Kaz Nefritik Astrovirüsü ile Enfekte Olmuş Kuşların Böbreklerinde ve Dalaklarında Bağışıklık İlişkili Gen İfadesi

Temastina.xiang@wecistanche.comdaha fazla bilgi için.

SOYUTKaz nefritik astrovirüsü (GNAstV) ilk olarak 2018 yılında izole edildi ve kaz endüstrisinde büyük ekonomik kayıplara neden oldu. Ancak, ev sahibi hakkında çok az şey bilinmektedirbağışıklık tepkisiGNAstV enfeksiyonuna. Bu çalışmada, kırk 2 günlük kuşlar rastgele 2 gruba ayrıldı: enfeksiyon ve negatif kontrol grupları. Enfeksiyon grubundaki her bir gosling'e kas içinden 0.5 mL GNAstV-JSHA ile meydan okunurken, negatif kontrol grubundaki gosling aynı miktarda PBS ile aşılandı. Histopatolojik değişiklikler ve virüs lokalizasyonudalakveböbrekincelendi ve immün ilişkili genlerin ekspresyonu enfeksiyondan sonra 7 ve 14 d'de qPCR ile belirlendi. Sonuçlarımız, GNAstV enfeksiyonuna bağlı dalak lenfositleri ve renal epitel hücrelerinin dejenerasyonu ve nekrozunu ve bu hücrelerin virüs için pozitif olduğunu göstermiştir. Ek olarak, GNAstV enfeksiyonu desen tanıma reseptörlerinin (RIG-I, MDA-5 ve TLR3) ve anahtar adaptör moleküllerinin aktivasyonunu indükledi.

Dalak ve böbrekte (MyD88, MAVS ve IRF7) ve dalaktaki interferon-α gen ekspresyonunu ve dalak ve böbrekteki antiviral proteinleri (MX1, OASL ve IFITM3) yukarı regüle etti. Ayrıca dalakta interlökin(IL)-1β ve IL-8, dalak ve böbrekte iNOS ekspresyonunun yüksek olduğu saptandı. Bu sonuçlar, GNAstV enfeksiyonunun konağın doğuştan gelen bağışıklık tepkisini aktive ettiğini göstermiştir. Ayrıca, GNAstV enfeksiyonu CD8t, MHCI ve MHCII ekspresyon seviyelerini arttırdı ve adaptif bir immün yanıtın aktive olduğunu gösterdi. Ayrıca, TGF-β dalak ve böbrekte yüksek oranda eksprese edilmiştir, bu da GNAstV'nin enfeksiyona neden olmak için bir immün kaçınma stratejisi olabilir. İlginç bir şekilde, böbrekte hem IL-1β hem de IL-6 mRNA seviyeleri azaldı ve bu da böbrek lezyonlarını azaltmaya yardımcı olabilir. Bu, GNAstV enfeksiyonuna yanıt olarak immün ilişkili gen ekspresyonundaki değişiklikleri bildiren ilk çalışmadır ve sonuçlarımız viral patogenez hakkında fikir vermektedir.

Anahtar kelime -ler: kaz nefritik astrovirüs, bağışıklık tepkisi, dalak, böbrek, kaz

Cistanche stem faydalarını öğrenmek ve cistanche deneyimi yaşamak için tıklayın

GİRİŞ

2017'den bu yana, birkaç kaz sürüsü, Doğu Çin'deki 4 ila 16 günlük kuşlarda ciddi bir gut salgını yaşadı ve bu da kaz endüstrisinde büyük ekonomik kayıplara yol açtı. Enfekte kuşlar, vücut ağırlığının azalması ve şişmiş ve soluk böbrekler, üreterlerde beyaz üratlar ve viseral organların ve eklem boşluğunun yüzeyinde ürat eğilimi sergiledi. 2018 yılında, enfekte olmuş kuşlardan yeni bir kaz astrovirüsü izole edildi ve hayvan üreme deneyleri, gosling gut hastalığının ana etken maddesi olduğunu kanıtladı. Bu virüs genetik olarak bilinen mam astrovirüs ve astrovirüsünden farklıydı. Genomun en değişken bölgesi olan tam uzunluktaki ORF2 proteininin (kapsid proteini) amino asit dizisine uygun olarak ayrı bir klad oluşturdu. Bu nedenle, virüsün kuşlara verdiği zarara daha fazla dikkat edilmelidir. Bu çalışmada, yeni kaz astrovirüsü kaz nefritik astrovirüsü (GNAstV) olarak adlandırılmaktadır.

