Cistanche Tubulosa'dan Vazorelaxant Aktivitesi Olan Feniletanoid Oligoglikozitler ve Asillenmiş Oligoşekerler
Mar 15, 2022
daha fazla bilgi için:ali.ma@wecistanche.com
Masayuki Yoshikawa ve diğerleri
Soyut
Kurutulmuş saplarından elde edilen metanolik ekstraktCistanche tübüloza(Schrenk) R. Wight'ın izole sıçan aort şeritlerinde noradrenalinin neden olduğu kasılmalar üzerinde engelleyici bir etki gösterdiği bulundu. Ekstraktan, yeni feniletanoid aminoglikozit bileşenleri, kankanosidler F ve G ve bir açillenmiş oligo şeker, kankanoz, bilinen 14 bileşikle birlikte izole edildi. Bu yeni bileşiklerin yapıları, kimyasal ve fizikokimyasal kanıtları temelinde belirlendi. Ek olarak, temel bileşenler, kankanozit F, kankanoz, ekinakozit, asteozit ve cistanozit F, vazorelaksan aktivite gösterdi ve aktivite için çeşitli yapısal gereksinimler açıklığa kavuşturuldu. 2006 Elsevier Ltd. Tüm hakları saklıdır.
Cistanche efektli ürünler için tıklayın
giriiş
Orobanchaceae parazit bitkisi,Cistanche tübüloza(Schrenk) R. Wight, Kuzey Afrika, Arabistan ve Asya ülkelerinde yaygın olarak yayılış göstermektedir.Cistanche tübüloza, yanı sıra C. salsa ve C. Deserticola geleneksel olarak kan dolaşımını teşvik edici bir ajan ve iktidarsızlık, kısırlık, lumbago, vücut zayıflığı ve tonik tedavisi olarak kullanılmıştır.2,3 Çin'den doğal biyoaktif bileşenler üzerindeki karakterizasyon çalışmalarımız sırasında ilaçlar,1,4-14, beş iridoid, kankanozidler A-D ve kankanol ve bir monoterpenglikozid, kankanoside E'nin, köklerinden bilinen 16 bileşikle birlikte izolasyonunu ve yapı aydınlatmasını bildirdik.Cistanche tübüloza1 Bu bitkisel ilaçla ilgili çalışmanın devamı olarak, tematanolik özütün, izole sıçan torasik aort şeritlerinde noradrenalinin neden olduğu kasılmalar üzerinde engelleyici bir etki gösterdiği bulunmuştur. Bu metanolik özütten ayrıca feniletanoid oligo glikozitleri, kankanozitleri F (1) ve G (2) ve anasillenmiş oligo şeker, kankanoz (3) ve bilinen 14 bileşik, ekinakozit (4), ateozit (5), izoakteozit (6'yı izole ettik. ),20-asetillakteozit (7), tübülositler A (8) ve B (9), cistanosid F (10), salidrosid (11), (2R,3R)-bütan-2,{{18 }}diol 2-ObD-glukopiranozit,Mezo-bütan-2,3-diol2-ObD-glucopyranoside, etil bD-glucopyranoside,3-metil butanol bD-glucopyranoside, (artı )-pinoresinol40-ObD -glukopiranozid ve (artı )-syringaresinol 40-ObD-glukopiranozid. Bu makale, yeni bileşiklerin (1-3) yapısının aydınlatılmasının yanı sıra ana bileşenlerin (1, 3-6,10 ve 11) noradrenalinin izole sıçan aortik şeritleri tarafından indüklenen kasılmalar üzerindeki damar gevşetici etkileri ile ilgilidir. kan dolaşımı (Şekil 1).
