Naringin ve Hesperidin, Erkek Wistar Sıçanlarında Diklofenak Nedenli Hepatotoksisiteyi, Antioksidan, Antiinflamatuar ve Antiapoptotik Aktiviteleri Yoluyla Önler Bölüm 1

Lütfen iletişime geçinoscar.xiao@wecistanche.comdaha fazla bilgi için

1. Giriş

Steroid olmayan antiinflamatuar ilaçlar )NSAID'ler) çeşitli yan etkilere sahiptir [1]. Bu ilaç kategorisinden biri olan diklofenak, belirli koşulları tedavi etmek için uzun süredir analjezik ve anti-inflamatuar bir ilaç olarak kullanılan bir fenilasetik asit türevidir [2]. Etki mekanizmasında diklofenak, siklooksijenaz-(COX-) )COX'a etki ettiğinden daha güçlü 2 enzim-1 [3]. Diklofenak güçlü terapötik etkilere sahip olmasına rağmen, sürekli kullanımı doza bağlı ciddi yan etkilerle ilişkilidir [3]. bir artışoksitleyicistres ve antioksidan savunma sistemlerinin baskılanması, ilacın toksisitesinin ve yan etkilerinin indüklenmesinde rol oynadığı çeşitli yayınlarla bildirilmiştir [4,5]. Diklofenak ile kombinasyon halinde narenciye flavonoidleri gibi antioksidanların kullanımı, diklofenak kaynaklı oksidatif strese karşı koyabilir ve böylece ilaç yan etkilerini ve toksisitesini önleyebilir.

Daha fazla bilgi için lütfen buraya tıklayın

Narenciye türlerinin meyvelerinin ekşi tadı ve acı tadından sorumlu olan Naringin, lipid düşürücü, antienflamatuar, serbest radikal temizleyici, antioksidan, antihiperlipidemik,

antiapoptotik ve antiaterojenik özellikler [6,7. Hesperidin, özellikle antioksidan ve antienflamatuar olmak üzere çeşitli biyolojik özelliklere sahip olan Narenciye türlerinden izole edilen başka bir flavonoiddir [8]. Hesperidin tarafından gözlemlenen sitokrom kaynaklı karaciğer dokusu hasarını iyileştirdiği bildirilmiştir.histopatolojikmuayene [9]. Ayrıca hesperidin'in baskılamada etkili olduğu ortaya çıktı.iltihapve alerjik semptomlarda ve alerjik rinit tedavisinde[10]. Bu nedenle, bu çalışma naringin ve hesperidin'in diklofenak kaynaklı karaciğer toksisitesi üzerindeki olası önleyici etkilerini değerlendirmek ve önleyici etkide inflamasyon, oksidatif stres ve apoptoz modülasyonunun rollerini araştırmak için yapılmıştır.

2. Malzemeler ve Yöntemler

2.1. Kimyasallar ve Kitler. Diklofenak sodyum, El-Nasr Pharmaceutical Chemical Company, Mısır'dan elde edildi.

Naringin ve hesperidin, Sigma-Aldrich Company (St. Louis, MO, ABD) tarafından üretildi. Kullanılan diğer tüm kimyasallar analitik kalitededir ve yerel kimya şirketlerinden temin edilmiştir. Alanin transaminaz(ALT) ve aspartat trans-aminaz(AST) kitleri, Spinreact, Ctra Sta Coloma, 7.17176 St., Esteve de Bas, Girona, İspanya'dan elde edildi. Laktat dehidrojenaz (LDH) ve y-glutamiltransferaz (GGT), Spectrum, Mısır Biyoteknoloji Şirketi, Obour City Sanayi Bölgesi, Kahire, Mısır'dan elde edildi. Alkalin fosfataz (ALP) kiti Biodiagnostic,29 Tahrir St., Dokki, Giza, Mısır'dan temin edildi. Albümin ve bilirubin kitleri Diamond,24 El Mon-matzah St., Heliopolis, Kahire, Mısır'dan temin edildi.

Cistanche bağışıklığı artırabilir

2.2.Deney Hayvanları. Bu çalışmada deney hayvanları olarak 100-130g (9-1l hafta) ağırlığındaki yetişkin erkek Wistar türü sıçanlar kullanıldı.