GNAstV yeni ortaya çıkan bir virüs olduğundan, çoğu çalışma izolasyonu, genetik analizi ve tanı yöntemlerinin oluşturulması üzerine odaklanmıştır (Yuan ve ark., 2018; Wan ve ark.,2019; Yin ve ark.,2020). Bununla birlikte, GNAstV enfeksiyonuna karşı konakçı immün yanıtı hakkında çok az şey bilinmektedir. Kaz nefritik astrovirüsü esas olarak kuşlarda böbrek, karaciğer ve dalakta hasara neden olur ve böbrek ve dalakta diğer organlara kıyasla daha yüksek bir viral yük tespit edilmiştir (Jin ve ark., 2018; Xu ve ark., 2019). Dalak lezyonları ve yüksek viral yük, virüsün bağışıklık tepkisine zarar verebileceğini gösterir. Doğuştan gelen bağışıklık sistemi, viral istilaya karşı ilk savunma hattı olarak hizmet ederek virüs enfeksiyonu sırasında önemli bir rol oynar (Chow J ve ark., 2015). Örüntü tanıma reseptörleri (PRR) viral nükleik asitleri tanır ve I-1β, TNF-x ve IFN gibi sitokinlerin ve OASL, IFITM3 ve MX1 gibi antiviral proteinlerin üretimi de dahil olmak üzere doğuştan gelen bir yanıt ortaya çıkarır. Membrana bağlı Toll benzeri reseptör 3 (TLR3) ve esas olarak RIG-1 ve MDA-5 içeren sitozolik RIG-I benzeri reseptörler, viral RNA'yı tanıyan en önemli PRR'dir. Doğuştan gelen bağışıklık tepkisi, enfeksiyonun sonraki bir aşamasında viral enfeksiyonu kontrol eden adaptif bağışıklık tepkisini ortaya çıkarmak için sinyal vermeyi indükler. Adaptif immün, CD3+, CD4+, CD8+, ve MHC sınıf I ve II moleküllerinin tutulumunu gerektiren antikor aracılı/B-hücre yanıtı I yanıtını ve hücre aracılı yanıtı içerir. Şu anda, GNAstV'nin konakçıdan doğuştan gelen ve adaptif immün yanıtları etkilediği mekanizmalar belirsizdir. Çin, dünya çapında en yüksek kaz nüfusuna ev sahipliği yapmaktadır; Bu nedenle, GNAstV enfeksiyonuna karşı kaz immün yanıtının araştırılması, yayılmasını kontrol eden GNAstVand'ın patojenite ve bağışıklık mekanizmasını aydınlatmak için önemlidir. Bu çalışmada, 2 günlük kuşlara GNAstV ile enfekte edildi. Daha sonra histopatolojik değişiklikler ve virüs lokalizasyonunun yanı sıra dalak ve böbrekteki immün ilişkili gen ekspresyonu incelendi.

GEREÇ VE YÖNTEMLER

Etik Beyanı

Tüm hayvan deneyleri, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı (Pekin, Çin) Deney Hayvanları Kılavuzlarına uygun olarak yürütülmüş ve Nanjing Tarım Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır.

Virüs

GNAstV-JSHA izolatı (GenBank katılım no. MK125058) gut hastalığı olan kuşlardan (Jiangsu eyaleti, Çin) izole edildi ve laboratuvarımızda tutuldu. GAstV-JSHA'nın titresi, Reed & Muench yöntemine uygun olarak kaz böbrek epitel hücreleri üzerinde titrasyon ile belirlenen 1 × 104.25 50% doku kültürü enfektif dozu (TCID50) / mL idi.