sonuçlar ve tartışma
2.1. Metanolik özütün damar gevşetici etkisiCistanche tübülozaizole sıçan torasik aortunda noradrenalinin neden olduğu kasılma üzerine
Tablo 1'de gösterildiği gibi, aşağıdakilerden elde edilen metanolik ekstraktCistanche tübüloza(Urumqi, Sincan Eyaleti, Çin'den satın alınmıştır) izole sıçan aort şeritlerinde noradrenalinin neden olduğu kasılmalar üzerinde zamana ve konsantrasyona bağlı olarak vazorelaksan aktivite gösterdiği bulunmuştur(30–3{{10}}) 0 lg/mL). Metanolik ekstrakt, normal ve ters fazlı kolon kromatografisi ve son olarak HPLC ile 1 (0.0yüzde 16), 2(0) verecek şekilde daha da saflaştırıldı.{{31} }25 yüzde ), 3 (0.020 yüzde ), 4 (3.0yüzde 9),3 5 ({{64} }.68 yüzde ),3 6(0.0yüzde 96 ),3 7 (0Yüzde 0,017 ),3 8 (0,052 yüzde ),3 9 (yüzde 0,0036 ),3 10(yüzde 0,025 ),15 11 (yüzde 0,044 ),16 (2R,3R)-bütan-2,{{44 }}diol2-ObD-glukopiranozit (yüzde 0,0087),17 mezo-bütan-2,3-diol 2-ObD-glukopiranozid (yüzde 0,0065),17 etilb-D- glukopiranozid (yüzde 0,055),17 3-metilbutanol bD-glukopiranozid (yüzde 0,0030),17 (artı)-pinoresinol 40-ObD-glukopiranozid (yüzde 0,016),18 ve (artı)-syringaresinol{{81} }ObD-glukopiranozid (yüzde 0.022 ).15
2.2. Kankanositlerin F (1) ve G (2) yapıları
Kankanoside F (1), negatif optik rotasyonlu (MeOH içinde ½a -28D -44.8-) beyaz bir toz halinde elde edildi. 1'in IR spektrumu, 156{{69}'da absorpsiyon bantları gösterdi. }, 1508 ve 1458 cm-1, 3432, 1075 ve 1044 cm-1'de aromatikleşme ve güçlü absorpsiyon bantlarına atfedilebilir, bir aminoglikozit yapısını düşündürür. 1 negatif iyon FAB-MS, m/z 647 (M artı Na) artı ve 623'te (MH) kusimoleküler iyon tepe noktaları gözlemlendi ve yüksek çözünürlüklü FAB-MS analizi, 1'in moleküler formülünün C26H40O17 olduğunu ortaya çıkardı. Çeşitli NMR deneyleri19 tarafından atanan 1'in 1H ve 13C NMR (CD3OD,Tablo 2) spektrumları, iki metilene [d 2.78 (2H, m, H2-7), 3.70, 4.{{ atanabilir sinyaller gösterdi. 39}} (1H her biri, her ikisi de m, H2-8)] ve orto- ve meta-bağlı ABC-tipi aromatik protonlar [d 6.56 (1H, dd, J=1.9,7.9 Hz, H-6), 6.67 (1H, d, J=7.9 Hz, H-5), 6.69(1H, d, J=1.9 Hz, H{ {64}})] üç glukopiranoz parçası ile birlikte [d 4.30 (1H, d, J=8.0 Hz, H-10), 4.37(1H, d, J=8. 0 Hz, H-1000), 5.16 (1H, br s, H-100)]. 1'deki aminoglikozit yapısı, aşağıdaki proton ve karbon çiftleri (H-10 ve C-8; H-100 ve Şekil 2'de gösterildiği gibi C-30; H-1000 ve C-60). Mutlak stereo yapısı daha önce3 tannaz13,14 ile bildirilen ekinakozit (4)'ün enzimatik deasilasyonu 1 verdi. Yukarıda belirtilen kanıtlar temelinde, kankanosit F'nin yapısının 2-(3,4- olduğu belirlendi. dihidroksi fenil)etil OaL-rhamnopiranosil(1-3)[bD-glukopiranozil(1-6)]-b- D-glukopiranozit (1).