Ani-mal Oftalmoloji Araştırma Enstitüsü Evi, Giza, Mısır'dan elde edildiler. Hayvanlar, günde 12 saat aydınlık-karanlık döngüsünde ve 20 ila 25 derece arasında sıcaklıkta iyi havalandırılmış kafeslerde barındırıldı. Sıçanlar, standart peletlenmiş diyet ve ad libitum su ile günlük olarak desteklendi. Hayvanlar, adaptasyon için ve herhangi bir araya gelen enfeksiyonu dışlamak için deneye başlamadan önce iki hafta boyunca gözlem altında tutuldu. Tüm hayvan metodolojileri, Beni Suef Üniversitesi, Mısır Hayvanların Bakımı ve Kullanımı Bilim Fakültesi Deney Hayvanları Etik Kurulu'nun yönergeleri ve talimatlarına uygundur. Etik onay numarası BSU/FS/2015/15'tir. Hayvanların acısını ve sıkıntısını azaltmak için her türlü çaba gösterildi.

2.3.Hayvan Gruplaması. Bu deneyde otuz erkek Wistar sıçanı kullanıldı ve beş gruba ayrıldı (Şekil 1).

Grup 1'deki (normal) sıçanlara intraperitoneal enjeksiyon yoluyla eşdeğer miktarda salin (diklofenakın çözüldüğü araç) verildi ve ayrıca yüzde 1'lik eşdeğer hacim verildi.karboksimetilselüloz (CMC; içinde naringin ve hesperidin'in çözüldüğü araç) 4 hafta boyunca her gün oral gavaj yoluyla. Grup 2'ye (diklofenak enjekte edilen grup) 3 mg/kilogram vücut ağırlığı (kg.ağ)/gün dozunda intraperitoneal uygulama yoluyla diklofenak (salin içinde çözülmüş) enjekte edildi [11] ve aynı zamanda yüzde 1'lik eşdeğer hacim verildi. 4 hafta boyunca günlük oral gavaj ile CMC. Grup3'e (naringin ile tedavi edilen diklofenak enjekte edilen gruba) grup 2'deki gibi diklofenak verildi ve oral olarak 20mg/kg doz seviyesinde naringin(yüzde 1 CMC'de çözülmüş) ile tedavi edildi. 4 hafta boyunca oral gavaj[12] ile ağırlık/gün. Grup 4'e (hesperidin ile tedavi edilen diklofenak enjekte edilen gruba) grup 2'deki gibi diklofenak verildi ve oral yoldan hesperidin (%1 CMC'de çözülmüş) ile 20 mg/kg vücut ağırlığı/gün dozunda 4 gün boyunca [13] tedavi edildi. haftalar. Grup 5 (naringin ve hesperidin ile tedavi edilen diklofenak enjekte edilen grup), grup 2'deki gibi diklofenak ile desteklendi ve oral yoldan naringin ile tedavi edildi vehesperidin(yüzde 1 CMC içinde çözülür) 20mg/kg'lık bir dozda b. 4 hafta boyunca ağırlık/gün.

2.4.Kan ve Karaciğer Örneklemesi.

Deney sonunda sıçanlar yemden mahrum bırakıldı ve şah damarlarından kan örnekleri alındı. Kan örnekleri oda sıcaklığında pıhtılaşmaya bırakıldı ve ardından 3000 rpm'de 15 dakika santrifüjlendi. Her kan örneğinin serumu, biyokimyasal analiz için kullanılana kadar -30 derecede tutulan üç şişeye bölündü.

Şah damarından kan örnekleri alındıktan sonra sıçanlara ötenazi uygulandı ve diseke edildi. Her sıçandan alınan karaciğer hızla çıkarıldı ve steril tuzlu su ({{0}}) ile yıkandı. Yüzde 9 NaCl. Karaciğer parçaları histolojik inceleme için yüzde 10 nötr tamponlu formalin içinde sabitlendi. oksidatif stres ve antioksidan savunma belirteçlerinin belirlenmesi için steril izotonik salin (%0.9 NaCl) içinde homojenizasyon beklenirken -30 derecede derin dondurucuda karaciğerin üçüncü kısmı steril Eppendorf tüplerinde -30 derecede tutuldu. ters transkriptaz-polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) analizi.

