In Vitro İnsan Sindirim Simülasyonunun Türkiye Cistus Türlerinden Sulu Ekstraktların Fenolik İçerikleri ve Biyolojik Aktiviteleri Üzerine Etkisi Bölüm 1

Lütfen iletişime geçinoscar.xiao@wecistanche.comdaha fazla bilgi için

Soyut:Oksidatif stres, diyabet, Parkinson hastalığı, kardiyovasküler hastalıklar, kanser vb. çeşitli metabolik hastalıkların önemli öncülerinden biridir. Çeşitli bilimsel raporlar, ikincil bitki metabolitlerinin oksidatif stresi ve onun zararlı etkilerini önlemede önemli bir rol oynadığını göstermiştir. Bu bağlamda, bu çalışma, Türkiye Cistus türlerinden elde edilen sulu ekstraktların fenolik profilini ve antioksidan ve antidiyabetik potansiyellerini in vitro yöntemlerle araştırmak için planlanmıştır. Fenolik içeriklerinin biyoyararlanımını tahmin etmek için tüm ekstraktlara in vitro sindirim simülasyon prosedürü uygulandı. Toplam fenolik, flavonoid, fenolik asit ve proantosiyanidin içerikleri sindirimin tüm aşamaları için belirlendi. Ek olarak, atanan işaretleyici flavonoidlerin (salidrosid, hiperosid ve kersitrin) miktarındaki değişiklikler, Yüksek Performanslı İnce Katman Kromatografisi (TLC) analizi ile izlendi. Ekstraktların antioksidan aktivite potansiyelleri, detaylı aktivite profillerini ortaya çıkarmak için çeşitli yöntemlerle incelenmiştir. Öte yandan, ekstraktların antidiyabetik potansiyellerini değerlendirmek için ekstraktların in vitro a-amilaz ve a-glukozidaz enzimleri ve ileri glikasyon son ürün (AGE) inhibitör aktiviteleri belirlendi. Sonuçlar, Türkiye Cistus türlerinin toprak üstü kısımlarından elde edilen sulu ekstraktların zengin fenolik içeriklere ve güçlü antioksidan ve antidiyabetik aktivitelere sahip olduğunu göstermiştir; bununla birlikte, biyoaktivite profilleri ve işaretleyici flavonoid konsantrasyonları, insan sindiriminden önemli ölçüde etkilenebilir. Sonuçlar, biyoyararlı örneklerin toplam fenolik içerikleri, antioksidan aktiviteleri ve diyabetle ilgili enzim inhibisyonlarının tüm ekstraktlarda sindirilmeyen örneklere göre daha düşük olduğunu göstermiştir.

Anahtar Kelimeler:Türkiye Cistus türleri;cistanche tubulosa faydaları;antioksidan aktivite;cistanche;insan sindirim simülasyonu; HPTLC; diyabet

1. Giriş

Cistaceae familyası çalılar ve tek yıllık veya çok yıllık otsu bitkilerden oluşur ve Cistus cinsi bu familyanın geniş yayılış gösteren üyelerinden biridir. Dünya çapında 50'den fazla Cistus türü dağılmıştır ve genellikle "rockrose" olarak adlandırılırlar[1]. Önceki in vitro ve in vivo araştırmalar, Cistus türlerinin antiviral, antidiyabetik, antioksidan, antimikrobiyal ve antienflamatuar aktivitelere sahip olduğunu göstermiştir [23]. Cistus türlerinden farklı fenolik bileşikler (fenolik asitler, flavonoidler, proantosiyanidinler) ve terpenler izole edilmiştir ve bunların terapötik faydaları genellikle bu bileşenlere atfedilir[4,5].

