Formononetin, JAK/STAT Modülasyonu ve Bağışıklık Yeniden Dengeleme Yoluyla Otoimmün Prostatiti Azaltır: CP/CPPS ve TCM Cistanche Ekstresi Yardımcı Maddelerinin Etkileri
Dec 10, 2025
Amaç:Formononetinin (FN), deneysel otoimmün prostatitin (EAP) fare modelinde JAK/STAT sinyal yolları yoluyla T yardımcı tip 1 (Th1) hücre farklılaşmasını ve makrofaj polarizasyonunu nasıl düzenlediğini araştırmak.
Yöntemler:Kırk erkek obez olmayan diyabetik (NOD) fare rastgele dört gruba atandı: normal kontrol, EAP modeli kontrolü, düşük dozda FN (LFN, 50 mg/kg) ve yüksek dozda FN (HFN, 100 mg/kg). EAP, son üç grupta tam Freund adjuvanı (CFA) içinde emülsiyon haline getirilmiş prostat antijenlerinin (PAg'ler) deri altı enjeksiyonu yoluyla indüklendi. Modellemenin ardından LFN ve HFN gruplarına sırasıyla 50 veya 100 mg/kg/gün dozunda intragastrik FN uygulandı; normal ve model kontrollere karboksimetilselüloz sodyum (CMC-Na) verilmiştir. Tedavinin başlatılmasından sonraki 42. günde farelere ötenazi uygulandı ve dokular toplandı. Prostat patolojisi HE boyama ile değerlendirildi; Prostattaki Th1 hücre farklılaşması ve makrofaj polarizasyonu, immünofloresan çift boyama (interferon- [IFN-] içeren CD4; indüklenebilir nitrik oksit sentaz [iNOS] ve CD206) ile değerlendirildi. Dalaktaki Th1 hücre ve makrofaj oranları akış sitometrisi ile, serum IFN- ve tümör nekroz faktörü- (TNF-) seviyeleri ise ELISA ile ölçüldü. Prostat dokusunda fosforile edilmiş (p)-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1 ve STAT1, Western blot ile belirlendi.
Sonuçlar: Model kontrollerle karşılaştırıldığında, her iki FN dozu da glandüler epitel hücrelerinin daha düzenli düzenlenmesine yol açtı, prostat inflamasyon skorlarını önemli ölçüde azalttı (P < 0.05), Th1 hücrelerinin ve M1 makrofaj belirteçlerinin oranını azalttı (P < 0.05) ve prostat ve dalak dokularında M2 makrofaj belirteçlerinin artmasına (P < 0.05) yol açtı. Serum IFN- ve TNF- düzeyleri LFN ve HFN gruplarında belirgin şekilde azaldı (P < 0.05). Moleküler düzeyde, prostat dokusunda p-JAK1/JAK1, p-JAK2/JAK2 ve p-STAT1/STAT1 oranlarının tümü önemli ölçüde azaldı (P < 0.05), bu da FN'nin JAK/STAT sinyalini modüle ederek, inflamasyonun çözümlenmesini teşvik ederek ve bağışıklık dengesini yeniden sağlayarak EAP'de terapötik etkiler gösterdiğini gösterir.
Çözüm:FN, JAK/STAT sinyal yollarını inhibe ederek ve Th1 farklılaşmasını ve makrofaj polarizasyonunu düzenleyerek EAP'yi hafifletir. Bu bulgular, bağışıklık modülasyonu ve pelvik ağrı desteği için Cistanche özü takviyeleri gibi geleneksel Çin tıbbı (TCM) yardımcı maddelerine artan ilgiyle birlikte, titiz, hakemli ortamlarda daha fazla onaylanmaya değer çok hedefli bir strateji önermektedir.
Anahtar Kelimeler:formononetin;otoimmün prostatit; inflamatuar yanıt; JAK/STAT sinyal yolları; fareler;TCM bitkisi Cistanche özü takviyesi; bağışıklık modülasyonu
TCM bitkisi Cistanche özü takviyesi
Wecistanche Destek Hizmeti-Çin'deki en büyük cistanche ihracatçısı:
E-posta:wallence.suen@wecistanche.com
giriiş
Kronik prostatit/kronik pelvik ağrı sendromu (CP/CPPS) erkeklerin %5-10'unu etkiler ve tüm prostatit vakalarının yaklaşık %90'ını oluşturur. Özellikle genç ve orta yaşlı erkekler arasında yaygındır; öncelikli olarak alt karın, perine ve pelvik bölgede ağrıyla kendini gösterir; buna sıklıkla alt idrar yolu semptomları ve bazen de erektil disfonksiyon eşlik eder. Mevcut birinci basamak tedaviler, steroid olmayan antiinflamatuar ilaçları (NSAID'ler), antibiyotikleri ve -adrenerjik reseptör blokerlerini tek başına veya kombinasyon halinde içerir. Ancak yüksek nüks oranları birçok hastanın bu rejimlerden memnun olmamasına yol açmaktadır. Bu nedenle, yeni terapötik müdahalelere ve CP/CPPS patogenezine ilişkin daha derin bir anlayışa acilen ihtiyaç vardır.
