Birinci Bölüm MnSOD'nin Genetik Polimorfizmleri, Çevresel Melamin'in Kalsiyum Ürolitiyazis Hastalarında Oksidatif Stres ve Erken Böbrek Hasarı Üzerindeki Etkilerini Değiştiriyor

Soyut

Çevresel melamin maruziyeti, oksidatif stres ve erken böbrek hasarı risklerini artırır. Manganez süperoksit dismutaz (MnSOD), glutatyon peroksidaz ve katalaz, böbrekleri oksidatif strese karşı koruyabilir ve normal işlevini sürdürebilir. Tek nükleotid polimorfizmlerinin (SNP'ler) melamin etkilerini değiştirip değiştiremeyeceğini değerlendirdik. Kalsiyum ürolitiazis tanısı alan toplam 302 hasta çalışmaya alındı. Tüm hastalara melamin seviyelerini, oksidatif stresin idrar biyobelirteçlerini ve böbrek tübüler hasarını ölçmek için tek nokta gecelik idrar örnekleri verildi. Medyan değerler, seviyeleri yüksek ve düşük olarak ikiye ayırmak için kullanıldı. rs4880'in T alelini ve yüksek melamin seviyelerini taşıyan denekler, ayarlamadan sonra rs4880'in C alelini ve düşük melamin seviyelerini taşıyanlara göre yüksek malondialdehit seviyeleri açısından 3,60 kat daha fazla riske sahipti. rs5746136'nın G alelini ve yüksek melamin seviyelerini taşıyan denekler, rs5746136'nın A alelini ve düşük melamin seviyelerini taşıyanlara göre yüksek N-Asetil- -D-glukozaminidaz seviyeleri riskine 1,73 kat daha fazla sahipti. Sonuç olarak, MnSOD, rs4880 ve rs5746136'nın SNP'leri, kalsiyum ürolitiazis hastalarında sırasıyla oksidatif stres ve renal tübüler hasar riskini etkiler. Yüksek üriner melamin seviyeleri bağlamında, bunların oksidatif stres ve renal tübüler hasar üzerindeki etkileri daha da artmıştır.

anahtar kelimeler

manganez süperoksit dismutaz; genetik polimorfizm; melamin; böbrek hasarı; oksidatif stres; kalsiyum ürolitiazis.

Cistanche özü almak için buraya tıklayın

giriiş

Melamin, ev eşyaları, tezgahlar, kumaşlar, yapıştırıcılar ve alev geciktiriciler dahil olmak üzere çeşitli ticari günlük yaşam ürünlerinin üretiminde kullanılan sentetik bir kimyasaldır [1,2]. Yüksek nitrojen içeriğine sahip olduğu için, protein içeriğini yanıltıcı bir şekilde yükseltmek için hayvan yemi ve sütte kötüye kullanılmaktadır [1,2]. Melamin maruziyetinin olumsuz etkileri, 2007'de ABD'de binlerce evcil hayvanın yanı sıra bebek mamalarında hayvan yemlerine skandal bir şekilde eklenmesinin ardından 50'den fazla ürolitiyazise neden olan, dünya çapında dikkatleri üzerine çekti,{{6 }} 2008'de Çin'de altı çocuk ve altı ölüm [1,2]. Bugüne kadar, melamin çevremizde her yerde mevcut olmaya devam ediyor. Birçok çalışma su, toprak, ekinler, günlük gıda ürünleri ve hayvan dokularında melamin saptadı [3-5] ve diğerleri bunu farklı ülkelerden çeşitli genel popülasyonların çoğu idrar örneğinde saptadı [6-9].

