Melatonin, Yüksek Tuzlu Diyetle İndüklenen Hipertansif Sıçanların Böbreklerine T Lenfosit İnfiltrasyonunu, CXCR3 Ligand Kemokinlerinin Ekspresyonunu Önleyerek Önler

Daha fazla bilgi için:ali.ma@wecistanche.com

Ariel Bier¹, Ravan Khashab², Yehonatan Sharabi^1,2,3, Ehud Grossman^1,2,3ve Avshalom Leibowitz^1,2,3,*

¹Tıp D, Chaim Sheba Tıp Merkezi, Tel-Hashomer 5262000, İsrail; arielbier@gmail.com (AB);Yehonatan.Sharabi@sheba.health.gov.il (YS); Ehud.Grossman@sheba.health.gov.il (EG)² Hypertension Unit, the Chaim Sheba Medical Center, Tel-Hashomer 5262000, Israel;rawankhasbab@gmail.com³Sackler Tıp Fakültesi, Tel-Aviv Üniversitesi, Tel-Aviv 6997801, İsrail*

Özet: Daha önce yaptığımız bir çalışmada şunu göstermiştik:melatoninengellerböbrekoksidatif stresi azaltarak tuz kaynaklı hipertansiyon modelinde hasar. Bu etkinin melatoninin immünomodülatör özelliklerini içerdiğini varsaydık. In vivo Study-Dahl tuza duyarlı (DSS) sıçanlar normal yem, yüksek tuzlu diyet (HSD) veya bir HSD ile beslendi.melatonin(30 mg/kg/gün) sularında sekiz hafta.böbrekleranında lenfosit izolasyonu ve Akış sitometrisi (CD3 artı CD4 artı ve CD3 artı CD8 artı) ile karakterizasyon ve lenfosit kemoatraktan (esas olarak CXCL) için hasat edildikemokinler) gen ekspresyonu çalışmaları. In vitro çalışma-sıçanı, mezanjiyal hücreler (RMC), yüksek tuzlu bir ortamda,melatonin. Bir HSD, kontrole kıyasla CD4 artı ve CD8 artı T lenfositlerinin önemli ölçüde renalinfiltrasyonu ile ilişkilendirildi. Melatonin, böbrek lenfosit infiltrasyonunu önemli ölçüde azalttı. Bir HSD, CXCL'nin mRNA ifadesini önemli ölçüde arttırdıkemokinler.HSD'ye melatonin eklenmesi bu etkiyi ortadan kaldırdı. RMC hücrelerinin tuzla tedavi edilmesi, CXCL10 ve CXCL11 ekspresyonunu artırdı, ancak CXCL9'u artırmadı. Eklememelatoninkültür medyasına bu artışı engelledi. HSD ile beslenen sıçanları melatonin ile tedavi etmek, renal lenfosit kemoatraktanmRNA ekspresyonunu azalttı ve renal T lenfosit infiltrasyonunu önemli ölçüde azaltmakla ilişkilidir. Tuz, melatonin tedavisi ile köreltilen kemokin üreten böbrek hücreleri üzerinde doğrudan bir etkiye sahip olabilir.

Anahtar Kelimeler:melatonin; tuz; T-lenfositler; hipertansiyon;böbrek; CXCL 9; CXCL 10; CXCL 11

1. Giriş

Hipertansiyon (HTN), önde gelen değiştirilebilir kardiyovasküler risk faktörüdür. Nüfusun yaşlanması nedeniyle, HTN prevalansı istikrarlı bir şekilde artmakta ve ileri yaşlarda yüzde 30'a ulaşmaktadır [1]. Çeşitli tıbbi tedavi seçeneklerine rağmen, HTN'nin dünya çapında kontrolü zayıftır. Kontrolsüz HTN'nin sonuçları yıkıcıdır ve halk sağlığı üzerinde büyük bir olumsuz etki yaratır [2].

HTN'nin patogenezinde çeşitli davranışsal, çevresel ve genetik faktörler rol oynar. Batılı diyetlerdeki yüksek tuz içeriği, HTN'ye önemli bir katkıda bulunur ve artan morbidite ve mortalite ile ilişkilidir. Kılavuzlar ve kamu girişimleri, genel nüfus için tuz alımının azaltılmasını önermektedir. Bununla birlikte, tuz duyarlılığını HTN'ye bağlayan patofizyoloji tam olarak anlaşılmadığından ve gelişmiş mekanik anlayışa ihtiyaç duyduğundan, her birey bu kısıtlamadan faydalanamayabilir [3]. Bu nedenle, daha iyi HTN anlayışı ve kontrolü için yeni stratejiler çok önemlidir ve yeni araştırma paradigmalarını acil bir ihtiyaç haline getirir.

Esansiyel HTN'nin patogenezinde inflamasyon ve oksidatif stresin rol oynadığı bulunmuştur. Bu süreçleri başlatan ve sürdüren tetikleyicileri araştırırken, birçok deneysel HTN modeli, adaptif immün yanıtın dahil olduğunu öne sürer [4].

TıklaBöbrek fonksiyonu için Cistanche faydaları ve yan etkileri

Adaptif bağışıklığı HTN'ye bağlayan ipuçları 1960'lardan beri zaten mevcuttu. Ancak, ancak son zamanlarda, bağışıklık sisteminin daha iyi anlaşılmasıyla bu yönde ilerleme kaydedilebildi. Guzik ve diğerleri tarafından yapılan öncü bir çalışma. anjiyotensin (Ang) II veya deoksikortikosteron (DOC) tuzu HTN'nin, T ve B lenfositlerinde eksik olan rag1-/- farelerde köreldiğini ve T'nin adaptif transferinin, ancak B hücrelerinin değil, BP yanıtını geri yükleyebileceğini gösterdi [5]. Bu makaleden bu yana, ortak hayvan modellerinin çoğunda HTN'nin patogenezi ile ilgili çeşitli evlat edinen bağışıklık bileşenleri bulunmuştur. Tuz kaynaklı HTN modelinde T hücrelerinin rolü de kapsamlı bir şekilde incelenmiştir. In vitro çalışmalar, tuzun naif T hücre farklılaşmasını TH17 hücrelerine itebileceğini göstermektedir [6]. Dhal tuzuna duyarlı (DSS) sıçanlar gibi yüksek tuzlu diyet (HSD) ile indüklenen HTN modellerinde yapılan çok sayıda in vivo çalışma, geniş renal T hücre infiltrasyonu gösterir [7-9].