2.5. Serumda Karaciğer Fonksiyon Parametrelerinin Tespiti.

ALT ve AST aktiviteleri, Spinreact, İspanya'dan satın alınan reaktif kitleri kullanılarak sırasıyla Murray [14] ve Murray [15]'in yöntemlerine göre nikotinamid adenin dinükleotit hidrojen (NADH) oksidasyon yöntemi kullanılarak tahmin edildi. Kısaca ALT, alaninin LDH tarafından laktata indirgenen Piruvat'a dönüşümünü katalize eder ve NADH, nikotinamid adenin dinükleotidine (NAD) oksitlenir. 340nm'de fotometrik olarak ölçülen NADH konsantrasyonundaki azalma hızı, serum numunesinde bulunan ALT'nin katalitik konsantrasyonu ile orantılıdır. Öte yandan, AST, aspartatın, malat dehidrojenaz (MDH) tarafından malata indirgenen oksaloasetata dönüşümünü katalize eder ve NADH, NAD'ye oksitlenir. 340nm'de fotometrik olarak ölçülen NADH konsantrasyonundaki azalma hızı, serum numunesinde bulunan AST'nin katalitik konsantrasyonu ile orantılıdır. Serum LDH aktivitesi, Van der Heiden ve ark.'nın yöntemine göre tespit edildi. [16]. Bu yöntemde LDH, NAD* ve L-laktat üretmek için piruvat ve NADH arasındaki reaksiyonu katalize eder. 340 nm'de fotometrik olarak ölçülen NADH konsantrasyonundaki azalma hızı, numunede bulunan LDH'nin katalitik konsantrasyonu ile orantılıdır. Serum ALP aktivitesi, Biodiagnostic, Mısır'dan elde edilen kitler kullanılarak Belfield ve Goldberg'in [17] yöntemine göre belirlendi. pH 10'da fenil fosfata (5 mmol/L) serum numunesi eklenerek,

ALP, fenol ve fosfat oluşumuna yol açar. Serbest bırakılan fenol, 4-aminofenazon ve potasyum ferrisiyanid varlığında 510nm'de kolorimetrik olarak ölçülür. GGT aktivitesi, Mısır Biyoteknoloji Şirketi, Mısır Spectrum Diagnostic'ten elde edilen kitler kullanılarak Szasz ve Persijn [18] yöntemine göre belirlendi. GGT, onlar-glutamil grubunu L- -glutamil-p-nitroanilid substratından transfer eder, 418nm'de ölçülen kromojen p-nitroanilidi(PNA) serbest bırakır ve oluşumu GGT aktivitesi ile orantılıdır. Serum albümin düzeyi Doumas ve ark.'nın yöntemine göre belirlendi. [19] Diamond, Mısır'dan satın alınan reaktif kitlerini kullanarak. Yöntem kısaca, sitrat tamponu pH 3.8'de 2mL bro-more sol green'e (0.12mmol/L) 10μL serum eklenerek gerçekleştirildi. albümin/bromokresolreaksiyonla oluşan yeşil kompleks 630 nm'de ölçülmüştür. Serum bilirubin düzeyi, Diamond, Mısır'dan satın alınan reaktif kitleri kullanılarak Malloy ve Evelyn'in [20] yöntemlerine göre test edildi. Bu bilirubin tahmini yöntemi, van den Bergh reaksiyonuna dayanmaktadır. Bu reaksiyonda bilirubin, diazotize sülfanilik asit ile reaksiyona girerek mor renkli azobilirubin üretir ve 578 nm'de fotometrik olarak ölçülür. Rengin yoğunluğu serumdaki bilirubin miktarı ile doğru orantılıdır.

