Cistanche Tubulosa Ekstraktının Uygulanmasından Sonra Ekinakozid ve Acteoside'nin Phloridzin'e Duyarlı Taşınması ve Değişen Bağırsak Emilim Yolu

Daha fazla bilgi için:ali.ma@wecistanche.com

Tadatoshi Tanino ve diğerleri

Soyut Amaçlar

Bu çalışmanın amacı, yararlı etkilerini ele almaktı.Cistanche tubulosa özüekinakozit (ECH) ve ateozit (ACT)'nin düşük bağırsak geçirgenliğini iyileştirme üzerine.

yöntemler

ECH ve ACT'nin emilimiCistanche tubulosa özübozulmamış bileşiklerle insan bağırsağı Caco-2 hücre tek katmanları kullanılarak karakterize edildi. ECH ve ACT'nin glukoz taşıyıcıya bağlı absorpsiyonu, bir in-situintestinal perfüzyon tekniği ile doğrulandı.

Önemli bulgular

Görünür geçirgenlik (Papp), bozulmamış ECH ve bozulmamış ACT arasında önemli ölçüde farklı değildi. Phloridzin varlığında, yüksek dozda ECH ve ACT'nin Papp'ı, ilgili tedavi dışı tedavinin yüzde 20'sine düşürüldü, ancak floretin ve verapamil tarafından değiştirilmedi.Cistanche tubulosa özüdüşük ve yüksek dozlarda, ECH ve ACT'nin Papp'ı (her ikisi de üç kat), sodyuma bağımlı glikoz taşıyıcıdan bağımsız absorpsiyona büyük katılımları ile sonuçlanmıştır. Düşük bir konsantrasyonda, portal kandaki eşzamanlı ECH ve ACT seviyeleri, phloridzin tarafından önemli ölçüde baskılanmıştır.

Çözüm

Diyet ve tıbbiCistanche tubulosa özüECH ve ACT'nin bağırsak absorpsiyonunun arttırılması, insan sağlığının daha iyi yönetilmesine hizmet edebilir, ancak phloridzin'e duyarlı taşımanın katılımı azaltılmalıdır.

anahtar kelimelerasteosit; Caco-2 hücre tek katmanları;Cistanchetubulosa özü; ekinakozit; phloridzin duyarlı glikoz taşıyıcı

Cistanche tubulosa özü

Cistanche tubulosa tozu için tıklayın

giriiş

Cistanche tubulosa'nın kökleri geleneksel olarak ilaç ve gıda için kullanılmıştır.Cistanche tubulosa özüçeşitli beyin hastalıklarında, yaşlanmayı geciktirici işlevlerde, yağ metabolizmasında ve saç büyümesinde farmakolojik etkilere sahip olduğu bilinmektedir.[1–4]Son zamanlarda iridoidler, monoterpenoidler, feniletanoidglikozitler ve lignanlar izole edilmiştir.Cistanche tübüloza.[5,6] Polifenolik bileşiklerin bir sınıfı olan feniletanoid glikozitler, miktarları türlere göre değişiklik gösterse de, Cistanche türlerindeki[7] ana kimyasal maddelerdir. Ekinakozit (ECH; Şekil 1), HerbaCistanchis'teki başlıca feniletanoid glikozitlerden biridir. Kalınbağırsakta bakteriyel kökenli enzimler tarafından acteoside (ACT; verbascoside olarak da adlandırılır) hidrolize edilir.[8,9] ECH ve ACT, kemirgen hayvanlarda hepatoproteksiyon[10] ve anti-inflamasyon[11] gibi faydalı aktiviteye sahiptir. Şaşırtıcı bir şekilde, suda yüksek oranda çözünür ECH, Parkinson hastalığının bir fare modelinde davranışsal ve nörokimyasal sonuçları iyileştirir ve serebellar granül nöronlarında kaspaz-3 ve kaspaz-8 aktivasyonunu inhibe eder.[9] Kan-beyin bariyerinin, ksenobiyotiklerin kandan beyne girişini ve dağıtımını kesin olarak sınırladığı iyi bilinmektedir. Wu ve diğerleri[12] ayrıca suda çözünür ACT'nin sıçanların beyin dokularında hızlı bir şekilde dağıldığını gösterdi. Bu nedenle ECH ve ACT, belirli sistem(ler) tarafından beyne, bağırsaklara ve karaciğere taşınabilir.

