Bölüm 1|Genetik Varyasyon, Akut Böbrek Hasarı Alt Fenotiplerinin Gelişiminde Plazma Anjiyopoietini-2 Etkiler

Pavan K. Bhatraju1,2*, Max Cohen1, Ryan J. Nagao3,4, Eric D. Morrell1, Susanna Kosamo1, Xin-Ya Chai1, Robin Nance5, Victoria Dmyterko1, Joseph Delaney5, Jason D. Christie6, Kathleen D. Liu7, Carmen Mikacenic1, Sina A. Gharib1, W. Conrad Liles8, Ying Zheng3,4, David C. Christiani9,10, Jonathan Himmelfarb2 ve Mark M. Wurfel1,2

Soyut

Arka fon:Daha önce iki tane tanımlamıştıkakutböbrekincinme(AKI) alt fenotipleri (AKI-SP1 ve AKI-SP2), farklı kötü klinik sonuç riskleri ve vazopresör tedavisine yanıtlar. Endotel disfonksiyonunun plazma biyobelirteçleri (tümör nekroz faktör reseptörü-1, anjiyopoietin-1 ve 2) AKI alt fenotiplerini farklılaştırdı.

Bununla birlikte, bu biyolojik belirteçlerin AKI alt fenotiplerinin gelişiminde basit belirteçler mi yoksa nedensel aracılar mı olduğu bilinmemektedir.

Yöntemler:içindeki tek nükleotid polimorfizmleri arasındaki ilişkileri test ettik.Anjiyopoietin-1, Anjiyopoietin-2,veTümör Nekroz Faktörü Reseptörü 1AAvrupa kökenli 421 kritik hasta denekte genler ve AKI-SP2. En iyi performans gösteren tek nükleotid polimorfizmleri (FDR < 0.05),="" cis-biyobelirteç="" ekspresyonu="" ve="" aki-sp2="" için="" genetik="" riske="" dolaşımdaki="" biyobelirteçler="" aracılığıyla="" aracılık="" edilip="" edilmediği="" açısından="" test="" edildi.="" ayrıca="" insan="" böbrek="" mikrovasküler="" endotel="" hücrelerini="" kullanan="" in="" vitro="" çalışmaları="" da="" tamamladık.="" son="" olarak,="" 20="" farklı="" zamanlı="" idrar="" toplama="" kullanarak="" plazma="" biyobelirteçlerinin="" renal="" klirensini="">

Sonuçlar:Bir genetik varyant, rs2920656C > T, yakınANGPT2AKI-SP2 riskinin azalmasıyla ilişkiliydi (olasılık oranı, 0.45; yüzde 95 GA, 0.31–0.66; düzeltilmiş FDR=0.003) ) ve plazma anjiyopoietininde azalma-2 (p = 0.002). Nedensel çıkarım analizi, her küçük alel (T) için AKI-SP2 geliştirme riskinin yüzde 16 azaldığını gösterdi. Plazma anjiyopoietin-2, AKI-SP2 için rs2920656 ile ilgili riskin yüzde 41,5'ine aracılık etti. rs2920656'nın T alelini taşıyan insan böbrek mikrovasküler endotel hücreleri, sayısal olarak daha düşük seviyelerde anjiyopoietin-2 üretti, ancak bu istatistiksel olarak anlamlı değildi (p = 0.07). Son olarak, analizler, anjiyopoietinin-2 kritik olarak hasta kişilerde gerçekten minimal düzeyde temizlendiğini göstermiştir.

Çözüm:Genetik aracılık analizi, anjiyopoietinin-2 AKI-SP2 riskinde nedensel bir rol oynadığına dair destekleyici kanıtlar sağlar.

