Polifenolik Antioksidanlar Arasındaki Etkileşimler Quercetin ve Naringenin Karışımlarının Redoksla İlgili Ayırt Edici Kimyasal ve Biyolojik Davranışını Dikte Eder Bölüm 3

Lütfen iletişime geçinoscar.xiao@wecistanche.comdaha fazla bilgi için

DPPH testi ile antioksidan aktivite.

Araştırılan antioksidanların ve bunların karışımlarının antioksidan aktivitelerinin belirlenmesi,spektrofotometrikdaha önce tarif edildiği gibi DPPH radikalini kullanan tahlil13,55. İlk olarak, DPPH radikalinin stok çözeltisi, 515 nm'de absorbans 0.9±0.05 olana kadar metanol ile seyreltildi. İkinci olarak, antioksidanlar ve bunların karışımları, tahlil355'in lineer aralığı içinde düşen konsantrasyonları elde etmek için yüzde 70 etanol ile uygun şekilde seyreltildi. Daha sonra, DPPH solüsyonu (1 mL) seyreltilmiş numuneler （30 μL） ile karıştırıldı ve 37 derece C'de 10 dakika sonra 515 nm'de absorbans ölçüldü. Tüm reaksiyonlar 48-kuyulu plakalarda gerçekleştirildi. Absorbans ölçümleri, bir TECAN Infinite M200 spektrofotometresi (Tecan Group Ltd., İsviçre) yardımıyla gerçekleştirilmiştir. Numunenin antioksidan aktivitesi, modifikasyonlar5 ile daha önce tarif edildiği gibi stokiyometri katsayısı ng olarak yeniden hesaplandı. Kısaca, test edilen numuneler tarafından temizlenen radikal sayısı, antioksidan(lar)çözelti ile radikal arasındaki 10 dakikalık reaksiyondan sonra yapılan ölçümlerin ardından Beer-Lambert yasasına ve DPPH'nin molar yok olma katsayısına göre hesaplanmıştır55. n değeri, 1 mL DPPH ile temizlenen DPPH mol sayısı arasındaki doğrusal ilişkinin tanjantı olarak hesaplanır.antioksidan(lar)"stok" çözeltinin "yüzde 100" konsantrasyonuna sahip olduğu ve diğer konsantrasyonların seyreltme faktörleri tarafından tanımlandığı gibi yüzde 100'lük bir kesir olduğu bir konsantrasyon aralığındaki çözeltiler.

Daha fazla bilgi için lütfen buraya tıklayın

Potansiyometrik titrasyon ve diferansiyel nabız voltametrisi ile antioksidan aktivite.

Q ve R için standart indirgeme potansiyelleri(E), başka bir yerde5 tarif edildiği gibi potansiyometrik titrasyon (PT) ile ölçülmüştür. Kısacası, çalışılan bileşikler ve titrant(K,[Fe(CN)]) PBS içinde çözülmüştür. Saflaştırılmış bileşiklerin konsantrasyonu 0.3 mg/mL idi, Karışımlar her bileşikten 0.3 mg/mL içeriyordu. Ölçümler, bir AglAgCl referans elektrodu (RE) ve bir platin ölçüm elektrodu yardımıyla JENCO 6230 N ORP-146C Mikro Oksidasyon-İndirgeme ekipmanı (ABD) kullanılarak gerçekleştirilmiştir. PT'ler, esas olarak Ultra Termostat (PolvScience, ABD) tarafından sağlanan 37±0.01 derecede yapıldı. Analite eşit hacimde titrant eklendi ve sabit potansiyel okundu. Sonuç olarak, titrasyon eğrileri, E=f(V..), SigmaPlot Version 13.0 yazılımı (Systat Software Inc., UK) yardımı ile sigmoidal,5-parametreler matematiksel olarak uyarlanarak analiz edilmiştir. modelden deneysel verilere 35. Eşdeğerlik noktasındaki potansiyel (EP vs. RE) a parametresine dayalı olarak doğrudan bu modelden okunmuştur. Bükülme noktasında eklenen titrantın hacmine eşittir. Son olarak, EP'ye karşı SHE (standart indirgeme potansiyeli, EO) değerleri hesaplandı. RE(c) potansiyelinin düzeltme terimi, bilinen standart indirgeme potansiyelleri ile karakterize edilen FeCl.6H, O ve Na,S, O3.5H,O redoks çiftlerinin titrasyonu ile oluşturulmuştur.

