Cistanche Deserticola'dan Polisakkaritlerin Lenfosit Proliferasyonunu Teşvik Edici Etkisi ve Mekanizmasının Ön Araştırması

Yöntemler

Farelerde dalak lenfositlerinin çoğalmasını tespit etmek için MTT tahlili kullanıldı. Bağışıklığı zayıflamış hayvanların hayvan modellerini kopyalamak için siklofosfamid (Cy) kullanıldı ve normal ve bağışıklığı zayıflamış hayvanların dalak ve timus endeksleri ölçüldü. İnterlökin-2'nin (IL-2) aktivitesi timosit çoğalma tahlili ile ölçüldü. Sonuçlar: Cistanche Deserticola polisakkariti, mitojenle (ConA ve LPS) aktifleştirilmiş lenfositlerin ve aktive edilmemiş normal hücrelerin proliferasyonunu önemli ölçüde teşvik etti ve lenfositlerde IL-2 salgılanmasını teşvik etti. İntraperitoneal uygulama, Cistanche Deserticola polisakaritinin normal ve bağışıklığı baskılanmış farelerin dalak indeksini önemli ölçüde arttırdığını ve ayrıca Cy'nin neden olduğu timus indeksinin azalması üzerinde önemli bir antagonistik etkiye sahip olduğunu gösterdi. Sonuç: Cistanche Deserticola polisakarit farelerde dalak lenfositlerinin proliferasyonunu önemli ölçüde destekleyebilir, bu da onun IL-2 salgılanmasını teşvik etmesiyle ilişkili olabilir.

Çölde yaşayan cistanche

[Anahtar kelimeler]Cistanche Deserticola polisakkariti; Dalak indeksi; Timus indeksi; Lenfosit çoğalması; İnterlökin-2

Bitki polisakkaritleri, yaygın immünomodülatör etkileri ve nispeten düşük toksisiteleri nedeniyle yaygın ilgi görmüştür [1]. "Çöl Ginseng'i" olarak bilinen Cistanche Deserticola ma, geniş farmakolojik etkileri olan Orobaceae familyasına ait bir bitki olan Cistanche Deserticola'nın pullu, kuru, etli sapıdır. Su kaynatma, makrofajların fagositik yüzdesini ve fagositik indeksini önemli ölçüde artırabilir. Daha ileri çalışmalar, materyal temelinin Cistanche Deserticola'nın toplam polisakkariti olduğunu göstermiştir [3]. Zeng Qunli ve ark. [4], Cistanche Deserticola polisakaritinin tek bir bileşeninin in vitro fare timik lenfositleri üzerinde önemli bir proliferatif etkiye sahip olduğunu bulmuşlardır. Cistanche Deserticola polisakkaritinin lenfosit çoğalması üzerindeki etkisi in vivo ve in vitro olarak gözlendi.

Cistanche Deserticola'nın moleküler formülü

1Materyal ve Yöntemler

1.1 İlaçlar ve reaktifler

Cistanche Deserticola'dan elde edilen polisakkarit, Tıp Fakültesi Tıp ve Bitkilendirme Enstitüsü Bitki ve Kimya Bölümü tarafından sağlanmaktadır. Cistanche ekstraktı tozundan ekstrakte edilir ve polisakkarit içeriği %87'dir.

Cistanche özü tozu

İn vivo deneyleri kullanmadan önce, fizyolojik salinle gerekli konsantrasyona kadar çözün ve seyreltin ve sterilizasyon için kaynatın. İn vitro deneylerin kullanılmasından önce, RPMI-1640 kültür ortamı çözülüp seyreltildi ve yüksek basınçlı sterilizasyon gerçekleştirildi. Lipopolisakkarit (LPS), konkanavalin (ConA), deksametazon (DEX) ve MTT'nin tümü Sigma Corporation'ın ürünleridir. Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd.'nin Çin-Amerikan ortak girişimi olan siklofosfamid, Fetal sığır serumu, RPMI1640 kültür ortamı ve trypsin'in tümü Gibco ürünleridir. Diğer reaktifler yerli analitik reaktiflerdir.

1.2 Hayvanlar

BALB c genç fareler (SPF seviyesi), Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. tarafından sağlanmaktadır [SCXK (Beijing) 2002-2003]. SPF sınıfı hayvanlar bir odada büyütülür ve serbestçe beslenir ve içilir.

1.3 Cihaz

Multikan Ascent enzim markeri, Thermo Electron Company, ABD'nin bir ürünüdür. Leici PHS-3B Hassas pH Ölçer, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 karbondioksit inkübatörü, NAPCO, ABD. BCN-1360 Ultra Temiz Tezgah, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Ters Mikroskop, Chongqing Optoelektronik Instrument Co., Ltd.

