Süt Eksozomundan Türetilen MikroRNA-2478 Akt-GSK3 Yolu Yoluyla Melanogenezi Bastırıyor

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

In-Seon Bae ve Sang Hoon Kim

Soyut:Eksozomlar, donorto alıcı hücrelerden molekülleri transfer ederek hücreler arası iletişime katılır. Eksozomlar, kan, idrar, beyin omurilik sıvısı ve süt dahil olmak üzere çeşitli vücut sıvılarında bulunur. Süt eksozomları birçok endojen mikroRNA molekülü içerir. MikroRNA'lar küçük kodlayıcı olmayan RNA'lardır ve biyolojik süreçlerde önemli rollere sahiptirler. Süt eksozomlarının spesifik biyolojik işlevleri iyi anlaşılmamıştır. etkilerini araştırdık bu çalışmada.süt eksozomlarımelanom hücrelerinde ve melanositlerde melanin üretimi üzerine. Onu bulduksüt eksozomları azaldımelanin içeriği, tirozinaz aktivitesi ve melanom hücreleri ve melanositlerde melanogenez ile ilgili genlerin ekspresyonu. Eksozomlardaki sığıra özgü miR-2478, melanin üretimini inhibe etti. Rap1a'nın, melanom hücreleri ve melanositlerde miR-2478'nin doğrudan hedef geni olduğunu bulduk. MiR-2478aşırı ekspresyonu Rap1a ekspresyonunu azalttı, bu da melanin üretimini ve melanogenez ile ilgili genlerin ekspresyonunu aşağı regüle etmesine yol açtı. Rap1a ifadesinin inhibisyonu azaldımelanogenezAkt-GSK3 sinyal yolu aracılığıyla. Bu sonuçlar, bir düzenleyici olarak milkexozomlardan türetilen miR-2478'nin rolünü desteklemektedir.melanogenezRap1a'nın doğrudan hedeflenmesi yoluyla. Bu sonuçlar, süt eksozomlarının iyileştirme için yararlı kozmetik bileşenler olabileceğini göstermektedir.beyazlatma.

Anahtar Kelimeler: melanogenez;süt eksozomu; miR-2478; Rap1a

bitki saksılarıMelanin önleyici bir maddedir

1. Giriş

Kozmesötik, kozmetik ve farmasötik kelimeyi birleştiren birleşik bir kelimedir ve tıbbi etkileri olan fonksiyonel bileşenlere sahip kozmetikleri ifade eder [1]. Geçmişte, cilt dermatolojik prosedürlerle iyileştirildi, ancak son zamanlarda tüketicilerin bu etkileri kozmetik yoluyla elde etme arzusu nedeniyle kozmesötiklere olan ilgi arttı. Kozmetik endüstrisi de son yıllarda yeni kozmetik bileşenlerin kullanımına artan bir ilgi gösterdi [ 2]. Fonksiyonel kozmetikler, ciltte melanin birikmesini önleyerek cildin beyazlamasına yardımcı olan ürünleri içerir.

Cildin ve saçın rengini belirleyen önemli bir element olan melanin, cildi ultraviyole ışınlarından korur [3]. Bununla birlikte, aşırı melanin oluşumu düzensiz cilt tonuna, örneğin lekelere ve çillere neden olur [4]. Mikroftalmi transkripsiyon faktörü (MITF), melanosit gelişiminin ana düzenleyicisidir. Tirozinaz (TYR), melanin sentezinin en önemli enzimidir. Melanin sentez süreci, melanin sentez sürecinin ilk aşamasında yer alan önemli bir enzim olan ve melanin oluşturmak için bir substrat olarak tirozin veya DOPA'nın L-formunu kullanan MITF aracılığıyla TYR aktivasyonu ile indüklenir [5].

MikroRNA'lar (miR'ler), transkripsiyon sonrası gen ekspresyonunu kontrol ederek birçok biyolojik sürece katılan kısa kodlayıcı olmayan RNA'lardır [6]. Çalışmalar ayrıca mikroRNA'lar tarafından melanin biyosentezinin kontrolünü ortaya çıkardı. Örneğin, miR-143-5p'nin Tak1 genini hedeflediği ve MITF ekspresyonunu azalttığı, böylece melaninsentezi inhibe ettiği bildirilmiştir [7]. MiR-125b, negatif düzenleyicimelanogenez, pigmentasyon geni SH3BP4'ü [8] düzenlediği gösterilmiştir ve keratinositlerden salgılanan eksozomlarda miR-675melanogenezMITF'yi [9] hedefleyerek.

