Yakın Kızılötesi Spektroskopisi ile Cistanche Tubulosa'da Altı Etkili Bileşenin Hızla Eşzamanlı Belirlenmesi

İletişim: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-posta:audrey.hu@wecistanche.com

Xinhong Wang, Xiaoguang Wang ve Yuhai Guo

Soyut:

Belirli bir bitkide birden fazla etkili bileşenin nicel olarak belirlenmesi, genellikle çok büyük miktarda otantik doğal ürün gerektirir. Bu çalışmada ekinakozid, verbaskosit, mannitol, sukroz, glukoz ve fruktozun eş zamanlı tayini için hızlı ve tahribatsız bir yöntem önerdik.Cistanche tübülozayakın kızılötesi spektroskopisi (NIRS) ile. Yakın kızılötesi dağınık yansıma spektroskopisi (DRS) ve yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), 116 grup Cistanche tubulosa numunesi üzerinde gerçekleştirilmiştir. DRS verileri, standart normal çeşitlilik (SNV) ve çarpımsal dağılım düzeltme (MSC) yöntemleri kullanılarak işlendi. Kısmi en küçük kareler regresyonu (PLSR), Cistanche tubulosa'daki ilgili bileşenler için kalibrasyon modelleri oluşturmak için kullanıldı. Tüm modeller daha sonra kalibrasyonun ortalama karekök hatası (RMSEC), kalibrasyon korelasyon katsayısı (r) hesaplanarak değerlendirildi. Altı kalibrasyon modelinin tümünün r değerlerinin 0.94'ten büyük olduğu belirlendi, bu da her modelin güvenilir olduğunu gösteriyor. Bu nedenle, bu çalışmada rapor edilen kantitatif NIR modelleri, aşağıdaki altı tıbbi bileşenin içeriğini doğru bir şekilde ölçmek için kalifiye olabilir.Cistanche tübüloza.

Anahtar Kelimeler: Cistanche tubulosa; yüksek performanslı sıvı kromatografisi; Yakın kızıl ötesi spektroskopi; Kısmi en küçük kareler

giriiş

cistanche(Hoffmg. Et Link), Orobanchaceae bitki ailesinin çok yıllık bir fanerogamik cinsidir. Cistanche cinsine ait türlerin çoğu, Çin'de binlerce yıldır tıbbi bitki olarak kullanılmıştır; üstün bir tonik olarak bir üne sahip olmak; ve "Çöllerin Ginseng'i" olarak bilinir [1,2].Cistanche tübülozaçok yıllık bitki Tamarix Chinensis'in köklerinin zorunlu bir parazitidir. Çin Farmakopesinde 2005 baskısından Cistanches Herba'nın (Çince adı: Roucongrong) gerçek kaynağı olarak belgelenmiştir [3]. Cistanche türleri üzerinde modern farmakolojik araştırmalar 1980'lerde başlatılmıştır [4]. Farmakolojik araştırmalar, Cistanche bitkilerinin özlerinin, böbrek yetmezliğini ve yaşlılık kabızlığını tedavi etme, öğrenme ve ezberleme yeteneğini geliştirme, Alzheimer karşıtı hastalık, bağışıklığı artırma, yaşlanmayı önleme, yorgunluk önleme vb. gibi geniş bir aktivite yelpazesine sahip olduğunu göstermiştir. [1,5–7]. Son otuz yılda, Cistanche bitkilerinin köklerinin faydalı etkilerinin maddi temelini aydınlatmak için kapsamlı ve sistematik farmakolojik çalışmalar fitokimyasal araştırmalarla birleştirildi. Bu araştırmalar, feniletanoid glikozitlerin (PhG'ler) Cistanche bitkilerinde böbrek eksikliği, iktidarsızlık [8], yaşlanmayı geciktirme [9] ve Alzheimer önleyici hastalık [10] tedavisinde kilit rol oynayan ana etkili bileşenler olduğunu göstermektedir. Çin Farmakopesinde iki PhG'nin (ekinakozit ve verbaskosit) içeriği gerekliydi. Bu arada, Cistanche bitkilerindeki mannitol, sakaroz, glikoz ve fruktoz gibi karbonhidratlar müshil işlevine sahiptir ve Cistanche bitkilerinin karbonhidrat kümeleri kabızlığın tedavisi için kullanılmıştır [11].