1.4 Yöntem

1.4.1 Lenfosit çoğalması üzerindeki etki [5]:

BALB/c farelerinden dalak lenfositlerinin rutin hazırlanması, hücre konsantrasyonunu 1 x 107 mL'ye ayarlamak için RPMI-1640 kullanılarak, 96 kuyucuklu bir kültür plakasına aşılandı ve her kuyucuğa μL-50 100 hücre süspansiyonu eklendi. Farklı konsantrasyonlarda Cistanche Deserticola polisakkaritiyle birlikte kültürlendi (aktive edilmemiş lenfositlerin çoğalması için son Cistanche Deserticola polisakkarit konsantrasyonu sırasıyla 6,25, 12,5, 25, 50 ve 100 mg/L idi; ConA ile aktifleştirilmiş T lenfositlerin çoğalması için son Cistanche Deserticola polisakkarit konsantrasyonu 3,9 idi, sırasıyla 7,8, 15,6, 31,2 ve 62,5 mg/L; ve LPS ile aktifleştirilmiş B lenfositlerinin çoğalması için nihai Cistanche Deserticola polisakarit konsantrasyonu sırasıyla 1,56, 3,13, 6,25, 12,5 ve 25 mg/L idi ve kontrol olarak ConA veya LPS, RPMI-1640 ortamı kullanıldı. Her deliğin toplam hacmi 200 μL'dir. Mitojen ConA ve LPS eklenirken (kontrol, ConA veya LPS'nin karşılık gelen konsantrasyonlarını içeren RPMI-1640'tir), her ikisinin de nihai konsantrasyonları sırasıyla 2,5 mg/L ve 10 mg/L'dir. Çeşitli işlemler için üç paralel delik açıldı. Kültür plakasını 68 saat boyunca 37 derece, %5 CO2 ile doymuş nem inkübatörüne yerleştirin, MTT ekleyin ve kültüre 4 saat devam edin. Proliferasyonu tespit etmek için MTT yöntemini kullanarak A540 nm değerini bir enzim işaretleyiciyle ölçün. Her grubu karşılaştırırken A540nm değerini aşağıdaki formüle göre lenfosit proliferasyon hızına dönüştürün:lenfosit proliferasyon hızı=AA örneği A kontrol × %100.

Cistanche'nin Etkileri - Bağışıklığı Artırın

1.4.2 Normal farelerde bağışıklık organlarının ağırlığı üzerindeki etki [6,7]:

Genç BALB c fareleri (erkek, 4 haftalık, vücut ağırlığı 10-15 g), her grupta 11 sıçan olacak şekilde rastgele bir boş kontrol (tuzlu su) grubuna ve farklı dozaj gruplarına (125 mg (kg · bw) ve 250 mg (kg · bw)) ayrıldı. İlaç birbirini takip eden 7 gün boyunca günde bir kez intraperitoneal olarak uygulandı. Fareler servikal dislokasyondan sonra öldürüldü. Dalak ve timüs alınarak yağ ve fasya dokusu çıkarıldı ve yüzeydeki sıvı filtre kağıdıyla kurutuldu. Tartıldıktan sonra dalak indeksi=100 × Dalak ağırlığı (mg) Vücut ağırlığı (mg); Hthymusindex=100 × Timus Ağırlığı (mg) Vücut Ağırlığı (mg). Sırasıyla her 100 mg vücut ağırlığı için dalak indeksini ve timus indeksini hesaplayın.

1.4.3 Bağışıklığı baskılanmış farelerde bağışıklık organı ağırlığı üzerindeki etki [7,8]:

Genç BALB c sıçanları (erkek, 6 haftalık, vücut ağırlığı 15-20 g) vücut ağırlığına göre rastgele 12 gruba ayrıldı. Normal kontrol grubu (eşdeğer hacimde fizyolojik salinin intraperitoneal enjeksiyonu) dışında, diğer gruplara günlük intraperitoneal olarak 50 mg (kg · bw) Cy enjekte edildi ve test ilacı solüsyonu intraperitoneal olarak uygulandı [125 ve 250 Mg (kg · bw)], normal kontrol grubu ve model gruba art arda 13 gün boyunca günde bir kez aynı hacimde fizyolojik salin verildi. Hayvan ağırlığındaki değişiklikler deney sırasında son uygulamadan . 24 saat sonra gözlemlendi, dalak ve timus endeksleri 1.4.2'deki yöntemin aynısı kullanılarak ölçüldü ve hesaplandı.