Hayvan Deneyi

Dalak ve böbrek örnekleri, Xu'nun çalışmasında açıklanan önceki hayvan deneyimimizden toplandı (Xuet al., 2019). Kısaca, GNAstV enfeksiyonu olmayan 2 günlük kırk kuş, enfeksiyon ve negatif kontrol grupları olmak üzere rastgele 2 gruba ayrıldı. Enfeksiyon grubundaki her bir gosling, intramüsküler aşılama ile 0.5 mL GNAstV-JSHA ile zorlanırken, negatif kontrol grubundaki gosling aynı miktarda PBS ile aşılandı.

Tüm kuşlar klinik belirtiler için günlük olarak izlendi. Enfeksiyon sonrası 7 d'de (dpi), her gruptan 10 kuş ötenazi yapıldı ve brüt değişiklikler incelendi ve daha sonra böbrek ve dalak toplandı. Bu sorunların bir kısmı histopatolojik inceleme için% 10 formaldehit ile düzeltildi, geri kalanı daha ileri deneyler için -80 ° C'de saklandı. 14 dpi'de, hayatta kalan kuşlar ötenazi yapıldı ve dokular yukarıda belirtildiği gibi toplandı ve saklandı.

Histopatolojik İnceleme

Sabit numuneler bir dizi alkol tarafından susuz bırakıldı, ksilen içinde berraklaştırıldı ve parafine gömüldü. Daha sonra örnekler seri olarak 4 μm kesitler halinde dilimlendi ve rutin yöntemlerle hematoksilin ve eozin ile boyandı. Lekeli kesitler ışık mikroskobu ile incelendi.

In Situ Hibridizasyon ile Virüs Konumu Tespiti

In situ hibridizasyon (FISH) yöntemi, ticari ISH kitinin (Boster, Çin) talimatlarına uygun olarak, bazı değişikliklerle gerçekleştirildi. ISH uygulanmadan önce, numunenin duyarlılığı ve özgüllüğü bir dizi ön işlemle test edildi ve optimize edildi. Kısaca deparafinize doku kesitleri HCl(0.2 M,15 dk) ve proteinaz K (40 μg/mL,20 dk,37°C) ile ön işlem gördü. Proteaz K, 5 dakika boyunca %4 paraformaldehit fiksasyonu ile inhibe edildi. Daha sonra hibridizasyon ve post hibridizasyon adımları gerçekleştirilmiştir. Problar, hibridizasyon tamponuna 0.5-2 μg / mL konsantrasyonunda eklendi; Probları içeren tampon 98 ° C'de 10 dakika boyunca denatüre edildi ve hemen buz üzerinde soğutuldu. Hibridizasyon karışımının yaklaşık 20 μL'si doku kesitlerine pipetlendi, dietilpirokarbonatla işlenmiş örtülerle kaplandı ve 42 ° C'de 16 ila 20 saat boyunca inkübe edildi. Viral RNA ile hibridize edilmiş problar, 3,3-N-diaminobenzidin tetrahidroklorüre konjuge edilmiş bir anti-DIG antikoru kullanılarak tespit edildi. Slaytlar metil yeşili ile kaplandı ve nötr sakızla kapatıldı. Duyarlılığı arttırmak için, probların dokuya girişini kolaylaştırmak için doku geçirgenliğini arttırmak için proteinaz K kullanıldı.

Kantitatif Gerçek Zamanlı PCR ile İmmün Genlerin Analizi

Toplam RNA, Trizol (Invitrogen, CA) kullanılarak ekstrakte edildi ve RNA'nın ters transkripsiyonu, HiScript Q RT SuperMix kiti (Vazyme, Çin) kullanılarak gerçekleştirildi. Bir termosikletör (AB7300; Yaşam Teknolojileri) kantitatif PCR için kullanıldı. Primer 5.0 yazılımı, Tablo 1'de gösterildiği gibi, bağışıklık ile ilgili genlerin tanımlanması için kullanılmıştır. Ribonükleik asit ekspresyonu, GAPDH'nin bir temizlik geni olarak nicelleştirilmesiyle normalleştirildi. Bağıl transkript düzeyleri 2-AACT kullanılarak yöntemle analiz edildi

