Cistanche Salsa Hücre Kültüründe Feniletanoid Glikozit Biyosentezinde Yer Alan Hidrojen Peroksite Duyarlı EST'lerin Tanımlanması

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

J.CHEN ve diğerleri

Soyut
Hidrojen peroksit, bitkilerde ikincil metabolit biyosentezini indükleyebilen etkili bir abiyotik elisitördür. Tuza dayanıklı bir tıbbi bitkinin hücre süspansiyon kültüründecistancheSalsa, biyoaktif bileşenlerin üretimifeniletanoidglikozitler(PeGs) H2O2 tedavisinden sonra arttı. PeG'lerle ilgili genleri tanımlamak için(feniletanoidglikozitler)H2O2'den etkilenen biyosentez, bircistancheSalsahücre hattı ve 105 eksprese edilmiş dizi etiketi (EST) ve 85 gen tanımladı. EST kütüphanesi fonksiyonel açıklama ve gen ontoloji analizleri, çeşitli stres tepkileri, ikincil metabolitlerin biyosentezi ve transkripsiyonel düzenleme ile ilgili genleri gösterdi. Bunlar arasında PeG'lerle ilgili iki gen belirledik.(feniletanoidglikozitler)biyosentez yolu (4-kumarat koenzim A ligaz ve sinnamat 4-hidroksilaz) ve iki WRKY tipi transkripsiyon faktörü. H2O2 işleminden sonra seçilen genlerin ifadeleri RT-qPCR ile analiz edildi. PeG'nin erken artan transkripsiyonu(feniletanoidglikozitler)tedaviden sonra biyosentez yolu genleri, H2O2'nin PeG'leri indüklediğini ortaya çıkardı(feniletanoidglikozitler)anahtar genlerinin yukarı regülasyonu yoluyla biyosentezi.
Ek anahtar kelimeler: sinnamat-4-hidroksilaz, 4-kumarat koenzim A ligaz, baskılayıcı çıkarmalı hibridizasyon.cistancheSalsa. feniletanoidglikozitler.

giriiş

cistancheSalsaHaloxylos ammodendrun kökünde çok yıllık bir bitki parazitidir ve batı Çin'in çöl bölgesinde yetişir. Asırlardır,cistanchetürleri geleneksel bitkisel ilaç olarak kullanılmıştır (Wang ve ark. 2012). Biyoaktif bileşenlerfeniletanoidglikozitler(PeG'ler) reaktif oksijen türlerinin (ROS) temizlenmesi, radyasyondan korunma, bağışıklık geliştirme ve yaşlanmayı önleme üzerinde dikkate değer bir etkiye sahiptir (Nan ve ark. 2013). PeG'ler(feniletanoidglikozitler)biyosentezcistanchefenilalanin'den başlatılır (Şekil 1 Ek) ve sentezlenen kafeik asit ayrıca çeşitli PeG'ler oluşturmak üzere glikosile edilir(feniletanoidglikozitler)(Wang ve ark. 2012). Üç ana PeG(feniletanoidglikozitler), echinacoside, acteoside ve 2'-acetylacteoside, en aktif bileşenler olarak kabul edilir.cistanche(Kobayashi ve diğerleri, 1984). İçeriklerini zenginleştirmek içincistanchehücre kültürü, kitosan, putresin, Ag plus ve ozmotik stres dahil olmak üzere çeşitli elisitörler test edilmiştir (Ouyang ve diğerleri 2005a,b, Cheng ve diğerleri 2005, 2006, Liu ve diğerleri 2007, Liu ve Cheng 2008). Bununla birlikte, PeG'lerde yer alan genler(feniletanoidglikozitler)biyosentezcistanche, başlıca fenilalanin metabolizma yolu genleri nadiren tanımlanmıştır. Sadece fenilalanin amonyak liyazını (PAL) kodlayan bir gen, yakın zamanda Cistanche Deserticola'da tanımlanmıştır (Hu ve ark. 2011). Diğer genler, örneğin, sinnamatın kumarik aside dönüşümünü katalize edebilen sinnamat-4-hidroksilaz (C4H) ve lignin ve flavanoidler için gerekli bir gen olan 4-kumarat koenzim A ligazı (4CL) kodlayan diğer genler biyosentezlerde bulunamamıştır.cistanche.
hücre kültürünü kullandık.cistancheSalsaPeG'leri incelemek(feniletanoidglikozitler)biyosentez ve ilgili genlerin ifadesi. Ayrıca etkili bir elisitör H2O2'nin PeG'ler üzerindeki etkisini de araştırdık.(feniletanoidglikozitler)biyosentez. Ayrıca, PeG'lerde yer alan erken yanıt veren genleri bulmak için(feniletanoidglikozitler)biyosentezde, H2O2-yanıt veren genlerden oluşan bir cDNA kitaplığı oluşturmak için bastırma çıkarmalı hibridizasyon (SSH) gerçekleştirdik.