Melamin alımından sonra orijinal formunun yüzde doksanı 24 saat içinde idrarla atılır, bu nedenle böbrekler melamine karşı daha duyarlı olabilir [1]. 2008'de çocuklarda yüksek doz melamin akut nefrotoksisite üzerindeki etkilerine ek olarak, uzun süreli düşük doz melamin maruziyeti, yetişkinlerde taş oluşumu ve böbrek fonksiyonunun bozulması dahil olmak üzere böbrek komplikasyonları riskiyle ilişkilendirilmiştir [10– 12]. Kronik düşük doz melamin maruziyetinin erken böbrek hasarına ve taş oluşumuna yol açabilmesinin olası bir mekanizması, melamin sofra takımı işçileri [13] ve kalsiyum ürolitiyazisi olan erişkin hastalarda [ 14]. Ayrıca insan renal proksimal tübüler HK-2 hücrelerini kullanarak bir in vitro çalışma yürüttük ve melaminin oksidatif stresi artırarak renal tübüler hasara neden olabileceğini bulduk [15]. Yakın zamanda yapılan iki insan araştırmasında, melamine maruz kalmanın MDA ile birlikte oksidatif stres, malondialdehit (MDA) ve 8-okso-20 -deoksiguanozin (8-OHdG) idrar biyobelirteçlerini artırdığını bulduk. renal tübüler hasarın bir biyobelirteci olan N-Asetil- -D-glukozaminidaz (NAG) üzerindeki melaminin toplam etkisinin yüzde 36-53'üne aracılık eder [16]. Bu bulgular, düşük dozda çevresel melamine maruz kalmanın insanlarda oksidatif stresi ve erken böbrek hasarı riskini artırabileceğini düşündürmektedir.

Oksidatif stres, pro-oksidanların veya reaktif oksijen türlerinin (ROS) üretimi endojen antioksidan kapasitesini aştığında ortaya çıkar. Böbreklerimiz, çoğu böbrek hastalığının başlamasında, gelişmesinde ve ilerlemesinde önemli bir faktör olduğu düşünülen oksidatif strese özellikle duyarlıdır [17,18]. Böbreklerdeki oksidatif stresin nedeni, tıbbi hastalıklar ile melamin gibi kimyasallara çevresel maruziyet arasındaki etkileşimlerle ilişkili olabilir [16]. Manganez süperoksit dismutaz (MnSOD), glutatyon peroksidaz (GPX1) ve katalaz (CAT) dahil olmak üzere endojen antioksidan sistemlerin böbrekleri oksidatif strese karşı koruduğu ve ardından normal işlevin korunmasına yardımcı olduğu bulunmuştur [18]. MnSOD, toksik ROS'u ve süperoksit anyonlarını hidrojen peroksite ayrıştırabilir ve bu daha sonra mitokondride GPX1 ve CAT tarafından toksik olmayan su ve oksijene dönüştürülür [18]. Bu antioksidan enzim genlerinin birkaç tek nükleotid polimorfizmi (SNP'ler), böbrek hastalıkları [20-22] dahil olmak üzere çeşitli hastalıklarla [19] ilişkilendirilmiştir.

Çevresel toksik madde ile ilişkili böbrek hasarı, genetik faktörlerden etkilenebileceğinden [23], antioksidan enzim genlerinin (örn. MnSOD, GPX1, CAT) SNP'lerinin, çevresel melamin maruziyetinin oksidatif stres riski üzerindeki etkilerini değiştirmesi mümkündür. ve insanlarda renal tübüler yaralanma. Bulmak için, çoğu böbrek hastalıkları [20-22] ile bağlantılı olan antioksidan enzim genlerinin (MnSOD: rs4880 ve rs5746136, GPX1: rs1800668, CAT: rs1001179 ve rs769217) beş aday SNP'sini seçtik. oksidatif stresin iki biyolojik belirteci olan 8-OHdG ve MDA ve idrarda böbrek tübüler hasarının bir biyobelirteci olan NAG üzerindeki çevresel melamin maruziyetiyle birleştiğinde etkileri.