tüketimine dair güçlü kanıtlar olmasına rağmen,Cistanche tubulosa özüinsan sağlığı için faydalıdır, 8,4 ± 1,6 ug/ml'lik bir apikal konsantrasyonda Caco{{0}} hücre mono tabakaları boyunca saf ECH'nin geçirgenliği, hücre dışı taşıma markörmannitolününkine eşit veya bunun altındadır.[13] Sıçanlara saf ECH oral yoldan verildiğinde (doz, 1{{10}}0 mg/kg), absorpsiyon son derece hızlıdır (Tmax,15 dk) ve maksimum serum konsantrasyonu çok düşüktür. (Cmax, 0.61 ± 0.32 ug/ml).[14] ECH'nin mutlak biyoyararlanımı yalnızca yüzde 0.83'tür. Benzer şekilde, Caco-2 hücreleri, zeytin değirmeni atık suyundan kısmen saflaştırılmış bir fenolik fraksiyon ile inkübe edildiğinde, saf ACT alımı hızlıdır ve 30 dakika sonra meydana gelen en yüksek birikim ve yüzde 0.1'lik bir toplam birikim verimliliği ile hücre içi 130 seviyeleri sağlar. pmol/mg hücre proteini.[15] Sıçanlarda, saf ACT'nin maksimum konsantrasyonuna (0.13 ± 0.03 ug/ml) 100 mg/kg'lık oral doz uygulamasından 30 dakika sonra ulaşılmıştır, bu da hızlı bağırsak absorpsiyonu anlamına gelir[12]. ACT'nin yanı sıra ECH'nin oral biyoyararlanımı oldukça düşüktür (yüzde 0.12 ± 0.04), bu da bağırsak sistemi ve karaciğerde ilk geçiş etkilerinin olasılığını düşündürür. Sıçan safrasında ECH'nin metilasyon ve glukuronidasyon konjugatları majör metabolitlerdir[16], ancak hepatik metabolizmanın kapsamı belirsizliğini korumaktadır. ECH ve ACT'nin sıçan bağırsak mukozası ve yapay mide asidinin homojenatlarında oldukça stabil olduğunu önceden bulduk (veriler gösterilmemiştir). Najar ve ark.[17] ACT'nin verapamile (temsili bir P-gp inhibitörü) benzer bir şekilde P-glikoprotein (P-gp)-ATPase aktivitesini inhibe ettiğini gösterdi, bu da bir P-gp modülatörü anlamına gelir; bununla birlikte, ACT'nin bir P-gp substratı olarak mevcut olup olmadığı belirsizdir. İlginç bir şekilde, diyetteki flavonoid-D-glukozitlerin son bulguları, çoklu ilaca dirençli proteinin (MRP2), sodyuma bağımlı glikoz taşıyıcısını (SGLT)1-kuersetin 4′-O- -glukoz,[18] aracılı alımını maskelediğini gösterdi. ,19] çok zayıf emilimden sorumludur. Bununla birlikte, polifenolik glikozitlerin, glikoz taşıyıcıları da dahil olmak üzere, emici taşıyıcılara duyarlılığı hakkında çok az şey bilinmektedir. Quercetin4′-glukozitin emilim özellikleri ve hızlı kan-beyin bariyeri-geçirgen ECH hakkındaki bilgiler, diyet C'de feniletanoid glikozitlerin taşıyıcıya duyarlı alımını araştırmamızı sağlamıştır. tübüloza.

Bu çalışmada, insan-bağırsak Caco-2 hücre tek katmanlarını kullanarak bozulmamış ECH ve ACT'nin glukoz taşıyıcı aracılı absorpsiyonunu araştırdık. Eşzamanlı olarak, ECH ve ACT'nin emilim taşınımı eşzamanlı beslenmeCistanche tubulosa özüemilim derecesi ile hepatik ilk geçişten kaçınma arasında kolayca ayrım yapabilen portal kan örneklemesi ile bir in vitro model ve in-situ bağırsak perfüzyon sistemi ile karakterize edilmiştir.

Malzemeler ve yöntemler

Malzemeler

Intact ECH ve ACT, EishinTrading Co., Ltd'den (Osaka, Japonya) cömert hediyelerdi. Phloridzin ve phloretin, Tokyo Kasei Co., Ltd.'den (Tokyo, Japonya) satın alındı. Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) tahlili için dahili standartlar olarak kullanılan Verapamil ve p-kumarik asit, Sigma-Aldrich'ten (St Louis, MO) elde edildi. ,AMERİKA BİRLEŞİK DEVLETLERİ). Kullanılan diğer tüm kimyasallar analitik derecedeydi ve ticari olarak temin edilebilirdi.

Bitki materyali ve tematanol özütünün hazırlanması

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) Salvadora veya Calotropis türlerinin köklerinde yetişen, Kuzey Afrika, Arap ve Asya ülkelerinde yayılış gösteren çok yıllık parazitik bir bitkidir. C. tubulosa'nın kurutulmuş gövdeleri toz haline getirildi ve 3 saat boyunca geri akış altında metanol ile üç kez özümlendi. Çözücünün azaltılmış basıncın altında buharlaştırılması, metanolik özü sağladı. Tematik özüt (ticari kalite, Parti No. 20070130; tescilli ticari isim, Sabaku Ninnjinn Kanka) Muraoka ve Morikawa (Kinki Üniversitesi, Japonya) aracılığıyla Eishin Trading Co., Ltd.'den cömert bir hediyeydi ve botanik tanımlaması Profesör Jia Xiaoguang tarafından gerçekleştirildi. Xinjiang Geleneksel Çin ve Etnolojik Tıp Enstitüsü.

Bitki özü analizi: kromatografi

ECH ve ACT içeriklerini belirledik.Cistanche tubulosa özü(Parti No. 20070130) aşağıda açıklanan bir HPLC analizi ile. Elde edilen veriler Tablo 1'de gösterilmiştir.