Şekil 1. H2O2 işleminden sonra RT-qPCR ile belirlenen nispi gen ekspresyonu. CsWRKY1 - WRKY transkripsiyon faktörü (Contig07), CsC4H1 - sinnamat 4-hidroksilaz (Contig09), Cs4CL1 - 4-kumarat: ligaz (Contig03), CsHSP1 - ısı şoku proteini 70 kDa (Contig 01) ve CsSOD1 - süperoksit dismutaz (Contig16). Hücreler, 2 saat boyunca sıvı bir ortamda 80 ug dm-3 H2O2 ile muamele edildi ve ifadeler, suyla muamele edilmiş bir kontrol ile karşılaştırıldı. Artı anlamına gelir - üç biyolojik tekrarın SD'si; * - P < 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Malzemeler ve yöntemler

CS2001 hücre çizgisi, bitkinin taç yapraklarından oluşturulmuştur.cistancheSalsa(CA Mey.) Beck, Neimenggu eyaletinde toplandı ve alt kültürlendi. Kültür yöntemi, daha önce yayınlanmış bir protokole benzerdi (Liu ve ark. 2007). Genel olarak, alt kültür için katı bir Murashige ve Skoog (1962; MS) ortamı ve PeG'ler için sıvı bir ortam kullanıldı.(feniletanoidglikozitler)biyosentez (30 g dm-3 glikoz ve 2.0 mg dm-3 indol-3-asetik asit ile desteklenmiş modifiye MS ortamıydı). H2O2 tedavisi için, hızlı bir büyüme döneminde, genellikle katı ortamda alt kültürlendikten 20 ila 30 gün sonra 5.0 ± 0.2 g hücre, 250 cm3'lük bir Erlenmeyer şişesi içinde 50 cm3'lük bir sıvı ortama aşılandı. ve farklı H2O2 konsantrasyonları olsun veya olmasın karanlıkta kültürlendi. PeG'ler(feniletanoidglikozitler)H2O2 ile 10 gün indüksiyondan sonraki içerik, metanol gradyanlı elüsyon ile ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisine dayalı olarak daha önce yayınlanmış bir metoda göre (Liu ve diğerleri 2007) analiz edildi.

H2O2 işleminden 2 saat sonra hücreler, bir Büchner hunisi kullanılarak filtre kağıdı ile ortamdan toplandı ve daha sonra sıvı nitrojen içinde donduruldu ve toz haline getirildi. Her 2 g hücre tozu, 1 cm3 2-merkaptoetanol, 1 cm3 200 g dm{{10}} sarkosil karışımı kullanılarak parçalandı, ve 8 cm3 bir GTC tamponu (5 M guanidinyum izotiyosiyanat, 62.5 mM Tris-HCl, pH 8.0, 6.25 mM EDTA, pH 8.0, 5 mM tioüre ve 10 mM ditiotreitol). Hücreler daha sonra 15 dakika buz üzerinde inkübe edildi, ardından 1/3 hacim 8.5 M CH3COOK, pH 6.0 eklendi ve hücreler buz üzerinde 15 dakika inkübe edildi ve ardından 15 dakika 15 000 g'de santrifüjlendi. . Süpernatan, toplam RNA'yı çökeltmek için eşit hacimde izopropanole ilave edildi. Toplam RNA, üreticinin talimatlarına göre bir RNeasy mini kiti (Qiagen, Hilden, ABD) ile daha da saflaştırıldı. Messenger RNA, bir Oligotex mRNA midi kiti (Qiagen) kullanılarak toplam RNA'dan izole edildi.