Cistanche tubulosa ve Cistanche hapları

Malzemeler ve yöntemler

1. Konular

Toplamda, Kasım 2010 ile Ocak 2015 arasında üst üriner sistem kalsiyum ürolitiyazı tanısı konan 309 hasta kaydedilmiştir. Ayrıntılı çalışma tasarımları ve dahil edilme protokolleri daha önce tarif edilmiştir [14,16]. Kısaca, tüm hastalar güneybatı Tayvan'daki Kaohsiung Tıp Üniversitesi'ne bağlı hastanelerdendi. Uygun hastalar, radyografi veya ultrasonografi ile üst üriner sistemde ürolitiyazis teşhisi konan ve kızılötesi spektroskopi analizi (Spectrum RX I Fourier Transform) ile kalsiyum bileşenlerine sahip olduğu doğrulanmış taş numuneleri sağlayan 20 yaş ve üzeri kişilerdi. -Kızılötesi Sistem, PerkinElmer, Waltham, MA, ABD). Katılımcıların hiçbirinde röntgende radyolüsent taş veya klinik değerlendirmede ürik asit veya sistin taşı bulunmadı.

Kronik idrar yolu enfeksiyonu, kronik ishal, gut, hiperparatiroidizm, renal tübüler asidoz, böbrek yetmezliği veya kanser öyküsü olan hasta denekler dışlandı. Ürolitiyazis tanısından veya görüşmeden önceki altı ay içinde düzenli olarak D vitamini, kalsiyum takviyeleri, diüretikler veya potasyum sitrat alan denekler de dışlandı. Çalışma protokolü, KMUH Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylandı ve tüm uygun hastalara bilgilendirilmiş yazılı onam formları imzalatıldı. Bu çalışma, STREGA'nın [24] yönergelerini izledi (bkz. Ek Malzemeler Tablo S1).

2. Klinik Verilerin ve Biyolojik Örneklerin Toplanması

Kabul üzerine, tüm katılımcılara, gece boyunca aç kaldıktan sonra ve herhangi bir ürolitiyazis tedavisinden önce, biyokimyasal ve genetik analizler için kan ve tek noktalı ilk işeme sabah idrarı örnekleri verildi. Ayrıca demografik verilerini, tıbbi geçmişlerini ve madde kullanımlarını (sigara, alkol ve betel papel) toplamak için yapılandırılmış bir anketi yanıtladılar [14,16]. Katılımcılar, düzenli olarak haftada 10 veya daha fazla sigara içmişlerse, haftada 1 defa veya daha fazla herhangi bir alkollü içecek tüketmişlerse veya veya en az altı ay boyunca haftada sırasıyla 7 betel sterline eşittir. Mevcut kullanıcılar, ürolitiyazis tanısı konmadan veya görüşmeden önceki bir yıl içinde yukarıdaki alışkanlıkları hala uygulayan kişilerdi [11,25].

Taşın yeri, taş numarası, taş çapı ve taş epizodları dahil olmak üzere klinik bilgiler de anket yoluyla toplanmış ve ilgili maruziyetten habersiz olan bir ürolog (C.-CL) tarafından hastaların tıbbi çizelgeleri kullanılarak daha ayrıntılı olarak incelenmiştir. melamin ve idrarda oksidatif stresin (8-OHdG ve MDA) ve renal tübüler hasarın (NAG) biyobelirteçleri ve antioksidan enzim genlerinin genotiplenmesi.

Cistanche kapsülleri

3. İdrarda Melamin, Oksidatif Stresin Biyobelirteçleri (MDA ve 8-OHdG) ve Renal Tübüler Hasar (NAG) Analizleri

Üriner melamin, izotopik sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometri yöntemi (LC-MS/MS) (API40{{20}}0Q, Applied Biosystems/MDS SCIEX) kullanılarak ölçülmüştür. , Concord, Vaughan, ON, Kanada) [13]. Üriner MDA, ters fazlı bir kolonda (Luna C18, 250 x 4.6 nm) flüoresanslı (HPLC-FL) tespitli yüksek performanslı sıvı kromatografisi kullanılarak ölçülmüştür [26]. Üriner 8-OHdG, çevrimiçi katı faz ekstraksiyonu (SPE) LC-MS/MS [27] için doğrulanmış bir yöntem kullanılarak ölçülmüştür. Ayrıntılı yöntemler daha önce tarif edilmiştir [14,16]. Üriner melamin ve oksidatif stresin biyobelirteçleri için tespit sınırları (LOD), melamin için 0,4 ng/ml, MDA için 0,02 µmol/L ve 8-OHdG için 0,01 ng/mL idi. MDA ve 8-OHdG'nin tüm idrar ölçümleri saptanabilir durumdaydı. Buna karşılık, 309 idrar melamin ölçümünün 31'i (yüzde 10.0) LOD'un altındaydı ve LOD/√ 2 olarak değiştirildi.

