BÖLÜM 2 Acteoside ve Türevlerinin Antioksidasyonu ve Sitokoruması: Karşılaştırma ve Mekanistik Kimya

Bölüm 2 Cistanche Acteoside antioksidanı hücreleri nasıl korur?

1. bölüm için buraya tıklayın

Daha fazla bilgi için lütfen iletişime geçin:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche Deserticola'nın birçok etkisi vardır, daha fazlasını öğrenmek için buraya tıklayın

3. Tartışma

Doğal fenolik bileşiklerin antioksidan etkisinin elektron transferinde (ET) yer aldığı bilinmektedir [18,19]. Bu nedenle, FRAP ve CUPRAC tahlilleri gibi bazı ET bazlı metal indirgeyici tahliller, fenoliklerin antioksidan seviyelerini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmıştır. FRAP testi yönergeleri, 3,6'dan düşük bir pH ile yerine getirilmelidir. Böyle bir asidik ortam, fenoliklerden H artı iyonlaşmayı başarıyla bastırdı; bu nedenle, FRAP testi sadece bir ET süreci olarak kabul edilir [20,21]. etkinliğiasteositve FRAP tahlilindeki türevleri, ateozid ve türevleri antioksidanlar olarak hareket ettiklerinde, antioksidan etkilerini uygulamak için ET yolunu kullanabileceklerini ima eder.

Ayrıca, pH 7.4 tamponda bir CUPRAC testi de gerçekleştirdik. Suppl'de görüldüğü gibi. 1,asteositve türevleri doza bağlı olarak Cu'larını arttırdı^{2 artı}- fizyolojik pH'ta ET potansiyelini koruyabileceklerini gösteren güç yüzdelerini azaltmak. Ancak, ET potansiyelleri aşağıdaki sırayla azaldı:asteosit> forsythoside B > poliumoside (Tablo 1). Bu dinamik, forsythosit B'deki apiosil parçasının ve poliumoside'daki rhamnosil parçasının ET potansiyelini düşürdüğünü açıkça göstermektedir.

ET'nin radikal temizleme süreçleri sırasında ortaya çıkma olasılığını test etmek için, çalışmada oksijen merkezli bir serbest radikal PTIO・ tanıtıldı. Döngüsel voltametri kanıtları, PTIO・-pH 5'in altında temizlemenin0 tek bir elektron redoks reaksiyonu olduğunu ortaya çıkardı. gözlem kiasteositve türevlerinin pH 4.5'te PTIO・ radikalini verimli bir şekilde temizleyebilmesi, radikal temizleme süreçleri sırasında ET olasılığını ortaya koymaktadır. Açıkça, bu bulgu, FRAP ve CUPRAC deneylerinden yukarıda bahsedilen sonuçları ve bir bağışlayan elektronun (e) fenolik antioksidanların bir özelliği olduğu önceki sonuçları desteklemektedir [23].

Bununla birlikte, fizyolojik pH 7.4'te, PTIO・-süpürme denemesi yalnızca bir ET yolu değildir, aynı zamanda bir proton- (H artı ) transfer yolunu da içerir. Süreç boyunca, PTIO・'nın H'yi kabul etmesi önerildi.^artıürün pikini üretmek için fenoliklerden ([PTIO-H]^artı). Çünkü H^artı-transfere adım adım veya senkronize mekanizmalarda her zaman ET eşlik eder [24], gerçekçi (veya nihai) ürün bir [PTIO-H] molekülüdür [22]. pH 7,4'te (Ek 1) PTIO・-süpürme şu anlama gelir:asteositve türevleri de bir H artı - transfer potansiyeline sahiptir. IC50 değerleri (Tablo 1), bağıl H^artı-transfer potansiyelleri azalan sıradaydıasteosit>forsythoside B > poliumoside. Apiosil ve rhamnosil kısımları da H'yi zayıflattı.^artı-antioksidan işlem sırasında transfer potansiyeli.

Daha önce tartışıldığı gibi, fenoliklerin antioksidan işlemi sırasında ET'ye genellikle proton (H) eşlik eder.^artı) hidrojen-atom transferi (HAT) [23,25-27], sıralı elektron-proton transferi (SEPT) [26,27], sıralı proton kaybı tek elektron gibi çeşitli antioksidan mekanizmalar oluşturmak için transfer [24] transfer (SPLET) [26] ve proton-bağlı elektron transferi (PCET) [24-26,28]. Örneğin, tek elektron transferinin (SET) [29] hakim olduğu bir reaksiyon olan ABTS plus • -scavenging'in de son zamanlarda H plus düzeylerinden etkilendiği kanıtlanmıştır [30]. ABTS plus • -scavenging bu nedenle çok yollu bir antioksidan tahlilidir [21,31]. gerçeğiasteositve türevleri ABTS artı ・ radikallerini temizleyebilir, onların antioksidan etkilerinin de çoklu yollardan aracılık edebileceğini gösterir. Bu hipotez, HAT, ET, SEPT ve PCET çoklu yollarından oluşan bir reaksiyon olan DPPH・-scavenging tahlilinden elde edilen kanıtlarla da doğrulanır [26,32]. Bununla birlikte, nicel analize dayalı IC₅₀değerler (Tablo 1), çok yol tabanlı ABTS artı --temizleme ve DPPH*-süpürme yönlerinde,asteosituygun forsythoside B ve rhamnoside poliumoside'dan daha üstündü. Böylece, apiol ve ramnosil kısımlarının sonunda çok yollu potansiyelleri engellediği sonucuna varılabilir (özellikle ET ve H^artı-transfer) serbest radikal temizleme işlemi sırasında.