1.4.4 IL-2 etkinliği üzerindeki etkisi:

① IL-2 indüksiyonu [9]: 96 kuyucuklu bir hücre plakasındaki her kuyucuğa 50 ekleyin μ L Cistanche Deserticola polisakaritinin farklı konsantrasyonları (son konsantrasyonlar sırasıyla: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5, 125 mg/L, kontrol kuyucuğuna μ L kültür ortamına 50 mg/L ekleyin) ve 50 μ L ConA (son konsantrasyon 5 mg/L), oyuk başına 1 tane daha × 106 dalak hücresi ekleyin. 37 derece, %5 CO2 doymuş nem inkübatöründe 24 saat inkübe edin, 2500 rpm'de 20 dakika santrifüj edin ve hücre süpernatanını alın ve bekleme için - 20 derecede saklayın. ② IL-2 aktivite tespiti [9,10]: Temel yöntem literatüre [9] dayanmaktadır ve literatüre [10] göre uygun ayarlamalar yapılmaktadır. BALB c fare timosit süspansiyonunun geleneksel hazırlanması, 96 oyuklu hücre kültürü plakası, oyuk başına 1 aşılama × 106 timosit, oyuk başına 50 hücre eklenirken μ L ConA (son konsantrasyon 2,5 mg/L) ve ardından hazırlanan IL-2 süpernatantı 50 μ L (boş kontrol deliği μ L kültür çözeltisine 50 ekleyin), birlikte 54 saat inkübe edin, MTT ekleyin, 4 süre inkübasyona devam edin saat, 1000 rpm'de 10 ila 15 dakika santrifüj edin, süpernatantı atın ve kuyucuk başına 100 μ L DMSO ekleyin, 8 dakika boyunca bir mikro osilatörle çalkalayın ve bir enzim işaretleyiciyle A540 nm değerini ölçün.

1.5 İstatistiksel Analiz

Veriler ortalama ve standart sapma (x±s) olarak ifade edildi. Verilerin derlenmesinde Microsoft Excel yazılımı kullanılmış ve t-testi yapılmıştır. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. Sonuçlar

2.1 Lenfosit çoğalması üzerindeki etki

Tablo 1'den görülebileceği gibi, 25 mg/L'nin üzerinde bir konsantrasyonda in vitro kültürlenen fare dalak lenfositlerinin kültür ortamına Cistanche Deserticola polisakaritinin eklenmesi, lenfosit proliferasyonunu önemli ölçüde uyarabilir; bu da Cistanche Deserticola polisakkaritinin kendisinin mitotik bir etkiye sahip olduğunu gösterir. Aynı zamandaTablo 2 ve Tablo 3'te CDPS'nin ConA'nın indüklediği T lenfositlerin veya LPS'nin indüklediği B lenfositlerin çoğalması üzerinde önemli bir teşvik edici etkiye sahip olduğu görülebilir..

Tablo.1 Cistanche Deserticola polisakkaritinin aktive edilmemiş lenfositlerin çoğalması üzerindeki etkisi (x ±s, n =3)

Not: Kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, ＊P<0.05.

Tab.2 Cistanche Deserticola polisakkaritinin ConA tarafından indüklenen T lenfositlerin çoğalması üzerindeki etkisi (x ±s, n =3)

 

Not: ConA grubuyla karşılaştırıldığında, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 Cistanche Deserticola polisakkaritinin LPS tarafından indüklenen B lenfositlerin proliferasyonu üzerindeki etkisi (x ±s, n =3)

Not: LPS grubuyla karşılaştırıldığında, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 Normal farelerde bağışıklık organlarının ağırlığına etkisi

Tablo 4'ten görülebileceği gibi,Cistanche Deserticola polisakkariti normalBALB/cc genç sıçanların dalak indeksini önemli ölçüde artırabilir ancak timus bezini etkilemez.

2.3 Bağışıklık sistemi baskılanmış farelerde bağışıklık organı ağırlığı üzerindeki etki

Tablo 5'ten,Cy immünsüpresif gruptaki farelerin dalak ve timus organ indekslerinin kontrol grubuna göre daha düşük olduğu ve Cistanche Deserticola polisakkaritinin (125, 250 mg/kg) dalak ve timus indekslerini önemli ölçüde iyileştirebildiği görülebilir.

2.4 IL-2 etkinliği üzerindeki etkisi

Tablo 6'dan görülebileceği gibi,Cistanche Deserticola polisakkaritinin dozu 7,82 mg/L'ye ulaştığında, fare dalak hücrelerinden IL-2 salınımını önemli ölçüde artırabilir.

Tab.4 Cistanche Deserticola polisakkaritinin normal farelerde bağışıklık organlarının ağırlığı üzerindeki etkisi (x ±s, n =11)

Not: kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, ＊＊P<0.01.