Birçok fizyolojik süreç arasında,melatoninkan basıncı regülasyonu ile katılım biraz sezgiseldir. Kan basıncının sirkadiyen modeli melatonin ve HTN ile ilgili kapsamlı araştırmaları teşvik etti. Geçmişte, insanlarda ve deneysel modellerde yapılan birçok çalışma, düşük melatonin düzeylerini HTN'ye bağlamıştır [10]. Melatonin takviyesinin özellikle gece HTN'si olan hastalarda HTN'yi tedavi edebileceğini düşündüren bazı klinik veriler vardır [11]. Bununla birlikte, bu verilerin tutarsızlığı, sirkadiyen olmayan melatonin özelliklerinin de kan basıncının düzenlenmesinde yer alıp almadığı konusunda soruları gündeme getiriyor.

Melatoninin anti-inflamatuar ve anti-oksidatif özellikleri, melatoninin bağışıklık sistemi ile etkileşime girdiğini ileri sürmüştür. Ortaya çıkan veriler, melatonin sinyalleşmesinin T hücresi gelişimi, aktivasyonu, farklılaşması ve hafızasındaki rolünü ima etmiştir. Kanıt varmelatoninT hücrelerinde membran ve nükleer reseptörler bulunur [12,13].melatoninTh1 yanıtının pivot düzenleyicisi olan interferon (IFN) gibi immün yanıtta yer alan birçok sitokinin üretimini etkiler [14].

Bazı araştırmacılara göre oksidatif stres ve T hücre yanıtı, HTN ve organ hipertansif hasarının gelişimini teşvik etmek için birlikte çalışır [15]. Daha önceki çalışmalarımızda gösterdik kimelatonintuza duyarlı bir HTN sıçan modelinde (DSS modeli) lokal (böbrek) oksidatif stresi azaltır ve tuza bağlı böbrek fibrozu ve proteinüriyi önler [16]. Oksidatif stres, HTN ile ilişkili adaptif immün yanıtta çok önemli bir role sahip olduğundan, melatoninin immünomodülatör özelliklerinin, HSD ile indüklenen HTN'deki koruyucu rolünden sorumlu olduğunu varsaydık.

Bu çalışmanın amacı, olup olmadığını değerlendirmektir.melatonintuz kaynaklı T hücre tepkisini azaltır ve bu etkiden sorumlu mekanizmaları aydınlatmak için.

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1. Hayvanlar ve Çalışma Protokolü

Çalışma protokolü, İsrail'deki Sheba tıp merkezindeki kurumsal hayvan etik kurulu tarafından onaylandı. Sağlık durumları, vücut ağırlığı ölçülerek ve her hayvan için hareket ve sağlık koşulları için günlük genel bir gözlemle izlendi. Dört haftalık erkek Dahl tuza duyarlı sıçanlar (RGD Cat# 1582190, RRID: RGD_1582190), 14 saat aydınlık/10 saat karanlık döngüsü ile 22°C'de normal kafeslerde (kafes başına iki sıçan) bir hayvan tesisinde barındırıldı. Sıçanlara normal bir tuz diyeti verildi ve beş günlük bir alışma süresi boyunca ad libitum içmeleri için musluk suyu verildi. Sıçanlar daha sonra 8 haftalık bir süre boyunca diyete göre üç gruba (n=8) ayrıldı. Etik komitesine göre, hastalık ve acı belirtileri gösteren hayvanlar kurban edilecekti.

Kontrol grubuna standart sıçan yemi diyeti (2018 SC; Teklad Envigo, Madison, WI, ABD) ve musluk suyu verildi; yüksek tuzlu diyet (HSD) grubuna eşleştirilmiş zenginleştirilmiş tuzlu diyet (yüzde 4) (TD.120485; Teklad Envigo, Madison, WI, ABD) ve musluk suyu verildi vemelatoningruba aynı zenginleştirilmiş tuz diyeti (yüzde 4) melatonin (M5250; Sigma, Rehovot,İsrail) (30 mg/kg/gün) ile içme sularında verildi. Vücut ağırlığı ve su tüketimi periyodik olarak ölçülmüştür. Her bir hayvan için doğru dozu vermek için her kafesteki kibrit su ihtiyacında doğru melatonin miktarı çözüldü. Gün sıfır, HSD ve melatonin tüketiminin başladığı gün olarak tanımlanır. Çalışmanın sonunda, sıçanlar yüzde 3 izofluran (anestezi derinliği arka ayak sıkma ile doğrulandı) ile derin anestezi uygulanarak feda edildi veböbreklerhasat edildi. Her iki böbreği de alındı ​​ve hemisektomi yapıldı. Böbrekler, hızlı bir şekilde alınan ve sıvı N2 içinde aniden dondurulan ve -80 ◦C'de saklanan birkaç kısım dışında akış sitometrisi analizi için alındı. RNA ekstraksiyonu için donmuş dokular kullanıldı.

Cistanche-böbrek hastalığı belirtileri

2.2. Gerçek Zamanlı Kantitatif Ters Transkripsiyon PCR

genlerin mRNA ekspresyon seviyeleri tespit edildi.böbrekgerçek zamanlı kantitatif ters transkriptaz-PCR (qRT-PCR) ile doku. Toplam RNA, bir NucleoSpin RNA Kiti (MACHERY-NAGEL, Düren, Almanya) kullanılarak böbrek dokusundan ekstre edildi. Ters transkripsiyon, Applied Biosystems High-Capacity cDNAReverse Transkripsiyon Kiti (Applied Biosystems, Foster City, CA, ABD) kullanılarak yapıldı. qRT-PCR reaksiyonları, Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems, Warrington, UK) ve Applied Biosystems 7500 gerçek zamanlı PCR sistemi kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Döngü koşulları şunlardı: 0.20 dakika boyunca 95 ◦C'lik ilk tek adım ve ardından 95 ◦C'de 3 s için 40 döngü eriyik aşaması ve 60 ◦C'de 30 s'lik uzatılmış aşama. 40 döngünün sonunda bir erime eğrisi aşaması gerçekleştirildi. Ribozomal protein yanal sap alt birimi P0 (Rplp0) mRNA, bir dahili kontrol olarak kullanıldı. Primerler Tablo 1'de listelenmiştir.

Tablo 1. Bu çalışmada kullanılan sıçan primerlerinin listesi.