vahşi kaynaklarCistanche tübülozaesas olarak Çin'in güneyindeki Sincan Özerk Bölgesi'ndeki Taklamakan Çölü'nü çevreleyen alanda dağılmıştır. Geleneksel Çin ilaçları (TCM'ler) olarak kullanılan diğer birçok türe benzer şekilde, C. tubulosa büyük ekonomik değere sahiptir ve aşırı toplama nedeniyle vahşi yaşam alanında neredeyse nesli tükenmiştir. Cistanches Herba'ya ham madde temini sağlamak ve yabani bitki kaynaklarını korumak için C. tubulosa'nın yetiştirilmesi 1990'larda Çin'de başladı. 2017 itibariyle, Xinjiang'daki Hotan Eyaletinde yaklaşık 13 bin hektar ekili C. tubulosa bulunmaktadır [12,13]. Dikim teknolojisindeki gelişmeler, ekimi genişletmenin yanı sıra kaliteyi de iyileştirmeyi talep ediyor.Cistanche tubulosa.

yetiştirmenin temel amacıCistanche tübülozaCistanches Herba'yı bu etkili bileşenlerden zengin olarak üretmektir. Bununla birlikte, Cistanches Herba'daki PhG'ler ve oligosakkaritler gibi etkili bileşenlerin içeriği, üretim sırasında birçok faktörden önemli ölçüde etkilenebilir [12,13]. C. tubulosa kalitesinin gerçek zamanlı bir tespit sistemi araştırılmalıdır. Bu nedenle, kısa bir süre içinde çok sayıda numuneyi analiz etme gereksinimini tam olarak yerine getirmek için yüksek verimli bir yöntem geliştirmek gereklidir. Geleneksel olarak, C. tubulosa'da PhG'ler ve karbonhidratlar gibi birincil etkili bileşenlerin belirlenmesi, genellikle yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) kullanılarak gerçekleştirilir [14,15]. Doğru ve güvenilir olmasına rağmen, veri toplama ve işleme için zaman alıcı ve zahmetlidir. Ek olarak, HPLC testlerinin genellikle toz haline getirilmesini, ekstraksiyonunu ve filtrasyonunu içeren numune hazırlama için de çok zaman ve çaba gerekir. Bu nedenle, nispeten büyük miktarda veri elde etmek için net bir ilke ve kullanımı kolay bir araca ihtiyaç vardır. Neyse ki, yakın kızılötesi spektroskopisi (NIRS) tarım ürünlerini [16], gıda [17], tıbbi numuneleri [18] ve farmasötik ürünleri [19] değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmıştır, çünkü hızlı olduğu kadar tahribatsızdır. Bu nedenle, NIRS, TCM'lerin verimli ölçümleri için gereksinimleri tam olarak karşılayabilir ve NIRS'nin kalitatif tanımlama [20,21] ve TCM'lerde bileşiklerin [22] miktar tayini için uygulanması şaşırtıcı değildir.

Bu çalışmada, 2013-2015 yılları arasında Sincan'daki Hotan Eyaletinden toplanan 116 parti C. tubulosa örneğinde ekinakozit, verbaskosit, mannitol, sakaroz, glikoz ve fruktoz dahil altı etkili bileşenin içeriği ilk olarak HPLC ile belirlendi. Daha sonra bu altı bileşenin kalibrasyon modelleri kısmi en küçük kareler regresyon (PLSR) yöntemi ile oluşturulmuştur. Bu modeller daha sonra kalibrasyon setlerindeki korelasyon katsayısı ve tahmin hataları ile doğrulanmıştır. Sonuçlar, geliştirilen yöntemin C. tubulosa'nın kantitatif analizi için güvenilir bir yöntem olarak kullanılabileceğini göstermiştir.

