Bölüm 1: Cistanche Tubulosa'dan İzole Edilen Ekinakozit, Ghrelin Reseptörünün Aktivasyonu Yoluyla Büyüme Hormonu Salgısını Varsayımsal Olarak Uyarır

Cistanche tubulosa'dan İzole Edilen Ekinakozid, Ghrelin Reseptörünün Aktivasyonu Yoluyla Büyüme Hormonu Salgısını Varsayılan Olarak Uyarır

Chieh-Ju Wu 1, Mei-Yin Chien 2, Nan-Hei Lin 1, Yi-Chiao Lin 1, Wen-Ying Chen 3, Chao-Hsiang Chen 2,4,* ve Jason TC Tzen 1,*

1 Lisansüstü Biyoteknoloji Enstitüsü, Ulusal Chung-Hsing Üniversitesi, Taichung 402, Tayvan; baby159357520@gmail.com (C.-JW); CMNHEI@mohw.gov.tw (N.-HL); s9755702@gmail.com (Y.-CL)

2 Ko Da Pharmaceutical Co. Ltd., Taoyuan 324, Tayvan; rd1@koda.com.tw

3 Veteriner Kliniği, Ulusal Chung-Hsing Üniversitesi, Taichung 402, Tayvan; wychen@dragon.nchu.edu.tw

4 Lisansüstü Farmakognozi Enstitüsü, Taipei Tıp Üniversitesi, Taipei 110, Tayvan

* Yazışma: gm@koda.com.tw (C.-HC); TCTZEN@dragon.nchu.edu.tw (JTCT); Tel.: artı 886-4-22840328 (dahili 776) (JTCT); Faks: artı 886-4-22853527 (JTCT)

Akademik Editör: Pinarosa Avato

Geliş: 22 Ocak 2019; Kabul Tarihi: 14 Şubat 2019; Yayınlanma: 17 Şubat 2019

İletişim:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Soyut:cistancheÇölün ginsengi olan türlerin, geleneksel Çin farmakopesinde birçok biyolojik aktiviteye sahip olduğu kaydedilmiştir ve yaşlanma karşıtı ilaç olarak kullanılmıştır. Üç feniletanoid glikozit—ekinakozit, tubulosit A ​​ve acteoside — su özütünde tespit edildi.cistanchetübüloza(Schenk) R. Wight ve ana bileşeni,ekinakozit, daha da saflaştırıldı.Ekinakozit10_6 M'den daha yüksek bir konsantrasyonun, sıçan hipofiz hücrelerinin büyüme hormonu salgılanmasını uyarmak için önemli bir aktivite sergilediğini göstermiştir. Ghrelin sentetik bir analoğu olan büyüme hormonu salgılatıcı hormona-6 benzer şekilde, ekinakozit tarafından büyüme hormonu salgılanmasının uyarılması, [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11]-madde P tarafından inhibe edildi. , ghrelin reseptörünün ters agonisti. Moleküler modelleme, üç feniletanoid glikozitin hepsinin ghrelin reseptörünün bağlayıcı cebi ile yeterince etkileşime girdiğini ve ekinakozitin reseptör ile tübülozit A ve ateositten biraz daha iyi bir etkileşim sergilediğini gösterdi. Sonuçlar, feniletanoid glikozitlerin, özellikleekinakozit, C. tubulosa'nın yaşlanma karşıtı etkilerinden varsayılan olarak sorumlu olan aktif bileşenlerdir ve ghrelinin peptidil olmayan analogları olarak geliştiği düşünülebilir.

Anahtar Kelimeler: cistanchetübüloza;ekinakozit; grelin; büyüme hormonu salgılanması; feniletanoid glikozitler