Kankanoside G (2), negatif optik rotasyonlu (½a-26D-35.0-MeOH içinde) beyaz bir toz halinde de elde edildi.2'nin IR spektrumu, 3432, 1709'da absorpsiyon bantları gösterdi, 1638, 1518, 1447 ve 1040 cm-1, hidroksile atfedilebilir, konjuge ester karbonil ve eter fonksiyonları ve aromatik halka. 2'nin moleküler formülü C29H36O14, pozitif ve negatif iyon FAB-MS'den [m/z 631 (M artı Na) artı ve 607(MH)-] ve yüksek çözünürlüklü FAB-MS ile belirlendi. 2'nin tanaz ile enzimatik deasilasyonu, mutlak stereo yapısı daha önce rapor edilen cistanosid G(12) verdi.16 2'nin yüzde 10 sulu potasyum hidroksit (KOH)—yüzde 50 sulu 1,4-dioksan (1:1, v/v), kafeik asit HPLC analizi ile tanımlandı. 2'nin 1H ve 13C NMR (CD30D, Tablo2) spektrumu, aşağıdaki fonksiyonların varlığını gösterdi: 4-hidroksifeniletil alkol kısım {iki metilenler [d 2.82 (2H, m, H2-7), 3.70, 3.96 ( 1H her biri, her ikisi de m, H2-8)] ve orto-bağlı A2B2-tipi aromatikprotonlar [d 6.65, 7.03 (2H her biri, her ikisi de d, J=8.6 Hz,H{) {62}},5 ve H-2,6)]} ve iki glukopiranoz parçası [d4.33 (1H, d, J=7.9 Hz, H-10), 5.19 (1H, br s, H-100)]bir kafeoil parçası ile birlikte {bir trans-olefin [d 6.29.7.56 (her biri, her ikisi de d, J=15.9 Hz, H{{84) }} ve H-7)] andpirokatekol tipi dihidroksibenzen [d 6.78 (1H, d,J=8.3 Hz, H-5), 6.89 (1H, dd, J {{ 96}}.9, 8.3 Hz, H-6),7.04 (1H, d, J=1.9 Hz, H-2)]}. 2'deki HMBC deneyinde, 60-proton [d 4.36 (1H, dd, J=6.1, 11.6 Hz),4,50 (dd, J {{) arasında uzun menzilli bir korelasyon gözlemlendi. 119}}.8, 11.6 Hz)] ve kafeoil karbonilkarbon (dC 169.1). Sonuç olarak, kankanosit G'nin yapısının 4-hidroksifenil-OaL-rhamnopiranosil(1 ! 3)-(6-O-kafeoil)-bD-glukopiranozit (2) olduğu belirlendi.
2.3. Kankanozun Yapısı (3)
Kankanose (3), ½a- 27D-35.3- (MeOH), beyaz bir toz halinde de elde edildi. 343{{30}}, 1702, 1639, 1611, 1458 ve 1071 cm-1'de 3'ün IR spektrumu absorpsiyon bantlarını gösterdi. hidroksil, konjuge ester karbonil ve eter fonksiyonları ve aromatik halka. 3'ün pozitif ve negatif iyon FAB-MS'si, sırasıyla m/z 673 (M artı Na) artı ve m/z 649'da (MH) yarı moleküler iyon zirveleri gösterdi. 3'ün yüksek çözünürlüklü FAB-MS'si moleküler formülün C27H38O18 olduğunu ortaya çıkardı. 3'ün yüzde 10 KOH– yüzde 50 sulu 1,4-dioksanla serbest bırakılan kafeik asit ile alkali hidrolizi, HPLC analizi ile bir oligo şeker ile birlikte tanımlanmıştır. Bu oligo şekerin 1.0 Mhidroklorik asit (HCl) ile asit hidrolizi, bir optik rotasyon detektörü kullanılarak HPLC analizi ile tanımlanan L-ramnoz ve D-glükozu serbest bıraktı.1,13,14 1H ve 13CNMR (CD3OD, Tablo 3) spektrumları19 3'ü trisakarit parçasına {d [5.11 (d,J=3.4 Hz), 4.57 (d, J=7.9 Hz), H{'nin a-ve b-formu karışımına atanabilir sinyaller gösterdi. {52}} (yaklaşık 1:1)], 4.25, 4.27 (her ikisi de d, J=7.7 Hz, H-1000),5.13, 5.18 (her ikisi de br s, H{{66) }})} bir kafeoil grubu [d 6.28, 6.29 (her ikisi de d, J=15.9 Hz, H-9), 6.78 (d,J=8.0 Hz, H) ile birlikte -5), 6.96 (dd, J=2.0, 8.0 Hz, Y-6), 7.06(d, J=2.0 Hz, H{{90} }), 7.60 (d, J=15.9 Hz, H-7)]. 3 üzerindeki HMBC deneylerinde, 40-proton [d 5.04, 4.99 (her ikisi de dd,J=9.5, 9.8 Hz)] ve kafeoil karbonil karbon (dC168.53) arasında uzun menzilli korelasyonlar gözlemlendi. , 168.65). Yukarıda bahsedilen kanıtlara dayanarak, kankanozun yapısı bea-L-rhamnopyranosyl(1-3)[bD-glucopyranosyl(1-6)]-O-(4- olarak açıklanmıştır. O-kafeoil)-D-glukopiranoz (3).