Sırasıyla, incelenen bileşiklerin ve bunların karışımlarının antioksidan gücü (AOP), daha önce gösterildiği gibi, modifikasyonlarla diferansiyel darbe voltametrisi (DPV) ile ölçüldü. Kısaca ölçümler, üç elektrotlu bir sistem içeren Gamry Reference 60{{10}} potansiyostat (Gamry Instruments, ABD) kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Sırasıyla çalışma (WE), yardımcı (AE) ve referans elektrot (RE) olarak camsı karbon elektrot (GC, 1,6 mm çapında), platin tel ve AgAgCl elektrot (Hydrome SC, Polonya) uygulandı13. Deneylerden önce, WE'nin yüzeyi alümina süspansiyonu （0 kullanılarak parlatıldı.05 μm partiküller, Buehler, USA） mikro bez pedler(MF-1040, BASi, ABD) ve daha sonra distile su ve metanol ile temizlendi. Çalışılan bileşikler, DMSO ve sodyum fosfat tamponu(pH=7.4±0.1) içinde seyreltildi, böylece fosfat tamponunun nihai konsantrasyonu {{30}}.1 oldu. Örnekte M. Tampon, destekleyici elektrolit olarak görev yaptı. Saflaştırılmış bileşiklerin konsantrasyonu 3 mM idi. Karışımlar, her bileşikten 3 mM içermiştir. Elektrokimyasal olarak reaktif oksijeni ortadan kaldırmak için, ölçümlerden önce çalışılan çözeltiler argon perkolasyonu ile deokside edildi. N-.N plus ve karışımlar için DPV voltamogramları: ON- ve RN plus -0.2 ila artı 1.3 V aralığında kaydedilirken, Q ve R için-0.2 ila .2 V aralığında kaydedildi. artı 0,6 V vs.RE.Potansiyel tarama hızı 0,1 V.s', darbe yüksekliği 0,05 V ve 25±0,01 derecede 0,1 saniye darbe süresi ayarlandı.

DPV voltamogramları, SigmaPlot Sürüm 13.0 yazılımı (Systat Software Inc., UK) ile analiz edildi. AOP değerleri iki adımda hesaplandı. Hesaplamalar sadece anodik tepe potansiyeli ve akımı (E,; I,) değil, aynı zamanda voltametrik eğrinin her noktasındaki ayarlanmış potansiyel ve ölçülen akımı da dikkate alır. Önceki çalışmamızda bildirilenlerden daha kesin değerlerin elde edilmesini sağladı3. İlk olarak, denkleme göre antioksidan enerji (AOE) parametresi hesaplandı. 1:

AwE, WE'nin yüzey alanıdır (çalışmamızda {{0}}.162±0.004 cm'ye eşittir), E, ​​RE [V]'ye karşı bir set potansiyeldir, WE ve RE arasındaki sıvı bağlantısının varlığını hesaba katan düzeltme faktörü (burada0.103 V), I, arka plan akımına karşı ölçülen akımdır [A], bu—potansiyel örnekleme zamanıdır [dt=0 .5 sn].

İkinci olarak, W cm² birimiyle ifade edilen AOP, Denk.2∶'ye göre hesaplanmıştır.

burada tt;— oksidasyon pikinin(t) başlangıç ​​zamanı ile bitişi (t) arasındaki farktır.

Awp'yi belirlemek için 0.1 M KCl'de 1.10-3MK,[Fe(CN.]] çözeltisi için döngüsel voltametri yapıldı. Bu değer, tarama hızının karekökü I, =f(pi/2) olarak anodik tepe akımının eğiminden Randles-Sevcik denklemine82 göre hesaplanmıştır. Potansiyometrik titrasyonda olduğu gibi ölçülmüştür. Ayrıca, mevcut çalışmada, oksidasyon işleminin termodinamik parametresi, WE ve RE (E.,=E.. artı e) arasındaki sıvı bağlantısı tarafından düzeltilen anodik tepe potansiyeli iken, kinetik parametreler aktarılan yükü ( Q) ve anodik akım (I,).