Anahtar Kelimeler: Akut böbrek hasarı, Genetik, Endotel

Daha fazla bilgi için lütfen iletişime geçin:emily.li@wecistanche.com

Cistanche Deserticola böbrek hastalığını önler, numuneyi almak için buraya tıklayın

Arka fon

Akutböbrekincinme(AKI), yoğun bakım ünitesine (YBÜ) kabul edilen hastaların yüzde 40-60'ını etkiler ve kısa ve uzun vadeli kötü sonuçlara katkıda bulunur. Bugüne kadar yapılan genetik çalışmalar, genetik varyantlar ile vakaları (AKI) kontrollerle (AKH yok) karşılaştıran AKI riski arasındaki ilişkilere odaklanmıştır. Ancak, bu çerçeve sınırlı olabilir çünküAkutböbrekincinmefarklı çökelticiler ve biyolojik profiller ile oldukça heterojendir. Örnek boyutunu en üst düzeye çıkarmak için bu tür AKI hastalarını birleştirmek, AKI popülasyonunun yalnızca patofizyolojik olarak farklı bir alt kümesinde bulunabilecek genetik istatistiksel sinyallerin seyreltilmesine neden olabilir. Diğer bir sınırlama, kritik hasta popülasyonlarda AKI'nin genellikle sepsis, cerrahi, şok, zatürree ve travma gibi ciddi yaralanmaların bir komplikasyonu olmasıdır. geliştirmeden kontrollerin kullanımıAkutböbrekincinmesorunlu olabilir. Yüksek riskli bir genetik varyant taşıyan kontroller, aynı zamanda vakalara benzer bir akut hakaret yaşamazlarsa AKI geliştirmeyebilir ve bu nedenle, herhangi bir potansiyel ilişki sinyalini azaltarak vaka dışı olarak sınıflandırılır. Biyolojik olarak farklı AKI alt fenotiplerinin genetik ilişki çalışmalarında kullanılması, özellikle AKI popülasyonuna odaklanarak ve biyolojik olarak farklı iki alt fenotipi karşılaştırarak AKI'yi fenotiplemede önceki sınırlamaların üstesinden gelir.

Yakın zamanda iki bağımsız kritik hasta AKI popülasyonunda 29 klinik ve biyobelirteç değişkeninden oluşan bir panele gizli sınıf analizi metodolojisi uygulayarak iki AKI alt fenotipi (AKI-SP1 ve AKI-SP2) tanımladık. Özellikle, AKI-SP2, AKI-SP1'e kıyasla daha kötü hastane sonuçlarıyla (örneğin mortalite, yeni diyaliz ve 7-gün böbrek iyileşmemesi) ilişkilendirildi. Daha sonra bu AKI alt fenotiplerini daha önce tamamlanmış çok merkezli randomize bir kontrol çalışmasında, Septik Şoklu Hastalarda (VASST) Vasopressin ile Norepinefrin İnfüzyonu'nda tanımladık. VASST çalışması, septik şoklu hastalarda vazopresör tedavi seçiminin mortaliteyi iyileştirip iyileştirmediğini araştırdı. Klinik çalışmadaki AKI popülasyonunda vazopresör tedavisinden kaynaklanan mortalite farkı bulunmazken, AKI-SP1, mortalite farkı olmayan AKI-SP2'ye kıyasla vazopressin ile mortalite yararına sahipti. Bildiğimiz kadarıyla bu, kritik hastalarda tedaviye yanıt veren AKI alt gruplarının belirlenmesine yönelik ilk örnektir.

Özellikle, AKI-SP2'yi tanımlamak için hiçbir değişken istatistiksel olarak diğer değişkenlerden daha iyi değildi (Tablo 1). Buna karşılık, plazma anjiyopoietin-2 (ANG-2), anjiyopoietin-1 (ANG-1) ve çözünür tümör nekroz faktör reseptörü{{8 kullanan üç değişkenli bir model }} (sTNFR-1), ayırt etmek için optimum tahmin performansına sahiptiAkutböbrekincinmealt fenotipler (C-istatistiği 0.93). Daha düşük ANG-2, daha düşük sTNFR-1 ve daha yüksek ANG-1, daha düşük AKI-SP2 riski ile ilişkilendirildi. AKI'nin hayvan modellerinde yapılan çalışmalar, bu plazma biyobelirteçlerinin

AKI'nin patofizyolojisi ve şiddeti. Bununla birlikte, bu plazma biyobelirteçlerinin klinik hastalığın gelişiminde nedensel bir rol oynayıp oynamadığı bilinmemektedir.Akutböbrekincinmealt fenotipler. Nedensel belirteçlerin belirlenmesi, hastalığın gelişmesini önlemek veya tedavi etmek için ilaç geliştirme hedeflerine bilgi verebilir.Akutböbrekincinmekritik hastalarda ve hasta risk sınıflandırmasına yardımcı olabilir.