Sonuç

HPLC Analizi

Ekinakozit ve verbaskozit içeriği literatürde iyi tanımlanmış bir HPLC-UV yöntemi ile belirlendi [3,23] ve dört karbonhidrat (mannitol, sukroz, glukoz ve fruktoz) iyi tanımlanmış bir HPLC-ELSD yöntemi ile belirlendi. 116 örneğin tümü için literatür [24]. Numune hazırlama ve belirleme yöntemleri Bölüm 3.1 ve 3.3'te açıklanmıştır. Şekil 1, karışık standartların karakteristik kromatogramlarını göstermektedir. Altı etkili bileşenin hepsinin başlangıçtan ayrıldığı ve dolayısıyla nicelleştirilebildiği görülebilir. HPLC yöntemi, numune testinden önce doğrulandı. HPLC yönteminin ana sonuçları Tablo 1'de listelenmiştir. Ekinakozit belirleme yönteminin olumlu bir doğrusal ilişkisi (r=0.9998) ve geri kazanımı (yüzde 98,5) sonuçlarda gösterilmiştir, tüm sonuçlarla aynı sonuç. beş bileşen. Bu nedenle, altı etkili bileşenin içeriği doğru bir şekilde belirlenebilir. Belirlenen tüm içerik aralıkları Tablo 1'de özetlenmiştir.

NIRS Analizi

Şekil 2, C. tubulosa örneklerinin NIR spektrumlarını (4000–10,000 cm-1) göstermektedir. Tüm örneklerde 4000 cm-1'den 7500 cm-1'e kadar önemli absorpsiyon zirveleri ortaya çıkarken, 7500 cm-1'den 10.000 cm-1'e hafif dalgalanmalar görüldü. NIR spektrumunun taban çizgisi kayması, numunenin parçacık boyutu ve rengi gibi faktörlerden kolayca etkilenmesi nedeniyle meydana geldi (Şekil 2A). Gereksiz bilgilerin etkisini bir dereceye kadar azaltmak için spektrumların matematiksel ön işlemleri kullanıldı. Matematiksel ön işlemler, birinci türetme (1. türetme), ikinci türetme (2. türetme), standart normal çeşitlilik (SNV) ve çarpımsal dağılım düzeltmesini (MSC) içermiştir. Şekil 2B, C. tubulosa'nın NIR spektrumunun 2. türevini gösterir ve 4000–4500 cm-1, 5000–5500 cm-1 ve 7000–7500 cm-1 olmak üzere üç bölgeden meydana gelen önemli varyasyonlar açıkça gözlemlenir. .

Kantitatif Kalibrasyon Modellerinin Kurulması

Kısmi en küçük kareler regresyonu (PLSR) klasik bir modelleme yöntemidir ve sonuçların yüksek kalitesi nedeniyle nicel modellerde yaygın olarak uygulanmaktadır. PLSR'nin avantajları, iyi tahmin kabiliyetini ve göreceli basitliğini içerir. PLSR, TCM'lerin nicel kalibrasyon modellerinin oluşturulmasında da yaygın olarak uygulanmıştır [25]. Ön işleme tabi tutulmuş NIR spektrumlarına ve C. tubulosa'daki altı etkili bileşen için NIR kantitatif analiz modeline dayalı olarak, gerçek değerler olarak HPLC analiz verileri ile PLSR yöntemi kullanılarak oluşturulmuştur. 116 numune rastgele 3:1 oranında kalibrasyon ve doğrulama setlerine bölünmüştür. Kalibrasyon için en uygun koşullar, düşük RMSEC ve yüksek korelasyon katsayısı ile seçilmiştir.

Kalibrasyon Modelleri İçin Dalga Bandı Seçimi

Uygun bir dalga bandının seçimi, kalibrasyon modellerinin oluşturulması için önemli bir adımdı. Bu çalışmada, 4000–7500 cm-1 (TQ analist yazılımı tarafından tavsiye edilir) ve 4000–10.000 cm-1 NIR aralığı spektrumları karşılaştırılmıştır. Bu aralığın Tablo 2'den 4000 cm-1 ile 7500 cm-1 aralığındaki kalibrasyon için uygun olmadığı görülmüştür. Dolayısıyla mevcut çalışmada altı kimyasal bileşen için spektral aralıklar şöyledir: tümü 4000 ila 10.000 cm-1 aralığından, RMSEC performansları ve korelasyon katsayısı karşılaştırılarak seçilmiştir.

