Yanıt Yüzeyi Metodolojisi ile Cistanche Deserticola Polisakkarit Ekstraktının Solorizasyon Sürecinin Optimizasyonu ve Antioksidan Aktivitesi

SOYUT:

 

Amaç:Cistanche Deserticola polisakkaritlerinin renklendirme sürecini optimize etmek ve antioksidan aktivitelerini keşfetmek.

Aktif karbonun çözülme ajanı olarak kullanılarak yöntemleri, aktif karbon dozajı, renklendirme sıcaklığı, renklendirme süresi ve pH gibi 4 faktörün renksizleştirme hızı ve polisakkarit geri kazanım hızı üzerindeki etkileri araştırıldı. Tek faktörlü deneylere dayanarak, Cistanche Deserticola polisakkarit ekstraktının renklendirme işlemi, yanıt yüzeyi metodolojisi kullanılarak optimize edildi. Bir in vitro antioksidan aktivite değerlendirme yöntemi kullanılarak 1, 1- difenil -2- pikrilhidrazin (DPPH), toplam indirgeme kabiliyeti, hidroksil radikal temizleme yeteneği ve 2,2'-azino kullanılarak 1, 1- Bis (3- etilbenzotiazol {{8} sülfonik asit) diammonyum tuzu (ABTS) Cistanche Deserticola'dan polisakkaritlerin serbest radikal temizleme kabiliyeti belirlendi. Sonuçlar Cistanche deserticola'dan polisakkaritlerin ekstraktı için optimal renklendirme işlemi koşulları aşağıdaki gibidir: aktif karbon dozu%20, renklendirme sıcaklığı 37 derece, renklendirme süresi 49 dakika, pH 5.03. Bu optimal koşullar altında, dekoloizasyon oranı ve polisakkarit geri kazanım oranı sırasıyla% 62.66 ve% 96.16 idi. Çöktülükten sonra, DPPH radikal ve hidroksil serbest radikalini temizleme yetenekleri önemli ölçüde artmış, Abts anion radikalini temizleme yetenekleri önemli ölçüde azalmıştır. SONUÇ SONUDALAMA SOĞUTUCU ETKİLERİ İLE KOLAYLAMA İLE İYİ ÇÖZÜM ETKİLERİ VE EKİSTCHARIT GERİZEŞİK GERİ DÖNÜŞTİR. Önemli uygulama değerine sahiptir ve Cistanche Deserticola polisakkaritinin daha sonraki araştırması ve geliştirilmesi için temel sağlar.

Anahtar Kelimeler: Cistanche Deserticolapolisakkarit; renklendirme; Yanıt yüzey metodolojisi; antioksidan aktivite

TirbahiDeserticola etkileri

 

1.2.3 Polisakkarit geri kazanım oranının ölçümü

Standart eğrinin hazırlanması:
Fenol-sülfürik asit yöntemi kullanıldı. Yaklaşık 0. 0 5 0 0 g glikoz standardı (105 derecede sabit ağırlığa kurutuldu), stok çözeltisini hazırlamak için doğru bir şekilde tartıldı ve 50 mL hacimsel bir şişeye kadar seyreltildi. Daha sonra, 1.0 mL stok çözeltisi doğru bir şekilde ölçüldü ve 0.1 mg/ml standart bir çözelti elde etmek için hacimsel bir şişe içinde 10 mL'ye seyreltildi. 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ve 100 ul glikoz standart çözeltileri 1.5 mL santrifüj tüplerine doğru bir şekilde ölçüldü. Toplam hacim 100 ul oluşturmak için her tüpe damıtılmış su ilave edildi. Boş bir kontrol çözeltisi olarak 100 ul damıtılmış su içeren bir başka 1.5 mL santrifüj tüpü kullanıldı. Her tüpe, 100 ul% 5 fenol çözeltisi ilave edildi, iyice karıştırıldı ve daha sonra 500 ul konsantre sülfürik asit hızla ilave edildi. Tüpler 3 dakika vortekslendi ve 35 dakika bekletildi. Daha sonra, 200 uL reaksiyon çözeltisi bir 96- kuyu plakasına aktarıldı ve absorbans, otomatik bir mikroplaka okuyucu kullanılarak 490 nm'de ölçüldü. Standart bir eğri, dikey eksen olarak absorbans (y) ve yatay eksen olarak glikoz konsantrasyonu (x, ug/mL) ile çizildi. Elde edilen standart eğri denklemi:

Y = 5.507X – 0.01,
r² = 0.992.