2.3. Böbreklerden T Hücre İzolasyonu

Böbrek kapsülü çıkarıldıktan sonra ikiböbrekler2 mML-glutamin, yüzde 10 FBS, 10 ug/mL DNase 1 (Kök Hücre teknolojileri, Cambridge, MA) içeren RPMI 1640'ta 100 µm hücre süzgecinden 2 mL'lik bir şırınganın pistonu ile karıştırıldı ve karıştırıldı , ABD) ve yüzde 0.1 kolajenaz tip IV (CLS 4, Worthington Decatur, AL, ABD). Çözelti 37 ◦C'de 25 dakika inkübe edildi. Yıkama solüsyonu (DPBS/2 yüzde FBS/2 mM EDTA) daha sonra böbrek homojenatına ilave edilerek 45 mL'ye ulaştı ve 70 um'lik bir hücre süzgecinden süzüldü. Çözelti, 400 x g/7 dakikada santrifüjlendi. ve pelet 5 mL'lik bir yıkama solüsyonunda süspanse edildi ve 40 um'lik bir hücre süzgecinden süzüldü ve 400 x g/7 dakika yeniden santrifüjlendi. Pelet, 3 ml FBS (10 mM EDTA) içinde yeniden süspanse edildi ve Histopaque-1083 (Sigma, Rehovot, İsrail) üzerine katmanlandı ve fren kapalı olarak 20°C'de 400 x g/30 dakika santrifüjlendi. Histopaque'ın üzerinde duran mononükleer hücre tabakası çıkarıldı, iki kez yıkama solüsyonu ile yıkandı ve akış sitometrik analiz için 5 mL'lik bir yıkama solüsyonunda süspanse edildi.

2.4. Akış Sitometrisi

Her gruptan,böbrekler5-7 sıçandan analiz edildi. Her numune için 1 x 106 hücre alındı. İzole edilmiş mononükleer hücreler, hücre dışı belirteçlerle inkübe edildi: anti-CD3 (Thermo Fisher Scientific Cat# 12-0030-82, RRID:AB_465493) ve izotip kontrolü (Thermo Fisher Scientific Cat# 12-4742-41, RRID) :AB_10753770), anti-CD4 (Thermo FisherScientific Cat# 17-0040-80, RRID:AB_1210581) ve izotip kontrolü (Thermo Fisher Scientific Cat# 17-4724-81, RRID: AB_470188), anti-CD8 (Thermo Fisher Scientific Cat# 25-0084-82, RRID:AB_10548361) ve izotip kontrolü (Thermo Fisher Scientific Cat# 25-4714-80,RRID: AB_657914). Tüm hücreler, FlowJo yazılımı (FlowJo, RRID: SCR-008520) kullanılarak akış sitometrisi (BD FACSCalibur Akış Sitometri Sistemi, RRID: SCR_000401) ile analiz edildi.

Cistanche-böbrek fonksiyonu

2.5. Hücre kültürü

Mesangial sıçan hücre çizgisi, RMC (ATCC Cat# CRL{{0}}, RRID: CVCL_0506), ATCC®'den elde edildi. Hücre, 1.5 g/L sodyum bikarbonat ve 4.5 g/L glikoz içerecek şekilde ayarlanmış 4 mM L-glutamin ile Dulbecco'nun modifiye Eagle ortamında (01-055-1A, biyolojik endüstriler, Beit HaEmek, İsrail) kültürlendi ve 0,4 mg/mLG418 ve yüzde 15 fetal sığır serumu. Melatonin, Sigma'dan (M5250 Rehovot, İsrail) elde edildi. 250 mMmelatoninetanolde stok yapıldı. Hücreler, melatoninsiz veya melatoninli (0.5 mM) normal veya yüksek tuzlu (ortama 80 mM NaCl eklenerek) koşullarda kültürlendi. Melatonin tedavisi, ortama NaCl eklenmeden 45 dakika önce zamanlanmıştır. Tüm deneyler, oyuk başına 3 x 105 hücreli 6 oyuklu plakalarda yapıldı ve 6 bağımsız deneme ile yapıldı.

2.6. İstatistiksel analiz

Veriler ortalama ± SEM olarak sunulmuştur İstatistiksel analizler IBMSPSS İstatistikleri, RRID: SCR_019096 kullanılarak yapılmıştır. Tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ve posthoc Tukey yöntemi gruplar arasındaki farklılıkları inceledi. Gerçek zamanlı qPCR verileri DataAssist, RRID: SCR_014969 kullanılarak analiz edildi.

3. Sonuçlar

3.1. Melatonin, HSD Tüketen Sıçanları Korur

Bu çalışma sırasında sıçanların yaşı 4-13 haftaydı. Bu yaşta, sıçanların sağlığı, kontrol grubu tarafından sergilenen kilo alımı ile gösterilir [17]. Ancak, HSDgroup 30. günde bir platoya ulaştı vemelatoninHSD'ye bu fenomeni iyileştirdi (Şekil 1A). HSD grubu, deney periyodu sırasında, sıçanların yüzde 50'sinin öldüğü veya hayvan etik kurulu kurallarına göre ötenazi gerektiren bir klinik duruma sahip olduğu yüksek bir ölüm oranı sergiledi. Melatonin takviyeleri, deney periyodunun sonunda 58. günde sekiz sıçandan sadece birinin öldüğü fare ölümlerini önemli ölçüde önledi (Şekil 1B).

Şekil 1.melatoniniyileştirilmiş kan basıncı ve HSD'de hayatta kalma. DSS Sıçanları 9 hafta boyunca melatoninli ve melatoninsiz HSD ile tedavi edildi. Yüksek tuzlu bir diyet 36. günden itibaren vücut ağırlığını azalttı ve melatonin bu etkiyi hafifletti (A). HSD, 4. günden 0 itibaren ölüm oranını artırdı. HSD federelerini melatonin ile tedavi etmek hayatta kalmalarını iyileştirir. (B). (n=8) *-p 0.05'e eşit veya daha az tuz ve tuz artı melatonin ve kontrol. #-p 0,05 tuza karşı kontrol ve tuz artı melatonin'e eşit veya daha az. HSD - yüksek tuzlu diyet.

3.2. Melatonin, HSD Tarafından İndüklenen Böbrek T Hücre İnfiltrasyonunu Önler

Hücreleri izole ettikböbrekve onları T hücre işaretçisi CD3'e bağladı. CD3 artı hücreler, CD4 ve CD8'e kapılandı. Hem CD3 artı CD4 artı hem de CD3 artı CD8 artı HSD'de (sırasıyla yüzde 5,18 ± 1,62 ve yüzde 4,6 ± 0,75 ) kontrole (0.16 ± {{18}) kıyasla önemli ölçüde daha yüksekti. }.{{20}}2 ve sırasıyla yüzde 0,95 ± 0,15 ) vemelatoninHSD'ye takviye, hem CD3 artı CD4 artı hem de CD3 artı CD8 artı hücreleri kontrol seviyelerine geri indirdi (sırasıyla 0.68 ± 0.21 ve 1.37 ± 0.45) (Şekil 2A–D).