Eksozomlar 30-200 nm büyüklüğünde membrana bağlı veziküllerdir ve DNA, RNA ve peptitler içerir [10]. Eksozomların iç bileşenleri, biyolojik sıvılardaki enzimler tarafından bozulmadan komşu veya uzak hücrelere güvenli bir şekilde bilgi iletebilir, böylece çeşitli hücrelerin etrafındaki mikro-ortamı etkiler [11].Süt eksozomlarıinsan sindirim süreçlerinde stabil olan süt kaynaklı hücre dışı veziküllerdir [12]. Sığır sütünden ekstrakte edilen eksozomlar, sadece kazein ve laktoglobulin gibi birkaç proteini değil, aynı zamanda kargo görevi gören mikroRNA'ları da içerir [13-15]. Sığır sütü miR-15b, miR-27b, miR-34a ve miR-10 gibi bağışıklıkla ilgili mikroRNA'lar içerir. Bu mikroRNA'lar özellikle kolostrumda bol miktarda bulunur [16].

Bazı araştırmalar, sütün bileşenlerininmelanogenezmelanositlerde; örneğin sütteki -laktoglobulin ve κ-kazein gibi proteinler melanogenezi düzenler [17,18]. Lactobacillus helveticus NS8-fermente edilmiş sütün süpernatantının ciltte UV hasarını ve hiperpigmentasyonu engellediği bulunmuştur [19]. Bununla birlikte, sığır sütündeki mikroRNA'ların deride yer alıp almadığına dair henüz bir rapor yok.beyazlatma79 mikroRNA bulunmasına rağmensüt eksozomları[13]. Bu nedenle, bu çalışmada, mikroRNA içeren süt eksozomlarının fare ve insan melanom hücrelerinde ve melanositlerde melanin sentezini inhibe edip etmediğini araştırdık.

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1. Hücre kültürü

Fare melanom B16F10 hücreleri, Dulbecco'nun değiştirilmiş Eagle ortamında (DMEM, Hyclone, Logan, UT, ABD) kültürlendi. İnsan melanom MNT-1 hücreleri, Minimum Essential Medium (MEM, Hyclone) içinde büyütüldü. Tüm ortamlara yüzde 10 fetal sığır serumu (FBS, Hyclone, ABD) ve yüzde 1 penisilin-streptomisin solüsyonu eklendi. 5 veya 6 numaralı pasajdaki normal insan epidermal melanositleri (NHEM, PromoCell, Heidelberg, Almanya), bir melanosit büyüme ortamında (PromoCell) muhafaza edildi. Bu hücreler, yüzde 5 CO2 içeren nemli bir atmosfer koşulunda 37 ◦C'de inkübe edildi.

2.2. Exosomes Arıtma

Ticari süt (1 mL) 2000×g'de 10 dakika santrifüjlendi, ardından süpernatan 10,000×g'de 10 dakika santrifüjlendi. Süt süpernatanı 0.45 um'lik bir filtreden ve ardından 0.2 um'lik bir filtreden geçirildi. Elde edilen çözelti (300 uL), fosfat tamponlu salin (PBS) ve 300 uL Exoquick eksozom çökeltme çözeltisi (Systems Biosciences, Palo Alto, CA, ABD) ile karıştırıldı ve 30 dakika süreyle inkübe edildi. Karışım, daha sonra PBS içinde yeniden süspanse edilen bir eksozom peleti elde etmek için 30 dakika boyunca 10.000 x g'de santrifüjlendi. Eksozomların boyut dağılımı, bir Zetasizer Nano ZS 90 (Malvern Instruments, Almelo, Fransa) üzerinde belirlendi. Eksozomlar daha sonra kullanılmak üzere -80 ◦C'de saklandı.