Üriner NAG, bir NAG tahlil kiti (Diazyme Laboratuvarı, Poway, CA, ABD) kullanılarak ölçüldü [13,14]. Tüm idrar NAG ölçümleri tespit edildi. Üriner kreatinin, kreatinin-pikrat reaksiyonunu ölçmek için 520 nm dalga boyuna ayarlanmış spektrofotometri (U-2000; Hitachi, Tokyo, Japonya) ile analiz edildi [14]. Yukarıdaki tüm biyokimyasal parametrelerin ölçümü, birbirlerinin bulgularından, çalışma tasarımından ve katılımcı bilgilerinden habersiz iki farklı laboratuvar teknisyeni tarafından gerçekleştirildi.

4. Beş SNP'nin Genotiplenmesi

DNA, bir Puregene DNA İzolasyon Kiti (Gentra Systems Inc., Minneapolis, MN, ABD) kullanılarak periferik tam kandan ekstrakte edildi. Beş SNP (MnSOD-rs4880, MnSODrs5746136, GPX1-rs1800668, CAT-rs1001179 ve CAT-rs769217), bir TaqMan 5' alel ayrım testi (Applied Biosystems) için isteğe bağlı bir SNP genotipleme kiti kullanılarak analiz edildi , Foster City, CA, ABD). Kısaca, 25 µL reaksiyon solüsyonunda 10 ng örnek DNA içeren SNP amplifikasyon testleri, 12,5 µL 2× TaqMan®Universal PCR Mix (Applied Biosystems) içerirken, SNP genotipleme ürününden (Applied Biosystems) 1,25 µL önceden geliştirilmiş test reaktifi içerir. Biosystems) iki primer içerir. Üreticinin talimatları izlenerek iki MCB-Taqman probu gerçekleştirildi. Polimeraz zincir reaksiyonları (PCR'ler), bir ABI Prism 7500 Dizi Tespit Sistemi (Applied Biosystems) [28,29] kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Bu genotipler, tam ölçekli genotiplemeden sonra doğrudan dizileme ile doğrulanmıştır. Rastgele, çalışma örneklerinin ~ yüzde 10'u (30 vaka) kalite kontrol için tekrarlandı ve sonuçlar yüzde 100 doğruluk gösterdi.

Cistanche'nin faydaları

5. İstatistiksel Analizler

Nicel veriler ortalama ± standart sapmalar (SD) veya çeyrekler arası aralıklı medyanlar (IQR) olarak ifade edildi ve kategorik veriler sayı (n) ve yüzdeler olarak sunuldu. Genotiplerin dağılımı için Hardy-Weinberg dengesi ki-kare testi kullanılarak kontrol edildi.

İdrar melamin seviyeleri ve idrar biyobelirteçleri (MDA, 8-OHdG, NAG), ileri analizlerden önce idrar kreatinin değerleri ile düzeltildi. Düzeltmeden sonra, oksidatif stresin (MDA ve 8-OHdG) ve renal tübüler hasarın (NAG) idrar biyobelirteçleri, medyan değerleri kullanılarak yüksek veya düşük olarak ikiye ayrıldı [14,16]. Basit lojistik regresyon modelleri ilk olarak antioksidan enzim genlerinin genotipleri ile oksidatif stres ve renal tübüler hasarın idrar biyobelirteçleri arasındaki ilişkileri değerlendirmek için kullanıldı. İlk analizde anlamlı bir ilişki kaydedildiyse, antioksidan enzim genlerinin genotipleri ile medyan değerlerle bölünmüş idrar melamin seviyeleri arasındaki birleşik etkiler, yaş, cinsiyet, BMI, eğitim gibi ortak değişkenler için ayarlandıktan sonra çoklu lojistik regresyon analizleriyle daha da test edildi. düzeyi, kişisel alışkanlıklar, taş sayısı, taş boyutu, taşın yeri ve komorbiditeler. Tüm istatistiksel analizler SAS istatistik paketi kullanılarak yapıldı. Tüm p değerleri iki taraflıydı ve şu durumlarda anlamlı kabul edildi:<0.05.