Lütfen Bölüm 2 için buraya tıklayın

Ekinakozitcistanche'de iyileştirebilirbağışıklık sistemi

1. Giriş

cistancheÇölün ginsengi olarak adlandırılan türler (Orobanchaceae), kuzeybatı Çin'in çöl bölgesinde bulunan holoparazitik bir bitkidir. Bu bitkisel ilacın, geleneksel Çin farmakopesinde kabızlığı giderme, uzun ömür ve afrodizyak özellikler gibi çeşitli biyolojik aktivitelere sahip olduğu kaydedilmiştir [1]. Farklı Cistanche türleri genellikle konakçılarına ve yetiştirme ortamlarına göre adlandırılır, örneğin Cistanche Deserticola YC Ma vecistanchetübüloza(Schenk) R. Wight. Ağırlıklı olarak İç Moğolistan'da bulunan Haloxylon ammodendron tarafından barındırılan C. Deserticola, başlangıçta Çin Farmakopesinde standart Cistanche kaynağı olarak görülüyordu, ancak 1984'ten beri Çin'de nesli tükenmekte olan bir bitki türü olarak listeleniyor. Sincan'da yetişen Tamarix ramosissima tarafından barındırılan C. tubulosa Hetian, hızlı bir büyüme oranına sahip olma eğilimindedir ve bu nedenle bu Moleküllerin tarımsal ekimi 2019, 24, 720; doi:10.3390/molecules24040720 türü, geleneksel C. Deserticola'dan çok daha iyi verim sağlar. Günümüzde, yukarıdaki iki türün her ikisi de Çin Farmakopesinde toplanmıştır [2].

C. çöl çiçeğiveC. tübülozabenzer kimyasal bileşenlere ve farmakolojik aktivitelere sahip oldukları bulunmuştur, bu nedenle her ikisi de yaşlanmaya bağlı hastalıklar için potansiyel bitkisel ilaç olarak kabul edilmektedir [3-5]. Feniletanol glikozitler, bu iki türde bulunan yaygın aktif maddelerdir ve ekinakozit, C. tubulosa'daki başlıca feniletanol glikozit olarak tanımlanır [6]. Geçtiğimiz on yılda, ekinakozit ve ekinakozit bakımından zengin C. tubulosa ekstraktının, yaşlanmayı önleme, nöroproteksiyon, öğrenme ve hafızayı güçlendirme, kalp fonksiyonunu iyileştirme, hiperlipidemi ve hiperglisemi azaltma gibi birçok farmakolojik aktiviteye sahip olduğu gösterildi. obezitenin neden olduğu diyabet ve metabolik sendromun önlenmesi [7-12].

"Açlık hormonu" olarak bilinen grelin, üçüncü serin kalıntısının biyolojik fonksiyonları için gerekli olan bir n-oktanoil grubu ile açillendiği 28 amino asit kalıntısından oluşan bir peptit hormonudur [13]. Ghrelin'in, büyüme hormonu sekretagogu olarak adlandırılan G-protein-bağlı bir reseptör için endojen bir ligand olduğu gösterilmiştir. GHS-R1a'nın ghrelin tarafından aktivasyonu, büyüme hormonu salgılanmasının uyarılması ve çeşitli fizyolojik reaksiyonların düzenlenmesi ile sonuçlanır [15]. Klinik çalışmalar, büyüme hormonları ile yapılan eksojen takviyenin, yaşlılarda kas gücünü ve kemik yoğunluğunu artırma ve uyku kalitesini ve bilişsel yeteneği iyileştirme gibi yaşlanma ile ilişkili hastalıkların semptomlarını hafifletebileceğini göstermektedir [16,17]. Bununla birlikte, ekzojen büyüme hormonları ile tedavi için ciddi yan etkiler (örneğin, prostat kanseri, eklem ağrısı, insülin direnci, sıvı tutulması, karpal tünel sendromu ve jinekomasti) ile ilgili endişeler gündeme gelmiştir [18,19]. Bu nedenle, GHS-R1a aktivasyonu yoluyla ghrelin tarafından büyüme hormonu salgılanmasının uyarılması, yaşlıların yaşlanmaya bağlı hastalıkları için alternatif bir tedavi yaklaşımı olarak düşünülmüş ve terapötik etkisinin, ekzojen büyüme hormonu takviyesinden daha üstün olduğu varsayılmıştır.

Son zamanlarda, Chin-shin oolong çayında ve Ginkgo biloba L. (Ginkgoaceae) yapraklarında bulunan benzersiz asillenmiş flavonoid glikozitler olan teaghrelinler ve ginkgogrelinlerin, ghrelin reseptörüne bağlanarak sıçan birincil ön hipofiz hücrelerinin büyüme hormonu salgılanmasını indüklediği gösterilmiştir [20-22] ]. Cistanche spp.'nin terapötik etkileri göz önüne alındığında. Chin-shin oolong çayı ve Ginkgo biloba yapraklarının yaşlanmayı geciktirici etkilerine benzer yaşlanma ile ilişkili hastalıklar üzerinde, feniletanol glikozitlerin farmakolojik aktivitelerinin, feniletanol glikozitlerin farmakolojik aktivitelerinin teaghrelinler ve ginkgogrelinler ile aynı yol üzerinden, grelin reseptörü İlk olarak, C. tubulosa'nın su ekstraktında üç feniletanoid glikozit – ekinakozit, tübülosit A ​​ve akteozit – tanımlandı. Ana bileşen olan ekinakozit daha da saflaştırıldı ve ghrelin reseptörünün aktivasyonu yoluyla sıçan hipofiz hücrelerinin büyüme hormonu salınımını uyarma kabiliyeti açısından incelendi. Ekinakozit, tübülosit A ​​ve ghrelin reseptörüne kenetlenen akteositin moleküler modellemesi yapıldı ve bağlama cebi içindeki olası etkileşimler için karşılaştırıldı.