Polisakkarit içeriğinin ölçümü:
100 ul seyreltilmiş bir kısımCistanche DeserticolaPolisakkarit ekstraktı, 1.5 mL'lik bir santrifüj tüpüne doğru ölçüldü. Absorbans değeri, yukarıda tarif edilen yöntem kullanılarak belirlendi ve polisakkarit konsantrasyonu standart eğri kullanılarak hesaplandı.

Polisakkarit geri kazanım oranının ölçümü:
Polisakkarit kütlesiCistanche DeserticolaÇökme öncesi ve sonra ekstrakt yukarıdaki yöntem kullanılarak ölçüldü. Polisakkarit geri kazanım oranı denklem (2) kullanılarak hesaplandı:

Polisakkarit geri kazanım oranı (%)
= (maftermBefore) ×%100 \ sol (\ frac {m _ \ text {sonra}}} {m}} \} \ text {Önceden}} \ sağ) \%100 \%(mBeBore mafter) × 100 \%100 \%
Nerede:

mBororem _ \ text {Önceden} MBEBORE ve MAFTRE _ \ text {sonra} Mafter kitleleriCistanche DeserticolaSırasıyla renklendirmeden önce ve sonra polisakkaritler (G).

 

 

1.2.4 Tek faktörlü deney tasarımı

Dört faktörle aktive edilen karbon dozajının etkileri, renklendirme sıcaklığı, renklendirme süresi ve pH-onsolorizasyon oranı ve polisakkarit geri kazanım oranınınCistanche DeserticolaPolisakkarit ekstraktı araştırıldı.

Aktif karbon dozajının etkisi:
30 dakikada çözülme süresi, 50 derecede renklendirme sıcaklığı ve 5.03'te pH (ölçülen numune değeri) sabit. Aktif karbon dozajının renklendirme oranı ve polisakkarit geri kazanım oranı üzerindeki etkisi incelenmiştir.

Çökme sıcaklığının etkisi:
Aktif karbon dozajını% 20 (M: M), 30 dakikada renklendirme süresi ve pH 5.03'te sabitlendi. Sokatlandırma sıcaklığının renklendirme oranı ve polisakkarit geri kazanım oranı üzerindeki etkisi incelenmiştir.

Çöküşme süresinin etkisi:
Aktif karbon dozuna%20, 50 derece renklendirme sıcaklığı ve pH 5.03'te sabitlendi. Sokatlandırma süresinin renklendirme oranı ve polisakkarit geri kazanım oranı üzerindeki etkisi incelenmiştir.

PH'ın etkisi:
Aktif karbon dozajı% 20 (M: M), 50 derece renklendirme sıcaklığı ve 30 dakikada renklendirme süresi. PH'ın renklendirme oranı ve polisakkarit geri kazanım oranı üzerindeki etkisi incelenmiştir.

 

1.2.5 Tepki Yüzeyi Optimizasyonu Deney Tasarımı

Tek faktörlü deneylerde tanımlanan optimal durum aralıklarına dayanarak, kutu-behnken deneysel tasarım yöntemi, dört faktörlü, üç seviyeli bir tasarım yapmak için kullanıldı.Cistanche DeserticolaPolisakkarit özü. Değerlendirme indeksleri olarak renklendirme oranı ve polisakkarit geri kazanım oranı kullanıldı. Tasarım parametreleri Tablo 1'de gösterilmiştir.

1.2.6 Antioksidan aktivitesinin belirlenmesiCistanche DeserticolaPolisakkaritler

(1) belirlenmesiCistanche DeserticolaPolisakkaritlerin DPPH radikal temizleme yeteneği

Kan Jintao ve ark. [21] Küçük modifikasyonlarla, 0. 5 mL 1. (1, {{1 0}} difenil -2- pikrilhidrazin) ve 1.1 mL damıtılmış su. Karışımın karanlıkta 30 dakika boyunca 37 derecede reaksiyona girmesine izin verildi. Reaksiyon çözeltisinin absorbansı 517 nm'de ölçüldü ve renklendirmeden önce ve sonra 1.0 mg/ml polisakkarit DPPH radikal temizleme hızı (3) denklemi kullanılarak hesaplandı:

DPPH radikal temizleme oranı (%)

{{0}}[1−(A1−A2)A0]×100%= \left[ 1 - \frac{(A_1 - A_2)}{A_0} \right] \times 100 \%= [1 - A0 (A1 −a2)] ×%100

Nerede:

A1a _1 A1, numune test tüpünün absorbansıdır,

A2A _2 A2, susuz etanol DPPH çözeltisinin yerini aldığında absorbansdır.