6. Duyarlılık Analizi

Bulgularımızın sağlamlığını incelemek için idrar melamin seviyeleri tertillere bölündüğünde sonuçları karşılaştırmak için duyarlılık analizleri yaptık. Ayrıca, idrar konsantrasyonunu ve karmaşık karıştırıcı yapıları düzeltmek için yeni bir ortak değişkene göre ayarlanmış standardizasyon artı kreatinin ayarlaması yöntemini kullanarak bulguları karşılaştırdık [14,30].

Referanslar

1. Hau, AK; Kwan, TH; Li, PK Melamin toksisitesi ve böbrek. J. Am. Sos. Nefrol. 2009, 20, 245–250. [ÇaprazRef]

2. Bhalla, V.; Grimm, PC; Chertow, Genel Müdür; Pao, AC Melamin nefrotoksisitesi: Küreselleşme çağında ortaya çıkan bir salgın. böbrek uluslararası 2009, 75, 774–779. [ÇaprazRef]

3. Qin, Y.; Sv, X.; Li, J.; Qi, G.; Diao, S.; Liu, G.; Xue, M.; Wang, J.; Tong, J.; Zhang, L.; et al. Çin'de mahsul, toprak ve sudaki melamin kontaminasyonunun değerlendirilmesi ve hayvan dokularında ve ürünlerinde melamin birikimi riskleri. çevre. Int. 2010, 36, 446–452. [ÇaprazRef]

4. Zhu, H.; Kannan, K. Yüzey suyu, içme suyu, yağış, atık su ve yüzme havuzu suyunda melamin ve türevlerinin oluşumu ve dağılımı. çevre. kirlilik. 2020, 258, 113743. [CrossRef]

5. Zhu, H.; Amerika Birleşik Devletleri'nden gıda maddelerinde Kannan, K. Melamin ve siyanürik asit ve bunların insan maruziyeti üzerindeki etkileri. çevre. Int. 2019, 130, 104950. [CrossRef]

6. Panuwet, P.; Nguyen, Ortak Girişim; Wade, EL; D'Souza, PE; Ryan, PB; Barr, DB Katyon değişimine dayalı yüksek performanslı sıvı kromatografisi-tandem kütle spektrometresi kullanılarak insan idrarındaki melamin miktarının belirlenmesi. J. Kromatr. B Anal. Teknoloji Biyomedikal Yaşam Bilimleri 2012, 887–888, 48–54. [ÇaprazRef]

7. Lin, Y.-T.; Tsai, M.-T.; Chen, Y.-L.; Cheng, C.-M.; Hung, C.-C.; Wu, C.-F.; Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Shiea, J.; Chen, BH; et al. 1-Gece idrar örneklerindeki melamin seviyeleri, okul çocuklarında önceki 24-saatlik toplam melamin atılım seviyesini tahmin edebilir mi? klinik Chim. Açta 2013, 420, 128–133. [ÇaprazRef]

8. Sathyanarayana, S.; Flynn, JT; Messito, MJ; Brüt, R.; Whitlock, KB; Kannan, K.; Karthikraj, R.; Morrison, D.; Huie, M.; Christakis, D.; et al. ABD'li çocuklarda melamin ve siyanürik asit maruziyeti ve böbrek hasarı. çevre. Res. 2019, 171, 18–23. [ÇaprazRef]