2.3. Kriyo-Elektron Mikroskobu

3 uL'lik bir taze eksozom süspansiyonu alikotu, parlayan deşarjlı, delikli karbon kaplı bir ızgaraya (2/2-3 C C-düz; Protochips, Morrisville, NC, ABD) adsorbe edildi ve daha sonra 3 saniye süreyle blotlandı. 4 ◦C'de ve bir Vitrobot Mark IV (Thermo FisherScientific, Lafayette, CO, ABD) kullanılarak daldırılarak dondurulmuştur. Izgaralar sıvı nitrojen içinde saklandı, ardından bir Gatan 626 kriyo numune tutucusuna (Gatan, Pleasanton, CA, ABD) aktarıldı. Örnekler, standart bir alan emisyon tabancası (s-FEG) ile donatılmış bir kriyo-elektron mikroskobunda (FEI Tecnai F20 TEM,FEI, Hillsboro, OR, ABD) 29,000× nominal büyütmede görüntülendi ve 200 kV hızlanma geriliminde bir K2Summit kamerası (Gatan).

2.4. Hücre Canlılığı Testi (WST Testi)

Melanom hücreleri (B16F10, MNT-1) ve insan melanositleri (NHEM), 96-kuyucuklu plakalarda 4 x 103 hücre/kuyuda ekildi vesüt eksozomları(20 ve 50 µg/mL) veya her deney için bir mikroRNA mimik (RNA çift sarmallı oligonükleotitler). Belirtilen zaman noktalarında, hücre canlılığı, üreticinin talimatlarına göre geliştirilmiş hücre canlılığı tahlil kiti EZ-CyTox (Daeil Lab Service, Seul, Kore) kullanılarak ölçüldü. Absorbans, bir Vmax mikroplaka spektrofotometresinde (Molecular Devices, San Jose, CA, ABD) 450 nm'de ölçüldü.

2.5. Melanin İçeriği Ölçümü

Melanom hücreleri ve melanositler ile tedavi edildisüt eksozomları(20 ve 50 µg/mL)48 saat. Buz gibi soğuk PBS ile iki kez yıkandıktan sonra hücreler, 10 dakika boyunca 2500 x g'de santrifüjlendi. Hücre topakları, yüzde 10 dimetil sülfoksit içeren 1 N NaOH içinde 90 ◦C'de 30 dakika yeniden süspanse edildi. Toplam melanin içeriği, 405 nm'de Vmax mikroplakaspektrofotometrede (Molecular Devices) ölçülmüştür.

2.6. Tirozinaz Aktivite Deneyi

Melanom hücreleri ve melanositler ile inkübe edildisüt eksozomları48 saat boyunca. Hücreler iki kez PBS ile yıkandı ve yüzde 1 Triton X-100 ve 0.1 mMfenilmetansülfonil florür içeren PBS ile parçalandı. Santrifüjden sonra süpernatan toplandı ve bir 96-kuyu plakasına aktarıldı. 0.1 ML-3,4-dihidroksifenilalanin eklendikten sonra örnekler 1 saat 37 ◦C'de inkübe edildi. Tirozinaz aktivitesi, mikroplaka spektrofotometresi (Molecular Devices) kullanılarak 475 nm'de absorbans temelinde ölçüldü.

bitki saksıları

2.7. İnsan Deri Dokuları

Melanositler (MelanoDerm, MEL-300B) içeren epidermal eşdeğerler MatTek'ten (Ashland, MA, ABD) elde edildi ve EPI-100-NMM-113-ortamında tutuldu.Süt eksozomlarıMelanoDerm dokularına 1, 3, 7, 9 ve 12. Günlerde uygulandı. Negatif kontrol olarak PBS kullanıldı. Dokular 3, 7, 9, 12 ve 14. Günlerde fotoğraflandı. Pigmentasyon, L değerindeki değişiklikler karşılaştırılarak ölçüldü (Adobe PhotoshopCC 2015). İnsan derisi dokusundaki melanin içerikleri, bir Solvablemelanin tahlili ile 14. Günde ölçülmüştür. Kısaca, MelanoDerm dokuları Solvable (PerkinElmer, Waltham, MA, ABD) kullanılarak çözündürüldü ve gece boyunca 60°C'de inkübe edildi. Numuneler vortekslendi ve daha sonra 5 dakika boyunca 16.500 x g'de santrifüjlendi. Süpernatant bir kuyu plakasının kuyularına aktarıldı ve bir spektrofotometre ile 490 nm'de okundu.