Yazarlar ve diğerleri [14,26] tarafından belirtildiği gibi, antioksidan işlem sırasında bir RAF reaksiyonu da meydana gelebilir. Ancak RAF olasılığını doğrulamak için kafeik asitle birlikte üç fenilpropanoid glikozit UPLC-ESI-Q—TOF-MS/MS analizi kullanılarak incelenmiştir. Kafeik asidin bir dimer ürünü verdiği bulunurken, üç fenilpropanoid glikozit, RAF ürününün hiçbir zirvesini üretmedi. Bu bulgu, üç fenilpropanoid glikozitin, antioksidan etkilerini uygulamak için RAF yolundan geçemeyeceğini açıkça göstermektedir. Üç fenilpropanoid glikozit, kafeik asidin esterleri olarak kabul edilebildiğinden (Şekil 1), kafeik asit ve kafeik asit esterleri arasındaki böyle bir fark, aynı zamanda, büyük kısmın RAF oluşumunu engelleyebileceğini de gösterir.

Serbest radikal süpürücü bir bakış açısıyla birlikte ele alındığında,asteositve türevleri, antioksidan etkilerini uygulamak için birden fazla yola girebilir. Bu antioksidan yollar en azından ET ve H artı transferinde yer alır (ancak RAF değil). Bulgularımız kısmen teorik çalışma tarafından desteklenmektedir.asteositSPLET yolu aracılığıyla antioksidan etki gösterebilir. Bu süreçte, asteozid ilk olarak protonsuzlaştırabilir (H^artı-transfer) anyon elde etmek için. Deprotonasyonun, zayıf asitli katekol kısımlarında meydana geldiği düşünülmektedir. Daha sonra, anyon, fenoksi radikal formuna yol açmak için elektron bağışladı [33]. Ancak pn konjugasyonuna sahip fenoksi radikalleri bir dereceye kadar stabildir. Elbette bu konuda gelecekte daha fazla deneysel çalışmaya ihtiyaç duyulmaktadır.

Hücresel oksidatif stresin geçiş metallerinden de (özellikle Fe^{2 artı}). Fe^{2 artı}Ancak iyon, H'yi dönüştürebilir.₂O₂molekülü Fenton reaksiyonu (Fe) yoluyla en zararlı OH radikallerine dönüştürür.²artı artı H2O2 T Fe³artı artı ・OH artı OH^-). Bu nedenle, Fe'nin zayıflaması²artı seviyeleri, hücresel oksidatif stresi serbest bırakmak için ・OH radikallerini etkili bir şekilde engelleyebilir. Aslında, doğal fenolik antioksidanlarla demir şelatlama şimdi bazı oksidatif stres hastalıkları için etkili bir tedavi olarak geliştirilmiştir [34,35].

Bu çalışmada, acteoside ve türevleri etkili Fe olarak önerilmiştir.^{2 artı}-spektroskopi ve çözelti renklerindeki değişikliklerle şelatörler (Şekil 2). Bununla birlikte, asteozit Fe şelatlamada iki glikozitten daha düşüktür.^{2 artı}ve apiosil parçalı forsitozit B, ramnosil parçalı poliumoside göre daha düşüktür. Tercih edilen konformasyonlarının karşılaştırılmasına dayanarak (Şekil 1, sağ), apiosil (veya rhamnosil) kısmının Fe şelatlamada ana liganda (fenilpropanoid grubu) yardımcı olabileceği öne sürülmüştür.^{2 artı}. Böyle bir sinerjik etki kuşkusuz Fe'yi güçlendirir.^{2 artı}-şelatlama yeteneği ve UV-vis piklerini büyütür. Bununla birlikte, rhamnosil, Fe içeriğinde apiosilden daha etkilidir.^{2 artı}-şelatlama yeteneği. Fark, ramnosil'in bir ekzosiklik formda (yani, aL-rhamnopiranosil) meydana gelmesine, apiosilin ise bir pentasiklik formda (yani, pD-apiofuransil) bulunmasına bağlanabilir. Ekzosiklik bir formun daha büyük ve daha kararlı olduğu bilinmektedir. Bu nedenle, ekzosiklik rhamnosil, Fe içeriğindeki pentasiklik apiosile kıyasla daha etkilidir.^{2 artı}-şelatlama yeteneği.

Acteoside ve türevlerinin ROS'u temizleyip temizleyemeyeceğini test etmek için bir pirogallol otooksidasyon deneyi yaptık. Suppl'de görüldüğü gibi. 1, hepsi hücrelerde meydana gelen tipik bir ROS olan radikali etkili bir şekilde temizleyebilir. Bununla birlikte, poliumoside > forsythoside B > sırasında nispi biyoaktivite azalmıştır.asteosit. Bu sıra sitoprotektif etkilerle de paraleldir (Tablo 2). Bu bulgu, ramnosil parçasının veya apiosil parçasının genel etkisinin, ROS süpürücü veya sitoprotektif etkileri arttırmak olduğunu gösterir.