Hücre kültürü

American Type CultureCollection'dan (ATCC, Rockville, MD, ABD) satın alınan Caco{{0}} hücreleri 38-53 pasajlarında kullanıldı. Bunlar, 0.1 mM esansiyel olmayan amino asitler, yüzde 10 ısıyla inaktive edilmiş fetal sığır serumu, 100 ile desteklenmiş Dulbecco'nun modifiye Eagle ortamından (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japonya) oluşan bir kültür ortamında büyütüldü. U/ml penisilin G ve 0.1 mg/mlstreptomisin sülfat.

Ulaştırma çalışmaları

Caco-2 hücreleri, 6.4 x 103 hücre/cm2on polikarbonat filtre yoğunluğunda kaplandı. Tohumlamadan 21-25 gün sonra taşıma deneyleri için tek tabakalar kullanıldı. İçeriklerine eşdeğer olan bozulmamış ECH ve ACTCistanche tubulosa özü (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

EkinakozidCistanche tubulosa özü

Yerinde bağırsak perfüzyonu

Erkek Wistar sıçanları (230-250 g), SLCJapan'dan (Hamamatsu, Japonya) elde edildi. Hayvanlar, kullanımdan önce 1 hafta boyunca 12 saat aydınlık/karanlık döngüsü altında klimalı bir odada barındırıldı. Sıçanlar, standart laboratuvar gıdası (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japonya) su ad libitum ile beslendi ve testten önce gece boyunca aç bırakıldı. Mihara ve ark.[20]tarafından açıklanan modifiye prosedüre göre yerinde dolaşımlı perfüzyon çalışması gerçekleştirildi.Kısaca, sıçanlara kan basıncındaki düşüşleri önlemek için yüzde 25 üretan solüsyonu (1 mg/kg) ile anestezi uygulandı. Midlineabdominal bir kesi yapıldı ve ince bağırsak ortaya çıkarıldı. Safra kanalı perfüzata safra salgılanmasını önlemek için bağlandı. Tüm ince bağırsağın tek parça olarak (duodenumdan ileuma kadar) normal tuzlu su ile 37 derecede 10 dakika yıkama berrak görünene kadar yıkandı. Silikon tüplere bağlı cam tüpler daha sonra ince bağırsağın her iki ucuna kanüllendi ve dikiş ipliği ile sabitlendi. Daha sonra ince bağırsak batına yerleştirildi ve kanüller peristaltik pompaya bağlandı. Portal ven polietilen boru (PE10) ile kanüle edildi.Cistanche tubulosa özüticari olarak temin edilebilen, 4.5 mg/ml'lik bir nihai konsantrasyon verecek şekilde Krebs-Henseleit bikarbonat tamponu (pH 7.4) içinde süspanse edildi ve çözünmeyen bileşenleri çıkarmak için 8000 rpm'de 10 dakika santrifüjlendi. Phloridzin (1 mM) varlığında veya yokluğunda süpernatan, deney boyunca 37 ± 0.5 derece sıcaklıkta tutulan bir rezervuara geri toplandı. Belirtilen zamanlarda portal ven kanülünden kan alındı. Kan örneklerinin santrifüjlenmesinden sonra, elde edilen plazma, iç standardı içeren asetonitril ile proteinden arındırıldı ve 3000 rpm'de santrifüjlendi. Süpernatanlar buharlaştırıldı ve tortu, asetonitril ve yüzde 0,5 asetik asitten oluşan hareketli bir faz ile çözüldü. Karıştırılan solüsyon bir HPLC kolonuna yüklendi. Sıçanlar, Japon hükümeti ve Kinki Üniversitesi tarafından yayınlanan Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımına İlişkin Kılavuz İlkelere uygun olarak etik prosedürlere uygun olarak kullanıldı.

HPLC analizi

HPLC analizi, aShimadzu SPD{{0}A, UV dedektörü, Shimadzu LC-10A pompası ve Shimadzu C-R4A kromatopac entegratörü (Kyoto, Japonya) ile donatılmış bir sistemde yapıldı. ECH ve ACT, bir Inertsil ODScolumn (5 um, 4.6 × 150 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japonya) kullanılarak ayrıldı. Bir mobil faz asetonitril ve 15:85 (h/h) oranında yüzde 0,5 asetik asit, 1.0 ml/dk'lık bir akış hızında kullanıldı. Algılama 334 nm'de gerçekleştirildi

kinetik analiz

Görünür geçirgenlik katsayıları (Papp), Caco-2 hücre tek katmanları boyunca bileşik taşımanın zaman sürecinin doğrusal bölümünün eğiminden şu şekilde tahmin edildi: P dQ dt AC app=( ) ( )

burada dQ/dt geçirgenlik oranıdır, C0 donör odasındaki çözünen maddenin ilk konsantrasyonudur ve A, zarın yüzey alanıdır (4,7 cm2).