3. Sonuçlar

3.1. Sütten İzole Edilen Eksozomların Karakterizasyonu

İnek sütünden elde edilen eksozomların özelliklerini araştırmak için önce dinamik ışık saçılımı ile eksozomların boyutunu ölçtük. Sonuç olarak, sütten ekstrakte edilen eksozomun 80-190 nm çapa sahip olduğu bulundu (Şekil 1A). İçinsüt eksozomusaflaştırma, Exoquick-süt süpernatan karışımı, bir süt eksozom peleti elde etmek için santrifüjlendi. Peletlerde eksozom belirteçleri olarak CD9, TSG101 ve HSP70'in ifadesi tespit edildi, ancak bu proteinler süpernatanda mevcut değildi (Şekil 1A). Ayrıca, eksozomların küresel morfolojisi ve boyutu kriyo-elektron mikroskobu ile doğrulandı (Şekil 1A). 1B). Eksozomların 200 nm çapa kadar yuvarlak bir şekle sahip olduğu bulundu. Daha sonra, sütten ekstrakte edilen eksozomların hücreler tarafından alınıp alınmadığını araştırdık. Fare B16F10 hücreleri ile inkübe edildi.süt eksozomlarılipofilik floresan boya PKH26 ile etiketlenmiştir. Sonuç olarak, etiketli eksozomların hücrelerin içinde bulunduğunu gözlemledik (Şekil S1).

3.2. B16F10 Hücrelerinde Süt Eksozomları Tarafından Bastırılan Tirozinaz Aktivitesi ve Melanin Üretimi

Daha sonra, çıkarılan eksozomların hücre canlılığı üzerindeki etkisini inceledik. Şekil 2A'da gösterildiği gibi, eksozom konsantrasyonundan bağımsız olarak hücre canlılığında önemli bir fark olmadığını ortaya çıkardık.

Olası deri hücresini araştırmak için-beyazlatmaetkisisüt eksozomları, hücreler süt eksozomları ile tedavi edildi. 20 veya 50 µg/mL konsantrasyonlarda milkexozomlara maruz kalan hücrelerde tirozinaz aktivitesinin sırasıyla yüzde 43 ve yüzde 59 oranında azaldığını bulduk(Şekil 2B). Tirozinaz enzim aktivitesinin azalması melanin biyosentezini engelleyebildiğinden, melanin içerikleri süt eksozomları ile muameleden sonra ölçülmüştür. maruz kalan hücrelerde melanin sentezinin inhibisyonunu kaydettik.süt eksozomları(20 veya 50 µg/mL) sırasıyla yüzde 45 ve yüzde 55 (Şekil 2C). Ayrıca, MITF mRNA'nın ifadesi, süt eksozomlarının konsantrasyonu arttıkça azaldı. MITF mRNA seviyesi, sırasıyla 20 µg/mL eksozomlarla tedavi edilen hücrelerde yüzde 59 ve 50 µg/mL eksozomlarla tedavi edilen hücrelerde yüzde 84 azaldı (Şekil 2D). Tirozinaz (TYR) mRNA ifadesi de bu eksozom konsantrasyonlarına maruz kalan hücrelerde yüzde 49 ve yüzde 76 oranında azaldı(Şekil 2D). MITF ve tirozinaz protein seviyeleri de süt konsantrasyonu arttıkça azaldı.eksozomlararttı (Şekil 2E). Bu sonuçlar, süt eksozomlarının melanogenezi engellediğini göstermektedir. fare B16F10 hücrelerinde.

3.3. Süt Eksozomlarından Sığırlara Özgü miR-2478 Melanogenezi Bastırıyor

miR-2478'den türetilmiş olup olmadığını belirlemek içinsüt eksozomlarımelanogenezi doğrudan etkilediğinden, miR-2478 inhibitörü, milkexozomlara (50 ug/mL) maruz kalan hücrelere transfekte edildi. Süt eksozomlarının varlığında, themiR-2478 inhibitörü ile transfekte edilmiş B16F10 hücreleri, kontroldekine kıyasla önemli ölçüde daha yüksek tirozinaz aktivitesi gösterdi (Şekil 4A). Melanin içerikleri de miR-2478 inhibitörle tedavi edilen hücrelerde kontrol hücrelerine göre daha yüksekti (Şekil 4B). MITF mRNA ifadesi -2.5-miR 2478 inhibitörü ile tedavi edilen hücrelerde kontrol hücrelerine göre kat daha yüksekti ve TYR mRNA ifadesi miR-2478 inhibe edildiğinde –2-kat daha yüksekti (Şekil 4C ). MITF ve TYR proteinlerinin seviyeleri de maruz kalan hücrelerde geri kazanıldı.süt eksozomlarıbu hücreler miR-2478 inhibitörü ile transfekte edildikten sonra (Şekil 4D). Bu sonuçlar, süt eksozomlarından türetilen miR-2478'nin fare melanom hücrelerinde melanogenezi doğrudan baskıladığını gösterdi.