2.6. Karaciğer Oksidatif Stres ve Antioksidan Savunma Sistemi Parametrelerinin Değerlendirilmesi.

Karaciğer lipid peroksidasyonu (LPO), Preuss ve ark.'nın yöntemine göre belirlendi. [21]. Kısaca protein, 1 mL karaciğer homojenatına 0.15mL yüzde 76 trikloroasetik asit(TCA) eklenerek çökeltildi. Daha sonra, ayrılan süpernatana renk geliştirici bir ajan olarak 0.35mL tiobarbitürik asit (TBA) ilave edildi. Oluşan soluk pembe renk, 80 derecede 30 dakika su banyosunda inkübasyondan sonra 532 nm'de ölçülmüştür. Standart olarak MDA(malondialdehit veya 1,1,3,3-tetra metoksi propan) kullanıldı. Karaciğerdeki azaltılmış glutatyon(GSH) içeriği, 0,5 mL5,5'-ditiobis(2-azot-zoik asit), Ellman reaktifi (renk geliştirici bir madde olarak) ve fosfat tampon çözeltisi (pH 7) eklenerek belirlendi. ) Beutler et al. [22]. Numunelerde gelişen sarı renkler ve GSH standartları, köre karşı 412nm'de ölçülmüştür. Karaciğer GPx aktivitesi, Matkovics ve ark.[23] prosedürüne göre ölçüldü. bazı değişikliklerle. Bu yöntem, kalıntı GSH'nin saptanması ve toplamdan çıkarılması yoluyla enzim tarafından oksitlenmiş glutatyona (GSSG) dönüştürülen GSH'nin saptanmasına dayanır. Kısaca, 350μL Tris tamponu （pH 7.6）, 50μL GSH solüsyonu （2mM） ve 50μL H, O, (3.38mM) içeren bir Wasserman tüpüne 50 μL homojenat süpernatanı ilave edildi. Daha sonra, 10 dakikalık inkübasyondan sonra, kalıntı GSH içeriği, 430nm'de GSH tayini için daha önce tarif edilen yöntemle ölçülmüştür. 50μL numune yerine 50μL distile su eklenerek standart test, 50μL numune yerine 100μL distile su ve 50μL GSH solüsyonu eklenerek kör test hazırlandı. Numunedeki kalıntı GSH içeriğinin saptanmasından sonra, GSH oksitlenmiş forma (GSSG) dönüştürülür ve enzim aktivitesi hesaplanabilir. Karaciğer süperoksit dismutaz(SOD) aktivitesi Marklund ve Marklund'un [24] yöntemine göre tespit edildi. Reaksiyon, pirogallolün SOD tarafından otooksidasyonunun inhibisyonuna dayanmaktadır. İşlem, süperoksit iyonlarının varlığına bağlıdır. Kontrole göre 1 dakikada yok olma değişimlerinde yüzde 50 oranında inhibisyona neden olan enzim miktarı, enzimin bir birimi olarak kabul edilir.

2.7.Serum TNF-, IL-17 ve IL-4 Düzeylerinin Belirlenmesi.

Serum TNF-, I-17 ve I-4 seviyeleri, üreticinin talimatlarına göre spesifik enzime bağlı immünosorbent tahlili (ELISA) kitlerine göre tahmin edildi. Sıçan TNF-alfa ELISA kiti (Katalog No: MBS355371), IL-17 ELISA kiti (Katalog No.MBS5203506) ve IL-4 ELISA kiti (Katalog No: MBS494192) MyBioSource, Inc.'den temin edilmiştir. , San Diego, CA, ABD. Bu ELISA kitleri, sandviç ELISA kullanır. Kısaca, bu kitlerde sağlanan mikro ELISA plakaları, ilgili sitokine özel bir antikorla önceden kaplanmıştır. Uygun mikro ELISA plaka kuyularına standartlar veya numuneler eklenir ve spesifik antikorlarla birleştirilir. Daha sonra, ilgili sitokin ve avidin-yabanturpu peroksidaz (HRP) konjugatına özgü biyotinlenmiş bir saptama antikoru, her bir mikroplaka kuyusuna art arda eklenir ve inkübe edilir. Serbest bileşenler yıkanır. Substrat çözeltisi her kuyuya eklenir. Yalnızca sitokin, biyotinlenmiş saptama antikorları ve avidin-HRP konjugatı içeren kuyucuklar mavi renkte görünecektir. Enzim-substrat reaksiyonu, bir sülfürik asit çözeltisi ilave edilerek sonlandırılır ve renk sararır. Optik yoğunluk (OD), 450 nm dalga boyunda spektrofotometrik olarak ölçülür. OD değeri, test edilen sitokinin konsantrasyonu ile orantılıdır ve numunelerdeki konsantrasyonu, numunelerin OD'si standart eğri ile karşılaştırılarak belirlenebilir.

2.8.p53'ün mRNA Ekspresyonunun Tespiti

2.8.1.RNA İzolasyonu.