Sıçan yerinde bağırsak perfüzyon çalışmasında, sıfır zamanından son ölçülene kadar portal vende plazma konsantrasyonu-zaman eğrisinin (AUC0-90) altındaki alan lineer yamuk kuralına göre hesaplandı.

içinde ActeosideCistanche tubulosa özü

Fiziko kimyasal özellikleri

Bileşiklerin polar yüzey alanı ve polar olmayan yüzey alanı, SAS programı kullanılarak hesaplandı (versiyon 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , NC, ABD). Deneysel olarak belirlenen log P ve pKa değerleri literatürden elde edildi.

istatistiksel analiz

Veriler, tek yönlü varyans analizi ve ardından Tukey'in post-hoc testi ile analiz edildi. Yüzde 5'in altındaki olasılık değerleri anlamlı kabul edildi.

Sonuçlar

Ekinakozit ve akteozitin Caco-2 hücre tek tabakaları yoluyla emici taşınması

Farelerde ve sıçanlarda, bozulmamış ECH[10,14] ve ACT[12,21], 100-1000 mg/kg dozlarında oral yoldan uygulanır. buCistanche tubulosa özükullanılan doz başına yaklaşık yüzde 30 ECH ve yüzde 15 ACT içeriyordu. Ekstrakt, inkübasyon ortamında ozmotik basıncı ve pH'ı değiştirdiğinden, oral doza göre 4.5 ve 13.5 mg/ml'lik konsantrasyonlar belirlendi (bozulmamış bileşikler: 2–20 mg/2{{2{{31}) }}}g vücut ağırlığı) farelerde. ve sırasıyla ACT için 3.0 mg. İnsanlarda bildirilen oral ECH ve ACT dozajından çok daha düşük olan C. tubulosa özütü miktarları uyguladık (ekstrenin önerilen diyet miktarı: ECH için yaklaşık 45 mg ve ACT için 22.5 mg içeren 150 mg). Bozulmamış bileşiklerin düşük ve yüksek dozlarında, absorpsiyon profilleri (Şekil 2) ve Papp, bir ECH eşdeğeri olarak ECH ve ACT arasında önemli ölçüde farklı değildi (Tablo 2). Ortama 13,5 mg/ml'lik yüksek dozda C. tubulosa özütü yüklendiğinde, Papp değerleri (sırasıyla 1.27 ± 0.13 ve 0.34 ± 0.03 × 10−6 cm/s) ECH ve ACT eşlik edenlerin sayısı, bozulmamış ECH ve ACT'ninkinden (sırasıyla 0,38 ± 0,09 ve 0,10 ± 0,03 × 10−6 cm/s) üç kat daha yüksekti (Tablo 2). Öz, bozulmamış bileşiklerin aksine, ECH ve ACT'nin absorpsiyon taşınmasını önemli ölçüde arttırdı.

Phloridzin, phloretin ve verapamil'in inhibitör etkisi

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 mM) phloretin, fark edilebilir hücre toksisitesi nedeniyle kullanılamadı. Ek olarak, P-gp, bitkisel ilaçlar ve klinik olarak önemli P-gp substratları arasındaki etkileşimden sorumlu önemli bir oyuncu olarak tanımlanmıştır. Verapamil, bozulmamış bileşiklerin absorptif taşınmasını arttırmadı (Şekil 3).

Ekstrede (düşük doz) ECH ve ACT'nin absorptif taşınması, phloridzin tarafından önemli ölçüde inhibe edildi (Tablo 2 ve Şekil 4). İntakt ECH ve ACT'nin taşınması phloridzin'e daha duyarlı olmasına rağmen, yüksek dozdaki ekstrakt floridzin duyarlı inhibisyonu bastırdı(Tablo 2).

Yerinde bağırsak perfüzyon çalışması

Yerinde bir çalışmada, ECH ve ACT'ninCistanche tubulosa özüince bağırsağın apikal tarafında bulunan SGLT1 ile taşınmıştır. Düşük dozda (4.5 mg/ml) diyet özü perfüze edildiğinde, portal kanda ECH ve ACT hızla ortaya çıktı (Şekil 5). AUC, ECH için 2702.8 ± 384.1 μm·dak ve ACT için 698.3 ± 197.2 μm·dak olarak belirlendi. AUC, içerikle normalleştirildikten sonraCistanche tubulosa özü, emilen miktar ECH ve ACT arasında önemli ölçüde farklı değildi. SGLT1-duyarlı phloridzin, phloretin'den farklı olarak, eşzamanlı ECH (AUC, 649.4 ± 248.2 μm·min) ve ACT'nin (algılanmadı) absorptif taşınmasını önemli ölçüde bastırdı.

Tartışma

Bazı bitkisel içerikler, karaciğer, bağırsak, beyin ve böbreklerde yüksek oranda eksprese edilen P-gp substratlarıdır. P-gp, sarı kantaron, kurkumin, ekinezya, ginseng, ginkgo ve zencefil gibi bitkisel ilaçların in-vivo biyoyararlanımı, düzeni ve dağıtımı için belirleyici bir faktördür.[22,23]Genisteinin biyoyararlanımı{{5} }bir flavonoid türevi olan glukozit de bağırsak MRP2 taşıyıcısı tarafından sınırlandırılmıştır.[24] Bu nedenle, bu çalışma ECH ve ACT'nin birlikte tüketilen ve tıbbi olarak emilim özelliklerini araştırmak için tasarlanmıştır.Cistanche tubulosa özü.