Cistanche bağışıklığı artırabilir

Hücre kültürü. Sunulan çalışmada, HT29 hücre hattı (insan kolonadenokarsinom) ATCC'den elde edilen insan bağırsağının bir modeli olarak kullanıldı, Hücreler,antibiyotikler(100 U/mL streptomisin ve 100 g/L penisilin) ​​ve fetal sığır serumu (100 mL/L)13. HT29 hücre çizgisi, bir hücre inkübatöründe (Heal Force)3 atmosfer olan yüzde 5 CO'nun altında 37C'de tutuldu. Hücre çizgisi, pasajlar 6 ve l arasında kullanıldı. Kültürlenmiş hücreler, ATCC'den (ABD) Evrensel Mikoplazma Tespit Kiti kullanılarak mikoplazma kontaminasyonu için test edildi.

Sitotoksisite değerlendirmesi. saflaştırılmış etkisini belirlemek içinantioksidanlar(Q, N plus , R, N-) ve bunların karışımları (QN-, RN plus ) HT29 hücrelerinin büyümesi üzerine, MTTtest daha önce tarif edildiği gibi uygulandı3,5. Kısaca, üstel olarak büyüyen hücreler 96-kuyu doku kültürü plakalarına (0.18 mL ortam içinde oyuk başına 5x10 hücre) ekildi ve 24 saat yerleşmeye bırakıldı 37 derecede yüzde 5 CO altında, Daha sonra hücreler 6,24 veya 72 saat 0.02 ml farklı konsantrasyonlarda saf antioksidanlar veya bunların karışımları3,5 ile muamele edildi. Antioksidanlar ve bunların karışımları etanol (naringenin, naringin ve karışımlar — yüzde 30 (h/h), kersetin-40 (h/h), rutin— yüzde 20 (h/h) içinde çözüldü. )). Saflaştırılmış bileşiklerin nihai konsantrasyonları, 10 nM ila 100 uM aralığındaydı. Karışımlar, her bir bileşiğin eşdeğer konsantrasyonlarını（10 nM-100 μM） içeriyordu. Kültür ortamındaki etanolün nihai konsantrasyonu, rutin durumunda yüzde 2 (h/h), yüzde 3 (h/h)naringenin, naringin ve karışımın yanı sıra yüzde 4 (h/v)kersetin idi. 6 ve 24 saatlik maruziyetten sonra ortam, kuyucuklardan aspire edildi ve 0.2 mL taze ortam ile değiştirildi. Hücreler 37 derecede toplam kuluçka süresinin 72 saatine kadar inkübe edildi13,55. 72 saatlik inkübasyondan sonra tüm oyuklara 0.05 mL MTT solüsyonu (4 g/L) eklendi ve hücreler 4 saat daha 37 derece C13,5'te tutuldu. Daha sonra ortam kuyulardan aspire edildi ve formazan kristalleri 0.05 mL DMSO içinde çözüldü. Elde edilen solüsyonların absorpsiyonu, TECAN Infinite M200 plaka okuyucusu (Tecan Group Ltd, İsviçre)15 yardımıyla 540 nm'de ölçülmüştür. Tedaviler dört teknik tekrar olarak gerçekleştirilmiştir. Her tedavinin üç bağımsız tekrarı yapıldı. İncelenen örneklerin HT29 hücrelerinin büyümesi üzerindeki etkisi, büyümesi yüzde 100 olarak kabul edilen sadece solvent ile muamele edilmiş kontrol hücrelerine kıyasla, tek tek antioksidanlara ve bunların karışımlarına maruz kalan hücrelerin büyüme inhibisyonunun yüzdesi olarak ifade edildi 13,55