Total RNA, Chomzynski ve Sacchi [25] ve Boom ve ark.'nın yöntemine göre karaciğer dokusundan izole edildi. [26] Thermo Fisher Scientific Inc., Rochester, New York, ABD'den elde edilen bir Thermo Scientific GeneJET RNA saflaştırma kiti kullanılarak. Kısaca, karaciğer numuneleri, kaotropik bir tuz olarak guanidin tiyosiyanat ve RNA'yı endojen RNazlardan koruyabilen -merkaptoetanol içeren lizis tamponu içinde parçalanır ve homojenize edilir. Lizat daha sonra etanol ile karıştırılır ve bir saflaştırma kolonuna yüklenir. Kaotropik tuz ve etanol, lizat kolon boyunca döndürülürken RNA'nın silika membrana bağlanmasına neden olur. Daha sonra, kolon yıkama tamponları ile yıkanarak safsızlıklar membrandan etkin bir şekilde uzaklaştırılır. Saf RNA daha sonra nükleaz içermeyen su ile düşük iyonik kuvvet koşulları altında ayrıştırılır. İzole edilmiş RNA seviyeleri belirlendi ve bir ultraviyole (UV) spektrofotometre kullanılarak ve 260nm ve 280 nm'de optik yoğunluklarda(OD) absorbans alınarak nicelendirildi. RNA, Sambrook ve Russell'ın [27] （RNA（ug/μL）=ODat 260nm×dilution×40ug/mL/1000） formülüne dayalı olarak nicelendirildi ve nitelendi. Ekstrakte edilen her RNA numunesi için, 260 nm'de OD ile 280nm'de OD arasındaki oran ve 1.7 ile 2.0 arasında değişen oran, ekstrakte edilen RNA'nın yüksek saflığını sağlar.

2.8.2. RT-PCR Assay.RT-PCR testi Thermo Scientific Verso 1-Step RT-PCR Reddy Mix Kit (Thermo Fisher Scientific Inc.,

Rochester, New York, ABD)karaciğer p53'ün mRNA ekspresyonunun saptanması için. Kısaca, tek aşamalı bir reaksiyonda, RNA, cDNA'ya ters kopyalandı ve üretilen cDNA, Techne 32 Ther-mocycler tarafından büyütüldü. Reaksiyon karışımı, Veso Enzyme Mix（1μL）,2X One-Step PCR ReadyMix（25μL）, RT geliştirici （25μL）, ileri primer （10μM; 1μL）, ters primer（10μM;1μ）, şablon RNA（1 ng;1.5μL） ve toplam hacmi 50μL'ye tamamlamak için su nükleaz içermez. Termal döngü programı, cDNA sentezini (sıcaklık 50 derece ,15 dakika, 1 döngü), Verso inaktivasyonu (temp.95 derece ,2 dakika, 1 döngü), denatürasyonu (temp.95 derece ,20 saniye), tavlamayı (temp. 55 derece C, 30 saniye), uzatma (temp.72 derece, 1 dakika) ve son uzatma (sıcaklık 72 derece, 5 dakika, 1 döngü). Tavlama ve uzatmanın ardından gelen denatürasyon döngülerinin sayısı 35 döngüdür. Ters transkripsiyon ve amplifikasyondan sonra, 10uL PCR ürünleri, 1xTris Borat EDTA tamponu(TBE)pH 8,3-8.5 içinde etidyum bromür ile boyanmış yüzde 1.5 agaroz jel üzerinde analiz edildi. Elektroforetik resim, jel dokümantasyon sistemi (GelDocu Advanced) ile görselleştirildi ve analiz edildi ve değerler -aktin miktarına normalleştirildi. Asiri'ye göre p53 primer çifti dizileri 5'd CAGCGTGATGATGGTAAGGA 3'(ileri) ve 5'd GCGTTGCCTCTGATGGTGA 3'(ters) idi [28].

2.9. Histopatolojik İncelemeler. Kurban ve diseksiyondan sonra, her sıçanın karaciğeri hızla çıkarıldı ve sonra salin solüsyonunda perfüze edildi.

