Nano Süt Proteini-Müsilaj Kompleksleri: Karakterizasyon ve Antikanser Etkisi Bölüm 2

Daha fazla bilgi için, iletişimtina.xiang@wecistanche.com

1. bölümü öğrenmek için bağlantıya tıklayın:https://www.xjcistanche.com/news/nano-milk-protein-mucilage-complexes-characte-55049142.html

3. Malzemeler ve Yöntemler

3.1. Malzemeler

Plantago ovata (alt hedef) kabuğu ve Ziziphus Spina-Christi(Nabeq)'in olgunlaşan meyvesi Mısır, Giza'dan satın alındı; süt proteini konsantresi (yüzde 81,3 protein) Fonterra şirketinden (Auckland, Yeni Zelanda) satın alındı. MPC'deki kazein ve peynir altı suyu proteinleri, büyük ölçüde doğal ve sütte bulunanlara benzer misel formlarındadır. Kullanılan tüm kimyasallar analitik saflıktaydı.

3.2.Isabgol Kabuğu Müsilajının (IHM) ve Nabeg Müsilajının (NabM) Hazırlanması

Isabgol kabuğu müsilajı (IHM) ve Nabeq müsilajı (NabM), El-Maksoud ve diğerleri tarafından açıklanan yönteme göre hazırlandı. [5]. Kısaca, 1.2 g 100 mL distile suda çözülerek bir isabgol kabuğu süspansiyonu hazırlandı ve aseton çözeltisi ile saflaştırıldı. Elde edilen jel, kullanılana kadar buzdolabında (4-5 derece) saklandı.

NabM için olgunlaşmış Nabeq meyveleri kiri çıkarmak için musluk suyuyla iyice yıkandı. Taze meyveler çekirdeklerinden ayrılarak küçük parçalara ayrıldıktan sonra 1:10(w/v) oranında distile su ile karıştırılmıştır. Karışım bir laboratuvar karıştırıcısı (Toshiba Mixie, Japonya) kullanılarak harmanlandı ve buzdolabında 12 saat beklemeye bırakıldı.

Müsilaj özü daha sonra 2000 rpm'de 30 dakika santrifüjlendi ve bir muslin bezinden süzüldü. Elde edilen viskoz çözünür müsilaj, aseton ile çöktürüldü. Elde edilen ham müsilaj kullanılana kadar buzdolabında saklandı.

Analitik amaçlar için, müsilaj bir hava fırınında 40 derecede kurutuldu ve bilyalı değirmen MM400(Retsch, Almanya) kullanılarak öğütüldü. Psyllium kabuğu müsilaj tozunun (PHMP) ve Nabeq müsilaj tozunun (NabMP) kimyasal bileşimi ölçülmüştür. Nem, protein, yağ, kül, ham lif ve toplam karbonhidrat içeriği, PHMP için yüzde 8.49, 0.34.0.21.2.13,1.53 ve 87.44 ve NabMP için yüzde 9.18.4.72.2.05.2.69.170 ve yüzde 78.26 idi. , sırasıyla. Elde edilen toz, bir sonraki analize kadar soğuk bir sıcaklıkta (4-5 derece) saklandı.

Daha fazla bilgi edinmek için tıklayın

3.3. Süt Proteini-Müsilaj Komplekslerinin (MPMC) Hazırlanması

IHM ve NabM ile süt proteini (MP) kompleksleri bazı modifikasyonlarla Morr ve arkadaşlarına göre hazırlanmıştır [44]. Süt proteini konsantresi damıtılmış suda yeniden oluşturuldu (yüzde 10). Elde edilen süt proteini koloidi, 1:3 (o/o) oranında IHM ve NabM ile karıştırıldı. Karışımın pH'ı 10'e ayarlandı ve 10 dakika beklemeye bırakıldı. Bundan sonra, 0.1 N HC1 kullanılarak pH 3.5'e düşürüldü ve 10 dakika daha bırakıldı. Daha sonra, bir filtre kağıdı üzerinde süzme yoluyla MPMC toplamak için 0.5 M NaOH kullanılarak pH 4.6'ya ayarlandı: MP ve ayrıca elde edilen MPMC, Novalyphe-NL500 liyofilizatör kullanılarak 24 saat -45 derece C'de liyofilizasyon ile kurutuldu. , Savant Instruments, Holbrook, NY, ABD.

3.4. Fizikokimyasal ve Fonksiyonel Özellikler

3.4.1.pH Ölçümü

Elde edilen ürünlerin yüzde 10'luk çözeltideki pH'ı, kalibre edilmiş bir pH metre (HANNA, HI 902 m, Almanya) kullanılarak ölçüldü.