CAA (hücresel antioksidan aktivite) tahlili. CAA tahlili (The OxiSelect Cell Biolabs, Inc. USA), daha önce açıklandığı gibi HT29 hücrelerinde tek başına bileşiklerin (O, N plus, R, N-) ve karışımların (ON-, RN plus) hücresel antioksidan aktivitesini değerlendirmek için kullanıldı35. Üstel olarak büyüyen hücreler, flüoresans ölçümleri için şeffaf altları olan 96-kuyulu doku kültürü siyah plakalarına ekildi (0.2 ml ortam içinde oyuk başına 3x104 hücre) ve yüzde 5 CO,i3.55 altında 37 derecede 24 saat oturmaya bırakıldı. Tüm antioksidanlar yüzde 10 etanol içinde çözüldü. Hücreler daha sonra 50{{50}} kez seyreltilmiş 2',7'-diklorofloresein diasetat (0) solüsyonu ile muamele edildi.05 mL). kit ile ve 1, 3 veya 6 saat boyunca aynı hacimde farklı konsantrasyonlarda antioksidan numuneler. Saflaştırılmış bileşiklerin nihai konsantrasyonları 1 ila 100 uM arasındaydı. Karışımlar, her bir bileşiğin (1-100uM) eşdeğer konsantrasyonlarını içeriyordu. Kontrol hücreleri, yalnızca yüzde 10 etanol (h/h) ile işlendi. Kültür ortamında etanolün nihai konsantrasyonu yüzde 5 (h/h) idi. Tüm işlemler, üç teknik kopya halinde gerçekleştirildi ve üç bağımsız deney yapıldı. Sonraki adımlar, üreticinin tavsiyelerine göre gerçekleştirildi(https://www.cellbiolabs.com). Hesaplamalar daha önce anlatıldığı gibi yapıldı, Genotoksik etkiler. HT29 hücrelerinde tek tek antioksidanlar (O, N artı , RN-) ve bunların karışımları (ON-, RN artı ) tarafından sergilenen genotoksik etkileri belirlemek için, daha önce tarif edildiği gibi bir kuyruklu yıldız tahlil prosedürü uygulandı. Üstel olarak büyüyen HT29 hücreleri 24-kuyu doku kültürü plakalarına (1.8 mL ortam içinde oyuk başına 10 derece hücre) ekildi ve yüzde 5 CO altında 37 derecede 24 saat yerleşmeye bırakıldı, 55, Daha sonra hücreler, tek başına veya karışımlar halinde 0.2 mL farklı konsantrasyonlarda antioksidanlarla 24 saat süreyle işleme tabi tutuldu. Saflaştırılmış bileşiklerin nihai konsantrasyonları, 1 ila 100 uM aralığındaydı. Karışımlar, her bir bileşiğin (1-100 uM) eşdeğer konsantrasyonlarını içeriyordu. Kültür ortamındaki nihai etanol konsantrasyonu yüzde 3 (h/h) idi. Negatif kontroller olarak kullanılan hücreler sadece solvent ile muamele edildi. Tedavi süresinden sonra ortam, oyuklardan aspire edildi ve hücreler, 0.5 mL PBS ile yıkandı. Hücreler daha sonra 0.2 mL tripsin solüsyonu (0.5 g/L) kullanılarak ayrıldı55 Tripsin aktivitesi, her bir oyuğa 1.8 mL tam büyüme ortamı eklenerek durduruldu. Hücreler yeniden süspanse edildi, sayıldı ve 1.5 mL tüplere (tüp başına 30 x 103³hücre) bölündü. Hücre süspansiyonu santrifüjlendi (100 x g, 5 dak, 4 derece). Hücre topakları 1 mL PBS ile yıkandı ve tekrar santrifüjlendi (100xg, 5 dakika, 4 derece ）5. Daha sonra, PBS atıldı ve hücreler, önceden su içinde 150 μL yüzde 0,5 LMP agaroz içinde yeniden süspanse edildi. 42°C'ye ısıtılmış ve bu karışımdan 40 µL önceden yüzde 1 normal erime noktalı agaroz (NMP agaroz) ile kaplanmış bir mikroskop lamına iki nokta olarak yerleştirilmiştir.Slaytlar lamellerle kapatılmıştır.Agarozun sertleşmesine izin verilmiştir. mikroskop lamlarını en az 5 dakika boyunca buz gibi soğuk bir tepsiye yerleştirme5 Test edilen maddelerin her konsantrasyonu için her biri iki tekrarlı üç slayt hazırlandı Yüksek tuzlu alkali tamponda (2.5 M NaCl, 0.1 M EDTA) gece boyunca lizizden sonra 0.01 M Tris, yüzde 1 Triton X100,pH10), slaytlar, soğuk elektroforez tamponuyla (0.3 M NaOH, 1 mM EDTA, pH 13) kaplı bir Bio-Rad Sub-Cell GT elektroforez platformuna (UK) yerleştirildi ve elektroforezden önce kromatinin 25 dakika gevşemesine izin verildi. V ve 300 mA (0.75 V/cm) karanlıkta 30 dakika 4-8 derecede. Bu aşamadan sonra lamlar önce PBS, ardından su ile yıkandı. Ardından DNA, 20 dakika boyunca TE tamponu (0.1 M Trizma-Base, 1 mM EDTA, pH 7.5) içinde SybrGreen ile boyandı. Boyamadan sonra lamlar distile su ile 5 dakika yıkandı. DNA "kuyruklu yıldızlar", bilgisayarlı bir slayt tarama sistemi (Metafer4, Almanya) ile birleştirilmiş bir floresan mikroskobu (Zeiss ImagerZ2, ABD) altında analiz edildi. Kuyruklu yıldız analizi, numune başına 200 ardışık çekirdeğin sayılmasını içeriyordu. Analiz edilen örneklerin genotoksisitesi, kuyruklu yıldız kuyruğundaki DNA yüzdesi olarak ifade edildi. Her muamelenin üç bağımsız tekrarı yapıldı.