Her sıçanın karaciğerinden （3 mm²） parçalar alındı ​​ve yüzde 10 nötr tamponlu formalin içinde yirmi dört saat sabitlendi. Sabitlenmiş karaciğerler, daha ileri işleme, mumda bloke etme, kesit alma ve hematoksilen ve eozin (H&E) ile boyama için Beni Suef Üniversitesi Veteriner Fakültesi Patoloji Bölümüne gönderildi[29]. Histopatolojik skorların tespiti için boyanmış karaciğer kesitleri incelendi. Her bölümün (×100) rastgele seçilen üç alanında, lezyonlar veya yaralanmalar yok (0), hafif (I), orta () ve değişiklikler için şiddetli (II) olarak derecelendirildi, yüzde 0, sırasıyla yüzde 30'dan az, yüzde 30-50 ve yüzde 50'den fazla [30]. Dereceli lezyonlar arasında hidropik ve vakuolar dejenerasyon, inflamatuar hücre infiltrasyonu, nekroz, apoptoz, Kupffer hücre proliferasyonu, yağ değişiklikleri ve steatoz, tıkanmış kan damarları ve sinüzoidler ve safra kanalının epitelyal kaplamasının hiperplazisi yer aldı.

2.10. Kaspazın İmmünohistokimyasal Tespiti-3.

Parafine gömülmüş karaciğer örnekleri, pozitif yüklü slaytlara (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) monte edilen 5 um kalınlığında bölümlere ayrılmak üzere Ulusal Kanser Enstitüsü Patoloji Bölümüne transfer edildi. Kaspaz-3 reaktivitesi, Galaly ve ark.[31] yöntemlerine göre işlendi. ve Ahmed ve Ahmed [32]. Kısaca, antijen alımından sonra, kaspaz-3(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, ABD) için seyreltilmiş bir birincil antikor, karaciğer kesitleri ile 1 saat inkübe edildi. Seyreltilmiş biotinlenmiş sekonder antikor (DakoCytomation Kit) eklenerek 37 derecede 15 dakika inkübasyon yapıldı. Daha sonra, streptavidin (DakoCytomation Kit) ile konjuge yaban turpu peroksidaz, 15 dakika daha inkübasyon için uygulandı. Bağlı antikor kompleksi, 3,3'-diaminobenzidin(DAB) substratının reaksiyonu ve hematoksilin ile zıt boyama ile görselleştirildi. Tüm karaciğer kesitleri, aynı antikor dilüsyonları ile aynı koşullar altında ve aynı periyotta inkübe edildi, bu nedenle immün boyama, farklı çalışma grupları arasında karşılaştırılabilir oldu. Her preparasyon için bir negatif kontrol yapıldı (birincil antikor içermeyen bir slayt). Kesitler ışık mikroskobu altında görüntülendi ve hücre immünopozitifliğinin kapsamı değerlendirildi. Karaciğer bölümlerinin görüntüleri bir dijital kamera (Leica, DM2500M Leica, Wetzlar, Almanya) kullanılarak alındı. Etiketlemenin incelenmesi ve analizi, ücretsiz yazılım sürümü ImageJ(1.51d)[33] kullanılarak yapıldı. ImageJ yazılımı, kaspazın-3 pozitif reaksiyonunun entegre yoğunluklarını (piksel cinsinden) ölçmek için kullanıldı.

2.11. İstatistiksel analiz.

Results were represented in tables and graphs as the mean±standarderror(SE). The data were analyzed by LSD analysis to discern the main effects and to compare various groups with each other using PC-STAT, University of Georgia(USA)[34]. Values of p>0.05, istatistiksel olarak anlamlı olmayan bir şekilde farklı kabul edilirken, p değerleri<0.05 were="" significantly="" and="" highly="" significantly="">