3.4. Süt Eksozomları Akt-GSK3 Yoluyla Melanogenezi Bastırıyor

Daha sonra, nasıl yapılacağını incelediksüt eksozomlarıdüzenlemekmelanogenezmelanom hücrelerinde ilgili etkilenmiş yolu tanımlamak için. Rap1a'nın melanogenezi doğrudan kontrol edip etmediği bilinmemekle birlikte, Rap1a'nın Akt fosforilasyon kanser hücrelerini inhibe ettiği bildirilmiştir [20]. Bu bilgilere dayanarak, Rap1a'nın teşvik etmek için Akt yolunu modüle edip etmediğini araştırdık.

Akt ile ilgilimelanogenezyolu, aktive edilmiş Akt, Ser9'da Gsk3'ün fosforilasyonunu indükler ve böylece onu inaktive eder; bu değişiklik MITF'nin transkripsiyonel aktivitesini inhibe eder ve tirozinazı aşağı regüle eder [21,22]. Bu çalışmada, Rap1a siRNA ile tedavi edilen hücrelerde Akt ve GSK3 ekspresyonunu değerlendirdik. Bu hücrelerde Akt fosforilasyonunun aktivasyonu arttı ve pGSK3 miktarı da arttı (Şekil 7A). GSK3, 20 veya 50 µg/mL likit ile tedavi edilen hücrelerde konsantrasyona bağlı bir şekilde Akt'nin aktivasyonu ile inaktive edildi.süt eksozomları(Şekil 7B). miR-2478mimik ile tedavi edilen hücrelerde Akt ve GSK3 proteinlerinin seviyeleri yukarıdaki sonuçlarla tutarlıydı (Şekil 7C). Daha sonra, süt eksozomlarından miR'nin-2478Akt-GSK3 yolunu etkileyip etkilemediğini test ettik. Süt eksozomlarının varlığında, themiR-2478 inhibitörü ile tedavi edilen hücrelerde Akt ve GSK3 proteinlerinin fosforilasyonu daha düşüktü (Şekil 7D). Ek olarak, AKT inhibitörü GSK690693 ile tedavi, aşağıdakilerle ilişkili genlerin ekspresyonunu arttırdı.melanogenezsüt eksozomu ile muamele edilmiş hücrelerde. (Şekil 7E). Bu bulgular, miR-2478süt eksozomlarıAkt-GSK3 yolu aracılığıyla Rap1a'yı aşağı regüle eder ve melanogenezi baskılar.