4. Malzemeler ve yöntemler

4.1. Kimyasallar ve Hayvanlar

Acteoside (CAS numarası: 61276-17-3, yüzde 97), forsythosit B (CAS numarası: 81525-13-5, yüzde 97) BioBioPha'dan (Kunming, Çin, Ek 3) elde edildi. Poliumoside (CAS numarası: 94079-81-9, yüzde 97 ) ekibimiz tarafından geleneksel Çin bitkisinden izole edildiCallicarpa periHT Chang (Ek 3). DPPH・,(±)-6-hidroksil-2,5,7,8-tetrametilkroman-2-karboksilik asit (Trolox), 2,9-dimetil{{ 9}},10-fenantrolin (neocuproine), 2,4,6-tripiridiltriazin (TPTZ) ve pirogallol, Sigma-Aldrich Shanghai Trading Co.'dan (Şanghay, Çin) satın alındı. (NHq'ABTS [2,2'-azino-bis (3-etilbenzen-tiazolin-6-sülfonik asit diamonyum tuzu)] Amresco Chemical Co.'dan (Solon, OH, ABD) elde edildi. radikali TCI Development Co., Ltd.'den (Shanghai, Çin) satın alındı.Kafeik asit, National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products (Pekin, Çin)'den satın alındı.Dulbecco'nun modifiye Eagle's ortamı (DMEM), fetal sığır serumu (FBS) ve tripsin Gibco'dan (Grand Island, NY, ABD) satın alındı ​​AnnexinV/propidium iodide (PI) tahlil kiti Invitrogen'den (Carlsbad, CA, ABD) satın alındı ​​Diğer tüm reaktifler analitik derecedeydi.

4 haftalık Sprague-Dawley (SD) sıçanları, Guangzhou Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Merkezinden alındı. Bu deneyin protokolü, Guangzhou Çin Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Etik Kurulu'nun gözetimi altında gerçekleştirildi (Onay numarası 20170306A).

4.2. Metal İndirgeme Testleri (FRAP& CUPRAC)

Metal indirgeme deneyleri Fe içerir^{3 artı}- azaltıcı güç tahlili ve Cu^{2 artı}- azaltıcı güç deneyi. Fe^{3 artı}-indirgeyici tahlil Benzie ve Strain tarafından kurulmuştur ve resmi olarak FRAP olarak adlandırılmıştır [20]. Bu tahlilin deneysel protokolü önceki bir raporda [9] açıklanmıştır. Kısaca, FRAP reaktifi, 10 mM TPTZ, 20 mM FeCl karıştırılarak taze olarak hazırlandı._3,ve pH 3.6'da 1:1:10 oranında {{0}}.25 M asetat tamponu. Test numunesi (x=4-20 L, 0.05 mg/mL), (20 — x) yüzde 95 etanole ve ardından 80 RL FRAP reaktifine ilave edildi. Ortam sıcaklığında 30-dakikalık bir inkübasyondan sonra, absorbans bir mikroplaka okuyucu (Multiskan FC, Thermo Scientific, Şanghay, Çin) kullanılarak 595 nm'de ölçüldü. Numunenin bağıl indirgeme gücü, aşağıdaki formül kullanılarak hesaplandı:

burada bir_maksimumnumune ile reaksiyon karışımının maksimum absorbansıydı ve A_dktestteki minimum absorbanstır. A, örneğin absorbansıdır.

Cu^{2 artı}- azaltıcı güç ayrıca antioksidan seviyesini de karakterize edebilir ve bu nedenle CUPRAC olarak adlandırılır. Bu tahlil, daha önce yayınlanmış bir yönteme göre gerçekleştirilmiştir [36]. Kısaca, 12 RL CuSOq sulu solüsyon (10 mmol/L), 12 RL neocuproin etanolik solüsyon (7.5 mmol/L) ve (75 — x) RL CH₃COONH₄tampon solüsyonu ({{0}}.1 mol/L, pH 7.5) farklı hacimlerde numuneye sahip kuyucuklara (0.05 mg/mL, 4-20 |^L) ilave edildi. 30 dakika sonra 450 nm'de absorbans, yukarıda bahsedilen mikroplaka okuyucu kullanılarak ölçülmüştür. Göreceli CUPRAC gücü, FRAP formülü kullanılarak hesaplandı. A_maksimumnumune ile reaksiyon karışımının maksimum absorbansıydı ve A_dktestteki minimum absorbanstır. A, örneğin absorbansıdır.

4.3. PTI0・-ScavengingAssay

PTIO*-süpürme deneyleri (pH 4,5 veya pH 7,4'te) bizim yöntemimize göre yürütülmüştür [16]. Kısaca, test numunesi çözeltisi (x=0-20 ^L, pH 4.5 için 1 mg/mL ve pH 7.4 için {{10}}.5 mg/mL) (20 — x) rL yüzde 95 etanol, ardından 80 RL sulu bir PTIO* çözeltisi. Sulu PTIO* solüsyonu, bir fosfat-tereyağı solüsyonu (0.1 mM, pH 4.5 veya pH 7.4) kullanılarak hazırlandı. Karışım 2 saat 37 derecede tutuldu ve daha sonra absorbans, yukarıda bahsedilen mikroplaka okuyucu kullanılarak 560 nm'de ölçüldü. PTIO* engelleme yüzdesi şu şekilde hesaplandı:

burada A derecesi numune olmadan kontrolün absorbansı ve A numune ile reaksiyon karışımının absorbansı.