feniletanoidglikozitleriçindecistancheSalsa

Kontrolden bir SSH kitaplığı oluşturuldu ve bir PCR-seçimli cDNA çıkarma kiti (Clontech, Mountain View, ABD) kullanılarak ortaya çıkarıldıktan 2 saat sonra yüzde 30 H2O2-ortaya çıkarılan hücre numuneleri. Kütüphane yapımı için ürünler, bir jel saflaştırma kiti (Qiagen) kullanılarak ayrı ayrı saflaştırıldı ve bir TA klonlama kiti (Tiangen, Beijing, Çin) kullanılarak bir pGEM vektörüne klonlandı. Bağımsız klonlardan plazmitler izole edildi ve T7 primeri kullanılarak dizildi. Kitaplıktan tüm ifade edilen dizi etiketi (EST) dizileri (vektör dizileri çıkarılmış olarak), CAP3 (//doua.prabi.fr/software/cap3) ile bitişik birleştirme için kullanıldı. EST'ler, contig'ler ve singleton'lar olarak gruplandırıldı; NCBI'deki BLASTx programı kullanılarak homoloji araştırması için kullanıldılar (/blast.ncbi. nlm.nih.gov). Daha sonra dizilere açıklama eklendi, analiz edildi ve Blast2GO (//www.blast2go.com) kullanılarak gen ontolojisi (GO) terimlerine göre sınıflandırıldı.
Gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR), Bustin ve arkadaşlarına göre yapıldı. (2009). cDNA örnekleri, 0.5 ug toplam RNA'dan bir PrimeScript RT reaktif kiti (Takara, Dalian, Çin) kullanılarak sentezlendi. RT-qPCR, üç teknik kopya ile bir ABI 7300 gerçek zamanlı PCR sistemi (Applied Biosystems, Foster City, ABD) üzerinde SYBR Premix Ex Taq II ve ROX plus kitleri (Takara) kullanılarak gerçekleştirildi. Primerler, Takara tarafından sağlanan talimata göre çevrimiçi Primer3 yazılımı kullanılarak tasarlandı; Bu çalışmada kullanılan primerler Tablo 1 Ek'te listelenmiştir. Gen ifadeleri, ifadesi tüm numunelerde stabil olan 18S RNA'ya normalleştirildi.

Sonuçlar R versiyonu 3.1.1 kullanılarak analiz edildi, farklılıkların önemi Student t-testi ile doğrulandı.