ıhlamur otuanti-oksidasyon için cilt üzerinde beyazlatma etkisi

3.8. Süt Eksozomları İnsan Melanom Hücrelerinde, Melanositlerde ve MelanoDerm Dokusunda Melanogenezi Engelledi

Verilensüt eksozomlarıengellenmişmelanogenezfare hücrelerinde, daha sonra süt eksozomlarının insan hücrelerinde eşit derecede etkili olup olmadığını belirledik. İlk olarak, 20 veya 50 ug/mL süt eksozomları ile inkübasyondan sonra MNT-1 insan melanom hücrelerinin ve NHEM insan melanositlerinin canlılığı incelenmiştir. Şekil 8A'da gösterildiği gibi, canlılıkta hiçbir fark yoktu. Tirozinaz aktivitesi, 20 ug/mL veya 50 ug/mL süt eksozomlarına maruz bırakılan MNT-1 hücrelerinde sırasıyla yüzde 43 ve yüzde 85 oranında inhibe edildi (Şekil 8B). NHEM ayrıca 20 ug/mL veya 50 ug/mL süt eksozomları ile tedavi yoluyla sırasıyla yüzde 34 ve yüzde 66 oranında azaltıldı (Şekil 8B). Ayrıca, MNT-1 hücrelerinde ve süt eksozomlarına maruz bırakılan NHEM'de melanin içerikleri ölçülmüştür. Sonuç olarak, 20 ug/mL veya 50 ug/mL'ye maruz kalan MNT-1 hücrelerinde melanin sentezisüt eksozomlarısırasıyla yüzde 37 ve yüzde 58 oranında inhibe edildi ve NHEM hücrelerinde süt eksozom tedavisi, melanin sentezini sırasıyla yüzde 36 ve yüzde 62 oranında engelledi (Şekil 8C). Ayrıca cilt aydınlatıcı etkisisüt eksozomlarıinsan derisi dokuları kullanılarak daha da doğrulandı. İnsan dokularında süt eksozomları ile tedaviden sonra, görecelibeyazlatma etkiler 3, 9, 12 ve 14. Günlerde gözlendi. Sonuç olarak, süt eksozomuna maruz kalan dokulardaki ten renginin kontrol dokularındakinden daha parlak göründüğünü bulduk (Şekil 8D). Pigmentasyon derecesi, parlaklığı temsil eden bir değer olan L değeri olarak hesaplandı. Pigmentasyon, süt eksozomu ile tedavi edilen cilt dokularında kontrol cilt dokularına göre daha yavaş ilerlemiştir (Şekil 8D). Tedavi edilen deney grubusüt eksozomlarıkontrol grubu ile karşılaştırıldığında daha küçük bir melanin partikül boyutu ve düşük miktarda melanin pigmenti gösterdi (Şekil 8E). 14 günlük süt eksozomlarından sonra melanin içeriğinin ölçülmesinin bir sonucu olarak, insan dokularında melanin sentezini inhibe etti (Şekil 8F). Bu nedenle, milkexozomların inhibe ettiği sonucuna vardık.melanogenezinsan hücrelerinde ve dokularında.

4. Tartışma

Eksozomları düzenleyen çalışmalarmelanogenezkeratinositlerden türetilen eksozomların beyazlatıcı bir etkiye sahip olduğunu bildirmiştir. Melanositler ve çevreleyen keratinositler, cilt epidermisinde melanin birimleri oluşturmak için fonksiyonel olarak bağlanır [23,24]. Keratinosit kaynaklı çözünür faktörler, komşu melanositlerin melanogenezini düzenler. Normal keratinositlerden salgılanan eksozomların ekspresyonunu düzenleyerek melanogenezi destekler.melanogenezilgili proteinler [23-25]. Ek olarak, birbeyazlatmaHücrelerden ekstrakte edilen eksozomların kullanıldığı bir çalışmada, yakın zamanda insan adipoz dokusundan türetilen kök/stromal hücrelerden ekstrakte edilen eksozomların faremelanom hücrelerinde cilt parlatma etkinliği gösterdiği bildirilmiştir [26]. Ayrıca bitkilerden elde edilen eksozomların beyazlatma etkisi olduğuna dair bir rapor da vardı. D. morbifera bitkisinin yapraklarından ve saplarından elde edilen hücre dışı veziküller, fare melanom hücreleri ve sağlıklı insan derisi üzerinde anti-melanojenik etkiler sergilemiştir [27]. Çalışmamızda süt türevi eksozomların beyazlatma etkisi araştırıldı.

Kan plazmasından veya kültür sıvısından ekstrakte edilen eksozomlarla karşılaştırıldığında, sütten elde edilen eksozomlar, yalnızca birim hacim başına ekstrakte edilebilen büyük miktarlarda eksozomlara sahip olmakla kalmayıp, aynı zamanda düşük bir fiyat avantajına sahiptir [26,27]. Çünküsüt eksozomlarıhücre zarlarınınkine benzer bir kimyasal bileşime sahiptirler, daha düşük immünojenisite ve sitotoksisite sergilerler ve yüksek biyouyumluluğa sahiptirler [28,29]. Son zamanlarda, DSS (dekstran sülfat sodyum tuzu) ile indüklenen kolit model farelere süt eksozomları beslendiğinde, proinflamatuar sitokinler IL-6 ve TNF'nin ekspresyonu kontrol grubuna kıyasla azaldı, böylece inflamasyonu azalttı ve nekrotizan enteriti iyileştirdi [30, 31]. Ek olarak, bir fare osteoporoz hastalığı modelinde süt eksozomlarının yutulması, kemik yoğunluğunu artırarak ve proinflamatuar sitokinleri azaltarak artriti iyileştirmiştir [32,33]. Şimdiye kadar, süt eksozomlarının etkileri, proinflamatuar sitokinleri azaltan immünolojik fenomenlere ve enteritin hafifletilmesi ve osteoporozun iyileştirilmesi gibi kemik gelişimine odaklanmıştır. Bu çalışmada, alma yönteminin yanı sırasüt eksozomları, cilde uygulandığında ciltte etkili olduğu doğrulandı.beyazlatma. Bu, gelecekte süt eksozomları kullanılarak fizyolojik aktiviteyi artırarak çeşitli hastalıkların tedavisi için uygulanabileceğini göstermektedir.