3.4.2.Yığın Yoğunluğunun (BD), Tapped Yoğunluğunun (TD) ve Carr Endeksinin Belirlenmesi

MPMC tozu, dokunulmamış hacme tekabül eden 25 mL'ye kadar 50 mL'lik bir ölçüm silindirine döküldü ve ardından, dokunulan hacme karşılık gelen tozun hacminde başka bir değişiklik görülmeyene kadar 5-10 kez hafifçe vuruldu.

Yığın yoğunluğu, kademeli yoğunluk ve Carr indeksi aşağıdaki denklemler [45] uygulanarak belirlendi:

(1)BD=kütle/ kullanılmayan hacim

(2)TD=kütle/kıvrılan hacim

(3)Carr endeksi ( yüzde )= (TD-BD)/TD×100

3.4.3. Su Emme İndeksi (WAI) ve Suda Çözünürlük İndeksi (WSD)

MP ve MPMC'nin suda çözünürlük ve su absorpsiyon indeksleri Yağç ve Göğüş'ün tarif ettiği metoda göre bazı modifikasyonlar yapılarak incelenmiştir [46]. Numuneler (0.5 g), bir santrifüj tüpünde 25 derecede 10 mL distile su içinde dağıtıldı. Her 5 dakikada bir tüp ters çevrilerek 30 dakika bekletildikten sonra numuneler 15 dakika 3500 rpm'de santrifüj edildi. Süzüntü bir alüminyum levha üzerine aktarıldı ve 3 saat 105 derecede kurutuldu. Kalan jelin ağırlığı kaydedildi ve WSI ve WAI aşağıdaki gibi belirlendi:

(4)WAI(g/g)= Jelin ağırlık kazancı/Numunenin kuru ağırlığı

(5)WSI yüzdesi=Süpernatant içindeki kuru katıların ağırlığı ×100/Numunenin kuru ağırlığı

3.4.4. Süt Proteini Sindirilebilirliği

Protein sindirilebilirliği, Abd El-Ghany ve arkadaşlarına göre belirlendi. [47]. Kısaca, MP ve MPMC numuneleri, 6.38 mg/mL'lik bir konsantrasyonda damıtılmış su içinde dağıtıldı ve pH, 8,0'e ayarlandı. Bir mililitre taze hazırlanmış enzim stok solüsyonu (1,6 mg/mL tripsin, 3,1 mg/mL kimotripsin ve 1,3 mg/mL ER amino peptidaz1

(ERAP1) protein süspansiyonu ile 37 derecede karıştırıldı. 10 dakika sonra pH kaydedildi ve enzim aktivitesi referans olarak kazein kullanılarak belirlendi. Protein sindirilebilirliğini hesaplamak için aşağıdaki denklem kullanıldı [47]:

(6) yüzde Sindirilebilirlik=210.46-18.10 (pH)

3.5.PHM ve NabM'nin Fenolik Fraksiyonları

HPLC analizi kullanılarak müsilaj numunelerinin fenolik bileşikleri, Elsayed ve ark. [48]. Kısaca, müsilaj özü, bir Agilent 1260 serisi HPLC sistemi (Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA, ABD) kullanılarak analiz edildi. Ayırma, C18 sütunu (100 mm×4.6 mm id,5 um) kullanılarak geçirildi. Mobil faz, (A) su yüzde 0,2 H3P04, (B)metanol ve (C) asetonitril'i 0,6 mL/dakikalık bir akış hızında içeriyordu. Gradyan ayrıştırma sonraki şemaya göreydi: 0-11 dk (yüzde 96 A., yüzde 2 B);11-13 dk (yüzde 50 A, yüzde 25 B);13-17dak (40 yüzde A, yüzde 30 B);17-20,5 dak (yüzde 50 B, yüzde 50 C);ve 20.5-30 dak (yüzde 96 A, yüzde2 B). Algılama dalga boyu (UV dedektör, 284 nm) 284 nm'ye ayarlandı. Enjeksiyon boyutu 20 µL idi ve kolon sıcaklığı 30 derecede tutuldu. Bileşikler, alıkonma süreleri otantik standartlardan gelenlerle karşılaştırılarak biliniyordu. Bileşik miktarlarını değerlendirmek için kalibrasyon eğrileri kullanıldı.