2.4. Ana bileşenlerin (1, 3–6,10, 11) damar gevşetici etkisiCistanche tübülozaizole sıçan torasik aortunda noradrenalin ve yüksek K plus tarafından indüklenen kasılma üzerine
Tablo 4 ve Şekil 3'te gösterildiği gibi, temel bileşenler olan kankanosit F (1) ve kankanoz (3), ekinakozit (4), ateozit (5), izoakteozit (6), cistanosid F (10) ve salidrosid ( 11) izole sıçan torasik aortunda noradrenalin kaynaklı kasılmalar üzerinde incelenmiştir. Sonuç olarak, 40-pozisyonunda bir kafeoil grubuna sahip olan bileşikler 3-5 ve 10, kasılmaları, zamana ve/veya konsantrasyona bağlı olarak (10–100 lM) önemli ölçüde inhibe ederken, 6'sı 60- O-kafeoil kısmı, 4 ve 5'ten zayıf aktivite gösterdi. Öte yandan, bir katekol grubu olan bileşik 1, önemli inhibisyon gösterdi, ancak bir fenol grubu ile 11, böyle bir etki göstermedi. Bu sonuçlar, 40-O-kafeoil kısmının ve 10-O-dihidroksifenetil kısmının güçlü damar gevşetici aktivite için gerekli olduğunu varsaymamıza yol açtı. Öte yandan, bileşikler 1, 3-6 ve 10 (100 lM), voltaja bağlı bir kalsiyum kanal blokeri olan nifedipin'den farklı olarak yüksek konsantrasyonda potasyumkatyon (yüksek K+) tarafından indüklenen kasılmalar üzerinde herhangi bir etki göstermedi. aynı dokular (veriler gösterilmemiştir). Bu bulgu, bu aktif bileşenlerin, reseptör tarafından işletilen kalsiyum kanalı yoluyla kasılmaları engellediğini, ancak voltaja bağlı kalsiyum kanalı yoluyla değil. Son zamanlarda, Iizuka ve arkadaşları, Forsythia suspensa'nın meyvesinden elde edilen bir feniletanoid, forsythiaside'ın, sıçan aortik halka preparatlarında noradrenalin ile indüklenen kasılmaları inhibe ettiğini bildirmiş ve noradrenalinin indüklediği kasılmanın hor çiçeği ile inhibisyonunun kısmen noradrenalinin indüklediği azalmadan kaynaklandığını öne sürmüştür. kalsiyum akışı.20 Bununla birlikte, bu çalışmada, aktif bileşenlerin gevşetici etkileri yaklaşık olarak gözlenmiştir. Bir adrenalin a1-reseptör antagonisti olan prazosininkinden farklı bir şekilde noradrenalinin eklenmesinden 30 dakika sonra. Aktif bileşenlerin etki mekanizmalarının daha fazla araştırılması gerekir.
3. Deneysel
3.1. Genel deneysel prosedür
Fiziksel verileri elde etmek için aşağıdaki araçlar kullanıldı: belirli rotasyonlar, Horiba SEPA-300 dijital polarimetre (l=5 cm); UV spektrumları, Shimadzu UV-1600spektrometresi; IR spektrumları, Shimadzu FTIR-8100 spektrometresi; 1H NMR spektrumları, JEOL JNM-LA500(500 MHz) spektrometresi; 13C NMR spektrumları, dahili standart olarak tetrametilsilanlı JEOLJNM-LA500 (125 MHz) spektrometresi; FABMS ve HR-FAB MS, JEOL JMS-SX 102A kütle spektrometresi; HPLCdetector, Shimadzu RID-6Bir kırılma indeksi ve SPD 10A UV-vis dedektörleri. HPLC kolonu, YMC-PackODS-A (250 · 4.6 mm id) ve (250 · 20 mm id) kolonları sırasıyla analitik ve hazırlık amaçlı kullanılmıştır.