Şekil 2. Melatonin, T hücrelerinin vücuda sızmasını önler.böbrek. T hücreleri, sıçanların böbreklerinden izole edildi ve CD3 için kapılandı. CD3-pozitif hücreler, CD4 ve CD8 için kapılanmıştır. Melatonin (C), kontrol grubundan (A) hiçbir fark olmaksızın melatonin içermeyen HSD'ye (B) kıyasla hem CD3 artı CD4 artı hem de CD3 artı CD8 artı azalttı. Tüm sıçanlar için analiz (D)'de gösterilmiştir (n=7–8). HSD - yüksek tuzlu diyet. *-p 0'den küçük veya eşittir.05'e karşı kontrol. #-p Tuz artı melatonin ile karşılaştırıldığında 0,05'e eşit veya daha az.

3.3. Melatonin, HSD'de Düzenlenen Bazı Böbrek Kemokinlerini Azaltır

T hücrelerinin inflamatuar dokulara alımı, lokal kemokin ekspresyonu ile düzenlenir. Bu nedenle, sıçanlarda iki kemokin ailesinin ifadesini ölçtük.böbrekler: kemokin (CXC motifi) ligandı (CXCL) ailesi ve kemokin (C-Cmotif) ligandı (CCL) ailesi.

CXCL ailesi için, T hücreleri üzerindeki CXCR3 reseptörünü kullanarak T hücrelerini hedef dokularına çeken CXCL 9, 10 ve 11, HSD sıçanlarında önemli ölçüde yukarı doğru düzenlenmiştir. eklenmesimelatoninHSD'ye geçiş, ifadelerini tekrar kontrol seviyelerine indirdi. Aynı model, CXCL 1 ve 16 için tespit edildi. Ancak, CXCL12 için, HSD'de hiçbir yukarı regülasyon tespit edilmedi (Şekil 3A).

CCL ailesi için, CCL 2, 4, 12, 17, 19 ve CX3CL1, HSD'de yukarı regülasyon göstermedi. CCL3, HSD'de yukarı regülasyon yaptı, ancak diyete melatonin eklenmesiyle önemli bir değişiklik tespit edilmedi. CCL7 için, HSD'de önemli bir yukarı düzenleme ve ilavesiyle önemli bir aşağı düzenlememelatoninHSD tespit edildi (Şekil 3B).

Şekil 3. Upregülasyonböbrekkemokinlermelatonin içeren ve içermeyen HSD'de. Sıçanlarda kemokin (CXC motifi) ligand (CXCL) ailesi (A), kemokin (CC motifi) ligand ailesi ve CX3CL1 (B) ekspresyonu belirlendi. (n=7–8) *-p 0'den küçük veya eşittir.05'e karşı kontrol. #-p Tuz artı melatonlamaya karşı 0,05'e eşit veya daha az. HSD - yüksek tuzlu diyet.

3.4. Melatonin'in RMC Mezanjiyal Hücre Hattı Üzerindeki Doğrudan Etkisi

Daha sonra, CXCR3 reseptörüne bağlanarak T hücrelerini çeken CXCL9, 10 ve 11'e odaklandık. Bunların ifadesini belirledik.kemokinlerbir sıçan mezanjiyal hücre hattı olan RMC hücrelerinde.

Hücreleri 0,5 mM olmadan ve ile 80 mM NaCl ile tedavi ettik.melatonin. Bu NaCl konsantrasyonu, CXCR10 ifadesini 2,4 ± 0 önemli ölçüde artırdı.26-kontrolle karşılaştırıldığında kat ve 0.5 mM melatonin eklenmesi önemli ölçüde azaldı bu ifade 1.4 ± 0.{{10}}kontrolle karşılaştırıldığında kat (Şekil 4A). CXCL11 için, 80 mM NaCl, ifadeyi kontrole kıyasla 3 ± 0.48-kat arttırdı ve 0,5 mM melatonin ilavesi bu ifadeyi önemli ölçüde 1,8 ± 0'a düşürdü.{{22 }}kontrolle karşılaştırıldığında katlayın (Şekil 4B). RMC hücrelerinde CXCL9 saptanmadı.

Şekil 4. Melatonin tedavisinin ekspresyonunu aşağı regüle ettiği bir mesangial hücre hattında tuz, CXCL10 ve CXCL11 ekspresyonunu yukarı regüle etti. RMC (sıçanların mezangial hücre çizgisi), 0.5 mM melatonin içeren ve içermeyen 80 mM tuz ile muamele edildi. CXCL10 (A) ve CXCL11 (B), tuz muamelesi ve ilavesiyle yukarı regüle edildi.melatoninbu düzenlemeyi azaltın. Grafikler 6 bağımsız deneme sunar. *-p 0'dan küçük veya eşit.001'e karşı kontrol #-p'den küçük veya eşit 0.005'e karşı tuz 80 mM ve melatonin 0.5 mM. $-p 0,05'e karşılık tuz 80 mM ve melatonin 0,5 mM'den az veya buna eşittir.

4. Tartışma

Faydalı etkisimelatoninHTN üzerindeki etkisi önceki çalışmalarda gösterilmiş ve tedaviye dirençli HTN için olası bir eylem planı olarak önerilmiştir [18]. İlk çalışmamızda oksidatif strese odaklandık ve melatoninin HSD'nin neden olduğu oksidatif stresi azalttığını ortaya koyduk. Bu çalışmada, adaptif bağışıklık etkisine odaklandık ve melatoninin HSD ile beslenen sıçanların hayatta kalmasını iyileştirdiğini gösterdik. Bu etki, böbreğe sızan T hücrelerinin azalması veböbrekkemokin ifadesi.

Tarihsel veriler, bir HSD tüketen DSS sıçanlarının şiddetli HTN geliştirdiğini ve daha yüksek ölüm oranları sergilediğini göstermektedir [19]. Dahl modeli kurarken, DSS sıçanları sütten kesmede (21-23 günlükken) bir HSD'ye (yüzde 8 NaCl) yerleştirildiğinde, bunların hızla HTN geliştirdiğini ve hepsinin tuzla beslenmenin 16. haftasında öldüğünü bildirmiştir [20]. Lateron, suşun bazı modifikasyonlarından sonra, Rapp ve ark. tüm sıçanların HSD'den sonraki sekiz hafta içinde (yüzde 8 NaCl) öldüğünü bildirdi [21]. Çalışmamızdaki sıçanlarda yüksek ölüm oranı vardı, ancak muhtemelen diyetlerindeki daha düşük tuz yüzdesi (yüzde 4) nedeniyle yüzde 100'e ulaşmadı. Bununla birlikte, açıktır ki,melatonintakviyesi, sıçan ölümlerini önemli ölçüde önledi.