Polarize Caco{{0}} hücre tek tabakaları ve ayrıca bağırsak,[25] P-gp, MRP'ler ve meme kanseri direnç proteini gibi başlıca bağırsak ilaç akış taşıyıcılarını ifade eder.[26]Diyet flavonoidleri kuersetin[27] ve mirisetin[28]'in hem hücre dizilerinde hem de hayvan modellerinde P-gp aracılı akışı engellediği gösterilmiştir. Bir P-gp inhibitörü olan Verapamil, Caco-2hücre tek tabakaları boyunca ACT ve ECH'nin geçirgenliğini değiştirmedi (Şekil 3), bu da bozulmamış ECH ve ACT'nin P-gp akış pompası ile sınırlı olmadığını gösterir. Daha önceki çalışmalarımız MRP2 proteinlerinin Caco-2 hücre tek tabakalarında ifade edilmediğini gösterdi.[29] P-gp ve MRP2-aracılı akış, ECH ve ACT taşınmasında hariç tutulabilir. Düşük lipofilikliğe sahip kersetin bazıglikozitleri, kersetin kendisinden daha verimli bir şekilde emildi.[30] Bir şeker parçasına sahip ACT'nin beyin dokularında hızla dağıldığını da belirtmek önemlidir. Dikkatimiz, enterositlerdeki iki glikoz taşıyıcısının birleşik etkisine odaklanmıştır: fırça kenarlı membranda SGLT ve bazolateral membranda kolaylaştırılmış difüzyon glikoz taşınması (GLUT). Caco-2 hücre kültürü, floretin duyarlı GLUT2, ve floridzin duyarlı SGLT1 ve 2 taşıyıcıları incelemek için bir model olarak kullanılabilir.[31–34]Glikoz, Caco-2 tek tabakalarının apikalinden bazolateral tarafına taşınır. Pappof 36,8 ± 1,1×10−6 cm/sn ile yüksek bir oranda.[35] Transselüler taşıma işaretçisi propranolol'den daha yüksek bir Papptan'a sahiptir (23.4 ± 2.8 × 10-6 cm/s). Tablo 2'de gösterildiği gibi, bozulmamış ECH ve ACT, glikoz ve pasif propranololde bildirilenden çok daha düşük Papp'a sahipti. Bölme katsayısının (oktanol-su) logaritmasını hesapladık, log P, ECH ve ACT için sırasıyla -2.32 ve 0.077 olarak hesaplandı. Polaror hidrofilik bileşiklerin paraselüler bir yolla (sıkı bağlantılar boyunca) taşındığına inanılmaktadır. Mannitol gibi iki feniletanoid glikozit, hücre dışı bir yoldan taşınıyor gibi görünmektedir. Bununla birlikte, phloridzin, sağlam ECH ve ACT'nin emici geçirgenliğini önemli ölçüde azalttı (Tablo 2), apikalSGLT1'in sağlam ECH ve ACT'nin bağırsak absorpsiyonunda önemli bir rol oynadığını düşündürdü. Eşdeğer bir dozda, daha yüksek hidrofobik ACT geçirgenliği, ECH geçirgenliğine yakındı (Şekil 2 ve Tablo 2). Yoshikawa ve ark.[36] kolaylaştırıcı taşıyıcıların (GLUT 1 ve 2) ve ayrıca floridzin duyarlı SGLT1'in ince bağırsakta yoğun bir şekilde eksprese edildiğini göstermiştir. Absorbe edilen bileşiklerin miktarları, alım ve eliminasyon arasındaki kütle dengesine dayandığından, GLUT2'nin katılımını değerlendirdik. Glukoz, enterositlerin apikal membranlarını SGLT1 ile yüksek afinite ve düşük kapasite ile çaprazlar ve bazolateral membrandan GLUT2 yoluyla düşük afinite ve yüksek kapasite ile çıkar. Phloretin (spesifik bir GLUT2 inhibitörü) bozulmamış ECH ve ACT'nin taşınmasını ortadan kaldırmadı (Şekil 3). Funes ve ark.[37] ACT'nin fosfolipid membranların fosfat gruplarıyla güçlü bir şekilde etkileşime girdiğini gösterdi. ACT yapısında hidroksil grupları bol olduğundan, bu gruplar ile gliserol kutup başları veya fosfolipidlerin fosfat grupları arasındaki hidrojen bağları, gerçekleşmesi en olası etkileşimlerdir. İntakt ECH ve eşdeğeri ACT, Caco-2 tek tabakaları ile 11 saat süreyle inkübe edildiğinde, ACT'nin hücresel birikimi (0.24 ± 0.04 nmol/cm2), ECH'ninkinden (0.07 ± 0.01 nmol/cm2) üç kat daha fazlaydı. SGLT1-duyarlı ECH ve ACT'nin enterositlerden kan dolaşımına yavaşça taşındığını ve muhtemelen lowPapp'ın gözlemlenmesine yol açtığını düşündük. Yüksek hidrofilik ECH ile karşılaştırıldığında, ACT'nin düşük geçirgenliği, hücre zarlarına interkalasyon nedeniyle olabilir.