Kromatografi için aşağıdaki deneysel koşullar kullanılmıştır: normal fazlı silika jel kolon kromatografisi, silika jel BW-200 (Fuji Silysia Chemical,Ltd, 150–350 ağ); ters fazlı silika jel kolon kromatografisi, Chromatorex ODS DM1020T (FujiSilesia Chemical, Ltd, 100–200 ağ); TLC, silika jel 60F254 (Merck, 0.25 mm)(normal faz) ve silika jel RP-18 F254S (Merck,0.25 mm) (ters faz) ile önceden kaplanmış TLC plakaları; ters fazlı HPTLC, silika jel RP-18 WF254S(Merck, 0.25 mm) ile önceden kaplanmış TLC plakaları; algılama, yüzde 1 Ce(SO4)2– yüzde 10 sulu H2SO4 püskürtülerek ve ardından ısıtılarak sağlandı.
Cistanche tübüloza
3.2. Bitki materyali
Kurutulmuş saplarCistanche tübülozaOcak 2005'te Urumqi, Sincan Eyaleti, Çin'de EishinTrading Co., Ltd, Osaka, Japonya aracılığıyla daha önce açıklandığı gibi satın alındı.1
3.3. Ekstraksiyon ve izolasyon
Kesirler {{0}} (590 mg), 2-1 (466 mg), 2-3 (3931 mg), 3-3(3610 mg), 3-4 (190 mg), 4-5 [=ekinakozit (4, 2595 mg, yüzde 0,44 )], 4-6 (1635 mg), 5-2 (1114 mg), {{ 20}} (306 mg), 5-4(347 mg), 5-5 (=4, 1620 mg, yüzde 2.03) ve 5-6 (1453 mg) şuradan elde edildi: saplarının metanolik özüCistanche tübülozadaha önce bildirildiği gibi.1 Fraksiyon 1-2(590 mg), HPLC [MeOH/H2O (35:65,v/v)] ile saflaştırılarak 3-metilbutanol bD-glukopiranozid(18 mg) elde edildi. , 0.0030 yüzde ), ( artı )-pinoresinol 40-ObD-glukopir anosit (96 mg, 0). 0yüzde 16 ) ve ( artı )-syringaresinol 40-O bD-glukopiranozid (129 mg, 0.0yüzde 22 ) birlikte sistanoklorin (21 mg, {{ 76}}.{{80}}0yüzde 35). Fraksiyon 2-1 (466 mg), HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)] ile ayrıldı ve (2R,3R)-bütan-2,{{40 }}diol 2-ObD-glucopyranoside(12 mg, {{1{{108}}}4}}.00Yüzde 87), (2R, 3S)-bütan-2,3-diol 2-ObD glukopiranozit (9 mg, 0.00%65 ) ve etil bD -gluko piranosid (76 mg, 0.055 yüzde ) ile birlikte üridin(0.00yüzde 69 ). Fraksiyon 2-2 (535 mg), antirhide (15 mg, yüzde 0,0079) birlikte salidrosit (11, 41 mg, yüzde 0,022) verecek şekilde HPLC[MeOH/H2O (5:95, v/v)] ile saflaştırıldı. ve6-deoxycatalpol (214 mg, yüzde 0.11). Fraksiyon 2-3(535 mg), gluro tarafı (110 mg, yüzde 0.14) ile birlikte 11'i (17 mg, yüzde 0.022) vermek üzere HPLC [MeOH/H20 (5:95,h/h)] ile ayrıldı ve bartsiosid (164 mg, yüzde 0,21). Fraksiyon 3-3 (510 mg), asteosit (5, 257 mg, yüzde 0,31) vermek üzere HPLC'ye [MeOH/H2O (40:60, v/v)] tabi tutuldu, izoakteozid (6, 79 mg, yüzde 0.096) ve 20-asetillakteozid(7, 14 mg, yüzde 0.017). Fraksiyon 3-4 (190 mg), kankanosit G (2, 17 mg, yüzde 0,0029) ve tübülozit B (9, 21 mg, 0,0036) verecek şekilde HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)] ile daha da saflaştırıldı. yüzde ). Fraksiyon 4-6 (75 mg), 5 (18 mg, yüzde 0.065) verecek şekilde HPLC [MeOH/H20 (35:65, v/v)] ile saflaştırıldı. Fraksiyon 5-2 (1114 mg), 2 (24 mg, yüzde 0.030) vermek üzere HPLC[MeOH/H20 (10:90, v/v)]'ye tabi tutuldu. Fraksiyon 5-3 (306 mg) kankanosid F (1, 13 mg, yüzde 0.016) verecek şekilde HPLC [MeOH/H20 (15:85, v/v)] ile saflaştırıldı. Fraksiyon 5-4 (347 mg), kankanoz (3, 30 mg, yüzde 0,038) ve cistanosid F (10, 20 mg, 0.025) vermek üzere HPLC[MeOH/H2O (10:90, v/v)]'ye tabi tutuldu. yüzde ). Fraksiyon5-6 (530 mg), HPLC [MeOH/H2O (35:65,h/h)] ile saflaştırılarak 4 (185 mg, yüzde 0.62), 5 (91 mg, yüzde 0.30) ve tübülozit A elde edildi. (8, 16 mg, yüzde 0.052).