9. Şi, X.; Dong, R.; Chen, J.; Yuan, Y.; Uzun, S.; Guo, J.; Li, S.; Chen, B. Şangay yetişkinlerinde melamin maruziyetinin ve bunun gıda tüketimi ile ilişkisinin değerlendirilmesi. çevre. Int. 2020, 135, 105363. [CrossRef]

10. Wu, C.-F.; Liu, C.-C.; Chen, B.-H.; Huang, SP; Lee, H.-H.; Chou, Y.-H.; Wu, W.-J.; Wu, M.-T. Tayvan'da üriner melamin ve yetişkin ürolitiyazisi. klinik Chim. Açta 2010, 411, 184–189. [ÇaprazRef]

11. Liu, C.-C.; Wu, C.-F.; Chen, B.-H.; Huang, SP; Goggins, W.; Lee, H.-H.; Chou, Y.-H.; Wu, W.-J.; Huang, C.-H.; Shiea, J.; et al. Melamin maruziyetinin düşük olması yetişkinlerde ürolitiyazis riskini artırır. böbrek uluslararası 2011, 80, 746–752. [ÇaprazRef]

12. Tsai, Y.-C.; Wu, C.-F.; Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Lin, Y.-T.; Chiu, Y.-W.; Hwang, S.-J.; Chen, H.-C.; Wu, M.-T. Üriner Melamin Düzeyleri ve KBH'nin İlerlemesi. klinik J. Am. Sos. Nefrol. CJASN 2019, 14, 1133–1141. [ÇaprazRef]

13. Wu, C.-F.; Peng, C.-Y.; Liu, C.-C.; Lin, W.-Y.; Pan, C.-H.; Cheng, C.-M.; Hsieh, H.-M.; Hsieh, T.-J.; Chen, BH; Wu, M.-T. Ortamda Melamin Maruziyeti ve Erken Böbrek Hasarının Üriner Biyobelirteçleri. J. Am. Sos. Nefrol. 2015, 26, 2821–2829. [CrossRef] [PubMed]

14. Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Wu, C.-F.; Tsai, Y.-C.; Huang, SP; Lee, Y.-C.; Huang, T.-Y.; Shen, J.-T.; Chou, Y.-H.; Huang, C.-N.; et al. Kalsiyum ürolitiyazisi olan hastalarda üriner melamin atılımı ve artmış renal tübüler hasar belirteçleri: Kesitsel bir çalışma. çevre. kirlilik. 2017, 231, 1284–1290. [ÇaprazRef]

15. Hsieh, TJ; Hsieh, PC; Çay, YH; Wu, C; Liu, C.; Lin, M.; Wu, M. Melamin, dönüştürücü büyüme faktörü-beta ve oksidatif stres yoluyla insan renal proksimal tübüler hücre yaralanmasına neden olur. Toksikol. bilim 2012, 130, 17–32. [ÇaprazRef]

16. Liu, C.-C.; Hsieh, T.-J.; Wu, C.-F.; Lee, C.-H.; Tsai, Y.-C.; Huang, T.-Y.; Wen, S.-C.; Lee, C.-H.; Chien, T.-M.; Lee, Y.-C.; et al. Çevresel melamin maruziyeti, oksidatif stresin biyobelirteçleri ve erken böbrek hasarı arasındaki ilişki. J. Tehlike Mater. 2020, 396, 122726. [CrossRef] [PubMed]

17. Gorin, Y. Böbrek: Oksidatif Stresle İlişkili Patolojilerin Ön Hattındaki Bir Organ. antioksidan. Redoks Sinyali. 2016, 25, 639–641. [ÇaprazRef]

18. Ratliff, BB; Abdülmehdi, W.; Pawar, R.; Wolin, Renal Hasar ve Hastalıkta MS Oksidan Mekanizmaları. antioksidan. Redoks Sinyali. 2016, 25, 119–146. [ÇaprazRef]