Cistanche tubulosa özü

Polifenolik bileşikler, klinik uygulamaları sırasında bitkisel karışımlarda tüketilir ve ticari olarak besin takviyesi olarak bulunur. Bir in vitro çalışmada, fenolik epikateşinin emiliminin içecek gıda malzemelerinin içerik bileşiminden etkilenmediği gösterilmiştir.[38] Buna karşılık, Hypericum perforatumL. ürün matrisleri, matris fitokimyasal bileşim ve taşıma özellikleri, yani hücre dışı transfer ve taşıyıcı aracılı veya aktif taşıma gibi farklılıklar nedeniyle quercetinglucosides (rutin ve isoquercitrin) ve hiperosidlerin Caco-2 hücrelerinde taşınmasını etkiler.[39] Bu çalışmada, C. tubulosa, intakt ECH ve ACT'den üç kat daha yüksek transepitelyal taşıma sağlamıştır(Şekil 2 ve Tablo 2). bileşenlerinde olduğunu tahmin ediyoruz.Cistanche tubulosa özüfloridzin duyarlı taşıyıcıyı aktive edin ve/veya hücre içi ECH ve ACT'nin ortadan kaldırılmasını hızlandırın.Cistanche tubulosa özüyüksek dozda, floridzin'e duyarlı taşımanın gücünü büyük ölçüde maskeliyor gibi görünüyordu (Tablo 2). Diyet karbonhidratları[40] ve proteinler[41] gastrointestinal kanaldaki bazı polifenollerle etkileşime girer.Morikawa ve ark.[10] beş iridoid, kankanosid AD ve kankanol, bir monoterpen glikozit, kankanosid E, iki feniletanoid oligoglikozit, kankanosid F ve G ve bir asillenmiş oligo şeker, kankanozun izole edilebileceğini göstermiştir.Cistanche tubulosa özü

şu anda kullanılıyor. İçindeki proteinler de dahil olmak üzere diğer bileşenlerCistanche tubulosa özü, belirsizliğini koruyor. Yukarıdaki spekülasyonla birlikte, diğer bileşenlerin SGLT1 ile etkileşime girip girmediğini ve ECH ve ACT emilimini engelleyip engellemediğini incelemek için tasarlandık.

İn-vivo deneyler, emilim derecesi ile karaciğerden ilk geçiş eğiliminden kaçınma arasında kolayca ayrım yapamaz. Yerinde bağırsak perfüzyon modeli, deney parametrelerinin kolay kontrolü ve diğer organların etkisinin dışlanması ve bozulmamış bağırsak kan beslemesinin korunması nedeniyle in-vivo ve in-vitro modellere göre bir avantaja sahiptir.[22] Floridzin'e duyarlı glikoz taşıyıcısının katılımı, yerinde bağırsak perfüzyon sisteminde değerlendirildi. Şekil 5'te gösterildiği gibi, vücutta emilen ECH ve ACT eşlik eden miktarlarıCistanche tubulosa özü (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10−6 cm/sn insanlarda tamamen emilirken, ilaçlar ve peptitler zayıf bir şekilde emilir (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10−6 cm/s(Tablo 2), hayvanlarda ve insanlarda yüksek oral biyoyararlanım olduğunu gösterir. Crespy ve ark.[43] bir in-situ bağırsak perfüzyon çalışmasında akışın phloridzin ve phloretin arasında önemli ölçüde farklı olmadığını göstermiştir. [44] ayrıca, SGLT1'e karşı yüksek duyarlılığa sahip phloridzinin oral biyoyararlanımının sıçanlarda sadece yüzde 10 olduğunu gösterdiler. Gelecekteki çalışmaların, diyet ekstraktının yüksek dozda oral yoldan verilmesinden sonra ECH'nin biyoyararlanımını ve hepatik ilk geçiş etkisini değerlendirmeye ihtiyacı vardır. Yerinde sonuçlar,Cistanche tubulosa özübozulmamış ECH ve ACT'nin düşük oral absorpsiyonunu iyileştirebilir.

Çözüm

Diyet ve tıbbiCistanche tubulosa özüECH ve ACT'nin bağırsak absorpsiyonunun arttırılması, insan sağlığının daha iyi yönetilmesine hizmet edebilir, ancak floridzin duyarlı taşımanın katılımı azaltılmalıdır.

beyannameler

çıkar çatışması

Yazar(lar) ifşa edecek herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan(lar)ı

Finansman

Bu çalışma kısmen Kinki Üniversitesi'nden Yüksek Teknoloji Araştırma Merkezi tarafından desteklenmiştir.

Teşekkür

Yazarlar, Osamu Muraoka'ya (Kinki Üniversitesi, Osaka, Japonya) ve Toshio Morikawa'ya (Kinki Üniversitesi, Osaka, Japonya) tedarik ettikleri için teşekkür etmek isterler.Cistanche tubulosa özüve saf bileşenler. Çalışma desteği için Masahiro Iwaki'ye (Kinki Üniversitesi) çok minnettarız.

