yan R, et al. Guizhou Eyaleti ve çevresindeki bölgelerden elde edilen cantharidin'in anti-insan hepatoselüler karsinom HepG 2 hücreleri aktivitesi. Modern Tıp ve Sağlık Dergisi (Çene) 2016; 32(5): 648-650.