3.6.MP ve MPMC'nin Toplam Fenolik ve Flavonoid İçeriği

Polifenolik içerik, bazı modifikasyonlarla Folin-Ciocalteu yöntemi ile belirlendi [5]. Kısaca, 10 mg MP veya MPMC içeren 2.8 mL milli-Qwater, 2 mL yüzde 2 sodyum karbonat ve 0.1 mL yüzde 50 Folin-Ciocalteau reaktifi ile karıştırıldı. Oda sıcaklığında 30 dakikalık inkübasyondan sonra, reaksiyon karışımının absorbansı, bir spektrofotometre (Hitachi, Model 100-20) kullanılarak kör olarak deiyonize suya karşı 750 nm'de ölçülmüştür. Standart bir fenolik bileşik olarak gallik asit(GA) kullanıldı ve yedi noktalı bir standart eğri (0-200 mg/L) oluşturuldu. Sonuçlar, gram protein başına miligram gallik asit eşdeğerleri (GAE/g) olarak ifade edildi.

flavonoidleriçerik, daha önce Abedelmaksoud ve diğerleri tarafından tarif edildiği gibi alüminyum klorür yöntemi kullanılarak belirlendi. bazı değişikliklerle [5]. Kısaca, 10 mg MP veya MPMC içeren 2.8 mL milli-Q su, 0.1 mL yüzde 10 alüminyum klorür heksahidrat ve 0.1 mL 1 M potasyum asetat ile karıştırıldı. Oda sıcaklığında 40 dakika inkübasyondan sonra reaksiyon karışımının absorbansı, kör olarak deiyonize suya karşı 415 nm'de ölçülmüştür. Quercetin, yedi noktalı bir standart eğri (0-50 mg/L) kullanılarak standart olarak kullanıldı. Toplam flavonoid içeriği, miligram kersetin eşdeğerleri (QE/g) olarak ifade edildi.

3.7. MP ve MPMC'nin Antioksidan Aktivitesi

MP ve MPMC'nin toplam serbest radikal temizleme kapasitesi, üç farklı antioksidan tahlili kullanılarak değerlendirildi: Stabil 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil(DPPH), Azino-bis(3-etilbenzotiazolin{{5) }}sülfonik asit (ABTS) ve Hidroksil radikali (HS) radikalleri, daha önce El-Maksoud ve diğerleri [5] tarafından tarif edildiği gibi.

3.8. MP ve MPMC'nin Amino Asit Profili

Protein numuneleri, Peksa ve arkadaşlarına göre 6 N HC1 kullanılarak asitle hidrolize edildi. [49. Amino asitleri belirlemek için otomatik bir amino asit analiz cihazı (AAA 400, INGOs Ltd.) kullanıldı.

3.9. Reolojik özellikler

Numuneler, Barnes [50] tarafından tarif edildiği gibi, bazı modifikasyonlarla hazırlandı. pH7'de yüzde 2.5 (a/a)çözeltisinin viskozitesi, bir Brookfield viskozimetresi (DV-II plus Pro, Rheocalc Software, Almanya) kullanılarak 25±1 derecede belirlendi. Gerilme （σ）ve viskozite （n）, kesme hızının bir fonksiyonu olarak çizildi. Güç yasası modelinin tutarlılık indeksi(K) ve akış davranış indeksi (n) hesaplanmıştır:

Newtonian akışkanlar için n değeri 1'e eşittir ve kesme incelmesi olan akışkanlar için 0 ile 1 arasında değişir ve kesme kalınlaşmasına neden olan akışkanlar için 1'den büyüktür [51].

3.10.Diferansiyel Tarama Kalorimetrisi (DSC)

MP ve MPMC'nin termal özellikleri, bir diferansiyel tarama kalorimetresi (PerkinElmer, ABD) kullanılarak ölçüldü. Numuneler (4-6 mg) bir alüminyum plakaya yerleştirildi ve kapatıldı. Her tava daha sonra 10 derece dk-1 ısıtma hızında 20 mL dk-1'de bir kuru nitrojen gazı akışıyla 350 dereceye kadar ısıtıldı. DSC termogramının endotermik zirvesinden, denatürasyon başlangıç ​​sıcaklığı, maksimum geçiş sıcaklığı ve bozunma noktası tahmin edildi [52]. DSC eğrisinde endotermik tepe noktasının altındaki alandan geçiş entalpi değeri (AH) belirlendi ve boş alüminyum tava referans olarak kullanıldı.