Cistanche tubulosa özüÜrün:% s

Gönderen: ' Ekinakozit ve akteozidin Phloridzin'e duyarlı taşınması ve uygulanmasından sonra bağırsak emilim yolunun değişmesiCistanche tubulosa özü' ileTadatoshi Tanino ve diğerleri

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, pp. 1457–1465,SGLT1 tarafından taşınan feniletanoid glikozitler

Referanslar

1. Tanaka J et al. EtkisiCistanche tubulosa özüçeşitli beyin hastalıkları hakkında. Yemek Tarzı 21 2008; 12: 24-26.

2. Tanaka J et al. Yaşlanma karşıtı işlevleriCistanche tubulosa özü. Yemek Tarzı 21 2008; 12: 27-29.
3. Tanaka J et al. Güzellik ve saç büyüme fonksiyonlarıCistanche tubulosa özü. Yemek Tarzı 21 2008; 12: 29–32.
4. Tanaka J et al. Yağ metabolize edici etkisiCistanche tubulosa özü. Yemek Tarzı 21 2008; 12: 30–33.
5. Yoshizawa F ve ark. Cistanche tubulosa Schrenk (Kanca) f.II'nin bileşenleri. yeni bir feniletanoid glikozit ve yeni bir neolignan glikozitin izolasyonu ve yapısı. Kimya Eczacı Boğa 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M et al. Cistanche tubulosa'dan vazorelaksan aktiviteye sahip feniletanoid oligoglikozitler ve açillenmiş oligoşekerler. Bioorg Med Kimya 2006; 14: 7468-7475.
7. Tu PF ve ark. Herba örneklerinin feniletanoid glikozitlerinin RP-HPLC ile analizi. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294–300.
8. Lei L ve diğerleri. Köpeğin gastrointestinal sisteminde Herba cistanches'ten feniletanoid glikozitlerin metabolik düzenlenmesi. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432-435.
9. Geng X ve diğerleri. Parkinson hastalığının fare MPTP modelinde ekinakozitin nöroprotektif etkileri. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66-74.
10. Morikawa T et al. Çöl bitkisi Cistanche tubulosa'dan hepatoprotektif aktiviteye sahip asillenmiş feniletanoid oligoglikozitler. Bioorg Med Kimya 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD ve ark. Bir kemirgen periodontitis modelinde syringa Vulgaris bitki hücre kültürleri ile biyoteknolojik olarak saflaştırılmış verbascoside'ın etkileri. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707-717.
12. Wu YT ve ark. LC-MS/MS kullanılarak Cistanche Deserticola ve Boschniakia rossica'da acteoside ve serbest hareket eden sıçanlarda farmakokinetiğinin belirlenmesi. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89-95.
13. Matthias A ve ark. Ekinezyadan alkilamidler ve kafeik asit konjugatlarının bir caco-2 hücre tek katmanlı modeli kullanılarak geçirgenlik çalışmaları. J Clin Eczacılık Terapisi 2004; 29: 7-13.
14. Jia C ve diğerleri. Ultraviyole algılamalı ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile sıçan serumunda ekinakozitin belirlenmesi ve farmakokinetik ve biyoyararlanımına uygulanması. J Kromatogr 2006; 844: 308-313.
15. Kardinali A ve ark. Zeytin değirmeni suyundan verbascosides: bir in vitro sindirim/kako-2 model sistemi kullanılarak biyoerişilebilirliklerinin ve bağırsak alımının değerlendirilmesi. J Gıda Bilimi 2011; 176: H48–H54.
16. Jia C ve diğerleri. Sıçanlarda iyi bir antioksidan olan ekinakozit metabolizması: safra metabolitlerinin izolasyonu ve tanımlanması. İlaç Metab Bertaraf 2009; 37: 431-438.
17. Najar IA ve ark. Bazı fito-bileşenler tarafından P-glikoprotein ATPaz aktivitesinin modülasyonu. Phytother Res 2009; 24: 454-458.
18. Walgren RA ve ark. Diyet flavonoid kuersetin 4′-beta-glukozitin insan bağırsak caco -2 hücre tek katmanları boyunca apikal çoklu ilaç direnci ile ilişkili protein-2 tarafından akışı. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830-836.
19. Walgren RA ve ark. Sodyum bağımlı glikoz taşıyıcı SGLT1 tarafından diyet flavonoid kuersetin 4′-beta-glukosidazın hücresel alımı. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837-843.
20. Mihara K et al. Sıçanlarda eperisonun bağırsakta ilk geçiş metabolizması. Eczacılık Res 2001; 18: 1131-1137.
21. Isacchi B ve ark. İki nöropatik ağrı modelinde verbascosidin antihiperaljezik aktivitesi. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594-601.

22. Cook TJ et al. Sıçanlarda tek geçişli bağırsak perfüzyon yöntemi kullanılarak klorpirifosun bağırsak geçirgenliği. Toksikoloji 2003; 184: 125-133.