Kalibrasyon Modelleri İçin Optimum Faktör Sayısının Seçimi

PLSR, faktörlerin hesaplanmasıyla spektrum verilerinin boyutsallığını azaltarak verilerdeki maksimum değişkenlik miktarını açıklar. "Yetersiz donanım" sorunu, sınırlı sayıda faktörden kaynaklanan yetersiz bilgi nedeniyle ortaya çıktı; ancak modelde ortaya konan optimum değerlerden daha büyük faktörlerin seçilmesi “aşırı uyum” sorununu beraberinde getirecektir. Ya "yetersiz uyum" ya da "aşırı uyum", yerleşik modellerin öngörme gücünü azaltacaktır [22]. Şekil 3, RMSECV ile altı bileşiğin tümü için faktörler arasındaki ilişkiyi göstermektedir. Bu nedenle, RMSECV'nin en düşük değerlerine karşılık gelen faktörleri seçtik. Kalibrasyon modelleri için optimum faktör seçimi Tablo 3'te listelenmiştir.

Kalibrasyon Modelleri için Spektral Ön İşlem Seçimi

Kalibrasyon modelleri için bir diğer en kritik etkili faktör, saçılma ve taban çizgisi kaymasının etkisini azaltmayı, sinyal-gürültü oranlarını arttırmayı ve düzensiz değişimleri ortadan kaldırmayı amaçlayan spektral ön işlemdir. Radyasyon saçılımının geleneksel etkisini ortadan kaldırmak için çarpımsal saçılım düzeltmesi (MSC) ve standart normal değişken (SNV) yöntemleri kullanıldı. Taban çizgisi kaymasının etkilerini çözmek için 1. ve 2. türev spektrumları karşılaştırıldı ve 2. türev seçildi [26]. Arzu edilen etki için, gürültü büyütmesini önlemek için türetmeden önce spektrumları Savitzky-Golay (SG) filtre algoritması ile düzelttik. Tablo 3, spektral ön işlem hakkındaki bilgileri ve kalibrasyon modelleri için sonuçlarını göstermektedir.

Kurulan Modellerin Değerlendirilmesi

İyi bir NIRS kalibrasyon modeli, düşük RMSEC ve RMSEP değerlerinin yanı sıra yüksek bir korelasyon katsayısına (r) ve RMSEC ile RMSEP arasında küçük farklılıklara sahip olmalıdır [27–29]. Seçilen altı bileşiğin kalibrasyon modelleri yukarıda bahsedilen prosedürlere göre oluşturulmuştur (Tablo 3). Ekinakozid kalibrasyon seti için RMSEC ve r değerleri sırasıyla 27.6 ve 0.9808 idi. Diğer kimyasal bileşik modellerinin performans parametreleri Tablo 3'te listelenmiştir, buradan kurulan modellerin tatmin edici tahmin sonuçları verdiği ve C. tubulosa'nın hızlı kantitatif analizi için kullanılabileceği sonucuna varabiliriz. Altı kimyasal bileşiğin dağılım grafikleri, kalibrasyon modellerini daha açıklayıcı ve görsel olarak gözlemlemek için Şekil 4'te gösterilmiştir. Şekil 4'te gösterildiği gibi, tahmine dayalı ve ölçülen değerler arasında küçük farklılıklar meydana geldi, çünkü noktaların çoğu y=x şeklinde bir denklemle gerileme eğrisi etrafında dağıtıldı. Bu nedenle, Şekil 4'te mükemmel öngörücü performanslar gözlendi.

Malzemeler ve yöntemler

Örnek hazırlama

2013'ten 2015'e kadar Xinjiang özerk bölgesindeki Hotan Eyaletinden yüz on altı C. tubulosa örneği toplandı. Tüm örnekler ekildi, ancak farklı büyüme aşamalarında toplandılar. Numunelerin taze ağırlıkları 20 g ile 1000 g arasında değişmektedir. Güneşte kurutulduktan sonra, kurutulmuş numuneler ezildi ve bir 60-meşli elekten [3,23] elendi.

NIR Spektroskopik Veri Toplama

Örneklerin NIR spektrumları, bir Antaris MXFT-NIR Sistemi (Thermo Scientific, Madison, WI, ABD) elde tutulan bir optik fiber yansıtma adaptörü ile donatılmıştır. Her spektrum, 64 taramanın ortalaması alınarak elde edildi. NIR spektrum taramasından önce numunelerin aynı sıcaklıkta analiz edildiğinden emin olmak için tüm numunelerin oda sıcaklığına (25°C) dengelenmesine izin verildi. Laboratuvardaki nem ortam seviyesinde tutuldu.