Genetik aracılık analizi, bağımsız bir değişkenin (örn., genetik varyant) sonucu (örn. AKI alt fenotipleri) açıklayıcı bir aracı (örn. . Bu yaklaşım, hastalığın nedensel mekanizmalarını anlamak için klinik verilerde yaygın olarak uygulanmıştır. cis-kantitatif özellik lokuslarının (QTL'ler) olduğunu varsaydık.ANGPT1, ANGPT2 ve TNFRSF1Agenler, ilgili biyolojik belirteçlerinin (ANG-1, ANG-2 veya sTNFR-1) dolaşımdaki seviyelerini düzenleyerek AKI alt fenotiplerinin gelişimini etkiler.

yöntemler

Çalışma popülasyonları

AKI alt fenotiplerinin tanımlanmasını, ileriye dönük olarak toplanmış bir YBÜ kohortu kullanarak daha önce bildirmiştik: Değişmiş Akut Akciğer Hasarı Riskine (iSPAAR) yatkın olan Tek Nükleotid Polimorfizmlerinin (SNP'ler) belirlenmesi. iSPAAR popülasyonu, ARDS'si olan ve olmayan hastaları içeren akut solunum sıkıntısı sendromu (ARDS) riskinin genom çapında bir vaka kontrol çalışmasıdır. iSPAAR popülasyonu, önceden tamamlanmış randomize kontrol denemelerinden ve ileriye dönük olarak kaydedilmiş bir YBÜ kohortundan denekleri içeriyordu. iSPAAR'a kayıtlı her popülasyon için çalışma tasarımının detayları daha önce açıklanmıştır; Akut Akciğer Hasarının Tedavisi için Albuterol (ALTA), Sıvı ve Kateter Tedavi Denemesi (FACTT), Enteral omega-3 yağ asidi, gama-linolenik asit ve akut akciğer hasarında (OMEGA) antioksidan takviyesi

ve Massachusetts Genel Hastanesinde Akut Solunum Sıkıntısının (MEA) Moleküler Epidemiyolojisi. iSPAAR içinde, çalışma kaydı, yoğun bakım ünitesine kabul edildikten 48 saat sonra gerçekleşti. Çalışma kaydında, genotipleme ve biyobelirteç analizi için DNA ve plazma toplandı, ardındanAkutböbrekincinmetespit. AKI, serum kreatinin (SCr) değerinde 0.3 mg/dl'ye eşit veya daha büyük veya "başlangıç" SCr'den yüzde 50'lik bir artış olarak tanımlandı. Temel SCr, çalışmaya kaydolmadan önceki en düşük değer olarak tanımlandı. AKI ayrıca modifiye idrar çıkışı kriterleri (her 6 saatte bir yerine günlük çıkış) kullanılarak tanımlandı.

Plazma biyobelirteçlerinin renal klirensini belirlemek için, Harborview tıbbi ve cerrahi yoğun bakım ünitelerinde Critical Illness adlı prospektif bir kohortu kaydettik.AkutböbrekincinmeKohort (CIA). Denekler, 4 sistemik inflamatuar yanıt sendromu kriterinden 2'sini karşılayan klinik olarak şüphelenilen bir enfeksiyona sahipse ve yerinde kalıcı bir üriner katetere sahipse kayıt için uygundu. En az 2-4 saat süren zamanlı bir idrar toplama işlemi tamamlandı ve zamanlı idrar toplama işleminin başında ve sonunda EDTA plazma örnekleri toplandı. Açıklık, Açıklık formülü kullanılarak hesaplanmıştır.(X) = U(X) * V/ P(X), neredeU(X) çözünen maddenin idrar konsantrasyonunu temsil ederX, V 2–4-saatlik toplama periyodundaki idrar hacmini gösterir veP (X) çözünen maddenin ortalama plazma konsantrasyonlarını temsil ederX İlk ve son kan koleksiyonlarından.