4.4. ABTSartı*-Temizleme ve DPPH*-Temizleme Testleri

ABTS*^artı-temizleme aktivitesi [37] yöntemine göre değerlendirildi. ABTS plus *, 0.2 mL ABTS diamonyum tuzu (7.4 mmol/L) ile 0.2 mL potasyum persülfat (2.6 mmol/L) karıştırılarak üretildi. Karışım, 734 nm'de absorbansının { {16}}.35 土 0.01 yukarıda bahsedilen mikroplaka okuyucu kullanılarak. Süpürme aktivitesini belirlemek için, test numunesi (x=4-20 RL, 0.05 mg/mL), (20 — x) RL damıtılmış suya, ardından 80 RL ABTS plus * reaktifine ve 734'te absorbans eklendi. nm, ilk karıştırmadan 3 dakika sonra, kör olarak damıtılmış su kullanılarak ölçülmüştür.

DPPH* radikal süpürücü aktivite, daha önce tarif edildiği gibi belirlendi [18]. Kısaca, 75 RL DPPH* çözeltisi (0.1 rM), metanol içinde çözülmüş numunenin belirtilen konsantrasyonları (0.025 mg/mL, 5-25 RL) ile karıştırıldı. Karışım oda sıcaklığında 30 dakika tutuldu ve absorbans, yukarıda bahsedilen mikroplaka okuyucu kullanılarak 519 nm'de ölçüldü.

ABTS artı •-süpürme aktivitesi ve DPPH*-süpürme aktivitesi yüzdeleri, Bölüm 4.3'te sunulan formüle göre hesaplanmıştır.

4.5. UPLC—ESI—Q-TOF—PPH'nin MS/MS Analizi* Reaksiyon Ürünleri

Bu yöntem önceki çalışmamıza dayanmaktadır [25]. Acteoside metanol solüsyonu 1:2 molar oranda metanol içinde DPPH* radikallerinin bir solüsyonu ile karıştırıldı ve elde edilen karışım 24 saat oda sıcaklığında inkübe edildi. Ürün karışımı daha sonra bir 0.22-Rm filtresinden süzüldü ve bir C18 kolonu (2.0 mm id x 100) ile donatılmış bir UPLC sistemi kullanılarak analiz edildi. mm, 1,6 Rm, Fenomenex, Torrance, CA, ABD). Mobil faz, sistemin elüsyonu için kullanıldı ve metanol (faz A) ve su (faz B) karışımından oluşuyordu. Kolon, aşağıdaki gradyan elüsyon programı ile 0.3 mL/dakikalık bir akış hızında ayrıştırıldı: 0-10 dak, 60-100 yüzde A; 10-15 dk, yüzde 100 A. Numune enjeksiyon hacmi, farklı bileşenlerin ayrılması için 1 RL'ye ayarlandı. ESI-Q-TOF-MS/MS analizi, Üçlü TOF 5600 kullanılarak yapıldıartıNegatif iyonizasyon modunda çalıştırılan bir ESI kaynağı ile donatılmış kütle spektrometresi (AB SCIEX, Framingham, MA, ABD). Tarama aralığı 100-2000 Da olarak ayarlandı. Sistem aşağıdaki parametrelerle çalıştırılmıştır: iyon püskürtme voltajı, —4500 V; iyon kaynaklı ısıtıcı, 550 derece C; perde gazı (CUR, N2), 30 psi; nebulize edici gaz (GS1, Hava), 50 psi; Bu gaz (GS2, Hava), 50 psi. Declustering potansiyeli (DP) -100 V'a, çarpışma enerjisi (CE) ise -40 V'a ve 20 V'luk bir çarpışma enerjisi yayılımı (CES) ile ayarlandı. RAF ürünleri

toplam iyon kromatogramından (Ek 2) karşılık gelen moleküler formül çıkarılarak nicelendirildi.

Yukarıda bahsedilen deney, forsythosit B, podyum tarafı ve kafeik asit kullanılarak tekrarlandı. karşılık gelenm/ztepe noktaları, toplam iyon kromatogramından (Ek 2) karşılık gelen moleküler formülden çıkarıldı.

4.6. UV-Vis-Spectra Analizi Fe^{2 artı}-Şelasyon Ürünleri

Fe^{2 artı}- acteoside-Fe'nin şelatlayıcı reaksiyon ürünleri^{2 artı}UV-Vis-spektroskopisi [13] kullanılarak değerlendirildi. Deney için, 300 metanolik bir asteosit (0.24 mM) çözeltisi 700 rL'lik sulu bir FeCl? 4H2O (168 mM). Çözelti daha sonra kuvvetlice karıştırıldı. Daha sonra elde edilen karışım, 200-850 nm'den bir saat sonra (Unico 2600A, Şanghay, Çin) bir UV-Vis spektrofotometresi kullanılarak tarandı.