3. Sonuçlar

3.1. Karaciğer Fonksiyonu ile İlgili Serum Parametrelerine Etkisi.

4 hafta boyunca günlük intraperitoneal diklofenak enjeksiyonu önemli bir yükselmeye neden oldu(p<0.05)in serum="" alt,="" ast,="" ldh,="" alp,="" and="" ggt="" activities="" as="" well="" as="" serum="" total="" bilirubin="" level.="" the="" cotreatment="" of="" diclofenac-injected="" ani-mals="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" induced="" a="" decrease="" in="" these="" elevated="" levels.="" while="" the="" cotreatment="" of="" diclofenac-injected="" rats="" with="" naringin="" induced="" a="" significant="" decrease=""><0.05)in the="" elevated="" serum="" ast,="" ldh,="" alp,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels,="" it="" produced="" a="" nonsignificant="" effect="" (p="">0.05) ALT etkinliğinde. Diklofenak enjekte edilen hayvanların hesperidin ile birlikte tedavisi önemli bir etki yarattı(p<0.05)on the="" elevated="" alt,="" ast,="" ldh,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels="" while="" it="" failed="" to="" produce="" a="" significant="" effect="" in="" serum="" alp=""><0.05). the="" cotreatment="" with="" naringin="" and="" hesperidin="" in="" combination="" successfully="" caused="" a="" significant="" decrease=""><0.05)in all="" elevated="" parameters="" related="" to="" liver="" function="" including="" alt,="" ast,="" ldh,="" alp,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels.="" moreover,="" the="" treatment="" with="" the="" combination="" of="" naringin="" and="" hesperidin="" appeared="" to="" be="" the="" most="" effective="" in="" improving="" the="" elevated="" ast,="" alp,="" and="" ggt="" activities(table="" 1).="" serum="" albumin="" level,="" on="" the="" other="" hand,="" exhibited="" a="" nonsignificant="" change="" (p="">0.05) tüm gruplarda.

3.2.Karaciğer Oksidatif Stres ve Antioksidan Savunma Sistemi Üzerine Etkisi.

4 hafta boyunca günlük intraperitoneal diklofenak enjeksiyonu önemli bir yükselmeye neden oldu (p<0.05)in liver="" lpo="" and="" a="" significant=""><0.05) in="" liver="" gsh="" con-tent="" and="" gpx="" and="" sod="" activities.="" the="" treatment="" of="" diclofenac-injected="" animals="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" induced="" a="" significant=""><0.05)in liver="" lpo.="" narin-gin="" and="" its="" combination="" with="" hesperidin="" were="" more="" potent="" than="" hesperidin="" alone="" in="" decreasing="" the="" elevated="" liver="" lpo="" product.="" while="" the="" treatment="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" produced="" a="" significant="" increase=""><0.05) in="" liver="" gpx="" and="" sod="" activities,="" only="" naringin,="" and="" hesperidin="" in="" combination="" induced="" a="" significant="" increase=""><0.05) in="" liver="" gsh="" content="" (table="">

3.3. Karaciğer p53 mRNA İfadesi Üzerine Etkisi.

Şekil 2'de belirtildiği gibi, proapoptotik protein p53 mRNA ifadesi önemli ölçüde arttı (p<0.05)in the="" liver="" of="" diclofenac-injected="" rats.="" on="" the="" other="" hand,="" the="" treatment="" with="" naringin,="" hesperidin,="" and="" their="" combination="" produced="" a="" significant=""><0.05)decrease in="" p53="" mrna="" expression="" in="" comparison="" with="" diclofenac-injected="" control.="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" three="" treatments="" when="" compared="" with="" each="">

3.4.Serum TNF-, IL-17 ve-4Düzeyleri Üzerindeki Etki. Tablo 3'te, 4 hafta boyunca günlük intraperitoneal diklofenak enjeksiyonu önemli bir artışa neden oldu(p<0.05)in serum="" tnf-αand="" il-17="" levels="" and="" a="" significant="" decrease="" in="" serum="" il-4="">

Diklofenak enjekte edilen sıçanların naringin ve/veya hesperidin ile birlikte tedavisi önemli bir iyileşme sağladı (p<0.05)of altered="" serum="" tnf-a,="" il-17,="" and="" i-4="" levels.="" the="" treatment="" with="" the="" combination="" of="" both="" flavonoids="" was="" the="" most="" potent="" in="" increasing="" the="" lowered="" il-4level;="" the="" effect="" of="" the="" combination="" was="" more="" significantly="" potent=""><0.05)as compared="" with="" the="" effect="" of="" either="" naringin="" or="">