genotipleme stratejisi

Avrupa kökenli 421 hastada Illumina 660 platformu (Illumina, San Diego, CA) kullanılarak genotipleme yapıldı. Genotiplenmiş veriler, bir örnek çağrı hızı filtresi > 0.97, küçük alel frekansı (MAF) > 0.01 ve SNP çağrı hızı > 0.95 kullanılarak kalite kontrolüne tabi tutulmuştur. Kalite kontrolünden sonra 238 SNP ±50 kilobazANGPT1, ANGPT2,veTNFRSF1Abulundular. Bağlantı dengesizliğinden (LD) sonra bir r'nin budaması²{{0}}.8'den 48 SNP kaldırılarak, ilişkilendirme testlerinde toplam 190 SNP kullanıldı. İmputasyon, IMPUTE2 v2.3.0 kullanılarak 1000 Genom Projesi referans paneli kullanılarak gerçekleştirilmiştir.

Plazma protein değerlendirmesi

Plazma ve idrar biyobelirteçleri, daha önce tarif edildiği gibi elektrokemilüminesan immünoanalizler (Meso Scale Discovery (MSD), Rockville, MD) kullanılarak ölçüldü. Kan, EDTA ile muamele edilmiş steril tüplerde toplandı, idrar steril kaplarda toplandı ve her ikisi de hemen santrifüjlendi. Plazma ve idrar alikotlandı ve -80 derecede donduruldu. Numuneler farklı süreler için saklandı, ancak bu çalışma için biyobelirteç ölçümlerini yürütmek için tek bir partide ve yalnızca bir kez eritildiler. Tüm biyobelirteç ölçümleri, Harborview Pulmonary Research Laboratories'de iki kopya halinde yapıldı.

Silico analizlerinde

QTL etkilerinin ifadesi için SNP'leri test etmek için Genotip-Doku İfadesi (GTEx) Portalını sorguladık.

Hücre kültürü

İnsan böbrek mikrovasküler endotel hücreleri (HKME C'ler), gebe kaldıktan sonraki 100 ila 135 gün arasındaki gönüllü gebelik kesintilerinden sonra fetal böbreklerden saflaştırılmıştır. Hastalardan fetal dokuların kullanımı için bilgilendirilmiş onam alındı. Daha sonra rastgele 9 farklı donör HKMEC seçtik, çözdürdük ve yarım milyon hücreyi yüzde 0,2 jelatin ile kaplanmış T25 şişelere yerleştirdik ve yüzde 1 antibiyotik-antimikotik (Life Technologies), yüzde 10 FBS içeren EBM-2 bazal ortamında muhafaza ettik, 100 ug/mL ECGS, 50 ug/mL Heparin ve 20 ng/mL VEGF (Ar-Ge), bir araya gelene kadar 48 saat boyunca. 48 saatte, HKMEC'lerden genomik DNA'yı saflaştırdık ve hücre süpernatanları toplandı. 8 donörden alınan hücreleri başarıyla genotiplendirdik.

istatistiksel analiz

Hasta demografik değişkenleri ya ortalama artı /−standart sapma ya da medyan ve çeyrekler olarak rapor edilir. İlk olarak, eklemeli bir genetik model (Golden Helix, MT) kullanarak AKI-SP1'e kıyasla 190 SNP ile AKI-SP2'nin gelişimi arasındaki ilişkiyi test etmek için lojistik regresyon kullandık. Modelimiz şu ortak değişkenler için kullanıldı: yaş, cinsiyet, sepsis ve ilk beş temel bileşen. Temel bileşenleri hesaplamak için Eigenstrat yöntemi v4.2 kullanıldı ve ilk beş ortak değişken olarak dahil edildi. Odds oranları (OR'ler) yüzde 95 güven aralığı ile rapor edilir. Genetik varyantlar ve AKI alt fenotipleri arasındaki analiz için, bir Benjamini-Hochberg yanlış keşif oranı (FDR) eşiği < 0.10="" kullanarak="" çoklu="" karşılaştırmalar="" için="" düzelttik="" ve="" bu,="" ilişkilerin="" yüzde="" 10'undan="" daha="" azının="" bir="" fdr="" değeri="" veya="" altında="" olduğunu="" tahmin="" ediyor.="" bu="" seviye="" yanlış="" pozitiflerdir="" [31].="" bir="" duyarlılık="" analizinde,="" aki-sp2="" ile="" ilişkili="" ek="" snp'leri="" tanımlamak="" için="" empoze="" edilmiş="" bir="" genotip="">