3.3.1. Kankanosit F (1).
Beyaz bir toz, ½a{{0}D -44.8- (c0.50, MeOH). Yüksek çözünürlüklü pozitif iyon FAB-MSm/z: C26H40O17Na (M artı Na) artı , 647.2163 için hesaplandı. Bulunan: 647.2160. UV [MeOH, nm (log e)]: 224 (3.83),283 (3.37). IR (KBr): 3432, 2940, 1560, 1508, 1458,1075, 1044 cm-1. 1H NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo 2'de verilmiştir. 13C NMR verileri (125 MHz, CD30D) dC: Tablo 2'de verilmiştir. Pozitif iyon FAB-MS m/z: 647(M artı Na) artı. Negatif iyon FAB-MS m/z: 623 (MH) ,477 (M-C6H11O4)-, 623 (M-C6H11O5)-, 623(M-C12H21O9)-.
3.3.2. Kankanosit G (2).
Beyaz bir toz, ½a{{0}D -35.0-(c 0.80, MeOH). Yüksek çözünürlüklü pozitif iyon FAB-MSm/z: C29H36O14Na (M artı Na) plus için hesaplandı, 631.2003. Bulunan: 631.1996. UV [MeOH, nm (log e)]: 329 (4.10).IR (KBr): 3432, 2924, 1709, 1638, 1518, 1447, 1264,1040 cm-1. 1H NMR (500 MHz, CD30D) d: Tablo 2'de verilmiştir. 13C NMR verileri (125 MHz, CD30D) dC: Tablo 2'de verilmiştir. Pozitif iyon FAB-MS m/z: 631 (M artı Na) artı. Negatif iyon FAB-MS m/z: 607 (MH)-, 461(M-C6H11O4).
3.3.3. Kankanoz (3).
Beyaz bir toz, ½a{{0}D -35.3- (c0.50, MeOH). Yüksek çözünürlüklü pozitif iyon FAB-MSm/z: C27H38O18Na (M artı Na) plus için hesaplandı, 673.1956. Bulunan: 673.1959. UV [MeOH, nm (log e)]: 219 (4.10),247 (3.96), 333 (4.21). IR (KBr): 3430, 2962, 1702,1639, 1611, 1458, 1264, 1071 cm-1. 1H NMR(500 MHz, CD30D) d: Tablo 3'te verilmiştir. 13C NMR verileri(125 MHz, CD30D) dC: Tablo 3'te verilmiştir. Pozitif iyon FAB-MS m/z: 673 (M artı Na) artı. Negatif iyon FABM-Sm/z: 649 (MH), 487 (M-C9H8O3)-, 325(M-C15H18O8)-.
Cistanche tübüloza
3.4. Tanaz ile 2 ve 4'ün enzimatik deasilasyonu
H2O (1.0 mL) içindeki 2 (4.8 mg, 0.008 mmol) solüsyonu tanaz (3.7 mg, Aspergillus oryzae'den) ile muamele edildi. , Wako Pure Chemical Ind., Ltd, Osaka, Japonya) ve çözelti 37 derecede 24 saat karıştırıldı. Reaksiyon karışımına EtOH eklendikten sonra solvent, indirgenmiş basınç altında çıkarıldı ve tortu, sistanoside G (12, 2.8 mg, yüzde 80) vermek üzere HPLC [MeOH/H20 (35:65, v/v)] ile saflaştırıldı.16 benzer bir prosedürde, H2O (2.0 mL) içindeki bir 4 (9.2 mg, 0.012 mmol) solüsyonu tanaz (7.5 mg) ile muamele edildi ve solüsyon 24 saat 37 derecede karıştırıldı. Reaksiyon karışımının yukarıda tarif edildiği gibi işlenmesi, HPLC [MeOH/H20 (15:85, v/v)] ile saflaştırılarak 1'i (4.7 mg, yüzde 62) veren bir tortu verdi.