3.11. Fourier Dönüşümü Kızılötesi Spektroskopisi (FTIR)

600 ve 3500 cm-I arasındaki kızılötesi spektrumlar, bir FTIR spektrofotometresi (QFA Flex, ABD) kullanılarak, 4 cm-I çözünürlük kullanılarak ve saniyede 10 tarama elde edilerek zayıflatılmış toplam yansıma yöntemiyle 25 derecede ölçüldü.

3.12. Transmisyon Elektron Mikroskobu

MP ve MPMC'nin mikro yapısı, 80 kV'da bir transmisyon elektron mikroskobu (JEOL, JEM 1400 Flash, Japonya) kullanılarak görselleştirildi. Negatif boyama yönteminde kriyo aşaması uygulandı [53].

3.13. MP ve MPMC Üzerine Biyolojik Çalışmalar

3.13.1.In Vitro Antikanser Aktivitesi

Bu deneyde kullanılan tüm hücre dizileri, American Type Culture Collection'dan (ATCC, Manassas, VA, ABD) elde edildi. Bu tahlilde iki insan kanserli hücre hattı kullanıldı: meme adenokarsinomu (MCF{{0}}, ATCCHTB-22TM) ve hepatoselüler karsinom (HepG2, ATCC4 HB-8065TM). Kanserli olmayan cilt fibroblast BJ-1(ATCC⑧ CRL-2522TM) ve epitelyal meme MCF-12F(ATCC CRL-10782TM) hücre hatları da karşılaştırma için test edildi. Hücre hatları, yüzde 10 fetal sığır serumu (FBS, Gibco, Brezilya), 100 U/mL penisilin, 100 ug/mL streptomisin ve 25 ng/ mL amfoterisin B(Sigma, Oakville, ON, Kanada) ve nemlendirilmiş bir inkübatörde yüzde 5 CO ile 37 derecede kültürlendi. Kültür ortamı gün aşırı taze bir ortam ile değiştirilmiştir. Hücreler yüzde 70 birleşme noktasına ulaştığında, yüzde 0.25 Tripsin-EDTA(1X) Gibco, Kanada kullanılarak ayrıldılar ve yeni bir kültür şişesine aktarıldılar. İkinci geçişten sonra, hücreler tripsinize edildi ve bir 96-yuvalı plakaya 2x10* hücre/kuyu konsantrasyonunda kaplandı. 24 saatlik inkübasyondan sonra, ortam boşaltıldı ve hücreler iki kez PBS ile yıkandı, ardından farklı konsantrasyonlarda protein numuneleri-1, 5,10 ve 20ug/mL içeren 200 uL kültür ortamı ile işlendi. Doksorubisin HC1 (4 ug/mL) pozitif kontrol olarak kullanılırken, takviye edilmemiş bir ortam ile tedavi edilen hücreler negatif kontrol olarak alındı. Plakalar 37°C'de 24 saat inkübe edildi vekanser karşıtınumunelerin aktivitesi, Repetto ve arkadaşlarına göre bir nötr kırmızı alım tahlili kullanılarak belirlendi. [54]. Kısaca, inkübasyon periyodundan sonra, ortam, serumsuz bir ortam içinde çözülmüş 150 uL nötr kırmızı boya (100 mg/mL) ile değiştirildi ve hücreler, 3 saat boyunca 37 derece C'de inkübe edildi. Daha sonra hücreler PBS ile yıkandı ve 150 μL elüsyon ortamı （EtOH/AcCOOH,50∶1） ilave edildikten sonra tam çözünmeyi sağlamak için 10 dakika hafifçe çalkalandı. Absorbans, bir mikrotitre plaka okuyucusu (BioTek, 96 Well Plates, ELX808, ABD) kullanılarak 540 nm'de ölçüldü.

burada Ac, kontrolün absorbansı ve As ise numunenin absorbansıdır. Sitotoksisite (yüzde) olarak sunulan hücre ölüm yüzdesi ve hücrelerin yüzde 50'sini öldüren konsantrasyon (IC50) her numune için hesaplandı.