İkinci olarak, en iyi performans gösteren SNP'ler ile log arasındaki ilişkileri belirlemek için yaş, cinsiyet ve sepsis için doğrusal regresyon ayarlaması kullandık.₂dönüştürülmüş biyobelirteç konsantrasyonları. Üçüncüsü, genetik varyantlar ile AKI-SP2 arasındaki ilişkiyi ve plazma biyobelirteç konsantrasyonları ile ilişkinin potansiyel aracılığını test etmek için nedensel bir çıkarım analizini tamamladık. Aracılık analizi, STATA için aracılık paketinde uygulanan yapısal eşitlik modellemesinin doğrusal olmayan uygulaması kullanılarak gerçekleştirilmiştir [32, 33]. Nedensel çıkarım analizinin ek ayrıntıları çevrimiçi ekte verilmiştir. Dördüncüsü, lojistik regresyon yoluyla, maksimum serum kreatinin ile ölçülen AKI şiddeti ile genetik varyantlar arasındaki ilişkileri belirledik. Materyal ve yöntemlerin ek ayrıntıları çevrimiçi ekte verilmektedir. Analizde 190 SNP'yi değerlendirdik ve muhafazakar birp değeri/ 0.05/190 =2,6 × 10^{− 4}. YBÜ hastalarının yaklaşık yüzde 4'ünün AKI geliştirdiği ve beklenen kontrol (AKI-SP1)/vaka (AKI-SP2) oranının 1,5, beklenen örneklem büyüklüğü 421 ve MAF'nin en az {{ {16}}.30, göreli riski 1,5 veya daha büyük [34] saptamak için yüzde 81 gücümüz olacak. Analizler STATA (Sürüm 15) ve Goldenhelix (Sürüm 4.0) kullanılarak tamamlandı. Tüm çalışmalar, Washington Üniversitesi'ndeki İnsan Denekleri Bölümü tarafından onaylandı. Kayıtlı tüm deneklerden yazılı bilgilendirilmiş onam alındı.

Sonuçlar

Popülasyonların özellikleri Önceki çalışmamızda doğrulama kohortundan 425 hastanın 421'inde genotipleme verileri mevcuttu. Demografi ve temel klinik özellikler Tablo 1'de açıklanmıştır. Tüm denekler Avrupa kökenliydi. Toplam 267 (yüzde 63) AKI-SP1 ve 154 (yüzde 37) AKI-SP2 olarak sınıflandırıldı. AKI-SP2 geliştiren denekler sunumda daha yüksek hastalık şiddetine sahipti (ortalama akut fizyoloji ve kronik sağlık değerlendirmesi (APACHE) III puanları, 111 ± 26'ya karşı 74 ± 24), sepsis olma olasılığı daha yüksekti (yüzde 84'e karşı yüzde 66) ve AKI-SP1'e kıyasla vazopresörlerle tedavi edilme olasılıkları daha yüksekti (yüzde 79'a karşı yüzde 42).

ANGPT2'ye Yakın Genetik Varyasyon, rs2920656, AKI-SP2 ile İlişkilidir

Genlerin 190 SNP'sinin ±50 kilobazdan 72'si ANGPT1'e yakındı, 100 ANGPT2'ye yakındı ve 18'i TNFRSF1A genine yakındı. AKI-SP1 ile karşılaştırıldığında AKI-SP2 ile ilişkili FDR < 0.05'i="" karşılayan="" bir="" snp="" belirledik="" (tablo="" 2="" ve="" şekil="" 1).="" angpt1="" veya="" tnfrsf1a'nın="" içinde="" veya="" yakınında="" snp'ler="" ile="" önemli="" bir="" ilişki="" gözlenmedi="" (tablo="" s2="" ve="" s3).="" aki-sp2="" riski="" ile="" en="" güçlü="" ilişkiyi="" gösteren="" snp,="" rs2920656="" idi="" (or,="" 0.45;="" yüzde="" 95="" ga,="" 0.31–0.66;="" p="">< 1.4="" ×="" 10−="" 5;="" fdr="0.003)." bu="" intronik="" snp,="" angp="" t2'nin="" 3'="" pozisyonunun="" aşağısında="" ≈="" 30="" kb'dir="">