Sonuçlar

Hidrojen peroksit kaynaklı üç ana PeG'nin hepsinin biyosentezini(feniletanoidglikozitler)içindecistancheSalsasüspansiyon hücreleri (Tablo 1) ancak hücre büyümesi üzerinde belirgin bir etkisi yoktur (Şekil S2). Ekinakozit içeriği 10 ug dm-3 H2O2 işleminden (P < 0.05)="" sonra="" zaten="" arttı,="" 20="" ug="" dm'den="" sonra="" daha="" yüksek="" bir="" artış="" kaydedildi="" -3="" h2o2="" tedavisi="" (p="">< 0.01)="" ve="" en="" yüksek="" artış="" 40,="" 80="" ve="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2="" işlemlerinden="" sonraydı.="" acteoside="" için="" benzer="" sonuçlar="" gösterilmiştir,="" ancak="" içeriği="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" işleminden="" sonra="" zirve="" yapmıştır.="" 2'-asetillakteozid="" biyosentezi="" h2o2="" tedavisine="" daha="" az="" duyarlıydı;="" içeriğinde="" önemli="" bir="" artış="" (p="">< 0.05),="" 40="" ug="" dm-3="" üzerindeki="" h2o2="" konsantrasyonlarındaydı.="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2="" işleminden="" sonra,="" üç="" ana="" peg'nin="" tümünün="">(feniletanoidglikozitler)kontrole göre önemli ölçüde arttı (P < 0.01).="" bu="" nedenle,="" bu="" konsantrasyon="" daha="" sonraki="" deneylerde="">
H2O2 tarafından yukarı regüle edilen erken yanıt veren genler için zenginleştirilmiş bir kitaplık oluşturmak için cDNA'yı kullandık.cistancheSalsa2 saat boyunca 80 ug dm-3 H2O2 ile muamele edilmiş süspansiyon hücreleri. SSH kitaplığındaki tek geçişli dizileme 129 rekombinant klon, vektör dizisi dışlamasından sonra 105 temiz EST verdi. Bu açık EST'ler, CAP3 tarafından montaj için kullanıldı ve 18 contig ve 67 singleton üretildi (Tablo 2). Böylece bu kütüphanede 85 gen izole edilmiştir. Temiz 105 EST'nin ortalama uzunluğu, dizi benzerliğine dayalı fonksiyonel sınıflandırma için yeterli olan 527 bp idi.

feniletanoidglikozitleriçindecistancheSalsa

Kütüphanede elde edilen 85 genin tümü, dizi benzerliği için GenBank yedekli olmayan protein veritabanına karşı BLASTx tarafından alındı ​​(E-değeri 0.001'den küçük veya eşittir). Yirmi bir gen, veritabanında isabet göstermedi;cistancheSalsa. BLASThits ile sonuçlar, daha fazla GO ve KEGG yolu zenginleştirme analizleri için Blast2GO yazılımına aktarıldı. BLAST isabetlerine sahip 64 genden 50'si, diğer türlerden gelen homolog genlerin tanımına göre açıklanmıştır. Açıklamalı genler, BLAST isabetlerinin açıklamasına göre adlandırıldı. GO analizi (Şekil 3 Ek), bu 50 gen arasında, uyaranlara verilen yanıtlarda yer alan 14 genin ve metabolik süreçlerle ilgili 30'dan fazla genin bulunduğunu göstermektedir (Tablo 1 ve 2). Bu genler arasında, beklendiği gibi iki PeG biyosentez yolu gen homologu izole edildi: 4-kumarat koenzim A ligaz (Cs4CL1: Contig03 olarak adlandırılır) ve sinnamat 4-hidroksilaz (CsC4H1: Contig14 olarak adlandırılır). Ayrıca, H2O2 işleminden sonra kütüphaneden genlerin indüklenmiş ekspresyonlarını doğrulamak için RT-qPCR gerçekleştirildi.

SSH kitaplığından tanımlanan temel genlerin H2O2 tedavisine yanıt verdiğini doğrulamak için iki PeG'nin ifadeleri(feniletanoidglikozitler)biyosentez yolu ile ilgili genler (Cs4CL1, CsC4H1), iki ROS kaynaklı gen (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) ve bir WRKY ailesi transkripsiyon faktörü benzeri gen (CsWRKY1: Contig 07) tedaviden sonra RT-qPCR ile ölçüldü. H2O2 ile (Şekil 1). CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 ve CsWRKY1 ifadeleri, H2O2'den 2 saat sonra sırasıyla 15-kat, 3-kat, 45-kat ve 4-kattan fazla yukarı regüle edildi tedavi. CsHSP1'in ifadesi, H2O2 işleminden sonra sadece 1.8 kat değişti.
H2O2 işleminden sonra CsWRKY1, CsC4H1 ve Cs4CL1 ifadelerinin zaman süreci, RT-qPCR ile ayrıca analiz edildi (Şekil 2). 16-h işleminden sonra CsC4H1 ve Cs4CL1 ifadeleri yüksek oranda arttı (sırasıyla 80-kat ve 50-kattan fazla) ve 32 saat sonra aşağı regüle edildi. CsWRKY1'in ifadesi 4. saatte 20-kattan fazla yukarı regüle edildi ve daha sonra 8 saat sonra azaldı (Şekil 2).