19. Crawford, A.; Fassett, RG; Geraghty, DP; Kunde, DA; Top, MJ; Robertson, IK; Coombes, JS Antioksidan enzimlerin tek nükleotid polimorfizmleri ve hastalık arasındaki ilişkiler. Gen 2012, 501, 89–103. [CrossRef] [PubMed]

20. Crawford, A.; Fassett, RG; Coombes, J.; Kunde, D.; Ahuja, K.; Robertson, IK; Top, MJ; Geraghty, D. Glutatyon peroksidaz, süperoksit dismutaz ve katalaz genotipleri ve aktiviteleri ve kronik böbrek hastalığının ilerlemesi. Nefrol. Aramak. nakli 2011, 26, 2806–2813. [ÇaprazRef]

21. Kıdır, V.; Uz, E.; Yiğit, A.; Altuntaş, A.; Yiğit, B.; İnal, S.; Uz, E.; Sezer, MT; Yılmaz, HR Manganez süperoksit dismutaz, glutatyon peroksidaz ve katalaz gen polimorfizmleri ve akut böbrek hasarında klinik sonuçlar. Ren. Hata. 2016, 38, 372–377. [CrossRef] [PubMed]

22. Evens, KG; George, RA; Şarma, K.; Ziyadeh, FN; Spielman, RS Transmisyon/dengesizlik testi ile diyabetik nefropati için 115 aday genin değerlendirilmesi. Diyabet 2005, 54, 3305–3318. [ÇaprazRef]

23. Kirpik, LH Böbrek Toksisitesini Etkileyen Çevresel ve Genetik Faktörler. Semin. Nefrol. 2019, 39, 132–140. [ÇaprazRef]

24. Küçük, J.; Higgins, JPT; Ioannidis, JPA; Moher, D.; Gagnon, F.; von Elm, E.; Khoury, MJ; Cohen, B.; Davey-Smith, G.; Grimshaw, J.; et al. Genetik ilişkilendirme çalışmalarının (STREGA) raporlamasının güçlendirilmesi: STROBE Bildirisinin bir uzantısı. Hımm. Genet. 2009, 125, 131–151. [ÇaprazRef]

25. Liu, C.-C.; Huang, SP; Wu, WJ; Chou, Y.-H.; Juo, S.; Tsai, L.-Y.; Huang, C.-H.; Wu, M.-T. Sigara içmenin, alkol içmenin ve betel sterlin çiğnemenin kalsiyum ürolitiyazis riski üzerindeki etkisi. Ann. Salgın. 2009, 19, 539–545. [CrossRef] [PubMed]

26. Hsu, KC; Hsu, PF; Chen, YÇ; Lin, H.; Chen, HP; Huang, Y. Malondialdehitin HPLC/flüoresan tespiti ile birleştirilmiş mikrodiyaliz örneklemesi ile karakterize edilen bakteriyel büyüme sırasındaki oksidatif stres. J. Kromatr. B Anal. Teknoloji Biyomedikal Yaşam Bilimleri 2016, 1019, 112–116. [CrossRef] [PubMed]

27. Hu, CW; Chao, Bay; Sie, CH 8-okso-7,8-dihidroguanin ve 8-okso-7,8-dihidro-2'-'nun idrar analizi otomatik katı faz ekstraksiyonu ile izotop seyreltme LC-MS/MS ile deoksiguanozin: 8-okso-7,8-dihidroguanin stabilitesi çalışması. Serbest Radikal. Biol. Med. 2010, 48, 89–97. [ÇaprazRef]

28. Liu, C.-C.; Lee, Y.-C.; Huang, SP; Cheng, K.-H.; Hsieh, T.-J.; Huang, T.-Y.; Lee, C.-H.; Geng, J.-H.; Li, C.-C.; Wu, WJ Hepatosit Nükleer Faktörü-4alfa P2 Promotör Varyantları, Yaşlanan Tayvanlı Erkeklerde Metabolik Sendrom ve Testosteron Eksikliği Riskiyle İlişkilidir. J. Seks Med. 2018, 15, 1527–1536. [ÇaprazRef]