Kilo almak, sıçanların 4-13 haftalıkken sağlığının bir göstergesidir. DSS sıçanları, iyi karakterize edilmiş bir suş olan Sprague Dawley'den kaynaklanır. Deneylerimizde kullandığımız sıçanların yaşlarında, sıçanların tutarlı bir şekilde kilo alması beklenir [22]. Birçok hayvan çalışmasında, kilo verme, deneylerin "son noktalarından" biri olarak kabul edilir [23]. Birkaç çalışmadan, DSS sıçanlarında bir HSD'nin kontrollere kıyasla daha düşük kilo alma oranları ile sonuçlandığı açıktır [24,25]. Bu çalışmalarla uyumlu olarak gruplar arasında ağırlık farklılıkları da gözlemledik. Burada, sıçanlar dört haftalık HSD'den sonra kilo almamıştır. Melatonin ile tedavi edilen sıçanlar kontrollerden daha az da olsa kilo almaya devam ettiğinden, melatonin HSD'nin bu etkisini de durdurdu.

yeteneğimelatoninhayvan modellerinde kan basıncını düşürdüğü, 20. yüzyılın yetmişli yıllarının sonlarında keşfedildi [26-28]. O zamandan beri, yüksek fruktozlu bir diyetin spontan hipertansif sıçanlarda metabolik sendromu indüklediği gibi birkaç başka modelde rapor edilmiştir [29,30]. Bu alandaki çalışmalarımız, melatoninin tuz kaynaklı HTN'de organ hasarını önleyerek ve mortaliteyi azaltarak rol oynadığını gösteren ilk çalışmadır.

Bu çalışmada, bir HSD'nin T lenfosit infiltrasyonunu indüklediğini gösterdik.böbrek, DSS sıçanlarında esas olarak Mattson'ın grubu tarafından tarif edilen bir süreç [31-33]. Bu infiltrasyon sürecinin DSS modelindeki temel rolü, T-hücresi eksik DSS sıçanlarının, Bir HSD ve bir splenosit transferi tarafından indüklenen HTN, tuza duyarlı HTN'yi şiddetlendirir [34].

Melatonin, T hücrelerini çeşitli yönlerden etkileyebilir (inceleme için bkz. [35]). Bu çalışma ilk kez göstermiştir kimelatoninhem CD4 plus hem de CD8 plus T hücrelerinin çekiciliğini azaltırböbrekHSD'de. Melatoninin bu etkisi, bu modeldeki faydalı etkisinin altını çizen mekanizma olabilir.

Melatoninin T hücre infiltrasyonunu azaltma yeteneği, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) fare modelinde tarif edilmiştir. EAE'de melatoninin CD4 artı T hücrelerinin ve Th17 hücrelerinin CNS'ye infiltrasyonunu azalttığı gösterilmiştir [36,37].

T hücresinin belirli bir dokuya çekiciliği esas olarak yerel yüksek konsantrasyonlar tarafından düzenlenir.kemokinlerBunlar, bağışıklık hücrelerinin göç modellerini ve konumlarını kontrol eden kemotaktik sitokinlerdir. T hücre infiltrasyonunu indükleyen iki büyük kemokin ailesi, CXC motif ligandı (CXCL) ve CC motif ligandı (CCL) kemokin aileleridir [38].

Böbrek fonksiyon bozukluğunu iyileştirmek için Cistanche

Çalışmamızda, CCL ailesinin HSD'ye verdiği yanıtta sabit bir model bulamadık.melatonin. dokuzun dışındakemokinlerbu ailede sadece CCL7 ve CLL21'in HSD'ye bağlı ekspresyonlarını arttırdığı, melatonin takviyesinin ise azalttığı gözlendi. Bir HSD, CCL3'ün ifadesini arttırdı, ancak melatonin ile tedavi edilen sıçanlarda hiçbir azalma tespit edilmedi. Aynı modelde yakın zamanda yapılan bir çalışma, bir HSD'nin CCL2'yiböbrekRNA-Seq yöntemini kullanarak [39]. Ancak bu çalışma, diyet başladıktan sonraki 3. ve 21. günlerdeki seviyeleri test etti. Çalışmamızda sekiz hafta sonra seviyeleri test ettik. HSD döneminde kemokin ekspresyonunun değişmesi mümkündür.

Tersine, CXCL 1, 9, 10, 11 ve 16 dahil olmak üzere CXCL ailesinin çoğunun seviyeleri, HSD ile tedavi edilen sıçanlarda arttı vemelatonintakviye bu artışı ortadan kaldırdı. Yalnızca CXCL12, HSD'ye yanıt olarak hiçbir artış göstermedi.

"İnterferon ile indüklenebilir CXC kemokin reseptörü 3 ligandları" olarak adlandırılan CXCL9, CXCL10 ve CXCL11, IFN- tarafından indüklenir ve CXC kemokin reseptörü 3'ün (CXCR3) ligandlarıdır. İn vivo çalışmalar, T lenfositlerin aktivasyonunda ve hedef organa alınmasındaki önemini göstermiştir [40-42]. Youn et al. insan hipertansif hastalarda hem T hücrelerinin renal infiltrasyonunu hem de üç CXCR3'ün dolaşımdaki seviyelerinin yükseldiğini gösterdi.kemokinler, CXCR3 ve ligandlarının insan HTN'sinde yer alan T hücreleri için alakalı olduğunu öne sürer [43]. Başka bir çalışma, hipertansif hastalarda CXCL10'un yükseldiğini ve seviyelerinin kan basıncı değerleriyle korele olduğunu göstermiştir [44].

Bu çalışmalar nedeniyle CXCL9, CXCL10 ve CXCL11'e odaklandık. Mesangial sıçan hücre hattını kültürledik ve onlara 80 mM NaCl ve 0.5 mM melatonin ile muamele ettik. CXCL 10 ve 11'in hücrelerde yukarı regüle edildiğini ve melatoninin bu yükselmeyi ortadan kaldırdığını bulduk. Sonuçlarımız, tuzun CXCL 10 ve 11'i yükseltmedeki etkisinin ve bunun tersi etkisinin olduğunu göstermektedir.melatonin, her ikisi de doğrudan mezanjiyal hücrelerde tespit edildi. Buna karşılık, bu hücrelerde CXCL9 tespit edilmedi.