Şekil 2. 80 ug dm-3 H2O2 ile muameleden sonra farklı zamanlarda CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) ve Cs4CL1 (C)'nin bağıl ifadesi. İfadeler bir kontrole normalleştirildi; (su ile muamele edilir). Artı anlamına gelir - üç biyolojik tekrarın SD'si; * - P < 0.05,="" **="" -="" p=""><>

Tartışma

Hidrojen peroksit, bitkiler üzerinde çeşitli etkiler gösteren iyi bilinen bir bitki göstericidir. ROS gibi, süperoksit dismutaz, katalaz, peroksidazlar, vb.'den oluşan ROS temizleme sistemini indükleyebilir ve tuz, ozmotik ve dehidrasyonun aşağı akış sinyali olarak hizmet eder.

(Wi ve ark. 2006, Kar 2011, Furlan ve ark. 2013, Sathiyaraj ve ark. 2014). Bitkilerde H2O2 oluşumuna, indüklenmiş ikincil metabolizma biyosentezinin eşlik ettiği öne sürülmüştür.cistancheSalsahücre kültürü. Beklendiği gibi, sonuçlarımız PeG'lerin(feniletanoidglikozitler)biyosentezsalata sosuH2O2 işleminden sonra hücre kültürü indüklendi (Tablo 1). Üç ana PeG'nin içeriği(feniletanoidglikozitler)PeG biyosentezindeki önemli rolünü gösteren H2O2 işleminden sonra arttı. SSH kitaplığında zenginleştirilmiş genler, bunun PeG'ler üzerindeki etkisini daha da ileri sürdü.(feniletanoidglikozitler)biyosentez indüksiyonusalata sosu.

Askorbat peroksidaz (CISTH069, Karyotou ve Donaldson 2005), h-kinon oksidoredüktaz (CISTH125, Bello ve ark. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah ve ark. 2014) gibi bilinen birçok H2O2-yanıt veren gen, ve hastalık direnci yanıt genleri (Contig10, Nanda, ve diğerleri, 2010), SSH kitaplığında zenginleştirildi (Tablo 3, Tablo 2 Ek). H2O2 işleminden sonra indüklenmiş bir ekspresyona sahip bu tipik ROS'a yanıt veren genlerin bazıları, burada nitelikli bir SSH kitaplığının oluşturulduğuna işaret eden RT-qPCR (Şekil 1 ve 2) ile daha da doğrulandı. Bu kütüphanede iki PeG biyosentez yolu geni, CsC4H1 ve Cs4CL1 de bulundu ve bu iki gen ifadesi, zamana bağlı bir şekilde H2O2 tedavisi ile indüklendi (Şekil 2). H2O2 tedavisinin PeG'leri indüklediğini öne sürüyor(feniletanoidglikozitler)PAL yolu genlerinin düzenlenmesi yoluyla genetik düzeyde biyosentez. Ancak, PAL ve diğer aşağı akış PeG biyosentez genleri (Wang ve diğerleri, 2012) SSH kitaplığında tanımlanmamıştır; bunun nedeni kitaplığın yeterince sıralanmamış olması olabilir. CsC4H1 ve Cs4CL1 ile indüklenen ifadeler ile H2O2 işleminden sonra artan PeGs biyosentezi arasındaki ilişki, daha ileri analizlerle açıklığa kavuşturulmalıdır.