CM otu Cistanche özü takviyesi Faydaları
Giderek artan sayıda kanıt, immün düzensizliğin CP/CPPS gelişiminde kritik bir rol oynadığını göstermektedir. Hastalar genellikle prostat dokusunda yoğun T lenfositleri ve monosit infiltrasyonu sergiler ve eksprese edilen prostat salgılarında, CD4+ T lenfositleri ve makrofajların hakim olduğu yüksek lökositler sergiler. Klinik öncesi veriler ayrıca immünosüpresif stratejilerin CP/CPPS'deki inflamasyonu ve ağrıyı hafifletebileceğini düşündürmektedir. Bu nedenle lökosit infiltrasyonunun ve inflamatuar yanıtın hedeflenmesi semptomların giderilmesinde etkili olabilir. Çeşitli TCM bitkilerinde bulunan önemli bir biyoaktif izoflavon olan Formononetin (FN), antioksidan ve antiinflamatuar özelliklere sahiptir. FN'nin CP/CPPS'yi iyileştirip iyileştiremeyeceği belirsizliğini koruyor. Burada FN'nin terapötik etkisini bir fare EAP modelinde değerlendirdik. Bütünleştirici yaklaşımlara artan klinik ilgiye paralel olarak, TCM bitkisi Cistanche ekstresi takviyelerinin pelvik ağrı sendromlarında immünomodülatör ve antiinflamatuar destek için araştırıldığını belirtiyoruz; Bu çalışmanın odak noktası olmasa da, FN'yi daha geniş bir Geleneksel Çin Tıbbı temelli tedavi ortamı içinde bağlamsallaştırıyorlar.
Malzemeler ve Yöntemler
Hayvanlar
6-7 haftalık erkek NOD fareleri, Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Deneysel Hayvan Merkezi'nden (SUTCM) (lisans SYXK [Hu] 2020-0009; sertifika SCXK [Jing] 2021-0006) elde edildi. Hayvanlar 12 saat aydınlık/12 saat karanlık döngüsü altında, istenildiği kadar yiyecek ve suya erişim sağlanacak şekilde barındırıldı. Tüm prosedürler SUTCM Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı (Onay No. PZSHUTCM2301040003).
Reaktifler ve İlaçlar
Formononetin (MedChemExpress, HY‑N0183); tam Freund adjuvanı (CFA; Sigma‑Aldrich, F5881); fosfat tamponlu salin (PBS); sığır serum albümini (BSA); ultra hassas ECL kitleri (Shanghai YaYme Biotech, CB012, PS113, SQ201); p‑JAK1, JAK1, p‑JAK2, JAK2, p‑STAT1, STAT1, GAPDH ve DAPI'ye karşı antikorlar (Hücre Sinyal Teknolojisi, #74129, #3344, #3776, #3230, #9167, #9172, #5174, #8961); RIPA tamponu ve BCA protein tahlili (Thermo Fisher Scientific, 89901, A55866); HE boyama kiti (Servicebio, GP1031); iNOS ve CD206 (Abcam, ab178945, ab125028); APC fare karşıtı CD3, FITC fare karşıtı CD4, PE fare karşıtı IFN‑ (BioLegend, 100235, 100405, 505807).
Aletler
Elektroforez aparatı (E11001, Bio‑Rad); lazer taramalı eş odaklı mikroskop (LSM 780, Zeiss); CytoFLEX akış sitometresi (Beckman Coulter).
EAP Modelinin Kurulması
Bir haftalık alıştırmadan sonra fareler dört gruba (n=10) randomize edildi: kontrol, model, FN düşük doz (50 mg/kg) ve FN yüksek doz (100 mg/kg). EAP önceki yöntemlere göre indüklendi. Prostat antijenleri (PAg) içeren süpernatan, Sprague‑Dawley sıçan prostat homojenatından hazırlandı ve CFA ile 1:1 karıştırıldı. 0. ve 28. günlerde farelere, CFA (150 μL/fare) ile emülsifiye edilmiş PAg (300 ug/fare; EAP grupları) veya PBS'nin (kontrol) her iki arka ayak tabanına, alt sırtına ve kuyruk tabanına deri altı enjeksiyonları uygulandı. FN gruplarına günlük olarak intragastrik FN (50 veya 100 mg/kg) verildi; kontrol ve model grupları hacim uyumlu CMC‑Na aldı. Deney 42. günde sona erdi ve ardından insani ötenazi yapıldı.