3.5. Karaciğer Histopatolojik Bulguları.

Şekil 3, diklofenak enjekte edilmiş sıçanların karaciğer histolojik değişiklikleri üzerinde naringin ve/veya hesperidin'in etkisini gösterir. Şekil 3(a), hepatik lobülün normal histolojik yapısına sahip karaciğeri göstermektedir. Öte yandan, diklofenak enjekte edilen sıçanların karaciğeri, hepatositlerin sitoplazmik vakuolizasyonuna ve fokal hepatik nekroza ek olarak, hepatositlerin hidropik dejenerasyonu, apoptotik hücreler ve mononükleer hücrelerle portal infiltrasyon (Şekil 3(b)) gibi belirgin zararlı histolojik değişiklikler sergiledi. fokal inflamatuar hücre infiltrasyonu ile ilişkili (Şekil 3(c)). Bu değişiklikler, sporadik hepatositlerin tek yağlı değişimini gösteren, naringin ile tedavi edilen diklofenak enjekte edilmiş sıçanlarda bir dereceye kadar değiştirildi (Şekil 3(d)). Diklofenak enjekte edilen sıçanların hesperidin ile tedavisi, diklofenak enjekte edilen kontrol ile karşılaştırıldığında karaciğer histolojik değişikliklerinde bir iyileşme sağladı, ancak yine de sporadik hepatositlerin yağlı değişimini, Kupffer hücrelerinin hafif aktivasyonunu ve birkaç apoptotik hücrenin varlığını sergiledi (Şekil 3(e)). Benzer şekilde, diklofenak enjekte edilen sıçanların naringin ve hesperidin kombinasyonu ile tedavisi, diklofenak enjekte edilen kontrole kıyasla karaciğer histolojik değişikliklerini iyileştirdi. Bununla birlikte, her iki flavonoidin bir kombinasyonu ile diklofenak enjekte edilmiş sıçanların karaciğeri, hafif Kupffer hücre proliferasyonu ve hafif sitoplazmik vakuolizasyon sergilemiştir(Şekil 3(f)). Naringin ve hesperidin'in birleşik etkisinin, karaciğer histolojik mimarisini iyileştirmede en güçlü olduğu görülüyordu.

Tüm grupların histopatolojik değişiklik skorları Tablo 4'te kaydedilmiştir. Normal kontrolün karaciğer bölümü tüm histolojik lezyonlar için sıfır skor göstermiştir. Karaciğer diklofenak enjekte edilen sıçanlar, derece III ile derece 0 arasında değişen çeşitli derecelerde histolojik lezyon skorları sergiledi. Diklofenak enjekte edilen sıçanlara hesperidin ve naringinin uygulanması, hidropik ve vakuolar dejenerasyon, inflamatuar hücre infiltrasyonu, nekroz, apoptoz, Kupffer hücre proliferasyonu, yağ değişiklikleri, steatoz, konjesyon dahil olmak üzere histolojik lezyonlarda dikkate değer gelişmelerle sonuçlandı.

FCURE 2: Naringin, hesperidin ve bunların kombinasyonlarının diklofenak uygulanan sıçanların karaciğerindeki p53 mRNA ekspresyonu üzerindeki etkisi. Farklı sembolleri paylaşan ortalamalar, p noktasında önemli ölçüde farklıdır.<0.05. blood="" vessels="" and="" sinusoids,="" and="" hyperplasia="" of="" the="" epithelial="" lining="" of="" the="" bile="" duct;="" thereby,="" the="" liver="" exhibited="" lower="" grades="" of="" histopathological="" change="" scores="" in="" the="" diclofenac-injected="" groups="" treated="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" in="" comparison="" with="" diclofenac-injected="" control="" rats.="" the="" combinatory="" effect="" of="" naringin="" and="" hesperidin="" was="" the="" most="" potent="" in="" decreasing="" the="" histopathological="" lesion="">

3.6. İmmünohistokimyasal Test.

İmmünohistokimyasal olarak boyanmış karaciğer bölümleri Şekil 4'te gösterilmektedir ve görüntü analizinin sonuçları Şekil 5'te gösterilmektedir.

Şekil 4'teki fotomikrograflar ve Şekil 5'teki veriler, diklofenak enjekte edilen sıçanlarda kaspaz-3 ifadesinin önemli ölçüde arttığını ortaya koydu. Diklofenak enjekte edilen sıçanların naringin, hesperidin ve bunların kombinasyonları ile tedavisi, karaciğerdeki yüksek kaspaz-3 ekspresyonunda önemli bir azalma ile sonuçlandı. Naringin ve hesperidin'in birleşik etkisi, yüksek kaspaz-3 içeriğini azaltmada en güçlüydü. Kombinasyonla yapılan tedavi, karaciğer kaspaz-3 ifadesini normalleştirdi.

Bu makale Oksidatif Tıp ve Hücresel Uzun Ömür Cilt 2021, Makale Kimliği 9990091, 14 sayfa https://doi.org/10.1155/2021/9990091'den alınmıştır.