Çalışmamızın sınırlamaları vardır. FACS sonuçlarımızda, CD3 plus'ın çoğu hem CD4 hem de CD8 için çift negatifti. Aynı sonuçlar Mattson'ın 2010'daki çalışmasında da görüldü [31]. Ancak Mattson'ın grubundan daha yakın tarihli çalışmalarda, CD3 artı CD4-CD8-hücreleri çok azdı [32,33,45,46]. Çift negatif CD3 hücrelerindeki önemli azalma, CD45 işaretçisinin eklenmesinin ve yalnızca Mattson'ın sonraki çalışmalarında gerçekleştirilen CD45pozitif olan hücrelerin analiz edilmesinin bir sonucu olabilir. CD3 artı CD4-CD8-'nin büyük popülasyonunun bir yapay olması mümkündür. Bununla birlikte, CD3 artı CD4 artı ve CD3 artı CD8 artı hücre popülasyonu için hiçbir artefakt bilinmemektedir.

5. Sonuçlar

Sonuç olarak, yüksek tuzlu bir diyet, T hücresi infiltrasyonu ile ilişkilidir.böbreklerDSS sıçanları. Tuz ayrıca böbrekte spesifik T hücresi kemoatraktanlarının ekspresyonunu da arttırdı. ile tedavimelatonin(30 mg/kg/gün) bu etkileri ortadan kaldırmıştır (melatoninCXCL3 ligand kemokin ekspresyonunda bir azalma ile birlikte T hücrelerinin böbreklere HSD ile indüklenen infiltrasyonunu azaltır).

İn vitro çalışmamız, tuz ve melatoninin, kemo-çekici madde ekspresyonunu doğrudan etkileyerek düzenleyebileceğini göstermektedir.böbrekhücreler.

Yazar Katkıları: Kavramsallaştırma, AL; biçimsel analiz, AB ve RK; araştırma, RK;metodoloji, AB ve AL; yazı—orijinal taslak, AB ve AL; yazma—inceleme ve düzenleme, YS ve EG Tüm yazarlar, makalenin yayınlanmış sürümünü okumuş ve kabul etmiştir.

Finansman: Bu araştırma hiçbir dış finansman almamıştır.

Kurumsal İnceleme Kurulu Açıklaması: Çalışma protokolü, Sheba tıp merkezindeki kurumsal hayvan etik kurulu, 1219/19/ANIM numaralı protokol ve Sağlık Bakanlığı 16418 numaralı protokol tarafından onaylanmıştır.

Bilgilendirilmiş Onam Beyanı: Uygulanamaz.

Veri Kullanılabilirlik Beyanı: Bu çalışmada sunulan veriler, ilgili yazardan talep üzerine sağlanabilir.

Teşekkür: Yazarlar, mükemmel teknik desteği için Zehava Shabtai'ye ve editörlük hizmetleri için Michael Kanovsky'ye teşekkür eder.

Çıkar Çatışmaları: Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Referanslar

1. Olsen, MH; Angell, SY; Esma, S.; Boutouyrie, P.; Burger, D.; Chirinos, JA; Damasceno, A.; Delles, C.; Gimenez-Roqueplo, AP;Hering, D.; et al. Artan kan basıncının mevcut ve gelecek nesiller üzerindeki küresel yükünü ele almak için bir eylem çağrısı ve yaşam boyu stratejisi: Lancet Hipertansiyon Komisyonu. Lancet 2016, 388, 2665–2712. [Çapraz Referans]

2. O'Brien, E. Hipertansiyon üzerine Lancet Komisyonu: Artan kan basıncının mevcut ve gelecek nesiller üzerindeki küresel yükünü ele almak. J. Clin. Hipertens 2017, 19, 564-568. [Çapraz Referans]

3. O'Donnell, M.; Mente, A.; Yusuf, S. Sodyum alımı ve kardiyovasküler sağlık. Daire. Araş. 2015, 116, 1046-1057. [Çapraz Referans]

4. Schiffrin, EL Hipertansiyonda küçük arterlerin yeniden şekillenmesi, antihipertansif tedavi ve bağışıklık sistemi mekanizmaları. Klinik. Araştırın. Med. 2015, 38, E394–E402. [Çapraz Referans]

5. Güzel, TJ; Hoch, NE; Kahverengi, KA; McCann, Los Angeles; Rahman, A.; Dikalov, S.; Goronzy, J.; Weyand, C.; Harrison, DG Anjiyotensin II ile indüklenen hipertansiyon ve vasküler disfonksiyonun oluşumunda T hücresinin rolü. J. Uzm. Med. 2007, 204, 2449–2460. [CrossRef][PubMed]

6. Kleinewietfeld, M.; Manzel, A.; Titze, J.; Kvakan, H.; Yosef, N.; Bağlayıcı, RA; Müller, DN; Hafler, DA Sodyum klorür, patojenik TH17 hücrelerinin indüklenmesiyle otoimmün hastalığı tahrik eder. Doğa 2013, 496, 518-522. [Çapraz Referans]

7. Mattson, DL; Lund, H.; Guo, C.; Rudemiller, N.; Geurts, AM; Jacob, H. Dahl tuzuna duyarlı sıçanlarda gen 1'i aktive eden rekombinasyonun genetik mutasyonu, hipertansiyonu ve böbrek hasarını hafifletir. Ben. J. Physiol. kural. Tamsayı. Komp. Fizyol. 2013, 304, 407–414.[CrossRef]

8. Mattson, DL İçeri sızan bağışıklık hücreleriböbrektuza duyarlı hipertansiyon ve böbrek hasarında. Ben. J. Physiol. Ren. Physiol.2014, 307. [CrossRef] [PubMed]

9. Lu, X.; Crowley, Tuza Duyarlı Hipertansiyon ve Böbrek Hasarında SD Enflamasyonu. Kör. Hypertens Temsilcisi 2018, 20. [CrossRef][PubMed]

10. Baker, J.; Kempinski, K. Rolümelatoninkan basıncı düzenlemesinde: Yardımcı bir anti-hipertansif ajan. Klinik. Tecrübe. Ecza. Physiol. 2018, 45, 755–766. [CrossRef] [PubMed]

11. Grossman, E.; Laudon, M.; Zisapel, N. Melatoninin gece kan basıncı üzerindeki etkisi: Randomize kontrollü çalışmaların meta-analizi. Vask. Sağlık Riski Yönetimi 2011, 7, 577-584. [CrossRef] [PubMed]