29. Liu, C.-C.; Huang, SP; Tsai, L.-Y.; Wu, WJ; Juo, S.-HH; Chou, Y.-H.; Huang, C.-H.; Wu, M.-T. Osteopontin promoter polimorfizmlerinin kalsiyum ürolitiyazis riski üzerindeki etkisi. klinik Chim. Açta 2010, 411, 739–743. [ÇaprazRef]

30. O'Brien, KM; Upson, K.; Aşçı, NR; Weinberg, CR İdrar ve Kandaki Çevresel Kimyasallar: Kreatinin ve Lipid Ayarlaması için Yöntemlerin Geliştirilmesi. çevre. Sağlık Perspektifi. 2016, 124, 220–227. [ÇaprazRef]

Chia-Chu Liu 1,2,3,4 , Chia-Fang Wu 1,5, Yung-Chin Lee 2,3,6, Tsung-Yi Huang 2 , Shih-Ting Huang 1,7 , Hsun-Shuan Wang 6 , Jhen-Hao Jhan 6 , Shu-Pin Huang 2,3, Ching-Chia Li 2,3, Yung-Shun Juan 2,3 , Tusty-Jiuan Hsieh 1,7 , Yi-Chun Tsai 1,8,9, Chu- Chih Chen 1,10 ve Ming-Tsang Wu 1,11,12,13,

1 Çevre Tıbbı Araştırma Merkezi, Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Kaohsiung Şehri 807, Tayvan; ccliu0204@gmail.com (C.-CL); cfwu27@nuu.edu.tw (C.-FW); u107800006@kmu.edu.tw (S.-TH); hsiehjun@kmu.edu.tw (T.-JH); 920254@kmuh.org.tw (Y.-CT); ccchen@nhri.edu.tw (C.-CC)

2 Üroloji Bölümü, Kaohsiung Tıp Üniversitesi Hastanesi, Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Kaohsiung Şehri 807, Tayvan; 890197@kmuh.org.tw (Y.-CL); 970417@kmuh.org.tw (T.-YH); shpihu@kmu.edu.tw (S.-PH); 850144@kmuh.org.tw (C.-CL); 840066@kmuh.org.tw (Y.-SJ)

3 Üroloji Bölümü, Tıp Fakültesi, Tıp Fakültesi, Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Kaohsiung Şehri 807, Tayvan

4 Üroloji Bölümü, Pingtung Hastanesi, Sağlık ve Refah Bakanlığı, Pingtung Şehri 900, Tayvan

5 Uluslararası Çeviri Tıbbı Yüksek Lisans Programı, National United Üniversitesi, Miaoli 360, Tayvan

6 Üroloji Bölümü, Kaohsiung Belediye Siaogang Hastanesi, Kaohsiung Şehri 812, Tayvan; 940199@kmuh.org.tw (H.-SW); 1030398@kmuh.org.tw (J.-HJ)

7 Tıp Enstitüsü, Tıp Fakültesi, Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Kaohsiung Şehri 807, Tayvan

8 Dahiliye Bölümü, Nefroloji ve Genel Tıp Bölümleri, Kaohsiung Tıp Üniversite Hastanesi, Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Kaohsiung Şehri 807, Tayvan

9 Dahiliye Bölümü, Tıp Fakültesi, Tıp Fakültesi, Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Kaohsiung Şehri 807, Tayvan

10 Biyoistatistik ve Biyoinformatik Bölümü, Nüfus Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Ulusal Sağlık Araştırma Enstitüleri, Miaoli 350, Tayvan

11 Çevresel ve Mesleki Tıp ve Klinik Tıp Lisansüstü Enstitüsü, Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Kaohsiung Şehri 807, Tayvan

12 Aile Hekimliği Bölümü, Kaohsiung Tıp Üniversitesi Hastanesi, Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Kaohsiung Şehri 807, Tayvan

13 Halk Sağlığı Bölümü, Sağlık Bilimleri Fakültesi, Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Kaohsiung Şehri 807, Tayvan