3.5. 2 ve 3'ün alkali ve asit hidrolizi
Yüzde 50 sulu 1,4-dioksan (1.0 mL) içindeki 2 ve 3'ün (her biri 3.5 mg) bir solüsyonu yüzde 10 sulu KOH ile işlendi. (1.{{30}} mL) ve tamamı sırasıyla 37°C'de 1 saat karıştırıldı. Çözücünün indirgenmiş basınç altında çıkarılması, HPLC analizine tabi tutulan bir reaksiyon karışımı verdi [sütun: YMC-Pack ODS-A,250 · 4.6 mm id; mobil faz: MeOH/H2O (30:70, v/v); saptama: UV (254 nm); akış hızı: 1.0 mL/dak] kafeik asidi belirlemek için (tR: 13.1 dakika). Daha sonra 3'ten elde edilen reaksiyon karışımı, 1 M HC1 (2.0 mL) içinde çözündürüldü ve geri akış altında 3 saat ısıtıldı. Soğutulduktan sonra reaksiyon karışımı, EtOAc ile özümlendi. Sulu katman, sırasıyla aşağıdaki koşullar altında HPLC analizine tabi tutuldu: HPLC kolonu, KaseisorbLC NH2-60-5, 250 · 4.6 mm id (Tokyo Kasei Co., Ltd, Tokyo, Japonya); algılama, optik döndürme [ShodexOR-2 (Showa Denko Co., Ltd, Tokyo, Japonya); mobilfaz, CH3CN/H2O (85:15, v/v); akış hızı 0.8 mL/dak]. Sulu tabakada bulunan L-ramnoz ve D-glukozun tanımlanması, alıkonma süreleri ve optik rotasyonları orijinal numunelerinkilerle karşılaştırılarak gerçekleştirilmiştir, tR: 9.9 dk (L-ramnoz, negatif optik rotasyon) ve 17.9 dk (D-glikoz, pozitif optik rotasyon).
3.6. vazorelaksan aktivite
3.6.1. Doku hazırlığı.
250–350 g ağırlığındaki erkek Sprague–Dawley sıçanları anestezi altında her iki karotis arteri kesilerek kurban edildi ve torasik aortlar izole edildi ve sarmal şeritler halinde kesildi (2–3 mm ·15–2{{25) }} mm). Fizyolojik tuz çözeltisi, NaCl(118.0 mM), KCl (4.7 mM), KH2P04 (1.2 mM), MgS04(1.2 mM), CaCl2 (2.5 mM), NaHC03 (25.0 mM) ve D-glukoz (10.0 mM) içeriyordu. Çözelti yüzde 95 O2– yüzde 5 CO2 gaz karışımıyla havalandırıldı ve 37 derecede tutuldu. Mekanik tepkiyi araştırmak için her preparasyon bir organ banyosunda (6 mi) süspanse edildi ve yaklaşık 1 g'lık bir başlangıç yüküne tabi tutuldu. Deneylerin başlamasından önce bir saatlik dengeleme süresine izin verildi. Kasılmalar, bir kuvvet-yer değiştirme dönüştürücüsü (AD Instruments) aracılığıyla izometrik olarak ölçüldü ve bir yalan makinesine kaydedildi.
3.6.2. dl-noradrenalin veya yüksek K plus tarafından indüklenen kasılma üzerinde inhibitör etki.