İstatistiksel Analiz

Kontrol grubu ile deney grubu arasındaki farklar Student t-testi ile analiz edildi. Sonuçlar ortalama ± standart sapma olarak ifade edilir. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistical="" significance="" compared="" with="" the="" control="" group,="" and="">< 0.01="" was="" considered="" to="" indicate="" a="" high="" degree="" of="" significance="" compared="" with="" the="" control="">

SONUÇ -LARI

Klinik Değişiklikler

Aşılanmamış kontrolde ölüm veya belirgin klinik bulgu gözlenmedi. Bununla birlikte, 20 enfekte kuştan 5'i deney sırasında öldü ve GNAstV ile enfekte olmuş kuşlarda vücut ağırlığında bir azalma gözlendi. Otopside, negatif kontrol grubundaki organlar normal görünüyordu, ancak ölü kuşlarda organların yüzeyinde (karaciğer, kalp ve böbrek), safra keseciklerinde ve eklem boşluğunda ürat eğilimi tespit edildi. Ayrıca, üreterlerde beyaz ürat ile şişmiş ve soluk böbrekler tüm enfekte kuşlarda gözlenmiştir. Patolojik değişiklikler önceki çalışmamızda gösterilmiştir (Xu ve ark.. 2019). Bu sonuçlar, kuşlarda GNAstV enfeksiyonunun bir hayvan modelini başarıyla kurduğumuzu göstermiştir.

Böbrek ve Dalakta Histopatolojik Değişiklikler

Histopatolojik incelemede negatif kontrol kuşlarından böbrek ve dalaklar histolojik olarak normal görünüyordu (Şekil 1A ve 1B). Bununla birlikte, renal epitel hücrelerinin dejenerasyonu ve nekrozu veInflamatuarenfekte kuşların böbreklerinde hücre infiltrasyonu gözlenmiştir (Şekil 1C). Ayrıca, dalak nekrozuLenfositve dalaklarda inflamatuar hücre infiltrasyonu da bulundu (Şekil 1D).

Böbrek ve Dalakta Virüs Yeri

Kaz nefritik astrovirüsünün böbrek ve dalaklardaki lokalizasyonu ISH kullanılarak incelendi. Şekil 2'de gösterildiği gibi, renal tübüler epitel hücrelerinin sitoplazmasında birkaç kahverengi partikül tespit edildi, ancak böbreğin glomerüllerinde kahverengi partikül gözlenmedi. Dalağın dalak lenfositlerinde ve makrofaj hücrelerinde az sayıda kahverengi parçacık tespit edildi. Bu sonuçlar GNAstV'nin renal tübüler epitel hücrelerini ve dalak lenfositlerini enfekte edebileceğini göstermektedir.

GNAstV Enfekte Kuşların Dalağı ve Böbreğinde PRR ve Adaptör Moleküllerinin İfadesi PRR (RIG-1, MDA-5 ve TLR3) ve anahtar adaptör moleküllerinin (MAVS, MyD88 veIRF7) dalaklarda ve böbreklerde Şekil 3'te gösterildiği gibi qPCR ile belirlendi. Dalaklardaki 3 PRR'nin mRNA düzeyi, enfekte grupta negatif kontrol grubuna kıyasla 7 ve 14 dpi'de anlamlı olarak artmıştır (P<0.05). the="" rig-1="" and="" tlr3="" mrna="" levels="" in="" the="" kidneys="" were="" also="" increased="" in="" the="" infected="" group="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" compared="" with="" that="" in="" the="" negative="" control="">< 0.01).="" the="" mda-5="" mrna="" level="" was="" higher="" in="" the="" infected="" group="" at="" 14="" dpi,="" but="" no="" difference="" in="" mda-5="" mrna="" expression="" was="" observed="" between="" the="" infected="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). Buna göre, enfekte gruptaki adaptör moleküllerinin 7 ve 14 dpi'deki ekspresyonu, kontrol grubundakinden anlamlı olarak daha yüksekti (P<0.05). these="" results="" indicate="" that="" gnastv="" infection="" activates="" the="" host's="" innate="" immune="">