23. Kumar YS et al. P-glikoprotein ve sitokrom P-450-aracılı bitkisel ilaç etkileşimi. İlaç Metabolizması İlaç Etkileşimi 2010; 25: 3-16.
24. Walle Birleşik Krallık ve diğerleri. Genistein-7-glukozitin insan bağırsak CACO-2 hücreleri tarafından taşınması: MRP2 için potansiyel bir rol. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45-56.
25. İto K ve ark. İlaç taşıyıcılarının apikal/bazolateral yüzey ekspresyonu ve vektörel ilaç taşınmasındaki rolü. Eczacılık Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L ve ark. Bağırsak absorpsiyonunun değerlendirilmesinde Caco-2 hücre kültürleri: birlikte uygulanan bazı ilaçların ve doğal bileşiklerin biyolojik matrislerdeki etkileri. (Helsinki Üniversitesi, Finlandiya, 2006) Akademik Tez, s. 1-66.
27. Scambia G ve ark. Quercetin, çok ilaca dirençli MCF-7 insan meme kanseri hücre dizisinde adriamisinin etkisini güçlendirir: olası bir hedef olarak P-glikoprotein. Kanser Chemother Pharmacol 1994; 34: 459-464.
28. Choi DH ve ark. Bir antioksidan olan mirisetinin, losartan ve aktif metaboliti EXP-3174'nin farmakokinetiği üzerindeki etkisi, sıçanlarda: sitokrom P450 3A4, sitokrom P450 2C9 ve P-'nin olası rolü mirisetin tarafından glikoprotein inhibisyonu. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908-914.
29. Tanino T ve ark. Paklitaksel-2′-etilkarbonat ön ilacı, ilaç sitotoksisitesini artırmak için P-glikoprotein aracılı hücresel akışı engelleyebilir. Eczacılık Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC ve ark. Sağlıklı ileostomi gönüllülerinde diyet kuersetin glikozitleri ve kuersetin emilimi. J Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL ve ark. Bağırsak glikoz emiliminin yayıcı bileşenine, GLUT2'nin fırça tahtası zarına glikoz kaynaklı alımı aracılık eder. Biochem J 2000; 350: 155-162.
32. Madde K et al. Endojen plazma membran proteinlerinin sınıflandırılması, kültürlenmiş insan bağırsak epitel hücrelerinde (Caco-2) iki bölgeden meydana gelir. Hücre 1990; 60: 429-437.
33. Mahraoui L et al. Hücre büyümesi ve glikoz tüketimi ile ilgili olarak Caco-2 hücre klonlarında SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 ve GLUT5 heksoz taşıyıcı mRNA'larının varlığı ve farklı ifadesi. Biochem J 1994; 298: 629-633.

34. Mesonero J ve ark. Fruktoz taşıyıcı GLUT 5'in Cac-2 hücrelerinde şekere bağlı ifadesi. Biochem J 1995; 312: 757-762.

35. Walgren RA ve ark. Quercetin ve glukozitlerinin insan bağırsak epitelyal Caco-2 hücreleri boyunca taşınması. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721-1727.
36. Yoshikawa T ve ark. Fare gastrointestinal sistemi boyunca heksoz taşıyıcılarının (SGLT1, GLUT1, GLUT2 ve GLUT5) karşılaştırmalı ifadesi. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L et al. Limon mineçiçeğinden bir fenilpropanoid glikozit olan verbascoside'ın fosfolipid model membranları üzerindeki etkileri. Kimyasal Fizik Lipidler 2010; 163: 190–19.
38. Neilson AP ve ark. Çikolata matrisi bileşiminin kakao flavan-3-ol biyoerişilebilirliği ve insanlarda biyoyararlanımı üzerindeki etkisi. J Tarım Gıda Kimyası 2009; 57: 9418-9426.
39. Gao S et al. Sarı kantaron ürünlerindeki son derece değişken fenolik içerikleri, bunların insan bağırsağı Caco-2 hücre modelinde taşınmalarını etkiler: ürün standardizasyonu için farmasötik ve biyofarmasötik gerekçe. J Tarım Gıda Kimyası 2010; 58: 6650-6659.
40. Schramm DD ve ark. Kakao flavanollerinin emilimi ve farmakokinetiği üzerine gıda etkileri. Yaşam Bilimi 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C ve diğerleri. Etanol ve polifenolik içermeyen şarap matrisi, insan bağırsak Caco-2 hücrelerinin farklılaşmasını uyarır. Prosiyanidin açısından zengin bir üzüm çekirdeği ekstresi ile ilişkilerinin etkisi. J Tarım Gıda Kimyası 2005; 53: 5541-5548.
42. Artursson P et al. İnsanlarda oral ilaç absorpsiyonu ile insan iç epitelyal (Caco-2) hücrelerinde görünen ilaç geçirgenlik katsayıları arasındaki korelasyon. Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V ve ark. Sıçanlarda kersetin, floretin ve bunların glukozitlerinin bağırsak emiliminin karşılaştırılması. J Nutr 2001a; 131: 2109-2114.
44. Crespy V ve ark. Sıçanlarda phloretin ve phloridzinin biyoyararlanımı. J Nutr 2001b; 131: 3227-3230.