HPLC Veri Toplama

Ekstraksiyon Hazırlığı

Bir gram C. tubulosa tozu, 30 dakika boyunca ultra-sonikasyon (500 W, 40 kHz) ile konik bir şişe içinde 50 mL yüzde 50 metanol ile özümlendi. Ekstrakt 4 ◦C'de saklandı. Ekstrenin süpernatanı, HPLC analizi için bir numune elde etmek üzere süzüldü [3,23].

HPLC-UV ile Echinacosit ve Verbascoside Eşzamanlı Tayini

Sıvı kromatografik analizi, iki LC-20ADXR solvent dağıtım birimi, bir LC-20AD pompası, bir SIL-20ACXRauto örnekleyiciden oluşan bir Shimadzu UHPLC sisteminde (Shimadzu, Kyoto, Japonya) gerçekleştirilmiştir. , bir CTO-20AC sütunlu fırın, bir SPD-M20A DAD dedektörü, DGU-20A3R gaz giderici ve ICBM-20Bir kontrolör.

Kromatografik ayırmalar için kullanılan bir Grace Prevail Karbonhidrat ES kolonu (150 × 2,1 mm, 2,7 mm) 35 ◦C'de tutuldu. Mobil faz, asetonitril (A) ve yüzde 0.1 sulu formik asitten (B) oluşuyordu ve aşağıdaki gradyan programı izlenerek verildi: 0–7 dakika, 10–20'lik bir lineer gradyan yüzde A; 7-15 dakika, yüzde 20 A; ve 15-20 dakika, yüzde 20-10'luk bir lineer gradyan A. Mobil fazın diğer hızı 0,4 mL/dk idi. UV izleme 330 nm'de yapıldı.

HPLC-ELSD ile Eşzamanlı Mannitol, Sükroz, Glikoz ve Fruktoz Tayini

HPLC, bir aG1322A gaz giderici, bir G1311A dörtlü pompa, bir G1311A otomatik örnekleyici, bir G1316A kolon sıcaklık kontrolörü ve bir G1315B DAD dedektöründen oluşan bir Agilent 1100 serisi LC sisteminde (Palo Alto, CA, ABD) gerçekleştirildi.

Kromatografik ayırmalar için bir Sigma Prevail Karbonhidrat ES kolonu (4.6 × 250 mm, 5 um) kullanıldı ve 25 ◦C'lik bir kolon sıcaklığında tutuldu. Mobil faz, asetonitril ve sudan (77:23, v/v) oluşuyordu ve izokratik müttefik, 0.7 mL/dk'lık bir diğer hızda sağlandı. Çıkış suyu, varsayılan parametreler [23,24] ile bir evaporatif ışık saçılım detektörü (ELSD) kullanılarak izlendi.

Veri işleme

TQ Analyst (sürüm 8.0, Thermo Scientific, Madison, WI, ABD) kalibrasyon ve doğrulama setlerinin bölünmesini, spektrumların matematiksel ön işleme tabi tutulmasını, kalibrasyon modellerinin oluşturulmasını ve diğer hesaplamaları gerçekleştirmek için kullanıldı. Rakamları yapmak için Origin (versiyon 9.1) kullanıldı.

Sonuçlar

Teşekkür: Bu çalışma, Çin Ulusal Bilim ve Teknoloji Planlama Projesi(2015BAD29B00-04) tarafından desteklenmiştir.

Yazar Katkıları: Xinhong Wang, deneyleri tasarladı ve tasarladı. Xinhong Wang ve Xiaoguang Wang deneyleri gerçekleştirdi. Makaleyi Xinhong Wang ve Yuhai Guo yazdı.

Çıkar Çatışmaları: Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan eder.

Referanslar

1. Jiang, Y.; Tu, PF Cistanche türlerinde kimyasal bileşenlerin analizi. J. Kromatogr. 2009, 1216, 1970–1979. [CrossRef] [PubMed]

2. Xu, R.; Chen, J.; Chen, S.-L.; Liu, T.-N.; Zhu, W.-C.; Xu, J. Cistanche Deserticola Ma, Çin'de yeni bir ürün olarak yetiştirildi. Genet. Kaynak. Kırpma Evol. 2008, 56, 137-142. [Çapraz Referans]

3. Çin Farmakopesi Komitesi Düzenleme. Çin Farmakopesi, 2005. baskı; Kimyasal Sanayi Basın: Pekin, Çin, 2005; Cilt 1, s. 90.