Tab.5 Bağışıklığı baskılanmış farelerde Cistanche Deserticola polisakkaritinin bağışıklık organlarının ağırlığı üzerindeki etkisi ( x ±s, n =12)

Not: kontrol grubuyla karşılaştırıldığında ## P < 0,01; model grubuyla karşılaştırıldığında, ＊＊P<0.01.

Tab.6 Cistanche Deserticola polisakkaritinin farelerde dalak lenfositleri tarafından IL-2 üretimi üzerindeki etkisi( x ±s, n =3)

Not: kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, ＊＊P<0.01.

3. Tartışma

Farelerde ConA ve LPS'nin neden olduğu dalak lenfosit proliferasyonu, T ve B lenfositlerinin fonksiyonunu tespit etmeye yönelik bir in vitro deneydir ve spesifik bağışıklık yeteneğinin önemli bir göstergesidir. Araştırmalar, Cistanche Deserticola polisakkaritinin son konsantrasyonu 25 mg/L'nin üzerinde olduğunda, lenfosit proliferasyonunu önemli ölçüde artırabildiğini, bunun da belirli bir mitotik etkiye sahip olduğunu gösterdiğini göstermiştir. Mitojenin (ConA veya LPS) varlığında, daha küçük bir Cistanche Deserticola polisakarit dozu, vücudun önemli proliferatif aktivite göstermesi durumunda iyileşme sağlayabilir. ConA ve LPS'nin esas olarak sırasıyla T lenfositlerin veya B lenfositlerin proliferasyonunu indüklediğini biliyoruz. Çalışmalar göstermiştircistanche tozunun sağlığa faydaları: Cistanche Deserticola polisakkariti hem T lenfosit proliferasyonunu hem de B lenfosit proliferasyonunu teşvik edebilir, ancak B lenfositleri üzerindeki proliferatif etkisi T lenfositleri üzerindeki proliferatif etkisinden önemli ölçüde daha güçlüdür.

Cistanche tozunun sağlık yararları-Improve bağışıklık

Cistanche Geliştirilmiş Bağışıklık ürünlerini görüntülemek için buraya tıklayın

【Daha fazlasını isteyin】 E-posta: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692

Timüs ve dalak hayvanlardaki ana bağışıklık organlarıdır. Dalaktaki bağışıklık hücreleri çoğunlukla olgun B lenfositlerden oluşurken, timustaki bağışıklık hücreleri çoğunlukla olgunlaşmamış T lenfositlerden oluşur. Timus ve dalak indeksleri bağışıklık organlarının gelişimini ve bağışıklık hücrelerinin fonksiyonel durumunu yansıtabilir. Cistanche Deserticola polisakaritinin intraperitoneal enjeksiyonu, normal ve bağışıklığı baskılanmış farelerin dalak indeksini önemli ölçüde artırabilir ve farelerde Cy'nin neden olduğu timik atrofi üzerinde önemli bir antagonistik etkiye sahiptir.

Cistanche Deserticola polisakaritinin normal hayvanlarda timik indeks üzerinde önemli bir etkisi yoktur; bu, Cistanche Deserticola polisakkaritinin T lenfositlerden ziyade B lenfositlerinin çoğalmasını teşvik ettiği in vitro deneylerin sonuçlarıyla tutarlıdır.

Cyakınımdaki istanche eki-İyileştirmebağışıklık

IL-2, hücre döngüsünün G1 fazından S fazına kadar T lenfositleri tarafından üretilen bir sitokindir. Otokrin büyüme faktörü olarak görev yapan önemli bir T hücresi büyüme faktörüdür. Ek olarak IL-2, B hücresi proliferasyonunu ve antikor sentezini destekleyebilir [11,12]. Cistanche Deserticola polisakkariti, dalak lenfositlerinin çoğalmasını teşvik eden Cistanche Deserticola polisakaritiyle açıkça ilişkili olan, lenfositlerden IL-2'nin salınmasını teşvik eder.

Tıbbi araştırmalar, Cistanche'nin lenfositleri aktive edebilen ve vücudu iyileştirebilen polisakkaritler, Ekinakozitler ve Acteoside içerdiğini göstermektedir; Cistanche Feniletanoid Glikozitlerin fonksiyonel bileşenleri, 60 Co gama ışını hasarından sonra hücre iyileşmesi üzerinde önemli bir etkiye sahiptir ve ayrıca radyasyon hasarına karşı bağışıklık fonksiyonunu iyileştirebilir. Cistanche Deserticola takviyelerini günlük olarak almak, bağışıklığı iyileştirme etkisine ulaşabilir.