HE Prostat Dokusunun Boyanması
Prostatlar %4 paraformaldehit içerisinde sabitlendi, kurutuldu, parafine gömüldü ve 5 μm'de kesitler alındı. Kesitler bir HE kiti kullanılarak boyandı ve konfokal mikroskopi ile görüntülendi. Enflamasyon, belirlenen kriterlere göre 0-3 arasında puanlandı; 0, inflamasyon olmadığını ve 3, belirgin inflamatuar hücre infiltrasyonunu gösterdi.
Th1 Hücreleri ve Makrofajlar için Akış Sitometrisi
Tek hücreli süspansiyonlar hazırlandı ve %0,5 BSA içeren PBS içerisinde muhafaza edildi. Yüzey ve hücre içi boyamada APC anti‑CD3, FITC anti‑CD4 ve PE anti‑IFN‑ kullanılarak standart protokoller izlendi. Hücreler 50 ng/mL PMA, 1 ug/mL iyonomisin ve 5 ug/mL brefeldin A ile 37 derecede 4 saat süreyle uyarıldı, ardından hücre içi olarak 4 derecede 30 dakika boyunca boyandı. Veriler bir CytoFLEX'te elde edildi ve FlowJo ile analiz edildi.
Makrofajlar için İmmünofloresan Boyama
Sabit prostat kesitleri parafinden arındırıldı, antijen alımına tabi tutuldu ve 30 dakika boyunca %10 keçi serumu ile bloke edildi. Birincil antikorlar (iNOS, CD206) gece boyunca 4 derecede uygulandı. PBS yıkamalarının ardından florofor etiketli ikincil antikorlar, karanlıkta 37 derecede 1 saat süreyle uygulandı. Çekirdekler, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca DAPI ile karşıt boyandı, ardından PBS yıkamaları yapıldı ve floresans mikroskobu için montaj yapıldı.
Sitokin Ölçümü
Serum IFN‑ ve TNF‑, üreticinin talimatlarına göre ELISA kitleri kullanılarak belirlendi.
Batı Lekesi
Prostat dokuları RIPA tamponunda (proteaz ve fosfataz inhibitörleriyle birlikte) parçalandı. Protein konsantrasyonu BCA tahlili ile ölçüldü. Uygun yüzdede jeller hazırlandı; eşit miktarlarda protein elektroforezlendi ve PVDF membranlarına aktarıldı. Birincil antikorlar (p‑JAK1, JAK1, p‑JAK2, JAK2, p‑STAT1, STAT1, GAPDH; tümü 1:1000) gece boyunca 4 derecede inkübe edildi, ardından yıkama ve HRP-konjuge sekonder antikorlarla (1:5000) 1,5 saat inkübasyon yapıldı. Bantlar geliştirilmiş kemilüminesans ile görselleştirildi ve görüntülendi. Nispi protein ekspresyonu dansitometrik analizle hesaplandı.
İstatistiksel Analiz
Veriler GraphPad Prism 9.0 kullanılarak analiz edildi. Çoklu grup karşılaştırmaları için tek yönlü ANOVA kullanıldı. Veriler ortalama ± SD olarak sunulmuştur; P 0,05'ten küçük veya ona eşit istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.
Tartışma
Bu çalışma, formononetinin histopatolojik inflamasyonu hafiflettiğini, Th1 polarizasyonunu baskıladığını, makrofaj fenotiplerini pro-inflamatuar M1'den pro-çözünür M2'ye kaydırdığını ve bir EAP fare modelinde prostat dokusunda JAK1/2-STAT1 fosforilasyonunu aşağı regüle ettiğini göstermektedir. Azalan sistemik IFN‑ ve TNF‑, FN'nin antiinflamatuar ve immün düzenleyici etkilerini daha da destekler. Bu sonuçlar, korunmuş anti-inflamatuar mekanizmaların altını çizerek, iskemi-reperfüzyon ve ateroskleroz modellerinde FN'nin JAK/STAT yolaklarını modüle ettiğine ilişkin önceki raporlarla uyumludur. Geleneksel Çin Tıbbı'nın daha geniş bağlamında, bütünleştirici bakım yolları bazen immünomodülasyon, yorgunluk ve ürogenital destek açısından araştırılan Cistanche (Rou Cong Rong) özü takviyeleri gibi botanikleri içerir. Her ne kadar Cistanche ekstraktı burada test edilmemiş olsa da gelecekteki kontrollü çalışmalar, JAK/STAT bağlantılı inflamasyon ve pelvik ağrı sonuçları üzerindeki potansiyel sinerjiyi araştırmak için FN'yi standartlaştırılmış TCM bitkisi Cistanche ekstraktı takviyeleri ile karşılaştırabilir veya birleştirebilir. Herhangi bir klinik çeviri kanıta dayalı standartlara, kalite kontrollü kaynak kullanımına ve güvenlik izlemeye uygun olmalıdır.