12. Pozo, D.; Delgado, M.; Fernandez-Santos, JM; Calvo, JR; Gomariz, RP; Martin-Lacave, I.; Ortiz, GG; Guerrero, JM Mel1a-melatonin reseptör mRNA'sının sıçan timusu ve dalağından lenfositlerin T ve B alt kümelerinde ifadesi. Faseb J. Off. yayın Fed.Am. Soc. Tecrübe. Biol. 1997, 11, 466-473. [Çapraz Referans]

13. Guerrero, JM; Pozo, D.; Garcia-Mauriño, S.; Osuna, C.; Molinero, P.; Calvo, JR Jurkat hücrelerinde melatonin tarafından geliştirilmiş IL-2 üretiminde nükleer reseptörlerin katılımı. Anne. NY Acad. bilim 2000, 917, 397-403. [CrossRef] [PubMed]

14. Farez, MF; Mascanfroni, kimlik; Mendez-Huergo, SP; Yeste, A.; Murugaiyan, G.; Garo, LP; Balbuena Aguirre, ME; Patel, B.;Ysrraelit, MC; Zhu, C.; et al.melatoninMultipl Skleroz Relapslarının Mevsimselliğine Katkı Sağlar. Hücre 2015, 162, 1338–1352.[CrossRef] [PubMed]

15. Kirabo, A.; Fontana, V.; de Faria, APC; Loperena, R.; Galindo, CL; Wu, J.; Bisikleteva, AT; Dikalov, S.; Xiao, L.; Chen, W.; et al. DC izoketal ile modifiye edilmiş proteinler, T hücrelerini aktive eder ve hipertansiyonu teşvik eder. J. Clin. Araştırın. 2014, 124, 4642-4656. [CrossRef][PubMed]

16. Leibowitz, A.; Volkov, A.; Voloşin, K.; Shemesh, C.; Barshack, İ.; Grossman, E. Melatonin önlerböbrekoksidatif stresi azaltarak yüksek tuzlu diyet kaynaklı hipertansiyon modelinde yaralanma. J. Pineal Arş. 2016, 60, 48-54. [CrossRef] [PubMed]

17. Hawkins, P.; Morton, DB; Burman, Ö.; Dennison, N.; Dürüstlük, P.; Jennings, M.; Lane, S.; Middleton, V.; Roughan, Ortak Girişim; Wells, S.; et al. Laboratuar hayvanlarının refah değerlendirmesi için protokollerin tanımlanması ve uygulanması için bir rehber: Arıtma üzerine BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Ortak Çalışma Grubu'nun on birinci raporu. Laboratuvar Animasyon. 2011, 45, 1-13. [Çapraz Referans]

18. Simko, F.; Reiter, RJ; Paulis, L.melatonindirençli hipertansiyonun konservatif tedavisinde akılcı bir alternatif olarak.Hypertens Res. 2019, 42, 1828–1831. [CrossRef] [PubMed]

19. Rapp, JP Dahl Tuza Duyarlı ve Tuza Dayanıklı Sıçanlar. Hipertansiyon 1982, 4, 753-763. [Çapraz Referans]

20. Dahl, LK; Knudsen, KD; Heine, MA; Leitl, GJ Kronik aşırı tuz alımının etkileri. Diyetteki varyasyonlarla sıçandaki deneysel hipertansiyonun modifikasyonu. Daire. Araş. 1968, 22, 11-18. [CrossRef] [PubMed]

21. Rapp, JP; Dene, H. Dahl tuzuna duyarlı ve tuza dirençli sıçanların kendi içinde yetiştirilmiş suşlarının gelişimi ve özellikleri. Hipertens 1985,7, 340-349. [Çapraz Referans]

22. Brower, M.; Grace, M.; Kotz, CM; Koya, V. Farklı kaynaklardan elde edilen Sprague Dawley sıçanlarının büyüme özelliklerinin karşılaştırmalı analizi. Laboratuvar Animasyon Araş. 2015, 31, 166-173. [Çapraz Referans]

23. Talbot, SR; Biernat, S.; Bleich, A.; van Dijk, RM; Ernst, L.; Häger, C.; Hilgers, SOA; Kögel, B.; Koska, İ.; Kuhla, A.; ve diğerleri. İnsancıl bir son nokta olarak vücut ağırlığının azaltılmasının tanımlanması: Eleştirel bir değerlendirme. Laboratuvar Animasyon 2020, 54, 99–110. [CrossRef] [PubMed]

24. Geschka, S.; Kretschmer, A.; Sharkovska, Y.; Evgenov, OV; Lawrenz, B.; Hucke, A.; Hocher, B.; Stasch, J.-P. Çözünür guanilatsiklaz stimülasyonu, fibrotik doku yeniden şekillenmesini önler ve tuza duyarlı Dahl sıçanlarında sağkalımı artırır. PLoS BİR 2011, 6,e21853. [CrossRef] [PubMed]

25. Wang, Y.; Mu, JJ; Liu, FQ; Ren, KY; Xiao, HY; Yang, Z.; Yuan, ZY Dahlsalt'a duyarlı sıçanlarda Tuz kaynaklı epitelyalden mezenkimal geçiş, yüksek kan basıncına bağlıdır. Braz. J. Med. Biol. Araş. Rev. Sütyen. Pesquisa Med. E Biol. 2014, 47, 223–230.[CrossRef]

26. Holmes, GB; Sugden, D. Proceedings: Melatoninin sıçanlarda pinealektomiye bağlı hipertansiyon üzerindeki etkisi. Br. J. Pharm.1976, 56, 360P–361P.