Yukarıda bahsedilen deney, asteosit yerine forsitozit B veya podyum tarafı kullanılarak tekrarlandı.

4.7. Süperoksit Anyonu için Pyrogallol Otooksidasyon Testi (•O2~) süpürme

Süperoksit anyonu (・.{0}}) süpürme aktivitesinin ölçümü, bizim yöntemimize dayanıyordu [17]. Kısaca, numune 1 mg/mL'de etanol içinde çözülmüştür. Numune solüsyonu (x rL), EDTA (1 mM) içeren Tris-HCl tamponu (980 — x rL, 0.05 M, pH 7.4) ile karıştırıldı. 20 RL pirogallol (1 mM HC1 içinde 60 mM) eklendiğinde, karışım hemen oda sıcaklığında çalkalandı. Karışımın 325 nm'deki absorbansı, 5 dakika boyunca her 30 saniyede bir kör olarak Tris-HCl tamponuna karşı ölçülmüştür (Unico 2100, Şanghay, Çin). — süpürme yeteneği şu şekilde hesaplandı:

4.8. Oksidatif Stresli bmMSC'lere Yönelik Sitoprotektif Etki (MTT Testi)

bmMSC'ler, önceki raporlarımıza göre [38] hafif değişikliklerle kültürlendi. Kısacası, bir sıçanın femur ve kaval kemiğinden kemik iliği elde edildi. Kemik iliği numuneleri, yüzde 10 FBS içeren DMEM (düşük glikoz) ile seyreltildi. bmMSC'ler, 1.073 g/mL Percoll'de 30 dakika boyunca 900 g'de gradyan santrifüjleme ile hazırlandı. Hazırlanan hücreler, yüzde 0.25 tripsin ile işleme tabi tutularak ayrıldı ve 1 x 104/cm'de kültürel şişelere aktarıldı.². 3. pasajdaki bmMSC'ler, MTT tahlili [39] kullanılarak CD44 tespiti kullanılarak kültürlenmiş hücre homojenliği açısından değerlendirildi.

MTT tahlili, acteoside ve türevlerinin bmMSC'lere karşı sitoprotektif etkisini değerlendirmek için kullanıldı [40]. Yaralanma modeli önceki çalışmaya [41] dayanılarak oluşturulmuştur. Deneysel protokol kısaca Şekil 3'te gösterilmektedir.

4.9. İstatistiksel analiz

Bölüm 4.2-4.4 ve 4.7'deki her deney üç kopya halinde ve MTT tahlil deneyi beş kopya halinde gerçekleştirilmiştir. Veriler ortalama olarak kaydedildi土SD (standart sapma). Doz-tepki eğrileri, Origin 6.0 profesyonel yazılımı (OriginLab, Northampton, MA, ABD) kullanılarak çizildi. IC50 değeri, yüzde 50 radikal inhibisyonunun (göreceli indirgeme gücü) nihai konsantrasyonu olarak tanımlandı [42]. İstatistiksel karşılaştırmalar, Windows için SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, ABD) kullanılarak önemli farklılıkları tespit etmek için tek yönlü ANOVA ile yapıldı.p< 0.05, istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.

5. Sonuçlar

Üç doğal fenilpropanoid glikozit, yani, asteosit, forsitozit B ve podyum tarafı, ET, H artı -transferi dahil olmak üzere antioksidan etki uygulamak için birçok yola dahil olabilir; ve Fe^{2 artı}-şelatlama, ancak RAF değil. ET ve H^artı- transfer yolları, ramnosil parçası veya apiosil parçası tarafından engellenebilir; bununla birlikte, Fe^{2 artı}-şelatlama yolu, şeker kalıntıları (özellikle ramnosil kısmı) ile güçlendirilebilir. Ramnosil parçasının veya apiosil parçasının genel etkisi, çoklu yol ile ilgili ROS süpürme kabiliyetini arttırmaktır. Bu nedenle, forsythosit B ve poliumoside sitoprotektif etkilerde asteozitten üstündür.

Ek Malzemeler:Ek materyaller çevrimiçi olarak mevcuttur. 1. Doz-yanıt eğrileri; 2. HPLC-MS spektrumları; 3. Acteoside, forsythosit B ve poliumoside analiz sertifikaları.

Teşekkür:Bu çalışma Çin Ulusal Bilim Vakfı (81573558, 81603269), Guangdong Bilim ve Teknoloji Projesi (2017A050506043) ve Guangdong Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (2 017A030312009, 2015A030310491) tarafından desteklenmiştir.

Yazar Katkıları:Xian Li ve Dongfeng Chen deneyleri tasarladı ve tasarladı; Aichi Wu poliumoside hazırladı; Yulu Xie, Qian Guo ve Penghui Xue antioksidan deneylerini gerçekleştirdi; Ke Li ve Wei Zhao, MTT deneylerini gerçekleştirdi; Hong Xie verileri analiz etti; Jiasong Guo, Şekil 2D'deki deneyi gerçekleştirdi; Xian Li makaleyi yazdı. Tüm yazarlar son makaleyi okudu ve onayladı.