3.13.2.p53, Bax, Kaspaz-3 ve Bcl-2 Protein Seviyesinin Belirlenmesi

Anahtar apoptoz protein belirteçlerinin hücresel seviyeleri, MP ve MPMC'nin ICso'si ile tedaviden 24 saat sonra belirlendi. Kısaca, Hep G-2, MCF-7, Bj-1 ve MCF-12F hücreleri 6-kuyuda 5×10* hücre/kuyuda ekildi tabaklar. Numuneler 37 derecede 24 saatlik inkübasyondan sonra hücreler toplandı ve parçalandı, ardından 10,{12}}rpm'de 20 dakika 4 derecede santrifüjlendi. Protein konsantrasyonu, süpernatanda Bradford tahlili [55] ile ölçülmüştür. Kaspaz-3 aktivitesi, üreticinin talimatlarına göre bir kolorimetrik tahlil kiti (Abcam, ab39401) kullanılarak analiz edildi [56]. Kısaca, 50 uL Kaspaz substratına 10 mg protein ilave edildi ve son hacim, 37 derecede reaksiyon tamponu kullanılarak 200 μL'ye ayarlandı ve karışım, karanlıkta 1 saat süreyle inkübe edildi, ardından Kaspaz ölçüldü{{24} } 405 nm'de konsantrasyon.

Pro-apoptotik işaretleyici p53, ilişkili X(Bax) ve anti-apoptotik işaretleyici B hücreli lenfoma-2(Bcl-2) seviyesi, Enzim Bağlantılı İmmünosorbent Testi Basit Adım kullanılarak hücre lizatında belirlendi Üreticinin talimatlarına göre ELISA (sırasıyla ab207225, ab119506 ve ab199080; Abcam, ABD) [57,58].

3.13.3. Oksidatif Stres Korumasının Neden Olduğu DNA Hasarı

DNA hasar tahlili, daha önce Leba ve diğerleri tarafından tarif edildiği gibi gerçekleştirildi. [59] küçük bir değişiklikle. Kısaca, 3 μL Ribonükleaz inhibitörü plazmid RNH1（NM_203387）Human Tagged ORF Clone 10 ug/μL, Fenton reaktifi（5 mM H2O2 ve 0,3 mM ile karıştırıldı. FeSO4 ve 0,6 mM EDTA） ve son hacim fosfat tamponu (H2POA, 8.3 mM, pH 7.4) kullanılarak 25 uL'ye ayarlandı. Daha sonra solüsyon 37 derecede 20 dakika inkübe edildi. Fenton reaktifi tarafından indüklenen DNA hasarına karşı MP ve MPMC'nin antioksidan koruma kapasitesini değerlendirmek için inkübasyondan önce 5 ug/mL MP/NabM, MP/IHM ve MP eklenmiştir. DNA koruma kontrolü olarak RNH1 plazmit DNA（3 μL, 10 ug/μL） kullanıldı.

3.13.4.PCR Tabanlı Genomik DNA Hasar Testi

Homo sapiens metilentetrahidrofolat redüktaz (MTHFR) geni, daha önce standart bir DNA ekstraksiyon kiti kullanılarak sağlıklı kan örneklerinden ekstrakte edilmiş kan genomiklerinden PCR kullanılarak amplifiye edildi [60]. DNA, MP veya MPMC ile desteklenmiş Fenton reaktifi ile veya onsuz 10 dakika süreyle inkübe edildi. Bir 198-bp fragmanı, ileri 5'-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGA-3' ve ters 5'-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3'primerleri kullanılarak amplifiye edildi. 50 ng işlenmiş DNA kullanılarak, PCR amplifikasyonu sonraki termocycler (5 dakika boyunca 94 derece, ardından 25 döngü denatürasyon, 30s 94 derecede; tavlama, 60 derecede 30s ve uzatma, 72 derecede 30 s) sonrasında gerçekleştirildi. 5 dakika boyunca 72 derecede 25 döngü ve 1 son uzatma döngüsü. PCR reaksiyon örnekleri, agaroz jel elektroforezi için uygulandı (yüzde 2).

3.13.5. RT-qPCR ile Gen İfadesi Profili Oluşturma

Anahtar pro- ve anti-apoptotik işaretleyici genlerin gen ekspresyonunun analizleri, elde edilen IC50'ye maruz bırakılan HepG-2, MCF-7, Bj-1 ve MCF-12F hücreleri ile gerçekleştirilmiştir. 72 saat için veriler (Tablo 3). Kısaca, toplam RNA, üreticinin talimatlarına göre Toplam RNA Saflaştırma Kiti (QIAGEN., Thorold, ON, Kanada) kullanılarak ekstre edildi. cDNA