Türkiye'de doğal olarak yetişen beş Cistus türü, C. salvifolius L., C. paroiflorus Lam, C.monspeliensis L., C.laurifolius L. ve C.creticus L.[6]. Türk halk tıbbının etnobotanik kayıtlarında, Cistus türlerinin çeşitli organları sıklıkla bir çare olarak belgelenmiştir. Edremit (Balıkesir) ilçesinde diyabete karşı C. laurifolius, C. salviifolius ve C. creticus'un dallarından hazırlanan infüzyonlar ağızdan alınmaktadır [7]. C.creticus ve C. salviifolius çiçeklerinden hazırlanan kaynatmalar, Marmaris'te (Muğla) peptik ülsere karşı dahili olarak kullanılırken [8], C. laurifolius'un açılmamış çiçek tomurcuklarından bir kaynatma aynı amaçla kullanılır. Batı Anadolu'da C. laurifolius yapraklarının kaynatılması, içten ateş ve karın ağrısına, dıştan ise banyo yoluyla romatizmal ağrılara karşı kullanılmaktadır [9].

Daha fazla bilgi için lütfen buraya tıklayın

Reaktif oksijen türlerinin (ROS) yüksek agregasyonunun, kanser, diyabet, kardiyovasküler problemler, Alzheimer hastalığı vb. gibi çeşitli metabolik bozuklukların önemli öncülerinden biri olan oksidatif stresi tetiklediği kanıtlanmış bir gerçektir.[10] Bu nedenle, antioksidan kullanımı, mevcut bilimsel uygulamada bu tür durumları önlemek veya tedavi etmek için yaygın bir bütünsel yaklaşım haline gelmiştir. Bitki özlerinin antioksidan aktiviteleri çok sayıda araştırmacı tarafından rapor edilmiştir[11-14]. Yaygın bir yaklaşım olarak, bitki ekstraktlarının antioksidan potansiyeli genellikle fenolik içeriklerine ayrılmıştır. Bilimsel literatürde, Cistus türlerinin fenolik profiller açısından da zengin olduğuna ve nihayetinde önemli derecede antioksidan aktiviteye sahip olduğuna dair çok sayıda kanıt mevcuttur. Ancak bu fitokimyasalların vücuttaki biyoyararlanım kavramı bu çalışmaların çoğunda dikkate alınmamıştır.

Gastrointestinal sistem koşullarının farklı pH koşulları, enzim eylemleri ve mikrobiyota nedeniyle fenolik bileşikleri etkilediği iyi bilinen bir gerçektir. Öte yandan fenolik bileşiklerin kimyasal yapıları ve bitki matriksi de biyoyararlanımlarını etkileyen önemli faktörlerdir [15]. Bu nedenle, mevcut araştırmada, fenolik içeriklerin biyoyararlılığını tahmin etmek için tüm ekstraktlara in vitro sindirim simülasyon yöntemi uygulanmıştır. Geçişleri izlemek için sindirimin tüm aşamalarında toplam fenolik, flavonoid, fenolik asit ve proantosiyanidin içerikleri belirlendi. Ayrıca, ekstraktların antioksidan aktiviteleri, kapsamlı aktivite profillerini ortaya çıkarmak için mekanik olarak farklı spektrofotometrik yöntemlerle incelenmiştir. Sindirim işlemi ile elde edilen tüm örneklerin antioksidan potansiyelleri DPPH ve DMPD (serbest radikal süpürücü), FRAP ve CUPRAC(metal indirgeme potansiyeli) ve TOAC(toplam antioksidan kapasite) tahlilleri ile araştırıldı. Daha önce, Guzelmeric ve ark. [16]Bu nedenle, bu flavonol glikozitlerin kalitatif ve kantitatif tayini Yüksek Performanslı İnce Tabaka Kromatografi sistemi ile gerçekleştirilmiş ve biyoyararlanım indeksleri tahmin edilmiştir.