Çıkar çatışmaları:Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

asteositiçindecistanche

kısaltmalar

ABTS artı • 2,2'-azino-bis (3-etilbenzo-tiazolin-6-sülfonik asit) radikali

bmMSC'ler kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücreler

CUPRAC cupric azaltıcı antioksidan kapasite

dAMP 2'-deoksiadenozin-5'-monofosfat radikali

DMEM Dulbecco'nun değiştirilmiş Eagle ortamı

dGMP 2^/-deoksiguanozin-5'-monofosfat radikali

DPPHe 1,1-difenil-2-pikril-hidrazin radikali

ET elektron transferi; FBS: Fetal sığır serumu

FRAP demir iyonu azaltıcı antioksidan güç;

HAT hidrojen atomu transferi

MTT 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil

PCET proton-bağlı elektron transferi

PTIOe 2-fenil-4,4,5,5-tetrametilimidazolin-1-oksil 3-oksit radikali

RAF radikal eklenti oluşumu

ROS reaktif oksijen türleri

SCNT somatik hücre nükleer transferi

SEPT sıralı elektron-proton transferi

SPLET sıralı proton kaybı tek elektron transferi

TPTZ 2,4,6-tripiridil triazin

Troloks (±)-6-hidroksil-2,5,7,8-tetrametilkroman-2-karboksilik asit

Referanslar

1. Kubica, P.; Szopa, A.; Ekiert, H. Farklı in vitro koşullar altında kültürlenmiş Verbena Officinalis L. (mine çiçeği) biyokütlesinde verbascoside ve fenolik asitlerin üretimi. Nat. Ürün Araş. 2017, 31, 1663-1668.

2. Lee, JH; Chun, JL; Kim, KJ; Kim, EY; Kim, DH; Lee, BM; Han, KW; Park, KS; Lee, KB; Kim, MK Klonlanmış Bir Köpek Üretmek İçin Acteoside'ın Hücre Koruyucusu Olarak Etkisi. PLoS BİR 2016,11, e0159330.

3. Wang, Merkez; Xu, YX; Yang, J.; Zhao, XY; Güneş, XB; Zhang, YP; Guo, JC; Zhu, CQ Acteoside İnsan Nöroblastom SH-SY5Y Hücrelerini |3-amiloid kaynaklı Hücre Yaralanmasına karşı Korur. Beyin Araş. 2009,1283,139-147.

4. Yang, JH; Yan, Y.; Liu, HB; Wang, JH; Hu, JP Acteoside'ın İnsan Derisi Fibroblastlarında X-ışınına Bağlı Hasara Karşı Koruyucu Etkileri. Mol. Med. 2015,12, 2301-2306.

5. Liu, CH; Liu, TS; Luo, CQ; Zhang, J.; Zeng, XY; Cui, L.; Xie, LJ Callicarpa kwangtungensis'ten farklı köken ve parçalarda hor çiçeği B ve poliumosidin belirlenmesi. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2013, 38, 3324-3326.

6. Jiang, WL; Tian, ​​JW; Fu, FH; Zhu, HB; Hou, J. Forsythoside B'nin Nöroprotektif Etkinliği ve Terapötik Penceresi: Serebral İskemi ve Reperfüzyon Hasarının Ina Sıçan Modeli. Avro. J. Pharmacol. 2010, 640, 75-81.

7. Pan, N.; Hori, H. Acteoside ve Analoglarının Lipid Peroksidasyonu Üzerindeki Antioksidan Eylemi. Redox Tem. 1996, 2, 149-154.

8. Zheng, RL; Shi, YM; Jia, ZJ; Zhao, CY; Zhang, Q.; Tan, XR DNA Radikallerinin Hızlı Onarımı. Kimya Soc. Rev. 2010, 39, 2827-2834.

9. Li, XC; Mai, WQ; Chen, DF Hidroksil kaynaklı DNA Hasarına ve Myrisitrinin Antioksidan Mekanizmasına Karşı Koruyucu Etki Üzerine Kimyasal Çalışma. J.Çin. Kimya Soc. 2014, 61, 383-390.

10. Şi, YM; Wang, WF; Huang, CY; Jia, ZJ; Yao, S.; Zheng, RL Fenilpropanoid Glikozitler ve Analogları Tarafından Oksidatif DNA Hasarının Hızlı Onarımı. Mutajenez 2008, 23, 19-26.

11. Jiang, Q.; Li, XC; Tian, ​​YG; Lin, QQ; Xie, H.; Lu, WB; Chi, YG; Chen, DF Mori Fructus ve Mori Ramulus'un Liyofilize Sulu Ekstreleri, Mezenkimal Kök Hücreleri eOH ile Tedavi Edilen Hasardan Korur: Biyo-tahlil ve Antioksidan Mekanizması. BMC Tamamlayıcı. Alternatif. Med. 2017,17, 242.

12. Wang, TT; Zeng, GC; Li, XC; Zeng, HP, BMSC'lerde 2-İkame Edilmiş-8-Hidroksikinolin Türevlerinin H2O2-İndüklenmiş Oksidatif Strese Karşı Antioksidan ve Koruyucu Etkisi Üzerine In Vitro Çalışmaları. Kimya Biol. İlaç Des. 2010, 75, 214-222.

13. Liu, JJ; Li, XC; Lin, J.; Li, YR; Wang, TT; Jiang, Q.; Chen, DF Sarcandra Glabra (Caoshanhu) Mezenkimal Kök Hücreleri Oksidatif Stresten Korur: Bir Biyodeğerlendirme ve Mekanistik Kimya. BMC Tamamlayıcı. Alternatif. Med. 2016, 16, 423.