Sonuçlar
Formononetin, JAK/STAT sinyalini inhibe ederek ve Th1 farklılaşmasını ve makrofaj polarizasyonunu düzenleyerek deneysel otoimmün prostatiti hafifletir. Bu bulgular, CP/CPPS için immünomodülatör müdahaleler olarak FN'nin ve Cistanche ekstraktı takviyeleri gibi potansiyel olarak yardımcı TCM stratejilerinin daha da geliştirilmesi için mekanik bir mantık sağlar; titiz, hakemli klinik öncesi ve klinik çalışmalarda onaylanmayı beklemektedir.
Referanslar
[1] He SL, Zhang ZJ, Wu JH, ve diğerleri. CP/CPPS'li hastalarda erektil disfonksiyonun psikolojik semptomlar üzerine etkisi. Hunan Normal Üniversitesi Dergisi (Tıp Bilimleri), 2021, 18(5): 27–30.
[2] Polackwich AS, Shoskes DA. Kronik prostatit/kronik pelvik ağrı sendromu: Değerlendirme ve tedavinin gözden geçirilmesi. Prostat Kanseri ve Prostat Hastalıkları, 2016, 19(2): 132–138.
[3] Sun Y, Liu Y, Liu B, ve diğerleri. CP/CPPS için akupunkturun etkinliği: Randomize bir çalışma. Annals of Internal Medicine, 2021, 174(10): 1357–1366.
[4] Franco JV, Turk T, Jung JH, ve diğerleri. CP/CPPS'nin tedavisi için farmakolojik olmayan müdahaleler. Cochrane Sistematik İncelemeler Veritabanı, 2019, 10: CD012551.
[5] Rees J, Abrahams M, Doble A, ve diğerleri. Kronik bakteriyel prostatit ve CP/CPPS'nin tanı ve tedavisi: Bir fikir birliği kılavuzu. BJU International, 2015, 116(4): 509–525.
[6] Pena VN, Engel N, Gabrielson AT, ve diğerleri. CP/CPPS için teşhis ve yönetim stratejileri. İlaçlar ve Yaşlanma, 2021, 38(10): 845–886.
[7] Chen L, Zhang M, Liang C. CP/CPPS: Başka bir otoimmün hastalık mı? İmmünoloji ve Terapi Experimentalis Arşivi, 2021, 69(1): 24.
[8] Murphy SF, Schaeffer AJ, Thumbikat P. Kronik pelvik ağrı sendromunun immün aracıları. Doğa İncelemeleri Üroloji, 2014, 11(5): 259–269.
[9] Appiya SM, Khan FU, Naveed M, ve diğerleri. CP/CPPS için Müdahaleler: Neredeyiz ve sırada ne var? Avrupa Farmakoloji Dergisi, 2019, 857: 172429.
[10] Yu L, Zhang Y, Chen Q, ve diğerleri. Formononetin, JAK2/STAT3 yoluyla serebral iskemi-reperfüzyonla ilişkili inflamasyona karşı koruma sağlar. Biyotıp ve Farmakoterapi, 2022, 149: 112836.
[11] Ma X, Wang J. Formononetin: Nöronları korumaya yönelik bir yol. Bütünleştirici Sinirbilimde Sınırlar, 2022, 16: 908378.
[12] Ma C, Xia R, Yang S, ve diğerleri. Formononetin, ApoE-/- farelerde KLF4-SRA etkileşimi yoluyla aterosklerozu hafifletir. Teranostik, 2020, 10(3): 1090–1106.
[13] Du HX, Yue SY, Niu D, ve diğerleri. Bağırsak mikroflorası, propiyonat yoluyla EAP'de Th17/Treg farklılaşmasını modüle eder. İmmünolojide Sınırlar, 2022, 13: 915218.
[14] Du H, Chen X, Zhang L, ve diğerleri. EAP, farelerde öğrenme-bellek bozukluğuna ve nöroplastik değişikliklere neden olur. Hücresel ve Moleküler Nörobiyoloji, 2020, 40(1): 99–111.
[15] Zhang Y, Feng R, Chen S, ve diğerleri. CXCR7'nin EAP hasarı ve fibroz üzerindeki nedensel etkisi. Uluslararası İmmünofarmakoloji, 2025, 144: 113368.