H2O2 tedavisi tarafından indüklenen PAL yolu genlerine ek olarak, SSH kütüphanesinde (Tablo 3 ve Tablo 2 Ek) iki WRKY ailesi transkripsiyon faktörü (CsWRKY1, CsWRKY2) bulundu ve CsWRKY1 kaynaklı bir ifade RT-qPCR ile doğrulandı. . İfadesi, iki PAL yolu geninin, Cs4CL1 ve CsC4H1'in ifadesinden daha önce H2O2 tedavisine yanıt verdi (Şekil 2). Önceki çalışmalardan, pirinçte bazı WRKY transkripsiyon faktörlerinin ve PAL yolu genlerinin birlikte ekspresyonu gözlemlenmiştir (Gupta ve ark. 2012). Ayrıca, PAL gen ekspresyonu, bir OsWRKY03 aşırı ekspresyon mutantında yukarı regüle edilir (Liu ve diğerleri, 2005). Yukarıda belirtilen iki WRKY ailesi transkripsiyon faktörü, PeG'lerde de rol oynayabilir.(feniletanoidglikozitler)biyosentezcistancheSalsa. İlginç bir şekilde, dehidrasyonla ilişkili EST'ler (CISTH067, CISTH064) SSH kitaplığında bulundu; bu, H2O2 tedavisinin, dehidrasyona yanıt veren genlerin ekspresyonu ile ilişkili olduğunu düşündürebilir.cistancheSalsadiğer bitkilerde gözlendiği gibi (Schmidt ve ark. 2013, Zhou ve ark. 2013). Bir gibberellin (GA) sinyalleme ile ilgili gen, gibberellin reseptörü gid1b-benzeri (CISTH092), SSH kitaplığında GA sinyalleme ve H2O2 tedavisinin bağlantısını ima eden tanımlandı.cistancheSalsa, arpada da rapor edilmiştir (Bahin ve ark. 2011). Bununla birlikte, bu genlerin PeG'lerle ilişkili olup olmadığını doğrulamak için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır.(feniletanoidglikozitler)biyosentez. Yukarıda bahsedilen genlerin dışında, burada oluşturulan SSH kütüphanesi ayrıca BLAST isabetleri olan veya olmayan genleri de sunar. C. salsa üzerindeki H2O2 etkisini anlamamızı geliştirir ve ilk olarak PeG biyosentezinde yer alan genlerinin bilgisini sağlar.

Sonuç olarak, H2O2'nin PeG'ler üzerindeki etkisini değerlendirdik.(feniletanoidglikozitler)indüksiyoncistancheSalsahücre kültürü. SSH kitaplığı, H2O2 işleminden sonra oluşturuldu ve seçilen genlerin ifadesi RT-qPCR ile doğrulandı. İki PeG biyosentez yolu ile ilgili gen ve diğer H2O2-yanıt veren genler tanımlandı. Bu bulgular, H2O2-indüklenen PeG'ler hakkındaki anlayışımızı genişletecektir.(feniletanoidglikozitler)biyosentezcistancheSalsamoleküler düzeyde, gen manipülasyonu için bilgi sağlayancistancheSalsaPeG'leri iyileştirmek için hücre kültürleri(feniletanoidglikozitler)üretme.

Kimden: ' Cistanche salsa hücre kültüründe feniletanoid glikozit biyosentezinde yer alan hidrojen peroksite duyarlı EST'lerin tanımlanması'J.CHEN ve ark.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN ve diğerleri. DOI: 10.1007/sn10535-015-0541-y