27. Zanoboni, A.; Zanoboni-Muciaccia, W. Pinealektomize sıçanlarda deneysel hipertansiyon. Hayat Bilimi. 1967, 6, 2327-2331. [Çapraz Referans]

28. Zanoboni, A.; Forni, A.; Zanoboni-Muciaccia, W.; Zanussi, C. Pinealektominin sıçandaki arteriyel kan basıncı ve gıda ve su alımı üzerindeki etkisi. J. Endokrinol. Araştırın. 1978, 1, 125-130. [CrossRef] [PubMed]

29. Pechanová, O.; Zicha, J.; Paulis, L.; Zenebe, W.; Dobesova, Z.; Kojsova, S.; Jendeková, L.; Sladková, M.; Dovinova, I.; Simko, F.; et al. N-asetilsistein ve melatoninin, yerleşik hipertansiyonu olan yetişkin spontan hipertansif sıçanlarda etkisi. Avro. J.Pharmcol. 2007, 561, 129-136. [CrossRef] [PubMed]

30. Leibowitz, A.; Peleg, E.; Sharabi, Y.; Shabtay, Z.; Shamiss, A.; Grossman, E. RolümelatoninMetabolik sendromlu sıçanlarda hipertansiyon patogenezinde. Ben. J. Hypertens 2008, 21. [CrossRef] [PubMed]

31. De Miguel, C.; Das, S.; Lund, H.; Mattson, DL T lenfositleri hipertansiyona aracılık eder veböbrekDahl tuzuna duyarlı sıçanlarda hasar. Ben. J. Physiol. kural. Tamsayı. Komp. Fizyol. 2010, 298, R1136–R1142. [CrossRef] [PubMed]

32. Evans, LC; Petrova, G.; Kurt, T.; Yang, C.; Bukowy, JD; Mattson, DL; Cowley, AW Artan Perfüzyon Basıncı Tahrikleri Dahl Tuza Duyarlı Sıçanlarda Renal T-Hücre İnfiltrasyonu. Hipertansiyon 2017, 70, 543–551. [Çapraz Referans]

33. Abais-Battad, JM; Alsheikh, AJ; Pan, X.; Fehrenbach, DJ; Dasinger, JH; Lund, H.; Roberts, ML; Kriegel, AJ; Cowley, AWJ; Kidambi, S.; et al. Diyetin Dahl tuzuna duyarlı Hipertansiyon, Böbrek Hasarı ve T Lenfosit Transkriptom Üzerindeki Etkileri.Hypertens 2019, 74, 854–863. [CrossRef] [PubMed]

34. Fehrenbach, DJ; Dasinger, JH; Lund, H.; Zmaj, J.; Mattson, DL Splenosit transferi, farelerde tuza duyarlı hipertansiyonu şiddetlendirir. Tecrübe. Fizyol. 2020, 105, 864–875. [CrossRef] [PubMed]

35. Ren, W.; Liu, G.; Chen, S.; Yin, J.; Wang, J.; Tan, B.; Wu, G.; Bazer, FW; Peng, Y.; Aydınlatılmış.; et al. T hücrelerinde melatonin sinyalleşmesi: Fonksiyonlar ve uygulamalar. J. Pineal Arş. 2017, 62. [ÇaprazRef]

36. Álvarez-Sánchez, N.; Cruz-Chamorro, I.; López-González, A.; Utrilla, JC; Fernandez-Santos, JM; Martínez-López, A.; Lardon,PJ; Guerrero, JM; Carrillo-Vico, A. Melatonin, T efektör/düzenleyici dengesini değiştirerek deneysel otoimmün ensefalomiyeliti kontrol eder. Beyin Davranışı. bağışık. 2015, 50, 101–114. [Çapraz Referans]

37. Chen, S.-J.; Huang, S.-H.; Chen, J.-W.; Wang, K.-C.; Yang, Y.-R.; Liu, P.-F.; Lin, G.-J.; Sytwu, H.-K.melatoninİn situ inflamasyonu inhibe etmek ve deneysel otoimmünsefalomiyelit şiddetini azaltmak için interlökin 10 ekspresyonunu arttırır ve kemotaksiyi baskılar. Int. İmmünofarmakol. 2016, 31, 169–177. [CrossRef] [PubMed]

38. Griffith, JW; Sokol, CL; parlaklık, ADkemokinlerve kemokin reseptörleri: konak savunması ve bağışıklık için hücrelerin konumlandırılması.Annu. Rev. İmmünol. 2014, 32, 659–702. [CrossRef] [PubMed]

39. Alsheikh, AJ; Dasinger, JH; Abais-Battad, JM; Fehrenbach, DJ; Yang, C.; Cowley, AWJ; Mattson, DL CCL2, tuza duyarlı hipertansiyon sırasında erken böbrek lökosit infiltrasyonuna aracılık eder. Ben. J. Physiol. Ren. Fizyol. 2020, 318, F982–F993. [CrossRef][PubMed]

40. Liu, L.; Callahan, MK; Huang, D.; Ransohoff, RM Kemokin reseptörü CXCR3: Beklenmeyen bir muamma. Kör. Tepe. geliştirici Biol.2005, 68, 149-181. [CrossRef] [PubMed]

41. Damat, JR; Lustre, AD CXCR3 ligandları: gereksiz, işbirlikçi ve antagonistik fonksiyonlar. immünol. Hücre Biol. 2011, 89,207–215. [CrossRef] [PubMed]

42. Van Raemdonck, K.; Van den Steen, PE; Likens, S.; Van Damme, J.; Struyf, hastalık ve tedavide S. CXCR3 ligandları. Sitokin Büyüme Faktörü Rev. 2015, 26, 311–327. [CrossRef] [PubMed]

43. Youn, J.-C.; Yu, HT; Lim, BJ; Koh, MJ; Lee, J.; Chang, D.-Y.; Choi, YS; Lee, S.-H.; Kang, S.-M.; Jang, Y.; et al. İmmünosensan CD8 artı T hücreleri ve CXC kemokin reseptörü tip 3kemokinlerinsan hipertansiyonunda artar. Hipertens 2013, 62, 126–133.[CrossRef] [PubMed]

44. Stumpf, C.; Auer, C.; Yılmaz, A.; Lewczuk, P.; Klinghammer, L.; Schneider, M.; Daniel, WG; Schmieder, RE; Garlichs, Th1 kemoatraktan interferon-gama ile indüklenebilir proteinin (IP) 10 CDSerum seviyeleri, esansiyel hipertansiyonu olan hastalarda yükselir. Hipertens Res. 2011, 34, 484-488. [CrossRef] [PubMed]

45. Rudemiller, NP; Lund, H.; Priestley, JRC; Endres, BT; Prokop, JW; Yakup, HJ; Geurts, AM; Cohen, EP; Mattson, hipertansiyon için genom çapında bir ilişki çalışması adayı olan SH2B3'ün DL Mutasyonu (LNK), inflamatuar modülasyon yoluyla Dahl tuzuna duyarlı hipertansiyonu hafifletir. Hipertens 2015, 65, 1111-1117. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wade, B.; Petrova, G.; Mattson, DL Dahlsalt'a duyarlı sıçanlarda anjiyotensin II'nin neden olduğu hipertansiyon ve böbrek hasarında immün faktörlerin rolü. Ben. J. Physiol. kural. Tamsayı. Komp. Fizyol. 2018, 314, R323–R333. [CrossRef] [PubMed]