Cistanche bağışıklığı artırabilir

Küresel DNA metilasyonu.

For the determination of global methylation of DNA, a modified comet assay procedure was developed. Methylation sensitive comet assay was performed according to Wentzel's procedure with significant modifications. The cells were seeded in 6-well tissue culture plates(4×105 cells per well in 3.6 mL of medium) and were allowed to settle for 24 h at 37°C under 5%CO,Then, the cells were treated with 0.4 mL, of different concentrations of the tested antioxidants or their mixtures for 24 h at 37C. The final concentrations of individual compounds and solvents were the same as used for genotoxic effect assessment. After incubation time, the medium was aspirated from the wells and the cells were washed with 2 mL of PBS. The cells were detached using 0.4 mL of trypsin solution (0.5 g/L). Then,3.6 mL of medium was added to each well. The cells were re-suspended, counted, and aliquoted into 1.5 mL tubes(30×10 cells per tube). The cell suspension was centrifuged (100×g,5 min, 4°C). The cell pellets were washed with 1 mL of PBS and centrifuged again(100×g 5 min,4℃C）.PBS was discarded and the cell pellet was re-suspended in 100μL of 1%LMP agarose in water pre-warmed to 45 °C. Then,40 μL of this mixture was placed as two spots on a microscope slide pre-coated with 1%normal melting point agarose(NMP agarose)5. The slides were then covered with coverslips and left to set on an ice-cold tray for at least 5 min to solidify agarose5. Each treatment embraced a set of 3 microscope slides. After overnight lysis in a high salt alkaline buffer(2.5 M NaCl, 0.1 M EDTA, 0.01 M Tris,1% Triton X100, pH 10), the slides were washed twice with water>5. Sıkıca paketlenmiş kromatin, çekirdeklerin 1.5 mM proteinaz K çözeltisi (slayt başına 0.2 mL)3 ile işlenmesiyle çözüldü. Slaytlar parafilm ile kaplandı, nemli bir bezle kaplı plastik bir kaba yerleştirildi, 37 derecede 10 dakika bırakıldı, sonra su3 ile yıkandı. Bu şekilde restriksiyon endonükleazları (Hall ve MspI) ile sindirim için nükleoidler hazırlanmıştır. Her iki enzim de aynı kısıtlama dizisini (5'-CCGG-3') tanır, ancak metillenmiş sitozine karşı farklı hassasiyet gösterir. HpalI'nin yalnızca metillenmemiş dizileri sindirdiği varsayılır. MspI, tamamen metillenmiş dizilerin yanı sıra metillenmemiş dizileri de parçalayabilir. Böylece, CpG dizisinin nispi DNA metilasyon seviyeleri, MspI sindirimi ve HpalI ile sindirilmiş nükleoidler ile gözlemlenen kuyruklu yıldız kuyruğundaki global DNA miktarı arasındaki fark olarak yansıtılır. Enzimatik sindirim için uygun koşulları yaratmak için.{{20}}.2 mL Moleküler sınıf su ile 1:9(v/v) oranında seyreltilmiş Tango tamponu setteki her lam üzerine uygulandı. Slaytlar parafilm ile kaplandı, nemli bir bezle kaplı plastik bir kaba yerleştirildi ve 10 dakika 37 derece Ce'de bırakıldı. Daha sonra tamponun fazlası çıkarıldı. Setteki üç slaydın her biri farklı şekilde işlendi. İlk (kontrol) slayda sadece 0.15 mL seyreltilmiş Tango tamponu uygulandı. İkinci slayttaki agaroz gömülü çekirdekler 0.15 mL Hall enzimi （0.37 μunit） ile işlenirken, üçüncü lamın üzerine aynı hacimde MspI （0.26 μunit） ilave edildi. Enzim çözeltileri, seyreltilmiş Tango tamponu kullanılarak hazırlandı. Slaytlar bir parafilm ile kaplandı ve nemli bir plastik kaba yerleştirildi. Enzimatik sindirim, 37 derecede 45 dakika boyunca gerçekleştirildi. Sindirimden sonra, slaytlar iki kez su ile yıkandı. Kuyruklu yıldız testinin elektroforez ve DNA boyama gibi diğer adımları, "Küresel DNA metilasyonu" bölümünde açıklandığı gibi gerçekleştirilmiştir. DNA "kuyruklu yıldızlar", bilgisayarlı bir slayt tarama sistemi (Metafer4, Almanya) ile birleştirilmiş bir floresan mikroskobu (Zeiss ImagerZ2, ABD) altında analiz edildi. Comet analizi, Comet skor yazılımı (ABD) yardımıyla yapıldı ve numune başına 100 çekirdeğin sayımını içeriyordu. Kuyruklu yıldız kuyruğundaki ortalama DNA yüzdesi, DNA parçalanmasının bir ölçüsüydü. Küresel DNA'yı hesaplamak içinmetilasyon(yüzde CpG metilasyonu), aşağıdaki denklem kullanıldı: yüzde CpG metilasyonu=100—Hpal/MspI×100, burada Hpal/MspI, HpalII ile sindirilmiş nükleoidin kuyruklu yıldızındaki DNA yüzdesinin ve DNA'nın oranıdır. Mspl85 ile sindirilen nükleoidin kuyruklu yıldızındaki yüzdesi. DNA hasarı artefaktları, kısıtlama enzimleri ile sindirilmiş numuneler için elde edilen değerlerden kontrol numunesinin kuyruğundaki DNA yüzdesi çıkarılarak hesaplanmıştır. Her deneyin üç bağımsız tekrarı yapıldı.