sentez, daha önce Aboul-Sound ve diğerleri tarafından tarif edildiği gibi gerçekleştirildi. [61]. Amplifikasyon programları ve PCR amplikon özgüllüğü, daha önce belgelendiği gibi Quanti-Tect SYBR-Green PCR Kiti (Qiagen, Almanya) ile bir Rotor-Gene O 5-Plex HRM termal döngüleyici (Qiagen, Almanya) kullanılarak gerçekleştirildi ve değerlendirildi. standart protokolleri takip ederek [61]. Aşağıdaki primerler kullanıldı: Hs_P53_1 SG QuantiTect Primer Testi (QT00060235); Hs_CASP3_1_SG Quan-tiTect Primer Testi (QT00023947); B hücreli lenfoma 2 Hs_BCL2_1_SG QuantiTect Primer Testi (QT00025011);Bcl-2-Hs proteini gibi_BAX_1_SG QuantiTect Primer Testi ( QT00031192); ve 18S rDNA house-keeping (HK) geni Hs_RRN18S_1_SGQuantiTect Primer Assay(QT00199367). 18S genine göre kat değişimini belirlemek için PCR termal döngü programı ve gen ekspresyon analizi, daha önce bildirildiği gibi esasen gerçekleştirilmiştir [61].

3.14.İstatistiksel Analiz

Elde edilen sonuçlar ortalama ± standart sapma olarak ifade edildi. İstatistikler SPSSsoftware 11.5 (SPSS, Inc.Chicago, IL, ABD) kullanılarak elde edildi. Tüm örnekler arasındaki anlamlı farklılıkları belirlemek için Duncan'ın çoklu aralık testi kullanıldı ve farklılıklar p noktasında anlamlı kabul edildi.<>

4. Sonuçlar

Sonuç olarak, bu çalışma süt proteini ile karıştırmanınpolisakkaritlerçözelti pH'ının farklılaşması yoluyla kompleksleştirme için uygun bir tekniktir. Elde edilen süt proteini müsilaj kompleksleri (MPMC), önemli ölçüde daha yüksek fenolik veflavonoidleriçeriği süt proteininden (MP) daha fazladır.DSC sonuçları, MP'nin polisakkaritlerle kompleksleşmesinin, denatürasyon sıcaklığındaki bir kayma ile termal stabiliteyi önemli ölçüde arttırdığını göstermiştir. Fonksiyonel grupları belirlemek için FTIR analizleri yapıldı ve hazırlanan komplekslerin akış davranışı araştırıldı. Süt proteininin WSI ve WAI'si, NabM veya IHM ile kompleksleştirme yoluyla arttırıldı. Hazırlanan komplekslerin mikro yapısını görselleştirmek için TEM kullanıldı. Öte yandan, isabgol kabuğu müsilajı (HM) veya Nabeq müsilajı (NabM) ile elde edilen süt proteini komplekslerinin, antioksidan ve antikanser etkisinde doğal süt proteinlerinden daha iyi performans göstermesi beklenir. Özetle, MPMC, nötr bir kırmızı alım tahlili ile kanıtlandığı üzere, model meme kanseri ve hepatik karsinom hücre hatlarına (sırasıyla MCF7 ve HEPG2) karşı benzersiz antikanser özellikleri ifade etti.

MPMC her ikisini de geliştirdiantioksidanve anti-proliferasyon aktivitesi. Kaspazlar, apoptoz indüksiyonunda rol oynayan anahtar düzenleyici proteinlerdir. Kaspaz 3 proteininin ve mRNA transkriptlerinin yukarı regülasyonu (Şekil 9A, B), mitokondriyal membranın Bax ile indüklenen sitokrom c salınımı ile çökmesi ve kaspaz 9'un aktivasyonu ile karakterize edilen apoptoz yolundaki diğer proteinleri kontrol eder ve bu da daha sonraki angajmana yol açar. kaspaz 3. Bcl-2 ifadesinin azalmasıyla birlikte Casp3, p53 ve Bax'ın yukarı regülasyonu, MPMC'nin indüklediği apoptoz indüksiyonunu ortaya çıkardı, burada p53'ün yukarı regülasyonu Bax ifadesini uyaracak ve bu da sitokrom c'yi indükleyecektir. bırakma, ardından kaspaz-9 ve-3 aktivasyonu. Ayrıca, Bcl-2'nin sitokrom c salınımını engellediği bilinmektedir. Çalışmamızda, MPMC ile indüklenen Bcl-2 aşağı regülasyonunun, rakipsiz Bax ile indüklenen sitokrom c salınımını ve ardından apoptozu kolaylaştırdığı gösterildi.

Protein-polisakkarit komplekslerinin antikanser etkisi, minimum yan etkilerle ekonomik ve verimli kanser tedavilerinin geliştirilmesinde kullanılacak bu komplekslerin uygulanabilirliği konusunda daha fazla aydınlatma sağlar.