GNAstV Ile Enfekte Kuşların Dalağında ve Böbreğinde Sitokin Ekspresyonu

Sitokin, IL-1β, I-6, IL-8, II.-10, TGF-B ve iNOS ekspresyonları Şekil 4'te gösterildiği gibi qPCR ile belirlendi. Dalakta, enfeksiyon grubundaki IL-1B ve TGF-B'nin mRNA seviyeleri 7 ve 14'tedpi negatif kontrol grubundakilerden açıkça daha yüksekti (P<0.01). furthermore,="" the="" i-8="" and="" inos="" mrna="" levels="" in="" the="" infection="" group="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="">< 0.05).="" but="" no="" differences="" in="" the="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). Ayrıca enfeksiyon ve kontrol grupları arasında 7 ve 14 dpi'de I-6 mRNA ekspresyonunda fark gözlenmedi (P> 0.05). Böbreklerde, 7 ve 14 dpi'de I-1β ve 7 dpi'de I-6'nın mRNA düzeyleri enfeksiyon grubunda negatif kontrol grubundakilere göre daha düşüktü (P< 0.05),="" whereas="" the="" tgf-b="" and="" inos="" mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" and="" the="" i-8="" mrna="" level="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="" in="" the="" infection="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05). no="" difference="" in="" i-10="" expression="" was="" detected="" between="" the="" infection="" and="" control="" groups(p="">0.05).

GNAstV ile enfekte olmuş kuşların dalağında ve böbreğinde antiviral proteinlerin ekspresyonu

IFN-d'nin mRNA seviyesi. dalakta ve böbrek ve dalakta antiviral proteinlerin (OASL, IFITM3.ve MIX1) ekspresyonu Şekil 5'te gösterildiği gibi belirlendi. Dalakta, mRNA seviyeleriIFN-2. OASL, IFITM3 ve MX1, 7 ve 14 dpi'de enfekte grupta negatif kontrol grubundakilere göre anlamlı derecede yüksekti (P< 0.05).="" in="" the="" kidney,="" the="" mrna="" levels="" of="" oasl,="" ifitm3,="" and="" mx1="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" significant="" differences="" in="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" group="" at="" 7="" dpi(p="">0.05).

GNAstV Enfekte Kuşların Dalağında CD4t, CD8+ ve MHC Sınıf ve I Moleküllerinin İfadesi

Dalaklarda antijen sunumu (CD4', CD8', MHC sınıf I ve II molekülleri) ile ilişkili genlerin ekspresyonu Şekil 6'da gösterildiği gibi qPCR ile belirlendi. MHC I'in 7 ve 14'teki ifade seviyeleridpi enfekte grupta negatif kontrol grubundakilere göre anlamlı olarak daha yüksekti (P< 0.05).="" the="" expression="" levels="" of="" mhc="" ii="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" difference="" in="" levels="" was="" observed="" between="" the="" 2="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). 7 ve 14 dpi'deki CD8+ mRNA düzeyleri enfekte grupta negatif kontrol grubundakilere göre anlamlı derecede yüksekti (P< 0.05).="" but="" no="" changes="" in="" cd4+mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" were="" found="" between="" the="" 2="" groups="" (p="">0.05).

TARTIŞMA

Kaz nefritik astrovirüsü, viseral gut'a ve kuşların ölümüne neden olabilen ve kaz çoraplarına büyük zarar verebilecek yeni izole edilmiş bir virüstür. Bugüne kadar, tedavisi için aşı ve terapötik ajan yoktur. Bu nedenle, patogenezini anlamak ve aşı ve tedaviler geliştirmek için virüse karşı konakçı immün yanıtını araştırmak gerekir. Bu çalışmada, GNAst V-JSHA ile intramüsküler aşılama ile kuşlarda bir hayvan modelini başarıyla kurduk. Virüsün splenik lenfositler ve makrofajlardaki yeri ve splenik lenfositlerin nekrozu, GNAstV'nin dalağı enfekte edebileceğini ve konakçı bağışıklık sistemine zarar verebileceğini göstermektedir. Bununla birlikte, şimdiye kadar, GNAstV ile enfekte olmuş kuşların immünolojik yanıtı hakkında hiçbir rapor bulunmamaktadır. Ek olarak, renal epitel hücrelerinde yüksek bir viral titre gözlendi. ve bu böbrek hasarına ve ürik asit atılım bozukluğuna katkıda bulunabilir.