Dengelemeden sonra, banyoya dl-nor-adrenalin (nihai konsantrasyon: 1 lM) veya 3 M KCl(0.1 mL, K artı nihai konsantrasyonu: 54 mM) ilave edildi. Dokular üç kez yıkandı ve kasılma maksimum seviyeye ulaştıktan sonra yeniden dengelendi. Sürekli kasılma, dl-noradrenalin veya KCl ilavesiyle tekrar indüklendi ve ardından test bileşiği 10-100 uM (noradrenalin) veya 100 lM'de (yüksek K artı) uygulandı. Test örneğinin uygulanmasından önceki kasılma tepkisi yüzde 100 olarak alındı. Referans bileşikler olarak Prazosin hidroklorür ve nifedipin kullanılmıştır.
3.6.3. İstatistiksel analiz.
Değerler, ortalama± SEM olarak ifade edilir. İstatistiksel analiz için, çoklu karşılaştırma analizi için Dunnett testinin izlediği tek yönlü bir varyans analizi kullanıldı. 0.05'ten küçük olasılık (p) değerleri anlamlı kabul edildi.
Teşekkür
Bu araştırma, 21. COE Programı, Akademik Sınır Projesi ve Japonya Eğitim, Kültür, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan Bilimsel Araştırmalar için Hibe Hibesi tarafından desteklenmiştir.
Referanslar ve notlar
1. Bu makale, 'Çin Doğal İlaçlarından Biyoaktif Bileşenler' serisinde 19 numaradır. 18 numaralı kağıt için bkz. Xie, H.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Nakamura, S.; Muraoka, Ö.; Yoshikawa, M. Chem. Eczacılık Boğa. 2006, 54, 669-675.
2. Namba, T. Renkli Resimlerle Wakan-Yaku Ansiklopedisinde (Geleneksel Çin-Japon İlaçları); Hokuryuşa: Osaka, 1994; Cilt II.
3. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmangani, K.; Ahmet, M. Chem. Eczacılık Boğa. 1987, 35, 3309-3314.
4. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Tao, J.; Ueda, K.; Yoshikawa, M. Chem. Eczacılık Boğa. 2002, 50, 208–215.
5. Morikawa, T.; Matsuda, H.; Toguchida, İ.; Ueda, K.; Yoshikawa, MJ Nat. Ürün 2002, 65, 1468-1474.
6. Tao, J.; Morikawa, T.; Toguchida, İ.; Ando, S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Bioorg. Med. Kimya 2002, 10, 4005-4012.
7. Morikawa, T.; Tao, J.; Ando, S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. Ürün 2003, 66, 638-645.
8. Tao, J.; Morikawa, T.; Ando, S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Chem. Eczacılık Boğa. 2003, 51, 654-662.
9. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Xie, H.; Yoshikawa, M. Planta Med. 2004, 70, 847-855.
10. Güneş, B.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Tewtrakul, H.; Wu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, MJ Nat. Ürün 2004, 67, 1464-1469.
11. Morikawa, T.; Güneş, B.; Matsuda, H.; Wu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, M. Chem. Eczacılık Boğa. 2004, 52, 1194-1199.
12. Xie, H.; Wang, T.; Matsuda, H.; Morikawa, T.; Yoshikawa, M.; Tani, T. Chem. Eczacılık Boğa. 2005, 53, 1416–1422.
13. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. Ürün 2006, 69, 881-886.
14. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Wang, T.; Yoshikawa, M. Chem. Eczacılık Boğa. 2006, 54, 506-513.
15. Kobayashi, H.; Karasava, H.; Miyase, T.; Fukuşima, S. Chem. Eczacılık Boğa. 1985, 33, 1452-1457.
16. Karasava, H.; Kobayashi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Fukushima, S. Yakugaku Zasshi 1986, 106, 721–724.
17. Kitajima, J.; Ishikawa, T.; Tanaka, Y. Chem. Eczacılık Boğa. 1998, 46, 1643-1646.
18. Çiba, M.; Hisada, S.; Nishibe, S.; Thieme, H. Phytochemistry 1980, 19, 335-336.
19. 1–3'lük 1H ve 13C NMR spektrumları, polarizasyon transferi (DEPT), çift kuantum filtre korelasyon spektroskopisi (DQF COSY) ve heteronükleer çoklu kuantum tutarlılığı (HMQC), heteronükleer çoklu bağ bağlanabilirliği ile distorsiyonsuz geliştirme yardımı ile atanmıştır. (HMBC) deneyleri.
20. Iizuka, T.; Nagai, M. Yakugaku Zasshi 2005, 125, 219–224.