Referanslar

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Reaktif oksijen türleri ve hormonal sinyal yolları arasındaki karışma, arpada tahıl uyku halini düzenler. - Bitki Hücresi Çevresi. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: Bir ısı şoku proteini (Hsp) indükleyici ürün tarafından üretilen reaktif oksijen türleri, Hsp70 üretimine ve Hsp'ye katkıda bulunur{{1} Artemia franciscana'da patojenik vibriolara karşı aracılı koruyucu bağışıklık. - Dev. Komp. immünol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: HeLa hücrelerinde NAD(P)H: kinon oksidoredüktaz 1'in ifadesi  hidrojen peroksit ve büyüme fazının rolü. - J. biol. Kimya 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: qPCR ve RT-qPCR'nin standardizasyonu. - Genet. Müh. Biyoteknoloji. Haber 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, IW., Liu, CZ:cistancheçölikola hücre süspansiyon kültürleri:feniletanoidglikozitlerbiyosentez ve antioksidan aktivite. - Proses Biyokimyası. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ İyileştirmefeniletanoidglikozitlerbiyosentezcistanchekitosan elisitör ile çölikola hücre süspansiyon kültürleri. - J. Biyoteknoloji. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Absisik asit, su stresiyle indüklenen fıstıkta hidrojen peroksit üretimine aracılık eder. - Biol. Bitki. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: Tek fonksiyonel patlama direnci geni Pi54, pirinçte karmaşık bir savunma mekanizmasını harekete geçirir. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Fenilalanin amonyak-liyaz geninin moleküler karakterizasyonucistancheçölikola. - Mol. Biol. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Bitkilerin su stresine tepkileri: reaktif oksijen türlerinin rolü. - Tesis Sinyal Davranışı 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Askorbat peroksidaz, glioksizomal zarlarda hidrojen peroksit temizleyicisi. - Ark h. Biyokimya. Biyofiz. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.:cistancheherbadır. 4. 2 yeni fenilpropanoid glikozit, cistanoside-C ve cistanoside-D'nin izolasyonu ve yapıları. - Kimya. Eczacılık Boğa. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: Geliştirmefeniletanoidglikozitlerhücre kültürlerinde biyosentezcistancheozmotik stres ile çölikola. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Geliştirilmiş birikimfeniletanoidglikozitlersüspansiyon kültürüne öncü besleme ilecistancheSalsa. - Biyokimya. Müh. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, OsNPR1'in yukarısındaki savunma sinyalleme yolunda işlev gören bir pirinç transkripsiyonel aktivatörü. - Hücre Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Hızlı büyüme ve tütün doku kültürleri ile biyolojik testler için revize edilmiş bir ortam. - Fizyol. Bitki. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Feniletanoidglikozitlerköklerinden anti-inflamatuar aktivitelerlecistancheDeserticola Tarım çölünde yetiştirilir. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Bitki-mikroorganizma erken etkileşimleri sırasında reaktif oksijen türleri. - J. Integr. Bitki Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Gelişmiş üretimfeniletanoid glikozitlerhücre kültürüne öncül besleme ilecistancheçölikola. - Proses Biyokimyası. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Geliştirilmiş üretimfeniletanoidglikozitlerilecistancheelek yükselticili bir dahili döngü hava ikmal biyoreaktöründe kültürlenen çölikola hücreleri. - Enzim Mikrobiol. Teknoloji 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Castilleja tenuiflora köklerinden in vitro haustoryumun anatomik ve histokimyasal karakterizasyonu. - Biol. Bitki. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC Panax ginseng CA Meyer. - Mol. Biol. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1, tuz stresine ilk tepki sırasında reaktif oksijen türüne bağlı sinyalleşmeyi düzenler
pirinçte. - Bitki Hücresi 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:cistancheDeserticola YC Ma, "Desert Ginseng": bir inceleme. -Amer. J. çene. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Tuz stresi altında pirincin yaprak kılıflarında hidrojen peroksitin birikme modeli. - Biol. Bitki. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1, kuraklık stres tepkilerini ve mavi ışık kaynaklı stoma açılmasını düzenler. Arabidopsis'te reaktif oksijen türlerinin birikimini inhibe eder. - Bitki Physiol. 162: 1030-1041, 2013.