Cistanche bağışıklığı artırabilir

Diabetes mellitus (DM) yaygın bir metabolik bozukluktur ve pankreas hücreleri tarafından insülin sekresyonunun azalması veya vücudun insüline yanıt vermemesi ile tanımlanır. İki tip DM vardır: İnsüline bağımlı (Tip I) ve insüline bağımlı olmayan (Tip II) [17]. （ne kadar cistanche alınır） Tip Ⅱ DM için tedavi stratejilerinden biri, "yemekten sonra kan dolaşımında önemli bir kan şekeri konsantrasyonu artışı" olarak tanımlanan tokluk hiperglisemiyi kontrol etmektir. a-amilaz ve o- dahil olmak üzere temel sindirim enzimlerinin inhibisyonu glukozidaz, tokluk hiperglisemiyi kontrol etmek için gereklidir. (cistanche tubulosa Çince) Gastrointestinal sistemde o-amilaz nişastayı sindirerek siklodekstrin, laktoz ve maltoz gibi indirgeyici şekerlere dönüştürür ve -glukosidaz bu şekerleri glikoza parçalar. Bu nedenle, sindirim enzimlerinin inhibisyonu, tokluk hiperglisemiyi tedavi etmek için olası bir etki şekli olarak kabul edilir [18] Öte yandan, yüksek kan şekeri seviyeleri, "enzimatik glikasyon reaksiyonu sonucunda oluşan bileşikler" olarak tanımlanan AGE'lerin oluşumunu tetikleyebilir. (Maillard)indirgeyici şekerler ve proteinler, nükleik asitler ve lipidler arasında". AGE'lerin vücutta yüksek birikimi nefropati, nöropati, retinopati vb. dahil olmak üzere birçok diyabetik komplikasyona neden olabilir.[19]. Aminoguanidin, hayal ve metformin, AGE'ler için sentetik inhibitörlerin örnekleridir ve akarboz, miglitol ve vogliboz, sindirim enzimleri için sentetik inhibitörlerdir ve son on yılda kullanılmaktadır [20,21]. Bununla birlikte, klinik deneyler ve in vivo deneyler, hepatotoksisite, abdominal distansiyon, gaz, meteorizm, anemi, kusma, kalp yetmezliği vb. gibi bu sentetik inhibitörlerin yan etkilerini göstermiştir [21,22]. Bu tür zararlı etkiler nedeniyle, bitki ekstraktlarının AGE'ler [23-25] üzerindeki inhibe edici potansiyellerini içeren çok sayıda çalışma yapılmıştır. Fitokimyasalların, özellikle fenolik asitler, flavonoidler ve proantosiyanidinler gibi fenolik bileşiklerin, AGE'lerin oluşumunu ve ilgili enzim hareketlerini, yani x-amilaz ve -glukosidaz [26-28] önemli ölçüde inhibe ettiği bildirilmiştir.

Geleneksel tıpta su ekstraksiyonu (infüzyon veya kaynatma) yaygın hazırlama tekniği olduğundan, bu çalışma in vitro gastrointestinal sindirim simülasyonu öncesi ve sonrasında Türk Cistus türlerinin sulu ekstraktları üzerinde gerçekleştirilmiştir. Bu bağlamda sulu ekstraktların ve sindirim metabolitlerinin fenolik profilleri ile antioksidan ve antidiyabetik potansiyelleri karşılaştırmalı olarak araştırılmıştır. Referans araştırmasına göre, bu çalışmada ilk kez Cistus ekstraktlarının AGE'ler üzerindeki inhibitör aktiviteleri incelenmiştir. Ek olarak, işaretleyici flavonoidlerin kantitatif analizi de HPTLC analizi ile gerçekleştirilmiştir. Fenolik bileşiklerin gastrointestinal koşullarda konsantrasyonlarındaki ve biyolojik aktivite profillerindeki değişiklikleri izlemek için tüm ekstraktlara in vitro sindirim simülasyon tekniği uygulandı.