2. Sonuçlar

2.1. İki Cistanche Türünün Su Ekstraktında Üç Ana Feniletanol Glikozitin Ayırma ve Tanımlanması

İki Cistanche türünün HPLC analizinde, C. tubulosa'nın, C. Deserticola'dan çok daha yüksek feniletanol glikozit içeriğine sahip olduğu bulundu (Şekil 1A,B). C. tubulosa'da üç ana feniletanol glikozit gözlendi ve daha önce yayınlanmış bilinen bileşiklerin HPLC profilleri ve MS verileriyle karşılaştırıldığında kütle spektrometrik analizi ile ekinakozit, tubulosit A ​​ve akteozit olarak tanımlandı (Şekil 2) [23,24]. MS1'de 785 m/z ve MS2'de 623 m/z moleküler parçalanmaya göre, C. tubulosa'nın su ekstraktındaki ana pik, ekinakozit olarak tanımlandı (Şekil 2A). Benzer şekilde, tübülozit A, moleküler parçalanması ile MS1'de 827 m/z ve MS2'de 665, 623 ve 782 m/z olarak atanmıştır (Şekil 2B); acteoside, MS1'de 623 m/z ve MS2'de 461 m/z moleküler parçalanma ile doğrulanmıştır (Şekil 2C). Ekinakozit, homojenliğe yakın olacak şekilde daha da saflaştırıldı (Şekil 1C) ve aşağıdaki biyolojik deneylerde kullanıldı.

Şekil 2. Devam.

Şekil 2. MS1 (sol paneller) ve MS2 (sağ paneller) fragmantasyonunda ekinakozit (A), tübülosit A ​​(B) ve ateozit (C)'nin kütle spektrometrik analizleri.

2.2. Ekinakozitin EtkisiSıçan Hipofiz Hücrelerinde Büyüme Hormonu Salgısının İndüklenmesi Üzerine

Ekinakozidin büyüme hormonu sekretagog reseptörünün (GHSR) bir agonisti olup olmadığını değerlendirmek için, birincil sıçan ön hipofiz hücrelerinden büyüme hormonu salgılanmasının indüksiyonunun incelenmesine tabi tutuldu. Sentetik bir GHSR agonisti olan GHRP-6'ye benzer şekilde, ekinakozit, sıçan hipofiz hücrelerinden büyüme hormonlarının salgılanmasını uyarabildi (Şekil 3). Sıçan hipofiz hücreleri, 15 ve 30 dakika süreyle 10_6 M'den daha yüksek bir konsantrasyonda ekinakozid ile tedavi edildiğinde, büyüme hormonu salgılanmasında önemli artışlar tespit edildi. Ekinakozitin (10_8 ila 10_5 M arası) 15 ve 30 dakika süreyle tedavisinin, doza bağlı bir şekilde sıçan hipofiz hücrelerinin büyüme hormonu salgılanmasını uyardığı bulundu. Ayrıca, bir GHSR ters agonisti, [D-Arg1, D-Phe5, D-Trp7,9, Leu11]-maddesi P, GHRP-6 ve ekinakozitin büyüme hormonu salgılanmasının uyarılması üzerindeki uyarıcı etkilerini açıkça inhibe etti. sıçan hipofiz hücreleri (Şekil 4). Sonuçlar, ekinakozidin potansiyel bir GHSR agonisti olduğunu göstermektedir.

Şekil 3. Ekinakozitin Etkisihipofiz hücrelerinin büyüme hormonu salgılanması üzerine uygulama. Sıçan birincil hipofiz hücrelerinden büyüme hormonu (GH) salgısı ölçüldü

ortam (kontrol), GHRP-6 (GHSR agonisti, 10_7 M) ve çeşitli konsantrasyonlar (10_8 ila15 (A) ve 30 dakika (B) için 10_5 M) ekinakozit (ECH),

sırasıyla. Veriler, n=6 ile ortalama o SD olarak sunuldu. tarafından görülen anlamlılık seviyeleriT-Testi, kontrole karşı * p < 0.05 ve ** p < 0,005 idi.