AKI-SP2'nin (R2 ) geliştirilmesi. Yalnızca az sayıda denek homozigot rs2920656 (n=26) olduğundan, baskın bir genetik modelde rs2920656 ve AKI-SP2 arasındaki ilişkileri de test ettik, bu da tutarlı sonuçlar verdi. sonuçlar (OR, 0.42; yüzde 95 GA, 0.28–0.64; p < 1.4="" ×="" 10−="" 6="" ).="" ayrıca,="" empoze="" genotipleri="" kullanarak="" angpt2="" lokusu="" içindeki="" ek,="" potansiyel="" olarak="" daha="" güçlü="" ilişkiler="" için="" test="" ettik="" ancak="" rs2920656="" ile="" gözlemlenenden="" daha="" güçlü="" bir="" ilişki="" bulamadık="" (tablo="" s4).="" duyarlılık="" analizinde,="" kritik="" durumdaki="" hastaların="" dahil="" edilip="" edilmediğini="" test="">Akutböbrekincinmegenetik ilişkiyi etkiler. AKI ve AKI-SP1'i olmayan hastaları birlikte grupladık ve rs2920656'nın AKI-SP2 riskinin azalmasıyla hala güçlü bir şekilde ilişkili olup olmadığını belirledik. Bu analizde 839 hastada AKI veya AKI-SP1 yoktu ve 154 hastada AKI-SP2 vardı. AKI-SP2'yi yeniden geliştirme riski, rs2920656 (OR 0.31; yüzde 95 CI, 0.19–0.52; p < 0,001)="" (tablo="" s5).="" başka="" bir="" duyarlılık="" analizinde,="" ispaar'a="" dahil="" edilen="" dört="" farklı="" çalışmanın="" her="" birinde="" rs2920656'nın="" azalan="" aki-sp2="" riski="" ile="" ilişkili="" olup="" olmadığını="" test="" ettik.="" üç="" randomize="" kontrol="" çalışmasının="" (alta,="" factt="" ve="" omega)="" ve="" icu="" prospektif="" kohortunun="" (mea)="" her="" birinde="" nokta="" tahmini,="" rs2920656'nın="" küçük="" aleli="" ile="" tutarlıydı="" ve="" aki-sp2="" gelişimi="" için="" riskin="" azaldığını="" gösteriyordu="" (tablo="" s6="" ).="" bu="" nedenle,="" plazma="" biyobelirteç="" konsantrasyonları="" ile="" ilişkiyi="" belirlemek="" için="" rs2920656="" ayrıca="" analiz="">

rs2920656'nın T aleli, plazma ANG'sinin azalmasıyla ilişkilidir-2

Daha sonra rs2920656 ve plazma ANG-2 konsantrasyonları arasındaki ilişkiyi analiz ettik. Yaş, cinsiyet ve sepsis için ayarlama rs2920656'nın T alelinin her bir kopyası, azalmış log2 plazma ANG-2 konsantrasyonları ile ilişkilendirildi (=− 0,09; yüzde 95 CI {{9} }.15, − 0.04; P=0.002). C aleli için homozigot olan denekler en yüksek plazma ANG-2 konsantrasyonlarını gösterirken (40,683 pg/ml; çeyrekler arası aralık (IQR) 19,374-73,205), T aleli için homozigot olan denekler en düşük konsantrasyonu gösterdi plazma ANG-2 konsantrasyonları (28.308 pg/ml (IQR 14,340-42, 944). Ek olarak, ANGP T2 gen bölgesi yakınında test edilen 100 SNP'den rs29206565, plazma ANG ile en güçlü ilişkili olandı. -2 konsantrasyonları (Şekil 2).