Doğuştan gelen bağışıklık sistemi, istilacı bir patojene karşı ilk savunma hattıdır. Çalışmamızda GNAstV enfeksiyonu TLR3'te artışa neden olmuştur. Dalak ve böbrekte RIG-1 ve MIDA-5 mRNA ekspresyonu, viral invazyonun inhibisyonuna katkıda bulunabilecek doğuştan gelen bağışıklık sisteminin aktive olduğunu gösterir, Anahtar adaptör moleküllerinin (MyD88 ve IRF7) yukarı regülasyonu bu sonuçları daha da doğruladı. IFN, ürünleri doğrudan antiviral aktiviteye sahip birkaç IFN ile uyarılmış genin indüksiyonu yoluyla viral baskılanmada kritik bir rol oynayan PRR'nin aktivasyonundan sonra üretilir. Çalışmamızda GNAstrV enfeksiyonu sonrası dalakta IFN-z ekspresyonu ve dalak ve böbrekte antiviral proteinlerin (OASL, MX1 ve IFITM3) ekspresyonu artmıştır. Antiviral proteinlerin artan üretimi, viral istilanın inhibisyonu için yararlı olabilir. Buna göre sonuçlarımız TLR3 olduğunu gösterdi. TEÇHIZAT-1. MDA-5 ve IRF7, GNAstV enfeksiyonu sırasında aktive edildi. Önceki bir çalışma ayrıca, sistem tipinin insan astrovirüs replikasyonunu in vitro ve in vivo olarak sınırladığını ve astrovirüs kaynaklı bariyer geçirgenliğine karşı koruma sağladığını göstermiştir (Marvin ve ark.. 2015). Bununla birlikte, TLR3 ve OASL için bulgular, dalaktaki diğer PRR ve antiviral proteinlerden farklıydı, çünkü hem TLR3 hem de OASL'nin ekspresyonu 7 dpi ile karşılaştırıldığında 14 dpi'de azaldı. Bu, olumsuz geri bildirim düzenlemesi veya virüs yükünün azaltılması ile ilgili olabilir. Buna göre, 14 dpi'de lL-1B, aşırı proinflamatuar sitokin üretimine karşı vücut düzenleyici mekanizmaların bir sonucu olabilir. İlginç bir şekilde, böbrekteki I-1β'nin mRNA seviyesi, enfekte grupta azalmıştır. Bu proinflamatuar sitokinin daha düşük bir seviyesi böbrek hasarını hafifletmeye yardımcı olabilir. Önceki çalışmalar, insan astrovirüsü ve hindi astrovirüs tip 2 (TASt V-2) enfeksiyonlarının inflamasyonla ilişkili olmadığını ve bağırsak villusunda az sayıda lezyona neden olduğunu bildirmiştir (Koci ve ark.. 2003; Sebire ve ark.2004), bunun epitel hücrelerinde astrovirüs enfeksiyonunun bir özelliği olabileceğini düşündürmektedir. I-6 aynı zamanda etkili bir bağışıklık tepkisi yoluyla antiviral etkilere neden olan enflamatuar bir sitokindir, ancak aynı zamanda vasküler hasara yol açan süreçlerde de rol oynar,enflamasyonvasküler duvarın ve trombozun. Çalışmamızda GNAstV enfeksiyonu sonrası dalakta IL-6'da anlamlı bir değişiklik saptanmamış; bu, bireysel kuşlar arasındaki büyük farklılıklarla ilgili olabilir. Bununla birlikte, böbrekte -1B gözlemine benzer şekilde I-6 ekspresyonu azaldı; bu aynı zamanda böbrek hasarını hafifletmeye yardımcı olabilir. I-8, lokal enflamatuar infiltrasyona katılan nötrofillerin işe alınmasından sorumlu bir arabulucudur. Bu çalışmada, I-8 dalak ve böbrekte yukarı regüle edildi ve böylece inflamasyona katkıda bulunmuş olabilir. IL-10, proinflamatuar sitokin üretimini inhibe edebilen bir anti-enflamatuar sitokindir. Bu çalışmada, GNAstV dalakta IL-10 düzeylerinde belirgin bir azalmaya neden olmuştur; bu, dalakta ciddi inflamasyonun bir göstergesi ve dalak hasarının nedenlerinden biri olabilir. Japon ensefalit virüsü ve Zika virüsü gibi diğer vi-ruses enfeksiyonu ile enfeksiyonun da I-10 ekspresyonunda bir azalmaya neden olduğu gösterilmiştir (Swarup ve ark.2007; Abreu 2019), ancak GNAstr Venfeksiyonunun altında yatan kesin mekanizmanın daha fazla çalışmaya ihtiyacı vardır. TGF-β immünsüpresif bir sitokindir. Bu nedenle, dalak ve böbrekteki TGF-B seviyelerindeki artış, GNAstV enfeksiyonunun immün baskılanmaya neden olabileceğini göstermektedir. Ayrıca T AStV-2 enfeksiyonunun hindilerde TGF-β serum düzeyini arttırdığı bildirilmiştir (Koci ve ark.2003). TGF-β üretiminin artmasının bağışıklık tepkisini baskıladığı ve viral replikasyonu arttırdığı gösterilmiştir (Letterio ve Roberts, 1998). Bu nedenle, TGF-β üretiminin artması, konakçı immün yanıtını inhibe ederek GNAstV replikasyonuna katkıda bulunabilir.iNOS, doğuştan gelen immün yanıtın önemli bir bileşenidir ve viral enfeksiyonların kontrolünde önemli bir rol oynar. Çalışmamızda bulgular GNAstV enfeksiyonu olduğunu göstermiştir.