Mikrodizi analizi.

355'ten önce gösterildiği gibi genomik analiz yapıldı, HT29 hücreleri 24-kuyulu doku kültürü plakalarına (1.8 mL ortam içinde oyuk başına 105 hücre) ekildi ve 37°C'de 24 saat yerleşmeye bırakıldı. derece altında yüzde 5 CO, Daha sonra hücreler, tek başına (Q, N-) veya karışımda (QN-) 0.2 mL farklı konsantrasyonlarda antioksidanlar ile 24 saat muamele edildi. Araştırılan bileşiklerin nihai konsantrasyonları 1 ila 10 uM arasındaydı. Karışım, her bileşiğin eşdeğer konsantrasyonlarını içeriyordu. Negatif kontroller olarak kullanılan hücreler sadece solvent ile muamele edildi. Kültür ortamında etanolün nihai konsantrasyonu yüzde 3 (h/y) idi. RNA izolasyonu. Antioksidan tepkiye dahil olan 84 genden oluşan dizinin ters transkripsiyon ve gerçek zamanlı PCR'si ve veri analizi daha önce tarif edildiği gibi yapıldı. Hücrelerin her muamelesinin üç bağımsız tekrarı gerçekleştirildi.

İstatistiksel analiz.

Tüm değerler, aksi belirtilmedikçe, üç bağımsız deneyin ortalama±SD'si olarak ifade edilir. DPV ve DPPH tahlili kullanılarak hücresiz bir sistemde ve ayrıca CAA testi ile elde edilen hücresel modellerde antioksidan aktivite tayinlerinin istatistiksel önemi, eşleştirilmemiş Tukey testi ile incelendi (p Küçük veya eşittir 0.{{ 6}}5). Comet tahlilleriyle analiz edilen genotoksisite ve global DNA metilasyonu sonuçları, Dunnett'in post-hoc testi ile tek yönlü ANOVA ile incelendi. Bu istatistiksel analizler, Prism 4.0 yazılım paketi (GraphPad Software, Inc., ABD) kullanılarak yapıldı. Örnekler ve kontroller arasındaki gen ekspresyonundaki değişikliklerin istatistiksel önemi, GenGlobe Veri Analiz Merkezi (Qiagen, ABD) kullanılarak ilgili her bir gen için eşleştirilmemiş Student t testi ile de değerlendirildi. İstatistiksel anlamlılık düzeyi, 0,05'ten küçük veya ona eşit olarak ayarlandı.

Bu makale alıntıdırwww.nature.com/scientificreports