14. Li, XC; Han, L.; Li, YR; Zhang, J.; Chen, JM; Lu, WB; Zhao, XJ; Lai, YT; Chen, DF; Wei, G. Sinapinin Hidroksil radikalinin Mezenkimal Kök Hücrelere Zarar Vermesine ve Olası Mekanizmalarına Karşı Koruyucu Etkisi. Kimya Eczacılık Boğa. 2016, 64, 319-325.

15. Bertolo, A.; Capossela, S.; Frankl, G.; Baur, M.; Potzel, T.; Stoyanov, J. Oksidatif Durum, İnsan Mezenkimal Kök Hücrelerinde Kaliteyi Öngörüyor. Kök Hücre Arş. orada. 2017, 8, 3.

16. Li, XC 2-Fenil-4,4,5,5-Tetrametilimidazolin-1-oksil 3-Oksit (PTIOe) Radikal Temizleyici: Yeni ve Basit Bir Antioksidan In vitro tahlil. J. Agric. Gıda Kimyası 2017, 65, 6288-6297.

17. Li, X. Geliştirilmiş Pyrogallol Otooksidasyon Yöntemi: Tüm Antioksidanlar için Uygun Güvenilir ve Ucuz Bir Süperoksit Temizleyici Test. J. Agric. Gıda Kimyası 2012, 60, 6418-6424.

18. Li, XC; Jiang, Q.; Wang, TT; Liu, JJ; Chen, DF Quercitrin ve Isoquercitrin'in Antioksidan Etkilerinin Karşılaştırılması: 6〃-OH Grubunun Rolünü Anlamak. Moleküller 2016, 21,1246.

19. Leopoldini, M.; Marino, T.; Russo, N.; Toscano, M. Fenolik Bileşiklerin Antioksidan Özellikleri: H-atomu Karşı Elektron Transfer Mekanizması. J. Fizik Kimya 2004,108, 4916^922.

20. Benzie, IFF; Strain, JJ "Antioksidan Gücün" Bir Ölçüsü Olarak Plazmanın (FRAP) Ferrik Azaltma Yeteneği: FRAP tahlili. Anal. Biyokimya. 1996, 239, 70-76.

21. Gülçin, I. Gıda Bileşenlerinin Antioksidan Aktivitesi: Genel Bir Bakış. Kemer Toksikol. 2012, 86, 345-391.

22. Goldstein, S.; Russo, A.; Samuni, A. PTIO ve Karboksi-PTIO'nun ・NO, ・NO2 ve O2 ile Reaksiyonları. J. Biol. Kimya 2003, 278, 50949-50955.

23. Li, X.; Han, WJ; Mai, WQ; Wang, L. Tetrahidroamentoflavonun in vitro Antioksidan Aktivitesi ve Mekanizması. Nat. Ürün Komün. 2013, 8, 787-789.

24. Zhang, HY; Wu, W.; Mo, YR Ab Başlangıç ​​Düzeyinde Dört Açık Diyabatik Durumla Proton-Birleştirilmiş Elektron Transferi (PCET) Çalışması. Bilgisayar. Teori. Kimya 2017, 1116, 50-58.

25. Lin, J.; Li, XC; Chen, L.; Lu, WZ; Chen, XW; Han, L.; Chen, DF Hidroksil radikalinin neden olduğu DNA Hasarına ve [6]-gingerol'ün Antioksidan Mekanizmasına Karşı Koruyucu Etkisi: Bir Kimyasal Çalışma. Boğa. Kore Kimyası. Soc. 2014, 35, 1633-1638.

26. Iuga, C.; Alvarez-Idaboy, JR; Russo, N. Hidroksil ve Hidroperoksil Radikallerine Yönelik Trans-Resveratrolün Antioksidan Aktivitesi: Bir Kuantum Kimyasal ve Hesaplamalı Kinetik Çalışması. J. Org. Kimya 2012, 77, 3868-3877. [CrossRef] [PubMed]

27. Li, XC; Hu, QP; Jiang, SX; Li, F.; Lin, J.; Han, L.; Hong, YL; Lu, WB; Gao, YX; Chen, DF Flos Chrysanthemi Indici, Antioksidan Mekanizma ile DNA ve MSC'lerde Hidroksil kaynaklı Hasarlara karşı Korur. J. Suudi Chem. Soc. 2015,19, 454-460.

28. Amik, A.; Markoviç, Z.; Markoviç, JMD; Stepanik, V.; Lucic, B.; Amic, D. Flavonoidlerin Serbest Radikal Temizleme Gücünün Geliştirilmiş Tahminine Doğru: Çift PCET Mekanizmalarının Önemi. Gıda Kimyası 2014, 152, 578-585.

29. Lee, CH; Yoon, JY Sulu Çözeltide 2,2'-ve-bis(3-etilbenzotiazolin-6-sülfonat) (ABTS)'nin UV Doğrudan Fotolizi: Kinetik ve Mekanizma. J. Photochem. Fotobiyol. 2008, 197, 232-238.