2. Sonuçlar

2.1.Numunelerin Fenolik İçeriklerinin Tahmini

Tablo 1'de gösterilen sonuçlara göre, C. saloifolius'un sulu özütü, çalışılan diğer türlere göre daha yüksek toplam flavonoid, fenolik ve fenolik asit içeriğine sahipken, C.creticus ve C.laurifolius'un ND (sindirilmemiş) numuneleri en yüksek proantosiyanidin'e sahipti. içindekiler. En önemli azalma, tüm ekstraktların toplam proantosiyanidin içeriğinde tespit edildi. IN (biyoyararlı) numunelerin proantosiyanidin miktarları, tüm sulu ekstraktlarda tespit edilememiştir. Sonuç olarak, sulu ekstraktların fenolik içerikleri, in vitro insan sindirim simülasyon prosedüründen olumsuz etkilenmiştir.

Örneklerin kısaltmaları ND'dir: Sindirilmemiş; PG: Postgastri; IN: Biyolojik olarak kullanılabilir; BAvI: Biyoyararlanım indeksi; BSonuçlar, üç kopya ortalaması ± standart sapma (SD) ve 1 g numunede mg gallik asit eşdeğerleri (GAE) olarak belirtildi; Sonuçlar, 1 g numunede üç kopya ortalaması ± standart sapma (SD) ve mg kersetin eşdeğerleri (QE) olarak ifade edildi; D Sonuçlar, 1 g numunede üç kopya ± standart sapma (SD) ve mg kafeik asit eşdeğerleri (CAE) olarak ifade edildi; Sonuçlar, üç kopya ortalaması 士 standart sapma （SD） ve lg numunede mg kateşin eşdeğeri （CE） olarak ifade edildi; * Sulu ekstraktların kısaltmaları∶C. creticus için CCA, C. laurifolius için CLA, C için CMA. monspeliensis, C.parviflorus için CPA, C.salviifolius için CSA.Aynı satırdaki farklı harfler anlamlılığı gösterir (p<>

Tablo 2'de gösterildiği gibi, C. salviifolius'un sulu ekstraktındaki salidrosid ve hiperosid içerikleri, diğer türlerinkinden nispeten daha yüksek iken, quercitrin bulunamadı. Öte yandan, C. creticus'tan elde edilen sulu ekstraktın tüm simülasyon örneklerinde quercitrin en yüksek konsantrasyonda bulundu, ancak konsantrasyonu biyoyararlı örneklerde önemli ölçüde azaldı. Ek olarak, HPTLC kromatogramı ve kaplama UV spektrumları ve tüm ekstraktların izlerinde karşılık gelen noktalar Şekil 1'de sunulmuştur.

Şekil 1. (A) Salidrosid'in UV spektrumlarını ve tüm ekstraktların izlerinde karşılık gelen noktaları kaplayın. (B) Tüm özlerin izlerinde hiperosidin UV spektrumlarını ve karşılık gelen noktaları kaplayın. (C) Kuersitrinin UV spektrumlarını ve tüm özlerin izlerinde karşılık gelen noktaları kaplayın. (D)HPTLC kromatogramları:1. VE 2. CCA PG,3. KABİN,4. CLA ND,5.CLA PG,6.CLAIN,7.Tiliroside（Rf ≈0.65）,8.Hiperosit（Bf ≈0.35）,9.Quercitrin（Rf ×{{ 14}}.45）,10.CMA ND,11.CMAPG,12.ZİNCİR,13.VE,14. CPA PG,15.CPA IN,16.CSAND,17.CSAPG,18.CSA IN.Mobil faz:EtOAc/CHCh/CHCOOH/HCOOH/H2O(100:25:10:10:10:10:11);Türevlendirme : NPR reaktifi. Görselleştirme: 366 nm.