A {0}} A _0 A0, damıtılmış su numunenin yerini aldığında absorbansdır.

 

(2) Toplam azaltma gücünün belirlenmesiCistanche DeserticolaPolisakkaritler

Lu Xue ve ark. [22], 1. 0 mg/ml polisakkaritler, renklendirme önce ve sonra hazırlandı. Bir 96- kuyu plakasına 5 uL numune ve 180 μL FRAP (ferrik iyon azaltıcı antioksidan güç) çalışma çözeltisi ilave edildi, iyice karıştırıldı ve 5 dakika boyunca 37 derecede reaksiyona girmesine izin verildi. Absorbans 593 nm'de ölçüldü ve polisakkaritlerin toplam azalma gücü, FESO4 standart çözeltisinin konsantrasyonu açısından ifade edildi.

(3) Hidroksil radikal temizleme yeteneğinin belirlenmesiCistanche DeserticolaPolisakkaritler

Literatürde tarif edilen yöntemi takiben [23] ve hidroksil radikal temizleme test kitinin talimatları, 1. Damıtılmış su, kontrol grubu absorbansı için hidrojen peroksitin (AconTrola _ \ text {control} acontrol) değiştirilmesi için kullanıldı ve boş grup absorbansı için numuneyi değiştirmek için damıtılmış su kullanıldı. Absorbans değerleri 550 nm'de ölçüldü ve hidroksil radikal temizleme hızı denklem (4) kullanılarak hesaplandı:

Hidroksil radikal temizleme oranı (%)

=[(Acontrol−Asample)(Acontrol−Ablank)]×100%= \left[ \frac{(A_\text{control} - A_\text{sample})}{(A_\text{control} - A _ \ text {boş})} \ sağ] \ times 100 \%= [(acontrol −thank) (acontrol −a -as -ASPRAST örnek) ×%100

Nerede:

ASMPlea _ \ text {sample} as -ampal, örnek grubun absorbansıdır,

Acontrola _ \ text {control} acontrol, kontrol grubunun absorbansıdır,

Ablanka _ \ text {blank} Ablank, boş grubun absorbansıdır.

 

(4) ABTS katyonu radikal temizleme yeteneğinin belirlenmesiCistanche DeserticolaPolisakkaritler

Literatürde açıklanan yönteme göre [24] ve ABTS katyon radikal temizleme test kitinin talimatları, 1. 10 uL'lik bir numune, dört ve 170 ul ABTS çalışma çözeltisi 20 ul reaktif çalışma çözeltisi ile karıştırıldı, iyice karıştırıldı ve oda sıcaklığında 6 dakika boyunca karanlıkta reaksiyona girmesine izin verildi. Deiyonize su boş bir kontrol olarak kullanıldı. Absorbans 405 nm'de ölçüldü ve ABTS katyon radikal temizleme oranı denklem (5) kullanılarak hesaplandı:

Abts katyon radikal temizleme oranı (%)

= [(Bblank - Bonsmate) Bblank] ×%100=\ \ frac {(b _ \ text {blank} - b _ \ text {sample}) {blank} \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \}}}} \ \ \ \ \ \ \ \ \ {{6} \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ {{6} \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ \} 100 \%= [bblank (bblank −base)] ×%100

Nerede:

Bblankb _ \ text {blank} Bblank, damıtılmış su ve ABTS çözeltisi arasındaki reaksiyonun absorbansıdır,

BSampleB _ \ text {sample} BSample, numune ve ABTS çözeltisi arasındaki reaksiyonun absorbansıdır.

 

1.3 Veri İşleme

SigMaplot 12.5 yazılımı çizim için kullanıldı ve tasarım uzmanı 8. 0. 6 yazılımı veri analizi için kullanıldı.