30. Aliağa, C.; Lissi, EA 2,2'-Azinobis(3-Etilbenzotiazolin-6-Sülfonik Asitten (ABTS) Türetilmiş Radikallerin Hidroperoksitlerle Reaksiyonu. Kinetik ve Mekanizma. Int. J. Chem. Kinet. 1998, 30, { {8}}.

31. Osman, AM; Wong, KKY; Fernyhough, A. ABTS Polifenollerin Radikal-Driven Oksidasyonu: Kovalent Katkı Maddelerinin İzolasyonu ve Yapısal Aydınlanması. Biyokimya. Biyofiz. Araş. Komün. 2006, 346, 321-329.

32. Osman, AM 2,2-Difenil-1-Pikrilhidrazil Radikalinin (DPPHe) (artı )-kateşin ile Reaksiyonunun Çoklu Yolları: DPPHe ve Oksitlenmiş Form Arasında Kovalent Bir Katkı Maddesi Oluşumuna İlişkin Kanıt Polifenol. Biyokimya. Biyofiz. Araş. Komün. 2011, 412, 473-478.

33. Lopez-Munguia, A.; Hernandez-Romero, Y.; Pedraza-Chaverri, J.; Miranda-Molina, A.; Regla, İ.; Martinez, A.; Castillo, E. Fenilpropanoid Glikozit Analogları: Enzimatik Sentez, Antioksidan Aktivitesi ve Serbest Radikal Çöpçü Mekanizmalarının Teorik Çalışması. PLoS BİR 2011, 6, e20115.

34. Perron, NR; Brumaghim, JL Demir Bağlanmasıyla İlgili Polifenol Bileşiklerinin Antioksidan Mekanizmalarının Gözden Geçirilmesi. Hücre Biyokimyası. Biyofiz. 2009, 53, 75-100.

35. Devos, D.; Moreau, C.; Devedjian, JC; Kluza, J.; Perrault, M.; Laloux, C.; Jonneaux, A.; Ryckewaert, G.; Garcon, G.; Rouaix, N.; et al. Parkinson Hastalığında Terapötik Bir Modalite Olarak Şelatlanabilir Demirin Hedeflenmesi. Antioksit. Redoks Sinyali. 2014, 21,195-210.

36. Çekiç, SD; Baskan, KS; Totem, E.; Apak, R. Polifenollerle Karışımda Tiyol İçeren Proteinlerin Antioksidan Kapasitelerini Ölçmek için Antioksidan Kapasitesini Azaltan Modifiye Bakır (CUPRAC) Deneyi. Talanta 2009, 79, 344-351.

37. Li, XC; Chen, DF; Mai, Y.; Wen, B.; Wang, XZ İn vitro Antioksidan Aktiviteleri ile Radix Astragali'nin (Huangqi) Kimyasal Bileşenleri Arasındaki Uyum. Nat. Ürün Araş. 2012, 26, 1050-1053.

38. Chen, DF; Li, XC; Xu, ZW; Liu, XB; Du, SH; Li, H.; Zhou, JH; Zeng, HP; Hua, Buzhong Yiqi Kaynatmasından elde edilen ZC Heksadekanoik Asit, Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücrelerinin Proliferasyonunu Tetikledi. J. Med. Gıda 2010,13, 967-975.

39. Li, X.; Liu, JJ; Lin, J.; Wang, TT; Huang, JY; Lin, YQ; Chen, DF Dihidromyricetin'in »OH ile İndüklenen Mezenkimal Kök Hücre Hasarına ve Mekanistik Kimyaya Karşı Koruyucu Etkileri. Moleküller 2016,21, 604.

40. Wang, GR; Li, XC; Zeng, HP Sentezi, (E)-9-p-Tolil-3-2-(8-hidroksi-kinol- 2-il)vinil-karbazol ve (E){{8'in Antioksidasyon aktivitesi }}(p-Anisyl)-3-2-(8-hidroksi-kinol-2-il)vinil-karbazol ve Mezenkimal Kök Hücrelerin İndüksiyon Proliferasyonları. Acta Chim. Günah. 2009, 67, 974-982.

41. Li, X.; Wei, G.; Wang, X.; Liu, D.; Deng, R.; Li, H.; Zhou, J.; Li, Y.; Zeng, H.; Chen, D. Shh Pathway'in atractylenolides tarafından hedeflenmesi, mezenkimal kök hücrelerin kondrojenik farklılaşmasını destekler. Biol. Eczacılık Boğa. 2012, 35,1328-1335.

42. Li, XC; Gao, YX; Li, F.; Liang, AF; Xu, ZM; Bai, Y.; Mai, WQ; Han, L.; Chen, DF Maclurin, mezenkimal kök hücrelerde hidroksil radikalinin neden olduğu hasarlara karşı koruma sağlar: Antioksidan değerlendirme ve mekanik içgörü. Kimya Biol. Etkileşime girmek. 2014, 219, 221-228.

Numune Bulunabilirliği: Poliumoside bileşiğinin bir numunesi yazarlardan temin edilebilir.

© 2018 yazarlar tarafından. Lisans Sahibi MDPI, Basel, İsviçre. Bu makale, Creative Commons Attribution (CC BY) lisansının (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z) hüküm ve koşulları altında dağıtılan açık erişimli bir makaledir.