2.2.Numunelerin Antioksidan Aktivitesinin Tahmini

Tablo 3'te sunulduğu gibi, Cistus özütlerinin biyolojik olarak kullanılabilir örnekleri, sindirilmeyen ve mide sonrası emsallerine göre daha zayıf radikal süpürücü antioksidan aktivite sergilemiştir. Tüm sulu ekstraktların ND ve PG numuneleri, önemli DPPH radikal süpürme aktivitesi gösterdi ve referans bileşik BHT'den daha düşük ECso değerlerine sahipti (ECso değeri:5.83±0.2 ug/mL）. Ancak, tüm ekstraktlar daha zayıf bir DMPD radikal süpürme sergilemiştir). aktivite referans bileşiği Trolox'tan (5.82±0.37 ug/mL). ND, PG ve IN CPA numuneleri, diğer ekstraktların numunelerine kıyasla daha iyi DMPD aktivitesine sahipti.

Radikal süpürücü aktivite deneylerine benzer şekilde, Cistus özütlerinin biyolojik olarak kullanılabilir örnekleri de sindirilmeyen ve mide sonrası örneklerden daha zayıf metal azaltıcı ve toplam antioksidan aktiviteler gösterdi. Ekstraktların tüm ND numuneleri, referans bileşik BHT'den (4.06±0.42mM FeSO4 eşdeğeri) daha güçlü olan önemli ölçüde ferrik azaltıcı antioksidan aktivite sergilemiştir. PG örnekleri arasında sadece CSA(44±0.16mM FeSO4 eşdeğeri) BHT'den daha iyi aktiviteye sahipti. CUPRAC testinde, CSA'nın ND ve PG örneklerinin diğer türlerin örnekleri arasında en güçlü olduğu tespit edildi. Kesin olarak, CCA'nın IN numunesi, diğer sulu ekstraktların biyoyararlı numunelerinden daha iyi CUPRAC aktivitesine sahipti.

2.3.Diyabetle İlgili Enzim İnhibisyon Aktivitesi

Tablo 4'te belirtildiği gibi, tüm sulu ekstraktlarda konsantrasyona bağlı enzim inhibitör aktivitesi görüldü（süpermen otlar cistanche）. CPA ve CSA'nın ND örnekleri (sırasıyla yüzde 75,89 ±0,62,80 yüzde 0,34 ±0,19) akarbozdan (75,80) biraz daha yüksek -amilaz inhibe edici aktivite sergilerken yüzde ±0.02) 1 mg/mL konsantrasyonda; CSA'nın sadece ND numunesi, her iki konsantrasyonda da referans bileşik kersetin'den daha yüksek -glukozidaz inhibitör aktivite sergiledi.

Özetlemek gerekirse, C. saloifolius'un sulu özütü, diğer türlerin özütlerinden daha iyi bir sindirim enzimi inhibitör aktivitesi sergiledi. Ek olarak, tüm sulu ekstraktların IN numuneleri, ND numunelerine kıyasla daha düşük enzim inhibitör aktiviteleri ortaya çıkardı. 2.4.AGEs Engelleyici Aktivite

Tablo 4'te sunulduğu gibi, tüm sulu ekstraktlarda konsantrasyona bağlı AGE inhibitör aktivitesi gözlendi. CCA, CPA ve CSA'nın ND numuneleri, hem 0.5 hem de 1 mg/mL konsantrasyonlarında referans bileşik kersetin'den daha iyi inhibitör aktivite sergiledi. Bununla birlikte, ekstraktların IN örnekleri arasında sadece C.salvifolius özütü, kersetin'den daha iyi inhibitör aktivite sergilemiştir. Biyoyararlı sulu ekstrakt numuneleri, sindirilmeyen numunelere kıyasla daha düşük AGE inhibitör aktiviteleri göstermiştir. Sonuçlara göre, C. salvifolius'un sulu ekstraktının ND numunesi en yüksek AGE inhibitör aktiviteye sahipti. Bununla birlikte, C. monspeliensis sulu ekstraktının IN numunesi, test edilen konsantrasyonlarda en zayıf AGE inhibisyon potansiyelini sergiledi.

Bu makale Molecules 2021, 26, 5322'den alınmıştır. https://doi.org/10.3390/molecules26175322 https://www.mdpi.com/journal/molecules