4. Kobayashi, H.; Komatsu, J. cistanchE bitkisinin bileşenleri (1). Yakugaku Zashi 1983, 103, 508–511. [CrossRef] [PubMed]

5. Şarkı, ZH; Lei, L.; Tu, PF Cistanche huffing bitkilerinde farmakolojik aktivite araştırmalarında ilerlemeler. Et bağlantısı. Çene. gelenek. bitki. İlaçlar 2003, 34, 473-476.

6. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T.; Namba, T. Feniletanoidlerin Cistanche Deserticola'dan antioksidan etkileri. Biol. Eczacılık Boğa. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

7. Xuan, GD; Liu, CQ Cistanche Deserticola'nın feniletanoid glikozitlerinin (PEG) D-galaktoz tarafından indüklenen yaşlı farelerde yaşlanmayı önleme üzerindeki etkisi üzerine araştırma. J.Çin. Med. Anne. 2008, 31, 1385-1388.

8. Şato, T.; Kozima, S.; Kobayashi, K.; Kobayashi, H. Cistanchis Herba üzerinde farmakolojik çalışmalar. I. Cistanchis Herba'nın bileşenlerinin kronik stresli farelerde cinsiyet ve öğrenme davranışı üzerindeki etkileri. Yakugaku Zashi 1986, 105, 1131-1144. [Çapraz Referans]

9. Shen, CY; Jiang, JG; Yang, L.; Wang, DW; Zhu, W. Geleneksel Çin tıbbında kullanılan otlar ve nutrasötiklerden elde edilen yaşlanma karşıtı aktif maddeler: ilaç keşfi için farmakolojik mekanizmalar ve çıkarımlar. Br. J. Pharmacol. 2016, 11, 1395–1425. [CrossRef] [PubMed]

10. Li, N.; Wang, J.; anne, J.; Gu, Z.; Jiang, C.; Yu, L.; Fu, X. Cistanches Herba Tedavisinin Orta Derecede Alzheimer Hastalığı Olan Hastalar Üzerindeki Nöroprotektif Etkileri. Kötü. Temelli Tamamlayıcı. Alternatif. Med. 2015, 2015. [CrossRef] [PubMed]

11. Gao, JY; Jiang, Y.; Dai, F.; Han, ZL; Liu, HY; Bao, Z.; Zhang, TM; Tu, PF Cistanche Deserticola'daki Müshil Bileşenleri Üzerine Çalışma YC Ma. Mod. Çene. Med. 2015, 17, 307–310.

12. Tu, PF; Chen, QL; Jiang, Y.; Guo, YH; Yang, Teksas; Wang, XY; Ayerkan, M.; Li, XB; Du, Y.; Nan, ZD; et al. Cistanche tubulosa ve konukçu Tamarix spp. yetiştirme teknikleri. Mod. Çene. Med. 2015, 17, 349–358.

13. Tu, PF; Jiang, Y.; Guo, YH; Tian, ​​YZ; Li, XB; Wang, XY; Wei, J.; Chen, QL; Aierkan, M. Batı çöl bölgesinin ekolojik medeniyetini teşvik etmek için saksı bitkisinin ekolojik endüstrisini geliştirmek. Mod. Çene. Med. 2015, 17, 297–301.

14. Lu, DY; Zhang, JY; Yang, ZY; Liu, HM; Li, S.; Wu, BJ; Ma, ZG Diyot dizisi tespiti ve kemometrik yöntemlerle birleştirilmiş yüksek çözünürlüklü kütle spektrometrisi ile birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisi kullanılarak cistanches herba'nın kantitatif analizi. J. Eylül Sci. 2013, 36, 1945–1952. [CrossRef] [PubMed]Moleküller 2017, 22, 843 9 / 9

15. Jiang, Y.; Li, SP; Wang, YT; Chen, XJ; Tu, PF Yüksek performanslı sıvı kromatografisi-diyot dizisi algılama-kütle spektrometrisi ile parmak izi ile bitki özlerinin farklılaştırılması. J. Kromatogr. 2009, 1216, 2156–2162. [CrossRef] [PubMed]

    ---