açıkça INOS ifadesini yukarı regüle etti. Yüksek iNOS üretimi, konağın viral enfeksiyona direnmesini sağlayabilir. Sonuçlarımız, TAStV-2 enfeksiyonunun astrovirüs replikasyonunu sınırlayan iNOS üretimini indüklediğini gösteren önceki çalışmalarla uyumludur (Qureshi ve ark., 200l; Koci ve ark.,2004; Meyerhoff ve ark.,2012).

Adaptif bağışıklık sistemi viral enfeksiyonların kontrolünde önemli bir rol oynar. Çalışmamızda GNAstVinfection MHC Ia, MHC Iix ve CD8+'ın mRNA düzeyini arttırmış ve bu da humoral ve hücresel immün yanıtların aktive olduğunu göstermektedir. Daha önce, insan astrovirüs enfeksiyonunun, virüsü nötralize edebilen antikor üretimini uyandırdığı bildirilmişti (Kurtzand Lee, 1978). Çalışmada CD4 + mRNA ekspresyonunda However.no önemli değişiklik bulundu. CD4 "T hücrelerinin B hücresi olgunlaşması ve antikor özgüllüğü için gerekli olduğu göz önüne alındığında, GNAst V'nin güçlü bir humoral immün yanıtı indükleyememesi mümkündür. Bu, MHC II.aexpression'da neden 7 dpi'de belirgin bir artış gözlenmediğini açıklayabilir. Ek olarak, CD8 ve MHCIa'nın 14 dpi'deki mRNA düzeyleri 7 dpi'ye kıyasla azaldı. Bu, yukarıda belirtildiği gibi virüs yükünün azaltılması ile ilgili olabilir. Bu çalışmada, ticari kit bulunmadığı için GNAst V antikoru tespit edilmedi. Bu nedenle, GNAstVinfection içinde antikorların rolü daha fazla araştırılmalıdır.

Sonuç olarak, verilerimiz GNAst V ile enfekte kuşların dalak ve böbreğindeki bağışıklık yanıt paternlerini ortaya koymuştur. GNAst V enfeksiyonunda, doğuştan gelen ve adaptif bağışıklık ile ilişkili genler aktive edildi. Bununla birlikte, sitokinlerin ve antiviral proteinlerin üretimi, kuşları hastalığa karşı korumamıştır. Bu, konakçı GNAstV etkileşimlerinin moleküler mekanizmalarını aydınlatmaya yardımcı olabilecek GNAst Venfeksiyonuna yanıt olarak immün ilişkili gen ekspresyonlarındaki değişiklikleri bildiren ilk çalışmadır.