Uyumlulaştırma analizi, ANG-2'nin AKI-SP2'nin geliştirilmesinde nedensel olduğunu öne sürüyor

rs2920656 ile AKI-SP2 riski arasındaki ilişkinin plazma ANG-2 konsantrasyonları aracılığıyla gerçekleştiğine dair kanıtları test ettik (Şekil 3). rs2920656'nın AKI-SP2 üzerindeki toplam etkisi, allel başına toplam=− 0.16 idi (yüzde 95 CI -0.24, − 0) .10, p=1.0 × 10− 4 ), bu, genetik varyantın her küçük aleli (T aleli) için AKI-SP2 geliştirme riskinin yüzde 16 azaldığını gösterir. Nedensel aracılık analizi, AKI-SP2 üzerinde rs2920656 için plazma ANG-2 konsantrasyonları aracılığıyla aracılık edilen önemli bir dolaylı etki saptadı ( dolaylı, allel başına − 0.07; yüzde 95 CI -0.11, − 0.03; p { {34}}.001), yani rs2920656 ile AKI-SP2 arasındaki ANG-2 konsantrasyonlarının aracılık ettiği etki oranı yüzde 41,5'tir.

rs2920656'nın T aleli, 7 günde azalmış AKI şiddeti ile ilişkilidir

Daha sonra, rs2920656'nın AKI şiddeti için maksimum serum kreatinin ve çalışma kaydından sonraki 7 gün içinde serum kreatinin artışı gibi geleneksel kriterlerle ilişkisini test ettik. Baskın bir genetik modelde, rs2920656'nın T aleli, serum kreatininde − 0.44 mg/dL'lik (yüzde 95 GA, − 0.77) bir azalma ile ilişkilendirildi. , − 0.10), p=0.01) yaş, cinsiyet, vücut kitle indeksi ve sepsis durumu için ayar yapıldıktan sonra. rs2920656'nın minör aleli aynı zamanda başlangıç ​​ve 7. gün arasında serum kreatinin artışındaki bir azalmayla da ilişkiliydi (=− 0.25, yüzde 95 GA, − 0.46, − 0.03; p=0.03)

rs2920656'nın T aleli, hücre kültüründe düşük ANG-2 ile ilişkilidir

rs2920656'nın fonksiyonel önemini belirlemek için in vitro deneyler ve in silico analizler gerçekleştirdik. 8 farklı insan ceninböbrekdokuörnekler, 2'si CC, 5'i CT ve 1'i rs2920656 için TT idi. Baskın bir genetik modelde, ANG-2 konsantrasyonları, C aleli için homozigot donörlerden alınan endotelyal hücrelerde sayısal olarak en büyüktü ve T alelinin taşıyıcılarında daha düşüktü, p=0.07 (Şekil 4). GTEx proje veritabanında, rs2920656, ANGPT2 gen ifadesi ile ilişkili değildi. Bununla birlikte, rs2920656 ile orta düzeyde LD (r2=0.23 ve D'=0.86) olan diğer iki SNP (rs41311412 ve rs2515591), ANGPT2 gen ekspresyonunda azalma (p) ile ilişkilendirilmiştir.=4.1 × 10− 5) tibial arterde, endotel hücreleri için oldukça zenginleştirilmiş bir doku (Tablo S7).

Plazma ANG-2 böbrekler tarafından minimal olarak temizlenir.böbrekişlevplazma ANG{{0}} konsantrasyonlarını etkileyebilir, AKI olan ve olmayan kritik hastalarda ANG-2 renal klerensini ölçtük. Ayrılmış plazma numuneleri ile 20 farklı zamanlı idrar numunesi koleksiyonunda, medyan serum kreatinin değeri 0.86 mg/dL ve çeyrekler arası aralık (IQR) 0.69 ila 1.45 mg/dL idi. Medyan plazma ANG-2 konsantrasyonu 10.261 pg/mL (IQR 6210–19.115 pg/mL) idi. Buna karşılık, idrar ANG-2 konsantrasyonları, medyan 206 pg/ mL (IQR 11-839 pg/mL) ile 50-kat daha düşüktü. ANG-2'nin hesaplanan renal klerensi, tüm zamanlı idrar toplamaları için < 1="" ml/dk'dır,="" bu="" da="" plazma="" ang-2="" konsantrasyonlarının="" sadece="" kötüleşen="" aki'nin="" bir="" fonksiyonu="" olarak="" artmadığını="" düşündürür="" (tablo="">