Bu çalışma bunu önermekle birliktesüt eksozomlarıengellemekmelanogenezkazein, -laktoglobulin ve -laktalbümin gibi peynir altı suyu proteinlerinin beyazlatma etkisi olduğu zaten bilinmektedir. -laktoglobulin, insan melanositlerinde [18] tirozinaz aktivitesini azaltır ve k-kazein, fare B16 melanom hücrelerinde [17] melanogenezi inhibe eder. İlginç bir şekilde, bu bileşenlerin birçoğu süt eksozomlarında da mevcuttur. Süt eksozomlarının proteomer sonuçlarına göre kazein, -laktoglobulin ve -laktalbümin eksozomlarda dağılır [15,34,35]. Süt eksozomları, proteinlerin yanı sıra mikroRNA'lar içerir. Izumi ve meslektaşları tarafından süt eksozomlarını kullanan bir miRNA mikrodizisi sonucunda miR-2478, miR-1777b,miR-1777a, let-7b ve miR{{16 }} süt eksozomlarında yüksek oranda dağılmıştır [13]. Bu çalışmada miR-2478 dışında bu mikroRNA'lardan miR-1777b, miR-1777a,let-7b ve miR-1224 kontrol grubundan tirozinaz aktivitesinde fark yok(Şekil S2). miR-2478 en çoksüt eksozomlarıve azalmış tirozinaz aktivitesi. Bununla birlikte, beyazlatma ile ilgili MITF ve TYR genlerinin ekspresyonu, tedavi edilen hücrelerde daha fazla azaldı.süt eksozomlarıtek başına miR-2478mimik ile tedavi edilen hücrelerde olduğundan daha fazla. Bu sonuçlar, milkexozomlardaki mikroRNA'lar da dahil olmak üzere çeşitli bileşenlerin,beyazlatmaeylem.

Süt eksozomlarındaki mikroRNA'ların çoğu, alıcı hücrelerde hedef genlerin ekspresyonunu inhibe ederek biyolojik işlevler uygular. Bu çalışmada miR-2478, Rap1a'yı hedef gen olarak hedefleyerek melanin sentezini de inhibe etti. Süt kaynaklı mikroRNA'lar olmasalar da, beyazlatma ile ilgili genlerin ifadesini kontrol eden mikroRNA'lar zaten rapor edilmiştir. İnsan miR-27a-3p mimik faremelanositlere uygulandığında, Wnt3a ekspresyonunu inhibe etti ve böylece melanin sentezini inhibe etti [36] ve ektopik miR-218 MITF ekspresyonunu azaltarak TYR aktivitesini inhibe etti murin melanom melanositlerinde [37]. miR-203 teşvik ediyormelanogenezmelanomda Kif5b'yi hedefleyerek CREB1/MITF/Rab27apathway yoluyla [38]. Süt eksozomlarında 79 mikroRNA vardır.

mikroRNA'larsüt eksozomlarıineklerden elde edilmiştir [13]. Bu nedenle, süt eksozomlarının fizyolojik aktivitesi hakkında daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır.

5. Sonuçlar

Bulgularımız şunu gösteriyorsüt eksozomlarımelanin ile ilgili genlerin ekspresyonunu inhibe ederek pigmentasyonu azaltan anti-melanojenik ajanlar için adaylardır (Şekil 10). Melanom hücrelerinde ve melanositlerde, süt eksozomları, negatif kontrole kıyasla TYR inhibisyonu ve melanin içeriği azalması gösterdi. Ayrıca, bu etkilere miR-2478 aracılık etmiştir.süt eksozomları. Bu nedenle, süt eksozomları fonksiyonel gelişim için faydalı olabilir.beyazlatmaDüşük sitotoksisiteye sahip kozmetikler.

cistancheanti-oksidasyon için cilt üzerinde beyazlatma etkisi